羊小反刍兽疫防控关键技术研究进展_马梦真.pdf

动物医学进展，（）：文献综述羊小反刍兽疫防控关键技术研究进展收稿日期：基金项目：陕西省重点研发计划项目（）；青海省重点研发与转化计划项目（）作者简介：马梦真（），女，河南洛阳人，硕士研究生，主要从事预防兽医学研究。通讯作者马梦真，雷馨雨，李登亮，姜悦才，陈曦，朱芳，张天亮，高士孔，陈德坤，马文涛（西北农林科技大学动物医学院，陕西杨凌 ；陕西千阳莎能奶山羊发展有限公司，陕西宝鸡 ；神木市畜牧业发展中心，陕西榆林 ）摘要：小反刍兽疫是一种由副黏病毒科麻疹病毒属的小反刍兽疫病毒感染引起的传染病，该病主要在羊群中传播，该病一旦在羊群暴发，病死率可高达 ，因此又称为羊瘟。当前，在我国周边的阿富汗、印度、巴基斯坦等国家，小反刍兽疫常呈流行性发生，国内的新疆等地是易发生该病的地区，该病的发生和流行给各个发展中国家的养羊业带来了严重的经济损失。论文主要介绍了小反刍兽疫的检测方法和疫苗研究进展，重点介绍了疫苗在小反刍兽疫防控中的重要性以及疫苗免疫程序的制定，以期为羊场小反刍兽疫的净化提供参考。关键词：小反刍兽疫；检测；疫苗；防控；净化中图分类号：；文献标识码：文章编号：（）小反刍兽疫（，）是由小反刍兽疫病毒（，）所引起的一种传染病，绵羊和山羊均易感，山羊又较绵羊更易感。该病于 年在非洲科特瓦迪首次被发现，在 年时传入我国西藏阿里地区，第例小反刍兽疫病例为山羊，病例发生后，采取了对患病山羊进行扑杀，并且加强动物的交通运输管制以及增加了对于羊群的筛查等措施。在 年时，小反刍兽疫在我国新疆、西藏、甘肃、山西等 多个省市皆有疫情暴发，给羊场造成了很大的经济损失。由于其较高的发病率和病死率，以及较难控制的扩散，小反刍兽疫在我国被列为必须报告的一类疫病，并且需要进行强制免疫。我国目前采取的防控技术主要是进行疫苗接种免疫，在调运时加强对羊群的管理，入站之前进行严格的检查以避免疫情的发生。国内小反刍兽疫流行现状近年来我国小反刍兽疫 呈 现出散发流 行。年月黑龙江省佳木斯市郊区某养殖户发生小反刍兽疫疫情，病死率为。同年月，江苏省南通市如皋市、海安县、如东县部分养殖户从外省调入的羊发生小反刍兽疫疫情，病死率为，同一时间，辽宁省铁岭市调兵山市某养殖户发生小反刍兽疫疫情，病死率为。年月湖南省衡阳市耒阳市某养殖场发生小反刍兽疫疫情，病死率为。年月至 年月，全国共报道 起小反刍兽疫疫情，其中 起涉及地区包括新疆建设兵团、青海、西藏以及内蒙古。其余起疫情分别发生在辽宁省抚顺市清原县，青海省海西州格尔木市，拉萨市堆龙德庆区、尼木县、当雄县交界处及青海省海西州都兰县国家自然保护区。而小反刍兽疫病毒在羊群中流行之外，也多次在野生动物体内发现，发生在青海省海西州都兰县国家自然保护区的疫情，导致 只野生岩羊死亡，在拉萨市堆龙德庆区、尼木县、当雄县交界处发生的野生岩羊小反刍兽疫疫情导致 只岩羊死亡。以及在新疆的乌鲁木齐和库车的鹅喉羚种群等，都曾发生过小反刍兽疫疫情，这些野生动物感染小反刍兽疫病毒的案例警示我们，自然放牧条件下存在着自然疫源病毒感染的风险，仍需按照国家规定进行强制免疫，以降低疫情出现的风险。综上所述，小反刍兽疫目前在我国呈现散发流行。尽管小反刍兽疫属于国家强制免疫的疾病，但DOI:10.16437/ki.1007-5038.2023.06.021是仍然存在发生疫情的风险，对于该病仍然需要严格的管控。尤其是经常调运交易羊群的地区，在调运过程中应将羊群的健康放在首位，并在羊群进入羊场前进行严格的检查，以减少疫情发生的风险。小反刍兽疫的传播途径及管控措施山羊和绵羊是小反刍兽疫病毒的主要宿主。陈曦等通过羊血液及鼻腔黏液进行抗体和核酸检测进行羊群检疫，证明患病羊的鼻液、血液等带有大量病毒，表明该病既可通过与患病羊直接接触导致感染，易感羊也可通过接触患有小反刍兽疫羊分泌物污染的水或者饲料而感染，或是通过气溶胶的形式，在呼吸系统的作用下间接感染。