复合益生菌对幼鲵生长及免疫指标的影响试验.pdf

江西水产科技2 0 2 3年第4期试验总结/ShiyanZongjie文章编号：10 0 6-318 8（2 0 2 3）0 4-0 17-0 4复合益生菌对幼鲩生长及免疫指标的影响试验周韶辉，解宜兴，毛盼，王丞，王晓清3，周先文”，魏营1*（1.湖南张家界大鲩国家级自然保护区事务中心，湖南张家界42 7 40 0；2.水产高效健康生产湖南协同创新中心，湖南常德4150 0 0；3.湖南农业大学动物科学技术学院，湖南长沙410 12 8）摘要：本研究旨在研究复合益生菌对幼鲩生长及免疫指标的影响。随机选取体质健康、体重10 0 g/尾左右的2 龄幼鲩，分别添加占基础饵料重量0.2 0%、0.40%、0.6 0%的配比复合益生菌进行拌料投喂试验，并设置空白对照组，每组设置三个重复组，共12 组，试验期18 0 d。试验结束时测定各组大鲩的生长及摄食指标、血液生理生化指标及血清抗氧化酶及非特异性免疫指标，结果显示三个试验组大鲩终末体重、平均增重率、特定生长率均显著高于对照组，指标数据说明以复合益生菌拌料投喂有利于大鲩的生长；中剂量组及高剂量组大鲩血液中的总蛋白（TP）及白蛋白（ALB）含量均显著高于对照组及低剂量组；试验组大鲍血清中酸性磷酸酶（A CP）均高于对照组，这显示出复合益生菌拌料投喂对大鲩的非特异性免疫有促进作用；中剂量组及高剂量组大鲩血清中超氧化物歧化酶（SOD）活性均显著性高于对照组及低剂量组。结果表明，复合益生菌（芽孢杆菌、酵母菌、乳酸菌）添加日常饵料重量0.40%、0.6 0%的配比中剂量、高剂量组不仅能促进大鲍的生长发育，同时还能促进大鲩对营养物质的吸收利用，从而增强体质，提升疾病抵抗力。关键词：复合益生菌；幼鲩；免疫指标中图分类号：S966.6中国大鲩拥有极高的科研及经济价值，已在我国已形成规模化养殖。随着养殖规模的扩大和养殖环境的恶化，我国大鲩养殖业越来越受困于病害的影响，尤其是细菌性、真菌性和病毒性疾病给大鲩养殖业造成了巨大的经济损失。由于传统的化学类和抗生素类药物毒性较大，不仅容易使病原微生物产生耐药性，还严重污染水环境，因此寻找可以替代药物的免疫添加剂正逐渐成为本领域的研究热点。水产动物益生菌的主要作用机制包括免疫促进、抑菌、营养促进等，本研究开展复合益生菌制剂对大鲩生长及免疫力的影响，以期对大鲩的疫病绿色防控提供更有效的方法，对大鲩养殖业的健康发展和资源保护具有重要的积极意义。接下来主要就针对复合益生菌对幼鲩生长及免疫指标的影响进行研究。1 材料与方法1.1 试验地点湖南张家界大国家级自然保护区事务中心。1.2 试验时间2022年0 1月2 0 2 2 年0 6 月，试验期共计18 0 d。*通讯作者：魏营（198 3）男，工程师，野生动植物保护与利用Em a i l：z s h 7 8 7 18 16 3c o m文献标识码：A1.3 试验材料复合益生菌由吉首大学微生物实验室提供，该复合益生菌为30%芽孢杆菌、30%酵母菌、40%乳酸菌组成的菌液，经平皿菌落计数法测定，结果显示活菌总数为510 CFU/mL。供试大鲩由湖南张家界大鲩国家级自然保护区事务中心提供，为规格10 0 g/尾左右的2 龄幼鲩。1.4 试验内容根据前期预试验结果，设计单因素试验考察以占基础饵料不同配的复合益生菌拌料投喂，对大鲩生长指标及非特异性免疫指标的影响。1.4.1供试大鲩的选择与分组随机选取体质健康、体重10 0 g/尾左右的2 龄幼鲩（幼鲩为卵黄完全消失，从开始主动摄食到外鳃完全消失的大鲩）48 尾，分为对照组、复合益生菌拌料投喂低剂量组、中剂量组及高剂量组，每组设3个重复，每个重复4尾大鲩。