紫檀茋减轻百草枯诱导的模型大鼠肺纤维化.pdf

年 月第 卷 第 期基础医学与临床 收稿日期：修回日期：基金项目：陕西省重点研发计划（）通信作者（）：文章编号：（）研究论文紫檀茋减轻百草枯诱导的模型大鼠肺纤维化陈新军，王卿语，陈 乐，古春昱，武 卓陕西省人民医院 急诊内科，医学装备部，陕西 西安 摘要：目的 探究紫檀茋（）减轻百草枯（）诱导大鼠肺纤维化的作用及机制。方法 将大鼠随机分为对照（）组，组（次性灌胃 百草枯），低、中、高剂量 干预组（灌胃 后分别灌胃、和 。每天 次，共 。）。治疗 后，用苏木精伊红（）染色评价肺组织形态，用 三色染色评价肺纤维化。检测支气管肺泡灌洗液（）中、和 水平。用试剂盒检测肺组织中 和 含量。检测肺组织中、和 的蛋白表达。结果 与对照组比较，组大鼠肺组织损伤程度，肺纤维化评分，中的、和 水平，肺组织中 含量，、和 的蛋白表达水平，和 蛋白的磷酸化水平均显著升高（），而肺组织中 含量，和 的蛋白表达水平均显著降低（）。干预后，与 组比较，组大鼠肺组织损伤程度，肺纤维化评分，中的、和 水平，肺组织中 含量，、和 的蛋白表达水平，和 蛋白的磷酸化水平均显著回降（），而肺组织中 含量，和 的蛋白表达水平均显著回升（）。结论 紫檀茋可能通过激活 和抑制 和 信号通路减轻肺部氧化应激和炎性反应，从而抑制纤维化进展。关键词：紫檀茋；百草枯；肺纤维化；氧化应激；炎性反应中图分类号：；文献标志码：，；，：（）（），（），（，），（），（），基础医学与临床 （），（），（），（），（）：；肺纤维化是百草枯（，）中毒最典型的特征之一。核因子红细胞 相关因子（，）途径引起的氧化应激，核因子（，）途径引起的炎性反应和转化生长因子（，）途径引起的纤维化是肺纤维化发生的 个关键途径。百草枯通过抑制 信号通路引起肺组织氧化应激，通过激活 信号通路诱导炎性反应，通过激活 信号通路引起人肺泡上皮细胞上皮细胞间充质转化（，），最终引起肺纤维化。目前，临床中缺乏有效治疗百草枯中毒和抑制相关肺纤维化进展的药物。紫檀茋（，）是从蓝莓和囊状紫檀中得到的芪类化合物，多项文献报道了紫檀茋的抗肺纤维化作用。本研究探索了紫檀茋对百草枯诱导的大鼠肺纤维化的抑制作用，旨在为临床治疗百草枯中毒提供候选药物。材料与方法 材料 试剂：百草枯溶液（公司）；紫檀茋（纯度为 ，公司）；苏木精伊红（，）染色试剂盒、三色染色试剂盒和苏木精（北京索莱宝科技有限公司）；大鼠白细胞介素（，）试剂盒（武汉菲恩生物科技有限公司）；大鼠白细胞介素（，）试剂盒（上海中乔新舟生物科技有限公司）；大鼠巨噬细胞炎性蛋白（，）试剂盒（上海富雨生物科技有限公司）。丙二醛（，）试剂盒、超氧化物歧化酶（，）试剂盒、二氨基联苯胺（，）显色试剂盒和高灵敏增强型化学发光（，）发光检测试剂盒（南京建成生物工程研究所）；裂解液和 试剂盒（碧云天生物技术研究所）；一抗、平滑肌肌动蛋白（，）一抗、一抗、核因子 相关因子（，）一 抗、一 抗、一 抗、一 抗、一 抗、一 抗、甘 油 醛磷 酸 脱 氢 酶（，）一 抗、辣根过氧化物酶（，）偶联的 二抗（公司）。