大口黑鲈配合饲料中3种动物蛋白源的不同添加比例对其生长性能、肠道健康及蛋白质代谢的影响.pdf

目前，大口黑鲈(Micropterus salmoides)配合饲料对鱼粉的依赖性大，而鱼粉价格不断上涨，导致其饲料成本居高不下，严重制约了其养殖业的健康发展。为降低饲料成本，本研究以鱼粉、鸡肉粉和猪肉粉为饲料动物蛋白源，制作 7 种配合饲料(D1D7)，其鱼粉/鸡肉粉/猪肉粉的添加百分比分别为 45.0/22.6/0、37.1/22.6/8.0、28.8/22.6/16.0、45.0/14.5/8.0、45.0/5.3/16.0、41.6/18.0/8.0 和37.0/13.8/16.0。采用上述饲料投喂大口黑鲈幼鱼(初始体重约为 55 g)60 d，评估饲料动物蛋白源组合对鱼生长性能、组织生化指标、肌肉质构特性以及肝脏蛋白质代谢和肠道炎性因子相关基因表达的影响。结果显示，相比于其他饲料投喂组，D3 组鱼的终末体重、增重率、特定生长率显著提高，饲料系数显著降低(P0.05)；D3 组全鱼粗蛋白质显著高于 D5 组，其粗脂肪水平显著低于 D4 和 D6组(P0.05)。在组织生理生化指标方面，D3 组鱼血清总氨基酸含量显著高于 D1 和 D4 组(P0.05)，而其谷草转氨酶活性显著低于 D5 组(P0.05)；D3 组鱼肝脏总蛋白含量显著高于 D7 组(P0.05)。在肌肉品质方面，D3 组肌肉硬度和胶着性以及咀嚼性分别显著低于 D4 组和 D6 组(P0.05)。此外，D3 组肠抗炎基因 il-10，肝脏蛋白质合成基因 tor、s6k1、akt、pi3k mRNA 表达水平上调，显著高于 D7 组(P0.05)；而肠促炎因子 il-1、il-6 和肝脏翻译抑制因子 4ebp-1 mRNA 表达水平下调，显著低于 D1 组(P0.05)。上述结果表明，饲料中添加 28.8%鱼粉、16.0%猪肉粉和 22.6%鸡肉粉对大口黑鲈的促生长效果最优，且有利于提高肝脏蛋白质合成，维护肠道健康。研究结果可为降低大口黑鲈配合饲料对鱼粉的依赖提供技术支撑。关键词 大口黑鲈；动物蛋白源；生长性能；蛋白质合成；肠道健康 中图分类号 S963.7 文献标识码 A 文章编号 2095-9869(2023)05-0033-12 34 渔 业 科 学 进 展 第 44 卷 鱼粉的蛋白质、必需脂肪酸、矿物质、维生素含量高，必需氨基酸种类齐全、比例平衡，适口性和消化吸收率好，是传统水产配合饲料主要的蛋白源(Tacon et al,2008)。近年来，水产养殖规模不断扩大，资源有限的鱼粉供不应求，价格不断攀高，大大增加了水产养殖的成本投入，限制了水产养殖业的可持续发展。因此，高效低鱼粉蛋白源的开发已成为当前水产饲料研究中的热点问题。植物蛋白来源广泛、供应稳定、价格较低，是良好的鱼粉替代物，但因抗营养因子含量较高、氨基酸不平衡、适口性差等原因，过量添加易对养殖鱼类(特别是肉食性鱼类)的生长和健康产生不良影响(肖金星等,2011)。相比于植物蛋白，陆生动物蛋白源的抗营养因子少、蛋白含量高，且含有对鱼体健康有益的功能性因子(吴瑞,2018)。其中，鸡肉粉(含 65%73%蛋白，亮氨酸、赖氨酸及维生素含量丰富)和猪肉粉(含 45%60%蛋白，脯氨酸和甘氨酸含量高)在水产配合饲料中应用最为广泛，是重要的鱼粉替代源(郭小瑞等,2022)。大口黑鲈(Micropterus salmoides)俗称加州鲈，具有生长速度快、肉多刺少、营养丰富等优点，年均养殖量高达 15 万 t，为我国第“五”大家鱼(赵鹏飞等,2016)。作为肉食性鱼类，大口黑鲈对饲料鱼粉的依赖性较高，其商品饲料中鱼粉添加水平高达 50%(李永娟等,2016)。而鱼粉价格的不断上涨，导致大口黑鲈养殖成本增加，亟需寻找合适的替代蛋白源，以降低其饲料鱼粉添加量，从而降低饲料成本。因此，本研究通过分析 7 组不同比例鱼粉、猪肉粉、鸡肉粉的动物蛋白源对大口黑鲈生长性能、肠道健康及肝脏蛋白质代谢的影响，评估猪肉粉和鸡肉粉替代鱼粉的效果，为开发高效低鱼粉配合饲料提供依据。1 材料与方法 1.1 实验饲料 本研究以不同比例的鱼粉、鸡肉粉、猪肉粉为动物蛋白源，豆油为脂肪源配制7种等氮(粗蛋白55.0%)等脂(粗脂肪 13.0%)的配合饲料(D1D7)。