其中对照组：基础饵料投喂；低剂量组：以基础饵料重量0.2 0%配比复合益生菌拌料投喂；中剂量组：以基础饵料重量0.40%配比17试验总结/ShiyanZongjie江西水产科技2 0 2 3年第4期复合益生菌拌料投喂；高剂量组：以基础饵料0.6 0%配比复合益生菌拌料投喂。1.4.2试验饵料组成根据幼鲩阶段生长需要，调整基础饵料配方，以50%米虾、50%大草鱼切丝进行投喂。1.4.3生长及摄食指标的测定试验期间，记录供试大鲩的初始体重及试验结束时的体重、每日投饵量及残饵量，计算试验期内大鲩体重增加量、平均增重率、饵料系数、特定生长率。具体计算公式如下：体重增加量=W,-Wi；平均增重率=（W-W,）W,n 10 0%；饵料系数=（F,-F,）（W-W,);特定生长率=（lnW，-l n W）/t 10 0%式中，W1为大鲩的初始总重、W2为试验结束时大鲩的总重，n为各个重复的样本数，F，为总投饵量、F，为总残饵量，t为实验总天数。1.4.4血液生理指标和生化指标的测定试验结束时，对所有供试大鲩以无菌注射器进行尾静脉采血，并将血样注人到添加抗凝剂的采血管中，将血样低温保存，送至湖南张家界市人民医院实验室以全自动生化仪进行检测。生理指标主要测定白细胞数（WBC）、红细胞数（RBC）、血红蛋白（H b）及血小板总数（Plt）等，生化指标主要测定总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、总胆红素（TBILK）、直接胆红素（DBIL）、间接胆红素（IBIL）、甘油三酯（TG）胆固醇（CHOL）、谷草转氨酶（A ST）、谷丙转氨酶（ALT）、碱性磷酸酶(ALP)等。1.4.5血清抗氧化酶和非特异性免疫指标测定试验结束时，对所有供试大鲩以无菌注射器进行尾静脉采血，采集到的血液于4静置2 h后，再以4000r/min离心10 min，取上清液，即为血清。分别以试剂盒测定待测血清中的酸性磷酸酶（ACP）、过氧化氢酶（CAT）及SOD（超氧化物歧化酶）等抗氧化酶和非特异性免疫指标。具体方法如下：（1）A C P的测定采用酸性磷酸酶试剂盒，其活力单位定义为：10 0 mL血清或1g组织蛋白在37 与基质作用30 min产生1mg酚为一个金氏单位；（2）C A T 的测定采用过氧化氢酶测定试剂盒，其活力单位定义为：1mL或1mg组织每秒钟分解1mol的H,O,的量为一个活力单位；（3）SO D 的测定采用总SOD试剂盒，其中以血清为样品，活力单位定义为1mL反应液中SOD抑制率达50%时所对应的SOD量。.181.4.6发病率及成活率统计试验期间密切观察各组大的生长情况，如发生病害感染应及时采取隔离措施，并对病进行疾病诊断及治疗。试验结束时，统计各组大鲩各类病害发生情况、死亡数，计算发病率、死亡率及成活率。1.5饲养管理将供试大鲩养殖于阴?避光处，养殖水源为宝峰湖湖水，水温保持在2 0 2 5之间，溶解氧6.0mg/L，p H 值为6.5 7.5。饵料经消毒后于每日18：0 0 投喂，次日0 8：0 0 捞出残饵，分别记录每日各组的投饵量与残饵量。1.6统计分析方法试验数据用Excel软件处理后，用SPSS13.0进行统计分析，结果以“平均值标准差”表示，P0.05表示差异显著，P0.01表差异极显著。2结果与分析2.1复合益生菌拌料投喂对大鲩生长性能的影响由统计分析（见表1）可知，试验结束时，三个试验组大鲩终末体重、平均增重率、特定生长率均显著高于对照组（P0.05）；四个组别的饵料系数均无显著性差异；四组试验大鲩均未出现死亡。2.2复合益生菌拌料投喂对大鲩血液生理指标的影响由统计分析（见表2）可知，试验结束时，四组大鲩血液中的白细胞数（WBC）、红细胞数（RBC）、血红蛋白（Hb）以及血小板总数（Plt）均无显著性差异（P0.05），说明复合益生菌拌料投喂对大鲩血液生理指标无不利影响。