动物：级雄性 大鼠（周龄，体质量）陕西师范大学【生产许可证：（陕）】。将大鼠在（）、湿度、光暗循环照明的环境中饲养，大鼠自由饮食。方法 动物的分组及处理：将大鼠随机分为对照组陈新军 紫檀茋减轻百草枯诱导的模型大鼠肺纤维化（），百草枯组（组，次性灌胃 百草枯），低、中、高剂量紫檀茋干预组（、和 组，灌胃 百草枯 后分别灌胃、和 紫檀茋）。每天给药 次，共给药 。肺部组织学染色：常规制作石蜡切片，使用 染色评价肺组织形态。使用 三色染色评价肺纤维化，根据文献的评分方法进行纤维化评分。检测 中的细胞因子：常规收集支气管肺泡灌洗液（，）。将细胞悬液 离心 ，取上清液。测定 中细胞因子、和 水平。肺组织氧化应激指标的检测：取肺组织研磨制备匀浆，离心 ，取上清液。根据试剂盒说明检测大鼠肺组织中 和 的水平。免疫组织化学染色检测肺组织 和 蛋白表达：将肺组织切片用 消除内源性过氧化物酶，然后在柠檬酸盐缓冲液中微波加热至 并维持 进行抗原修复。使用含 的 溶液洗涤切片 次，然后使用山羊血清在 封闭切片 。然后 在 下 与 稀 释 的 和 一 抗 孵 育 过 夜。使 用 含 的 溶液洗涤切片 次，然后与 稀释的 偶联的二抗 孵育 。显色，苏木精复染。使用光学显微镜在 倍放大倍数下拍照。检测肺组织、和 蛋白表达：裂解液裂解肺组织，使用 试剂盒测定蛋白质浓度。蛋白质样品经 电泳分离并转移到聚偏二氟乙烯膜。脱脂牛奶封闭 膜 ，然后将膜与（稀释）、（稀释）、（稀释）、（稀释）、（稀释）、（稀释）、（稀释）、（稀释）、（稀释）和（稀释）的一抗 过夜孵育。然后与 偶联的 二抗（稀释）室温孵育 。使用 显影，作为内参蛋白。统计学分析使用 软件分析数据，计量资料以均值标准差（）表示，采用单因素方差分析及 检验分析组间差异。结果 紫檀茋减轻肺组织损伤和纤维化 组大鼠肺组织出现明显的炎性细胞浸润，伴有肺泡出血、肺泡壁断裂、肺泡间隔水肿、肺泡间隙蛋白质碎屑增多等病变，肺组织纤维化明显。组大鼠病变程度较 组减轻，且呈紫檀茋剂量依赖性减轻（）（图）。紫檀茋降低 中的炎性细胞因子水平与对照组比较，组大鼠 中的、和 水平升高（）；与 组比较，组大鼠 中的、和 水平降低（）（表）。紫檀茋抑制肺组织氧化应激与对照组比较，组肺组织中 含量降低，含量升高（）。与 组比较，组肺组织中 含量回升，含量回降（）（表）。紫檀茋抑制了肺组织 组大鼠肺组织中 蛋白高表达，组肺组织中 蛋白表达水平低于 组（图）。与 对 照 组 比 较，组 肺 组 织 中 的 蛋 白 表 达 水 平 降 低，和 的蛋白表达水平升高（）；与 组比较，组肺组织中 的蛋白表达水平回升，和 的蛋白表达水平回降（）（图，）。紫檀茋激活了肺组织 信号通路与对照组比较，组肺组织中 的蛋白表达水平降低（）；与 组比较，组肺组织中 的蛋白表达水平回升（）（图）。紫檀茋抑制了肺组织 信号通路与对照组比较，组肺组织中 蛋白的磷酸化水平升高（）；与 组比较，组基础医学与临床 （）；图 大鼠肺组织 染色和 三色染色结果 （，）表 大鼠 中的、和 水平 ，（，）（）（）（）；表 大鼠肺组织中 和 的含量 （，）（）（）（）（）（）；肺组 织 中 蛋 白 的 磷 酸 化 水 平 回 降（）（图）。