其鱼粉/鸡肉粉/猪肉粉的添加百分比分别为 45.0/22.6/0(对照组)、37.1/22.6/8.0、28.8/22.6/16.0、45.0/14.5/8.0、45.0/5.3/16.0、41.6/18.0/8.0 和 37.0/13.8/16.0，饲料配方及营养组成见表 1。各种饲料原料进行粉碎后，将粉碎的饲料原料混匀，加入水再次混匀，接着在膨化机(XBF-62,鑫贝发)的作用下制成膨化饲料。烘干后外喷油(XBF-65,鑫贝发)制成饲料。制好的饲料阴干后，于20 保存。1.2 实验设计 实验鱼购于佛山当地养殖户，并置于广东德宁水产科技有限公司杏坛基地大网箱(5 m5 m2 m)中暂养。暂养期间，用容川商品饲料投喂至实验规格，使其适应养殖环境。养殖实验开始前，禁食 24 h，挑选大小一致的健康幼鱼(初始体重约为 55 g)随机分配至35 个实验网箱(1.5 m1.5 m1.8 m)中，每组 5 个重复。每个网箱 100 尾鱼，养殖周期为 60 d。养殖期间每天投喂 2 次(06:30 和 17:45)，水温为 27.432.3，氨氮含量为 0.10.2 mg/L。同时，每天观察鱼的摄食、活动情况，如有异常及时处理。若有死鱼及时捞出并记录重量。1.3 样品采集 养殖实验结束后，禁食 24 h。对每个网箱中的鱼逐一称重，并统计其重量。从每个网箱随机选取 3 尾鱼，放入含有 0.01%2-苯氧乙醇麻醉剂的水中，采用尾部静脉取血，并分离其肌肉、肝脏、肠道等组织。另外，每个网箱随机选取 3 尾鱼，测定其内脏重、肝脏重和体长，用于计算肝体比、脏体比及肥满度。最后，从每个网箱取 2 尾鱼分别用于测定肌肉质构特性和全鱼营养成分。1.4 组织生理生化指标测定 血清中的白蛋白(ALB)、尿素氮(BUN)、总氨基酸(TAA)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总蛋白(TP)及血氨(SA)，肝脏中的谷草转氨酶、谷丙转氨酶、总蛋白均采用南京建成生物工程研究所的试剂盒测定，具体测定步骤见各试剂盒说明书。1.5 肌肉质构特性测定 肌肉质构特性使用质构仪(Universal TA 型，上海腾拔仪器科技有限公司)进行测定，具体测定步骤参考 Ma 等(2020)：取下实验鱼的背肌，在 TPA 模式下，使用 TA 25/1000 探头，测试参数：测试前后速度为2.00 mm/s，测试时速度为 1.00 mm/s，压缩比为 75%，前后 2 次压缩时间间隔为 2 s。1.6 常规成分测定 肌肉和全鱼的常规成分测定方法参考 Li 等(2017)和 Li 等(2008)的方法。水分、粗脂肪、粗蛋白及灰分分别采用常压干燥法、索氏抽提法、凯氏定氮法和马弗炉灼烧法测定。第 5 期 江坤生等:大口黑鲈配合饲料中 3 种动物蛋白源的不同添加比例对其生长性能、肠道健康及蛋白质代谢的影响 35 表 1 饲料组成及其营养成分/%Tab.1 Composition and nutrient levels of experimental diets/%饲料处理组 Dietary treatment 饲料组成 Dietary composition D1 D2 D3 D4 D5 D6 D7 秘鲁鱼粉 Peruvian fish meal 45.0 37.1 28.8 45.0 45.0 41.6 37.0 猪肉粉 Porcine meat meal 8 16 8 16 8 16 鸡肉粉 Poultry by-product meal 22.6 22.6 22.6 14.5 5.3 18.0 13.8 去皮豆粕 Peeled soybean meal 4.6 4.6 4.9 4.7 5.5 4.7 5.3 棉籽蛋白 Cottonseed protein 5 5 5 5 5 5 5 大豆油 Soybean oil 6.7 5.7 4.9 6.0 5.6 5.9 5.2 谷朊粉 Gluten powder 2 2 2 2 2 2 2 木薯粉 Tapioca flour 11 11 11 11 11 11 11 大口黑鲈预混料 Largemouth bass premix1 1 1 1 1 1 1 