2.3复合益生菌拌料投喂对大鲩血液生化指标的影响由统计分析（见表3）可知，试验结束时，中剂量组及高剂量组大鲩血液中的总蛋白（TP）及白蛋白（ALB）含量均显著高于对照组及低剂量组（P0.05）；四组大鲩血液中的总胆红素（T BI LK）、直接胆红素（DBIL）、间接胆红素（I BI L）、甘油三酯（TG）、胆固醇（CHOL）谷草转氨酶（AST）、以及谷丙转氨酶（ALT）碱性磷酸酶（A LP）含量均无显著性差异（P0.05）。2.4复合益生菌拌料投喂对大鲍血清抗氧化酶和非特异性免疫指标的影响由统计分析（见表4）可知，试验结束时，四组江西水产科技2 0 2 3年第4期试验总结/ShiyanZongjie大鲩血清中的酸性磷酸酶（ACP）及过氧化氢酶（CA T）活性均无显著性差异（P0.05），但试验组大鲩血清中酸性磷酸酶（ACP）均高于对照组，这显示出复合益生菌拌料投喂对大鲩的非特异性免疫或有促进作用；中剂量组及高剂量组大鲩血清中超氧化物歧化酶（SOD）活性均显著性高于对照组及低剂量组（P0.05）。项目对照组初始体重(g)105.8 10.77终末体重重（g)平均增重率（%)特定生长率（%）饵料系数注：同列数据肩标小写字母不同表示差异显著（P0.05）。项目白细胞数（WBC)109/L红细胞数(RBC)1012/L血红蛋白(Hb)8/L血小板总数（Plt)109/L注：同列数据肩标小写字母不同表示差异显著（P0.05）。表3复合益生菌拌料投喂对大鲲血液生化指标的影响项目单位总蛋白(TP)8/L白蛋白（ALB)g/L总胆红素（TBIL-K）mol/L直接胆红素（DBIL）mol/L间接胆红素（IBIL）mol/L甘油三酯(TG)mmol/L胆固醇(CHOL)mmol/L谷草转氨酶（AST)U/L谷丙转氨酶（ALT)U/L碱性酸酶（ALP)U/L注：同列数据肩标小写字母不同表示差异显著（P0.05）。2.5复合益生菌拌料投喂对大鲩发病率及成活率的影响由统计分析（见表5）可知，试验结束时，所有组别的大鲩均无死亡；其中对照组发病率为16.6 7%，低剂量组发病率为8.33%，中剂量组及高剂量组发病率均为0；经诊断，所有患病大鲩所患疾病均为水霉病。表1复合益生菌拌料投喂对大鲲生长性能的影响低剂量组中剂量组101.8 11.65110.21 5.34210.19 11.84a225.32 17.34b98.54 3.38a121.18 4.61b1.12 0.07a1.33 0.04b1.33 0.051.28 0.10表2 复合益生菌拌料投喂对大血液生理指标的影响单位对照组68.37 7.562.52 0.1362.38 8.1454.28 7.62对照组35.13 6.53a11.99 2.49a15.46 2.884.76 2.1210.70 2.451.49 0.120.65 0.10105.13 10.729.87 2.19894.76 28.87高剂量组107.43 8.87235.87 20.75b229.13 21.15b114.02 2.65b113.28 2.88b1.35 0.03b1.31 0.05b1.30 0.081.27 0.09低剂量组中剂量组67.15 6.8370.14 7.762.61 0.122.49 0.1660.98 6.5562.76 7.3955.46 6.9952.53 3.27低剂量组中剂量组38.15 5.71a45.46 6.39b12.34 1.85a17.89 2.45b14.86 2.7515.89 3.184.21 1.764.31 1.6310.65 1.9611.58 2.011.39 0.261.45 0.310.63 0.110.70 0.15102.34 12.68108.45 13.3110.33 2.259.19 1.65910.53 