羊群感染后可根据免疫力不同，表现出感染后发病与感染后不发病两种状态。感染后无临床症状状态的羊也能够持续不断地向环境中排毒，造成疫病的传播，导致周围更多的其他免疫力低下的羊感染，成为最容易被养殖人员忽视的隐性传染源。因为上述的传播方式，该病在个体和群体间的传播速度都非常快，在不同地域之间的传播也是如此。因为该病目前尚无有效的治疗药物，携带病毒的羊一旦发病，只能依靠自身免疫力来抵抗病毒，因此该病病死率较高，在疫病暴发较严重地区有可能超过，这对于羊场而言势必造成很大的经济损失。为了减少带毒羊群造成环境污染从而使更多健康的羊感染，要及时处理传染源，切断传播途径，一旦在羊群中检查出具有感染性的小反刍兽疫病毒，应立即对羊群进行隔离，并对羊场进行彻底消毒。在之后的每半个月对羊场的圈舍、食槽、饮水槽器具都进行消毒，可使用氯化物或者酚化物消毒药物喷洒。并且定期检查羊场剩余羊群的健康状况，对于疾病要及时的发现，对羊只进行编号，记录羊只接种疫苗等的信息，以便于管理 。众所周知，小反刍兽疫以前只在我国新疆地区，但后来随着新疆羊只被贩运到内地，也引发了内地多地暴发小反刍兽疫。推测其原因可能就是小反刍兽疫病毒带毒羊，因为外表正常无任何症状，被误以为是健康羊转运到内地。长途应激导致带毒羊发病，因为被贩运的应激羊群大量感染发病，进而暴发了小反刍兽疫。因此，该病防控的一个关键环节就是应该加大对异地贩运羊只的病原检测。小反刍兽疫的病原检测病毒分离鉴定临床上关于小反刍兽疫的检测方法有很多，病毒的 分 离 鉴 定 方 法 是 鉴 定 小 反 刍 兽 疫 的“金 标准”。小反刍兽疫病毒能够在原代的牛和绵羊细胞以及 细胞、细胞中生长繁殖，因此可以采取患病羊的眼分泌物、鼻液、唾液、直肠分泌物的棉拭子或者血液样本进行病毒的分离试验，之后在上述细胞中接种病毒，接种后的细胞出现合胞体即表示发生病变，证明分离出的病毒具有感染性。相对于病毒核酸检测技术（如 技术）而言，病毒分离技术虽然灵敏度较低，但该技术的准确性使其更适合用于临床诊断和流行病研究。因此，病毒分离技术通常与其他更灵敏的研究技术相结合，用于动物病毒病的流行病调查和疫病诊断，其得出的结论更科学真实。病毒抗原检测琼脂双扩散法是一种常见的病毒检测方法，可溶性抗原可以和抗体在琼脂糖凝胶中形成沉淀线，以此来检测是否存在小反刍兽疫病毒，由于其操作简单且经济实惠，非常适用于实验条件受限的地方进行检测。眼、口、鼻分泌物或是排泄物以及发生病变的组织都可以进行检测。该方法的缺点是灵敏度较低，耗时相对较长。相较于琼脂双扩散，对流免疫电泳也是一种较好的方法，这种方法不仅简单便捷，其所耗费的时间也较短，有更高的灵敏度。酶联免疫吸附试验（）是一种常见的检测方法，将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体特异性结合进行免疫反应的定性和定量检测方法，在样本数目较多的情况下，一般可以采用这种方法。等 开发了一种以重 组 山 羊 信 号 淋 巴 细 胞 活 化 分 子 为 配 体 的 用于检测小反刍兽疫病毒，该检测方法对于小反刍兽疫病毒具有高度特异性，并且对于口蹄疫病毒、羊痘病毒等之间没有交叉翻译，灵敏度和特异性分别为 和 。该研究也是首次证明了山羊信号淋巴激活分子可以用于开发检测小反刍兽疫病毒。免疫层析是一种可以用于野外条件下进行诊断的快速检测方法，通过固定在硝酸纤维素膜某一区域的已知抗体抗原与相应抗原抗体的相互作用，在该区域会显示出颜色，从而进行特异性检测。其灵敏度为，特异性为。并且可以检测到代表种谱系的小反刍兽疫病毒分离物，在动物感染 临床症状较少时便可以检测到。