1 磷酸二氢钙 Ca(H2PO4)2 1.5 2.0 2.5 2.0 2.5 2.0 2.5 氯化胆碱 Choline chloride 0.6 0.6 0.6 0.6 0.6 0.6 0.6 L-赖氨酸盐酸盐 L-lysine hydrochloride 0.2 0.5 0.2 0.3 0.2 0.4 L-苏氨酸 L-threonine 0.1 0.1 0.1 0.1 DL-蛋氨酸 DL-methionine 0.1 0.1 0.1 0.1 总计 Total 100 100 100 100 100 100 100 饲料营养成分 Nutrient composition of diets 水分 Moisture 5.11 5.49 5.67 5.92 4.71 6.03 5.71 粗蛋白 Crude protein 54.99 55.39 55.73 54.72 55.38 55.63 54.94 粗脂肪 Crude lipid 13.28 13.21 12.90 13.48 13.80 13.82 13.24 灰分 Ash 12.85 13.90 14.10 13.56 13.29 12.54 12.35 饲料氨基酸成分 Amino acid composition of diets 天冬氨酸 Asp 4.36 4.56 4.54 4.44 4.35 4.01 3.96 苏氨酸 Thr 2.08 2.11 2.09 2.10 2.04 2.16 2.22 丝氨酸 Ser 2.09 2.15 2.15 2.18 2.05 2.09 2.10 谷氨酸 Glu 7.41 7.62 7.63 7.58 7.34 7.19 7.12 甘氨酸 Gly 4.10 3.71 4.14 4.74 4.03 3.68 3.91 丙氨酸 Ala 3.48 3.49 3.58 3.70 3.84 3.98 4.05 缬氨酸 Val 2.48 2.60 2.56 2.57 2.48 2.37 2.34 蛋氨酸 Met 1.11 1.16 1.17 1.08 1.17 1.05 1.05 异亮氨酸 Ile 2.04 2.24 2.15 2.00 2.03 1.99 1.90 亮氨酸 Leu 3.65 3.88 3.81 3.65 3.65 3.74 3.65 酪氨酸 Tyr 1.59 1.78 1.75 1.56 1.54 1.87 1.84 苯丙氨酸 Phe 2.14 2.32 2.30 2.09 2.16 2.24 2.18 赖氨酸 Lys 3.56 3.72 3.84 3.66 3.66 3.33 3.38 组氨酸 His 1.40 1.43 1.46 1.39 1.42 1.78 1.21 精氨酸 Arg 3.35 3.36 3.49 3.61 3.23 3.05 3.09 脯氨酸 Pro 2.75 2.59 2.75 3.13 2.42 3.12 3.30 必需氨基酸总和 EAA2 21.82 22.82 22.87 22.13 21.83 21.71 20.99 注：1.每千克大口黑鲈预混料中含有：VA 100 万 IU，VD3 25 万 IU，DL-生育酚乙酸酯 8.0 g，VK3 2.0 g，VB1 2.0 g，VB2 1.6 g，VB6 1.6 g，VB12 5.0 mg，D-泛酸钙 7.0 g，烟酰胺 12.0 g，叶酸 0.4 g，D-生物素 16 mg，肌醇 24.0 g，L-抗坏血酸-2-磷酸酯 62.0 g，Zn 1.5 g，Mn 1.25 g，Cu 0.7 g，Fe 12 g，Co 0.15 g，I 0.1 g，Se 0.015 g，Mg 3.5 g，K 6.0 g，预混料由广东德宁水产科技有限公司提供。2.必需氨基酸总和包括 Lys、Phe、Met、Thr、Ile、Leu、His、Arg 和 Val。