30.76867.89 23.98高剂量组67.99 7.872.65 0.1463.12 6.5450.55 4.89高剂量组46.71 7.14b 19.01 2.36b16.98 3.744.09 0.9812.89 2.121.31 0.230.68 0.17100.76 9.6610.85 2.01880.76 36.6519试验总结/ShiyanZongjie江西水产科技2 0 2 3年第4期表4复合益生菌拌料投喂对大鲩血清抗氧化酶和非特异性免疫指标的影响项目酸性磷酸酶（ACP)过氧化氢酶（CAT)超氧化物歧化酶（SOD）注：同列数据肩标小写字母不同表示差异显著（P0.05）。项目成活率（%）死亡率（%)发病率（%)疾病类别3讨论益生菌是通过定殖在动物体内，改变宿主某一部位菌群组成的一类对宿主有益的活性微生物。研究表明，益生菌能促进水生动物生长性能及免疫力提升，减少病害的发生，从而降低生产成本。此外，益生菌还可改善水体环境，从而使养殖获得较好的社会效益和经济效益2 。相较于单一益生菌，近年来复合型益生菌的应用日益增多，与添加单一益生菌相比，在饲料中添加复合益生菌对降低肠道细菌数量、调节水产动物肠道菌群平衡、改善肠道菌群组成等具有更好的促进作用(31。本研究以芽孢杆菌、乳酸菌及酵母菌组成的复合益生菌拌料投喂大，结果显示，试验组大鲩的生长性能得到有效提升。血液中的总蛋白由白蛋白和球蛋白组成，良好的营养状态可以使上述指标维持在较高水平。试验结果显示，以占日常饵料配比0.40%、0.60%的复合益生菌拌料投喂大鲩，能使得大鲩血液中总蛋白、白蛋白显著高于对照组，说明合理添加量的益生菌的使用能促进大鲩对营养物质的吸收利用，从而增强其体质4。另外，试验结果还显示，以复合益生菌拌料投喂的大鲩相较对照组大鲩血液中酸性磷酸酶（ACP）活性得到显著提升，这显示出复合益生菌拌料投喂对大鲩的非特异性免疫或有促进作用。此外，试验期间对照组及低剂量组部分大鲩体表出现灰白色菌丝，并伴随表皮溃烂及少量出血，部分单位Kingunit/100mlU/mLU/mL表5复合益生菌拌料投喂对大发病率及成活率的影响对照组低剂量组100.00100.000016.678.33水霉病水霉病病鲩表现出焦躁不安、在饲养池内急速游动等状态，经诊断，确定上述大鲩感染水霉病。对照组与中、高剂量组发病率的差异进一步证实了适量以添加芽孢杆菌、酵母菌、乳酸菌组成的复合益生菌拌料投喂，对增强大鲩体质有一定的促进作用5。综上所述，以芽孢杆菌、酵母菌、乳酸菌组成的复合益生菌拌料投喂不仅能在一定程度上促进大鲩的生长发育，同时还能在一定程度上促进大鲩对营养物质的吸收利用，从而增强其体质，提升其疾病抵抗力。但由于本试验使用的为成品复合益生菌，因此对三种单一菌种之间的协同或拮抗作用机理尚不清楚，还有待进一步研究。参考文献1张泽龙,张秀霞,李军涛,等益生菌在水产动物养殖中的应用J饲料研究,2 0 2 2,45（2 1）：133-136.2步海平益生菌在水产养殖中的应用J.渔业致富指南,2 0 2 2(0 1):41-43.3徐晴,李若铭,王桂芹，益生菌对鱼类黏膜免疫影响的研究进展J饲料工业,2 0 2 2,43（0 6）：5-8.4周韶辉,解宜兴,周先文,等。枯草杆菌二联活菌颗粒对稚鲩生长及免疫指标的影响试验J中国水产,2 0 2 0(11):7 4-7 7.5周韶辉中草药与益生菌对大鲩生长及免疫的影响研究D.湖南农业大学,2 0 2 0.对照组3.98 0.762.48 0.253.23 0.37 a低剂量组4.15 0.532.57 0.313.35 0.34a中剂量组4.34 0.292.29 0.193.95 0.66b中剂量组100.0000高剂量组4.03 0.852.67 0.324.18 0.74b高剂量组100.000020