病毒核酸检测常见的定性核酸检测方法是 ，是一种用于放大扩增特定的 片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊 复制，的最大动物医学进展 年第 卷第期（总第 期）特点是能将微量的 大幅增加。将 产物进行琼脂糖凝胶电泳，即可得知检测结果。该方法对于操作人员的要求不高，在县级实验室一般就能够完成。但是该方法只是定性检测，不能具体得知动物的带毒情况。（）是反转录核酸检测技术，相较于夹心 ，是一种具有更高灵敏度的检测方法。是一种将 的反转录（）和 的 相结合的技术。首先经反转录酶的作用，从 合成 ，再以 为模板，在 聚合酶作用下扩增合成目的片段。该测试方法可以对于患病动物的带毒情况进行检测，更为准确的描述患病动物的情况，但是对于操作人员技术以及实验室条件有一定要求。是一种比 的敏感性高 倍的检测方法，在 扩增以后，在微孔板上借用 的原理，使用酶标抗体，进行固相杂交来实现定量。但是该方法所耗费的时间更长，操作要求也更加严格，因此该方法常用来检测疑似病例，并不适合在样本数目较多时使用。综上所述，对于患病动物的病原检测可以采用病毒分离鉴定、病毒抗原检测以及病毒核酸检测等方法，常见的检测方法有琼脂双扩散法、免疫层析等，这些方法不仅操作简单，并且可以在样本数目较多的时候使用。病毒的核酸检测例如 通常在样本数量较少时使用，因为该方法虽然灵敏，但消耗的时间更长，并且对于操作条件有苛刻的要求。近年来，重组酶聚合酶扩增（，）快速核酸检测技术有了很大的进展，重组酶与引物结合形成的蛋白 复合物，能在双链 中寻找同源序列。一旦引物定位了同源序列，就会发生链交换反应形成并启动 合成，对模板上的目标区域进行指数式扩增。被替换的 链与 结合，防止进一步替换。这种方法逐渐取代了 以及 的 地 位，成 为 病 原 体 检 测 的 主 要 方式。疫苗免疫疫苗的发展预防小反刍兽疫最好的方法为及时有效地接种疫苗。在小反刍兽疫疫苗尚未研发出来之前，小反刍兽疫多采用牛瘟病毒疫苗来进行预防。小反刍兽疫减毒疫苗用于临床后，取得了很好的预防效果，通常只需要每年接种一次疫苗，就可以预防该病的发生。但减毒疫苗的耐热性较差，而小反刍兽疫在一些热带、亚热带国家发生较多，因此研发出更好更安全的疫苗是非常重要的。在一些非流行地区，灭活疫苗是一种较好的选择。使用灭活疫苗进行接种时，以佐剂配制第针注射后，在鼠和山羊体内有 的血清转化，并且有较好的持续时间。这表明灭活疫苗与佐剂配合，是一种效果良好甚至有希望替代减毒疫苗的方法。之后又研发出痘病毒载体重组疫苗，但是这些疫苗诱导的免疫效果十分差，没有超出实验阶段。近年新兴起的转基因植物载体疫苗仍在研发过程中，但一些研究已经表明该疫苗具有预防作用。首免时间的确定新生羊对于小反刍兽疫的抵抗力要远远弱于成年羊。因此，一个科学的首免时间可以有助于羊场制定合理的免疫程序来预防小反刍兽疫。可以通过测定母羊产下羔羊后的第、天的抗体水平，去分析新生羔羊的母源抗体的上升与下降的趋势，以及在不同品种间母源抗体的差异。也可以将母羊产前 体内的抗体水平与产后的羔羊抗体水平相比较，用以研究了解母羊与新生羔羊之间是否存在抗体抑制的表现。通过这些变化与差异来确定最佳首免日龄。李洁等 的研究表明，羔羊在 日龄以前均可得到母源抗体较好的保护，在 日龄时，其母源抗体阳性率下降为，日龄时已经下降到。因此建议羔羊首免时间在 日龄左右。疫苗效果评估在接种疫苗后的一段时间（年左右），羊体内可检测到小反刍兽疫病毒所引发的抗体，通过抗体水平的监测可以判断出疫苗的免疫效果是否良好，并为接下来的免疫程序的制定提供依据。抗体检测方法中，病毒中和试验是一种常见的方法。但是由于进行中和试验时，需要耗费时间去进行细胞培养工作，难以用于日常的检测。正如上述内容所描述的，在日常大规模的检测中，是较为适用的方法，其操作更为简单，具有商品化的试剂盒，相应所耗费的时间较少，更为经济便捷。临床效果也是疫苗效果的一个重要表现。