Note:1.Largemouth bass premix per kg contains:VA 1 million IU,VD3 250 thousand IU,DL-alpha-tocopherol acetate 8.0 g,VK3 2.0 g,VB1 2.0 g,VB2 1.6 g,VB6 1.6 g,VB12 5.0 mg,D-calcium pantothenate 7.0 g,niacinamide 12.0 g,folate 0.4 g,D-biotin 16 mg,inositol 24.0 g,L-ascorbate-2-phosphate 62.0 g,Zn 1.5 g,Mn 1.25 g,Cu 0.7 g,Fe 12 g,Co 0.15 g,I 0.1 g,Se 0.015 g,Mg 3.5 g,K 6.0 g.The premix is provided by Guangdong Daynew Aquatic Sci-Tech Co.,Ltd.2.Essential amino acids(EAA)is the sum of Lys,Phe,Met,Thr,Ile,Leu,His,Arg and Val.36 渔 业 科 学 进 展 第 44 卷 1.7 肠道炎症基因、肝脏蛋白质代谢基因 mRNA 表达量测定 根据鱼体生长性能和组织蛋白含量，挑选出对照组(D1 组)、生长最优组(D3 组)和生长最差组(D7 组)，比较分析 3 组鱼体肝脏蛋白质合成、肠炎症因子相关基因表达水平，以探讨摄食 D3 饲料的鱼具有优良生长性能的潜在机制。肠和肝脏组织总 RNA 采用Simply P Total RNA extraction kit(Bioflux)提取，具体步骤详见说明书。提取的组织总 RNA 用 1%的琼脂糖凝胶电泳检查 RNA 的完整性。用核酸分析仪测定RNA 浓度。之后采用反转录试剂盒 PrimeSriptTM RT regent kit(TaKaRa)将组织总 RNA 反转录 cDNA。炎症因子、蛋白质合成代谢相关基因以及-actin引物序列均根据 NCBI 中相关基因并采用 Premier 5.0设计特异性引物(表 2)。采用实时荧光定量 PCR 仪(BIO-RAD,美国)和 Thunderbird SYBR qPCR Mix试剂盒(TOYOBO)进行荧光定量 PCR，反应程序采用两步法：95 预变性 30 s，95 变性 5 s，60 延伸30 s，共 40 个循环。数据采用 2CT法进行处理。表 2 实时荧光定量 PCR 引物 Tab.2 Primer sequences for real-time quantitative PCR 基因 Gene 正向引物 Forward primer 反向引物 Reverse primer 基因序列号 Gene serial number-actin ATCGTCCACCGCAAATGCTT TGGTGTGGTTGTTTTGCACAGXM_038695351 il-1 AGCCGTCATTGAACATGGGA GAAACATCAGGGGGTGACCA XM_038733429 tnf TACAGCCAAGCGTCCTTCAG GGACCAGCGCTGAACAGTAT XM_038733429 il-6 CGCGCAATTTGCCGATGATA CGTTGTTGCTGGTTGCATGA XM_038732985 il-10 CCACCAGAATGACTCCTCGG TGGTTGTTGCACATGGGACT XM_038696252 tgf-1 CTTTACTACGTGGGCAGGCA ATAGGTTTGAGGCGAGGCAG XM_038693206 tor CCAAAGACGTGCTGTTCACC GAGCCTTCAGAAACCTGCGA XM_038702468 pi3k GGATGAGACACAGAAGATGCGACCTCAGGTTTCCCAGTTGGT XM_038715187 akt TCTGGAGCATGTCTGCCAAT TTTTTGCCAAAGGACAGCCG XM_038701564 4ebp1 ATATCCGATACAGGCGCGTT TGGTCTTCTGGCAGTCAGTG XM_038703877 s6k1 GATTCTTGTGTGCGCCGTTT ACCTACGGAGAAAGCAACCG XM_038694705 1.8 计算公式 实验鱼的增重率、特定生长率、饲料系数、成活率、肥满度、肝体比、脏体比和日摄食率的计算公式：增重率(WGR,%)=(终末鱼均重初始鱼均重)/初始体重100 