紫檀茋抑制了肺组织 信号通路对照组肺组织中 蛋白低表达，组大鼠肺组织中 蛋白高表达，组肺组织中 蛋白表达水平低于 组（图）。与对照组比较，组肺组织中 的蛋白表达水平和 蛋白的磷酸化水平升高（）；与 组比较，组肺组织中 的蛋白表达水平和 蛋白的磷酸化水平回降（）（图，）。陈新军 紫檀茋减轻百草枯诱导的模型大鼠肺纤维化；，；图 大鼠肺组织中、和 的蛋白表达 ，（，）；图 大鼠肺组织中 的蛋白表达 （，）讨论本研究首次探究了紫檀茋对百草枯诱导的肺纤维化的影响，结果表明紫檀茋减轻了百草枯中；图 大鼠肺组织中 蛋白的磷酸化水平 （，）毒大鼠的肺组织损伤和纤维化，提示紫檀茋可能是一种治疗百草枯中毒的候选药物。氧化应激和炎性反应参与了肺纤维化的病理过程。本研究表明紫檀茋降低了 中的炎性细胞因子、基础医学与临床 （）；图 大鼠肺组织中 的蛋白表达水平和 蛋白的磷酸化水平 （，）和 的水平，升高了百草枯中毒大鼠肺组织中抗氧化酶 含量，降低了氧化产物 含量，从而减少了百草枯引起的肺氧化损伤并抑制的炎性反应。参与了百草枯暴露后的肺纤维化形成。过程中，上皮标志物（如）丧失而成纤维细胞标志物（如 和）高表达，肺上皮细胞转分化为间质型肌成纤维细胞，进而形成肺纤维化。本研究表明紫檀茋升高了百草枯中毒大鼠肺组织中 的蛋白表达水平，降低了 和 的蛋白表达水平，从而抑制了肺组织。是一种具有抗氧化特性的关键转录因子，对纤维化的保护作用已在多项研究中得到证实。本研究表明紫檀茋激活了百草枯中毒大鼠肺组织 信号通路。据报道，紫檀茋通过激活 信号通路抑制脂多糖诱导的小鼠肺组织氧化应激，从而减轻肺纤维化。因此，紫檀茋可能通过激活 信号通路发挥抗氧化作用。信号通路是肺纤维化中重要的炎性反应相关途径。本研究表明紫檀茋抑制了百草枯中毒大鼠肺组织 信号通路。据报道，紫檀茋通过抑制 和 信号通路抑制脂多糖诱导的小鼠肺组织炎性反应，从而减轻肺纤维化。因此，紫檀茋可能通过抑制 信号通路减轻炎性反应引起的肺损伤。是主要促纤维化细胞因子，可刺激成 纤 维 细 胞 向 肌 成 纤 维 细 胞 转 化。激 活 的通过磷酸化 调节下游促纤维化基因的转录，如胶原蛋白和。通常由 介导。本研究表明紫檀茋抑制了百草枯中毒大鼠肺组织 信号通路。据报道，紫檀茋通过抑制 信号通路来抑制果糖诱导的肝纤维化大鼠中的肝细胞。这些结果说明紫檀茋抗百草枯诱导的肺纤维化的作用与 信号通路密切相关。综上所述，本研究表明紫檀茋在百草枯中毒大鼠中具有良好的抗肺纤维化作用，紫檀茋通过陈新军 紫檀茋减轻百草枯诱导的模型大鼠肺纤维化激活 和抑制 和 信号通路减轻肺部氧化应激和炎性反应，从而抑制纤维化进展。本研究对于百草枯中毒相关药物研发具有参考价值。参考文献：，：，：，：，：，：，：，：李美崎，邓俊，王宋平 苦参碱减轻百草枯诱导的模型小鼠肺纤维化 基础医学与临床，：，：，：，：，：，：，（），：，：，：