接种疫苗后，能够使动物抵抗病毒的侵染，阻止动物发病，因此疫苗接种羊群小反刍兽疫发病率以及病死率的变化情况也是疫苗效果评估的重要依据。展望在 年，世界动物卫生组织（）宣布了关于小反刍兽疫的根除计划，计划于 年前在世界范围内消除小反刍兽疫。同年我国也发布政马梦真等：羊小反刍兽疫防控关键技术研究进展策，计划于 年全面根除小反刍兽疫。从控制到消除，计划采取四个阶段循序渐进地解决，分别为评估、控制、根除和根除后阶段。其中疫苗接种被确认为第二、第三阶段所需要的主要预防控制措施。我国正处于第二、第三阶段之间，大部分省市的小反刍兽疫免疫抗体合格率都常年保持在 以上，符合国家要求，只有少数地区还未合格。严格的调运管理，规范的羊场消毒程序，以及科学的疫苗接种安排和及时的抗体监测让根除小反刍兽疫计划得以顺利实施。但是，虽然疫苗免疫效果良好且有效期长，部分地区也存在因为监管不到位而出现免疫效果较差的现象。我国幅员辽阔，许多私人经营的地处偏僻地区的羊场，或是放牧形式饲养羊群的地区，以及靠近边境地区，在疫苗有效期结束后没有有效的抗体检测，不及时接种疫苗，周围环境可能存在小反刍兽疫病毒阳性、新羊入场没有做到规范有效的隔离与消毒检测等，由于这些因素的存在，这些地区就具有疫情暴发的风险，也因此，在国内小反刍兽疫虽然控制效果良好，但还是没有彻底根除。年月份在农村农业工作部的通知中仍将小反刍兽疫列为需要进行强制免疫的疫病，要继续对全国的羊进行免疫，其主要任务为制定免疫计划、加强技术指导、做好免疫记录、落实制度报告和评估免疫效果。坚持预防为主，应免尽免，争取让少部分抗体合格率低下的地区得到明显提升。小反刍兽疫严重危害着世界各地的养羊企业，对羊产业经济造成严重的冲击，甚至会危害到人类自身的健康。为减少其带来的危害，应该更加严格地管理各地新羊的输入，切断传播途径；及时有效科学地进行疫苗的接种，消灭传染源。现如今，在全球各地人们共同的努力下，在各国政策全力支持下，小反刍兽疫的控制效果得到明显的提升，我国小反刍兽疫的防控也取得了良好的效果 。而在科研人员的不断研究中，人们对于小反刍兽疫病毒的了解也越来越深刻，相信未来一定可以成功将其根除。参考文献：杨家禹，袁晓娟，梁均 贵州山区小反刍兽疫综合防控措施中国乳业，（）：张大俊羊痘疫苗与小反刍兽疫疫苗同时或单独免疫效果比较及分析北京：中国农业科学院，肖会元羊小反刍兽疫流行病学、临床症状及防控畜牧兽医科学（电子版），（）：宋焕堂，江萍，丁剑，等新疆小反刍兽疫流行现状及防控措施现代畜牧兽医，（）：高睿，罗艳，庄向婷，等 以小反刍兽疫防控为例浅谈规模化羊场生物安全体系建设吉林畜牧兽医，（）：，（）：王炯羊小反刍兽疫诊断与防治畜牧兽医科学（电子版），（）：袁凯海门地区山羊口蹄疫和小反刍兽疫防控效果的监测江苏扬州：扬州大学，孙瑶，艾军，姜平小反刍兽疫检测方法研究进展中兽医医药杂志，（）：邹娜 羊小反刍兽疫诊断与防治 中国畜禽种业，（）：，：，（）：，（）：，（），（）：徐国范 羊小反刍兽疫综合防控措施 中国畜牧业，（）：，（）：，（）：，（）：，（）：，（）：任杨，李永琴，许立华 宁夏某地区羔羊小反刍兽疫疫苗首免日龄的探索 黑龙江畜牧兽医，（）：孙瑛瑛 母源抗体对哈萨克羊小反刍兽疫疫苗免疫效果的影响中国畜禽种业，（）：，（）（），（）：动物医学进展 年第 卷第期（总第 期）安茹延庆区羊小反刍兽疫抗体水平检测养殖与饲料，（）：陈曦，占松鹤，洪功飞，等 年安徽省小反刍兽疫监测 中国动物检疫，（）：，（）：李洁，高博，吴爱睿，等 绵羊小反刍兽疫母源抗体的消长规律甘肃畜牧兽医，（）：，：，（），（）：索郎扎西小反刍兽疫诊断技术和疫苗研究进展中兽医学杂志，（）：，（）（），（）：，（）（），（）：，：（）（），（）：，（.，；.，.，；.，）：（），：；马梦真等：羊小反刍兽疫防控关键技术研究进展