特定生长率(SGR,%/d)=ln(终末鱼均重)ln(初始鱼均重)/养殖天数100 饲料系数(FCR)=摄入的饲料总重/(终末鱼总重初始鱼总重)成活率(SR,%)=终末鱼体数量/初始鱼体数量100 肥满度(CF)=鱼体重量/(鱼体长)3100 肝体比(HSI,%)=肝脏重量/鱼体重量100 脏体比(VSI,%)=内脏重量/鱼体重量100 日摄食率(FR,%)=摄入的饲料总量/(初始鱼体重+终末鱼体重)/2/养殖天数100 1.9 数据处理 采用 SPSS 25.0 软件对数据进行方差分析，并用Tukey test进行多重比较，以 P0.05作为显著性差异。所有数据均用平均值标准误(MeanSE)表示。2 结果 2.1 不同饲料投喂组大口黑鲈生长性能及全鱼常规成分 不同饲料投喂组鱼的生长性能及全鱼常规成分如表 3 所示。在生长性能方面，D1D7 组中，D3 组鱼的末重、增重率、特定生长率最大，显著高于其他组(P0.05)，其饲料系数最小，显著低于其他组(P0.05)。在全鱼常规成分方面，各组间的水分、灰分无显著性差异(P0.05)。D3 组全鱼粗蛋白含量显著高于 D5 组(P0.05)。D3 组全鱼粗脂肪含量显著低于D4 和 D6 组(P0.05)。2.2 不同饲料投喂组大口黑鲈组织生化指标 不同饲料投喂组鱼组织生化指标见表 4。各组鱼的血清尿素氮、谷丙转氨酶活性和血氨含量，以及肝脏谷丙转氨酶活性均无显著性差异(P0.05)。其中，第 5 期 江坤生等:大口黑鲈配合饲料中 3 种动物蛋白源的不同添加比例对其生长性能、肠道健康及蛋白质代谢的影响 37 表 3 不同饲料投喂组大口黑鲈的生长性能及全鱼常规成分 Tab.3 Growth performance and whole-body composition of Micropterus salmoides fed with different diets 饲料处理组 Dietary treatment 项目 Items D1 D2 D3 D4 D5 D6 D7 初始体重 IBW/g 55.100.92 56.060.0455.300.1555.250.1355.860.28 56.160.15 55.700.31 终末体重 FBW/g 167.612.75b 169.580.96b180.762.19a171.452.26b168.481.55b 169.570.95b 165.421.71b增重率 WGR/%204.221.44bc 202.501.69bc226.863.69a210.324.19b201.602.04bc 201.941.93bc 196.971.46c特定生长率 SGR/(%/d)1.870.01bc 1.850.01bc1.970.02a1.890.02b1.840.01bc 1.840.01bc 1.820.01c饲料系数 FCR 0.980.01ab 0.960.01b0.910.01c0.970.01b1.000.01ab 0.980.01b 1.010.01a日摄食率 FR 1.650.01ab 1.600.01b1.600.02b1.640.01ab1.640.01ab 1.620.01b 1.670.03a肥满度 CF 2.500.07 2.490.032.430.022.610.062.520.04 2.350.14 2.520.08 肝体比 HSI/%2.280.16 2.060.111.930.012.100.022.280.13 1.820.13 2.300.10 脏体比 VSI/%8.220.15 7.790.187.510.128.120.178.170.40 7.680.14 7.940.15 成活率 SR/%95.201.39 96.200.5895.332.1995.750.6395.001.08 94.801.32 95.000.58 常规成分 Composition/%WT 水分 Moisture 68.410.54 68.430.2169.140.3568.230.4268.500.20 68.440.11 68.460.27 粗蛋白 Crude protein 17.570.10ab 17.540.05ab17.780.09a17.200.29ab17.060.06b 17.300.11ab 17.360.12ab粗脂肪 Crude lipid 9.530.23bc 9.260.19bc9.150.18c10.290.27ab9.630.32abc 10.730.14a 9.940.17abc灰分 Ash 3.810.06 3.870.063.970.223.940.214.090.12 4.060.25 3.950.11 注：同一行中不同小写字母表示相互间有显著差异(P0.05)，下同。Note:Values in the same row without common superscript letter means significant differences(P0.05)。D3 组鱼的血清总氨基酸含量显著高于 D1组和 D4 组(P0.05)，肝脏总蛋白含量显著高于 D7组(P0.05)；而 D3组鱼血清的谷草转氨酶最低，显著低于 D5 组(P0.05)。2.3 不同饲料投喂组大口黑鲈肌肉常规成分和质构特性 不同饲料投喂组鱼肌肉质构特性和常规成分如表 5 所示。在肌肉质构特性方面，各组间的粘性、弹性和黏聚性均无显著差异(P0.05)。D3 组肌肉的硬度和胶着性显著低于 D4 组(P0.05)。D3 组肌肉的咀嚼性显著低于 D6 组(P0.05)。D3 组鱼的肌肉回复性显著小于 D1 组和D7 组(P0.05)。在肌肉常规成分方面，各组间水分、粗蛋白、粗脂肪及灰分含量均无显著差异(P0.05)，其中，D3 组鱼的肌肉粗蛋白含量最高，灰分含量最低。2.4 不同饲料投喂组大口黑鲈肠炎症因子和肝脏蛋白合成代谢相关基因表达水平 不同饲料投喂组鱼肠道炎症因子相关基因表达水平见图 1A。在 D1、D3 和 D7 组中，D3 组肠道促炎因子基因 il-1、tnf 和 il-6 mRNA 表达水平最低，其中，il-1 和 il-6 mRNA 表达水平显著低于 D1 组(P0.05)。D3 组肠道抗炎因子基因 il-10 和 tgf-mRNA 表达水平最高，其中，il-10 mRNA 表达水平显著高于 D7 组(P0.05)。不同饲料投喂组鱼肝脏蛋白质代谢相关基因表达水平见图 1B。在 D1、D3 和 D7 组中，D3 组蛋白代谢基因 tor、s6k1、akt 和 pi3k mRNA 表达水平最高，显著高于 D7 组(P0.05)。D3 组翻译抑制因子 4ebp-1 表达水平显著低于 D1 组(P0.05)。表 5 不同饲料投喂组大口黑鲈的肌肉常规成分和质构特性 Tab.5 Muscle texture and composition of Micropterus salmoides fed with different diets 饲料处理组 Dietary treatment 项目 Items D1 D2 D3 D4 D5 D6 D7 常规成分 Composition/(%wet weight basis)水分 Moisture 76.760.65 75.941.43 77.210.71 74.801.48 76.980.14 76.920.48 76.930.23 粗蛋白 Crude protein 19.470.23 19.900.50 20.280.41 19.640.36 19.970.11 19.340.20 19.880.15 粗脂肪 Crude lipid 3.280.27 4.070.12 3.340.47 3.760.31 3.860.17 3.520.17 3.350.45 灰分 Ash 1.350.09 1.270.04 0.980.08 1.370.16 1.240.11 1.050.04 1.190.11 质构特性 Muscle texture 硬度 Hardness/gf 82.393.12ab 69.254.41b68.453.66b96.063.83a85.175.68ab 71.384.47b 83.063.01ab粘性Adhesiveness/(gf-mm)0.460.06 0.540.03 0.680.08 0.710.09 0.540.07 0.550.03 0.680.04 弹性 Springiness/mm 0.560.01 0.570.02 0.560.02 0.590.01 0.570.02 0.580.01 0.570.01 咀嚼性 Chewiness/gf 30.461.57ab 27.932.47b28.181.63b36.062.38ab37.793.34ab 41.683.89a 31.382.25sb胶着性 Gumminess/gf 51.172.58ab 47.343.57b47.932.54b65.772.80a58.915.64ab 54.674.46ab 50.522.23ab黏聚性 Cohesiveness 0.640.01 0.640.01 0.630.01 0.650.01 0.630.01 0.640.01 0.650.01 回复性 Resilience 0.820.02a 0.770.02ab0.730.01b0.770.01ab0.810.02ab 0.810.02ab 0.830.02a 3 讨论 大量研究表明，水产配合饲料的蛋白源及比例不同，其促生长和维护健康的效果不一样，其原因可能与鱼粉的替代量、蛋白源的种类、氨基酸组成、适口性等有关(郝甜甜等,2022;黎恒基等,2022;Ma et al,2020;Mohammadi et al,2020;Khalil et al,2021;Hang et al,2022)。在杂交石斑鱼(E.lanceolatus E.fuscoguttatus)相关研究中发现，相比于鱼粉对照组(55%鱼粉)，饲料中鸡肉粉替代 40%60%的鱼粉具有相同的促生长效果，而当饲料中鱼粉降至 11%、鸡肉粉升至 44%，鱼体的增重率和特定生长率被显著抑制(Wang et al,2020)。曹晓莉等(2020)研究发现，鸡肉粉替代鱼粉比例不超过 45%(基础饲料鱼粉为 55%)对黄鳝(Monopterus albus)的生长无负面影响，而替代 60%饲料鱼粉则显著抑制了其生长性能。相似的是，Huang等(2022)在卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)中发现，猪肉粉替代饲料中 30%鱼粉(基础饲料鱼粉为 30%)对生长 第 5 期 江坤生等:大口黑鲈配合饲料中 3 种动物蛋白源的不同添加比例对其生长性能、肠道健康及蛋白质代谢的影响 39 图 1 不同饲料投喂组大口黑鲈肠炎性因子(A)和肝脏蛋白合成代谢相关基因(B)的表达水平 Fig.1 Relative mRNA expression of intestine inflammatory factor(A)and liver protein synthesis(B)in the Micropterus salmoides fed with different diets 不同小写字母表示组间有显著差异(P0.05)。Values without sharing a common letter means significant differences(P0.05).性能无负面影响，而当替代比例超过 30%则显著降低了鱼的增重率。本研究发现，D3 组大口黑鲈增重率、特定生长率显著高于其他组，且饲料系数显著低于其他组，说明 28.8%鱼粉/16.0%猪肉粉/22.6%鸡肉粉的饲料动物蛋白源组合更有利于大口黑鲈生长。鱼体的生长是其体蛋白合成的体现。血清总氨基酸、血氨及总蛋白含量是评估鱼体蛋白质合成的重要指标。部分氨基酸在鱼体内被氧化分解，其主要产物是氨。研究表明，血氨含量与机体氨基酸分解代谢成正相关性，而氨基酸水平与机体蛋白质合成正相关(林淑琴等,2014;Wang et al,2020)。肝脏的谷草转氨酶、谷丙转氨酶活性及总蛋白含量也与机体的蛋白质合成正相关(石英等,2009)。在暗纹东方鲀(Takifugu obscurus)的 研 究 中，发 现 饲 料 中 鸡 肉 粉 替 代15%60%的鱼粉(对照组鱼粉为 45%)不会显著影响鱼体血清总蛋白含量(崔锡帅,2022)。Li 等(2019)对大口黑鲈的研究发现，相比于对照饲料组(51%鱼粉)，采用鸡血浆粉替代饲料中 10%30%鱼粉，对血清总蛋白含量无显著影响。对西伯利亚鲟(Acipenser baerii Brandt)的相关研究发现，饲料中添加 5%的鸡肉粉不会影响其肝脏谷丙转氨酶活性，对蛋白质代谢无显著影响(Zhu et al,2011)。本研究中，D3 组血清的血氨含量较低，而血清总氨基酸和肝脏总蛋白含量较高，表明该组饲料有利于大口黑鲈的蛋白合成。研究表明，mTOR 能够感知细胞内的营养素变化，从而调控下游 4E 结合蛋白 1(4EBP-1)、核糖体蛋白 S6 激酶(S6K1)等靶蛋白，在蛋白质合成代谢中有重要作用(Jing et al,2016;Kim et al,2003;Ma et al,2009)。同时，在蛋白质合成代谢中，PI3K/AKT 信号通路也发挥着关键作用，PI3K/AKT 信号通路可通过激活 mTOR 信号通路、影响蛋白质翻译起始，进而影响蛋白质合成(Rommel et al,2001;Terada et al,1994)。对青斑(Cromileptes altivelis)的研究发现，与对照组(69.18%鱼粉)相比，饲料中用复合蛋白(鸡肉粉、血红蛋白粉和大豆蛋白)替代 21%63%的鱼粉不会显著影响其肝脏 tor 和 s6k1 的 mRNA 表达水平(Geng et al,2022)。Irm 等(2020)在黑鲷(Acanthoparus schlegelii)中发现，饲料中鸡肉粉替代 30%的鱼粉(对照组饲料鱼粉含量为 40%)会显著上调其肝脏 tor、s6k1、pi3k、akt 的 mRNA 表达水平，促进蛋白质合成。Li 等(2021)报道，相比 45%鱼粉+17%植物蛋白组，饲料中添加 35%鱼粉、5.4%水解虾蛋白和 23.4%植物蛋白显著上调了大口黑鲈肝脏 tor的 mRNA表达水平，同时显著下调了肝脏 4e-bp1 的 mRNA 表达水平。本研究中，D3 组肝脏 tor、s6k1、pi3k 及 akt 的mRNA 表达水平显著高于 D7 组，4ebp-1 表达水平显著低于 D1 组，表明 D3 组饲料可通过激活肝脏 TOR信号通路，提高机体蛋白质合成代谢表达水平，从而提高大口黑鲈的生长性能。饲料蛋白源和氨基酸的营养失衡易导致鱼体产生氧化应激(于晓彤,2016;Ji et al,2022)。而机体氧化应激会导致炎症的发生。在调节炎症反应过程中，TNF-、IL-1 和 IL-6 等促炎因子，引发炎症反应；而 IL-10、TGF-等抗炎因子能缓解炎症，对机体具有保护作用(Liang et al,2018)。Gaudioso 等(2021)在虹鳟(Oncorhynchus mykiss)的研究中发现，饲料中添加 17.8%或 36.0%鸡肉粉不会影响其肠道 il-1、il-10及 tgf-的 mRNA 表达水平。在大口黑鲈的相关研究中，饲料中添加 36.5%的蛋白水解物会显著提高鱼肠道抗炎基因 il-10 和 tgf-的表达水平(Sheng et al,2022)。Li 等(2022)则发现，与对照组(59.14%鱼粉)相比，棉籽浓缩蛋白替代 100%的鱼粉会上调大口黑鲈肠道促炎因子的表达，下调鱼肠道抗炎因子的表达。本研究发现，D3 组鱼肠 il-1、il-6 mRNA 表达40 渔 业 科 学 进 展 第 44 卷 水平下调，而 il-10 mRNA 表达水平上调。说明 D3组饲料可降低其炎症反应，维护肠道健康。以上结果说明，饲料中的不同蛋白源的不同组成比例会对鱼类肠道炎症反应产生不同的结果，可能与蛋白源的种类及添加比例、鱼的种类等有关。本研究表明，D3 组饲料能够降低大口黑鲈肠道炎症反应，改善其健康，从而促进鱼的生长。鱼类的肌肉品质会受到内外多种因素的影响，如品质、规格、遗传、养殖条件以及饲料组成等(de Paula et al,2014;Gisbert et al,2016)。质构特性是评价肌肉品质的重要指标。研究表明，肌肉硬度与其嫩度存在一定的负相关(鉏晓艳等,2021)。本研究发现，相比其他饲料组，D3 组大口黑鲈肌肉硬度最小，其水分含量最大，这表明 D3 组饲料有利于提高其肌肉嫩度。程小飞等(2020)发现饲料中添加猪肉骨粉不会显著影响芙蓉鲤鲫(Cyprinus capio Furong Carassius auratus re