天然药物化学规划教材.pdf

第一章第一节绪论第二节生物合成第三节提取分离方法第四节结构研究法一、天然药物及其相关术语二、天然药物化学的定义、研究对象、研究内容三！L天然药物化学发展历史沿革和现状：1.天然药物的定义：天然来源1 L L J J Il 2.天然药物的来源：动物矿物微生物海洋天然药物/3佟然刊螂?吏/.天然药物 nat ural medic inestV一、中草药 Chinese herbal medic ine本草纲目，1892种/本草纲目拾遗，工02工种 目前我国药用植物总数，15000余种 中药 Tradit io nal Chinese Medic ine 草莓herbal 机时-f 民族药 Et hnic Medic ine 蒙药 Mongolia Medicine 藏药 Tibetan Medicine 苗药 Miao drug 生药 Crude drug4.天然药物研究现状 7疾病工医疗模物结构的改 传染、感染性疾病身心疾病、现代病 治司斗预防、保健、治疗、康复 化药化药天然药r国际市场对天然药物的需求日益增大 2000年全球植物药销售额，300亿美元天然药物销售额年增长幅度，欧共体，30%美国，20%日本，15%4.天然药物研究现状世界各地加强天然药物研发的投入1983-1994年，上市522种新药，44%天然来源1984-1995,FDA,31种抗癌新药，61%天然来源J3种抗感染新药，63%天然来源-关于天然产物的学术交流日渐活跃_ _ _ 独特的、不可替代的作用内在本质、物质基础由O三天然药物化学的定义、研究对象研究内容一 1.定义及相关术语2.研究对象-LL3.研究内容-天然药物化学一 /-hemi st ry-fnat uri-l-med i4lne-1-/厂丁.r-HVIed i c i na I c hemi st ry o f nat ura I pro duc t s运用现代科学理论与方法研究天然药物中化学成分（以生理活性成分或有效成分为主）_ _ _ 中药化学 Chemi st ry o f TCM 植物化学 Phyt o c hemi st ry 天然产物化学 Chemi st ry o f nat ura Ipro duc t s/2.天然药物化学的研究对象 V 研究对象：化学成分c hemic aI c o nst it uent s一 特别是生理活性成分或有效成分ac t i ve c o mpo undE成分的复杂性:占同药物所含成分类型不同_每种类型成分的数目相当多同种药物所含成分结构、性质各异12天然药物化学的研究对象 生理活性成分 ac t ive c o mpo und/c o nst it uent 非生理活性成分i nac t i ve c o mpo unds;，效#分I j I I I I I I I 一 无效成分 有效部位 ac t ive frac t io n/1/一种主要有效成分/一组结构相近的有效成分 有毒成分 t o xic c o mpo und正确理解成分的划,:弄理活性成分并木一k真正代表有效成分cjy效成分与无效成分的划分是相对的一 发展的A.不同类型成分，在不同天然药物中作用不同B.原来视为无效成分，可能成为有效成分过去视为有效成分，被修正、完善_一 麝香一抗炎成分一麝香酮-多肽 一丹参扩冠丹参醍-丹参酚酸D.加工、代谢等过程，可转化非活性成分为活性成分辞构*点/理化性质 提取分离方洋*构/结构修饰 构效关系I 生物转化r体内代谢过程等-生物合成大体分为以下3个阶段：1.原始和萌芽阶段（一18世纪末）2.学科真正形成阶段（19世纪）3.学科迅速发展时期（20世纪一）1.原始和萌芽阶段（18世纪末）7L7-L r4 天然药物识别、使用经验一巫术、迷信色彩-文明的进步一对疾病、天然药物的认识趋于客观231-341,晋，葛洪，抱卜子-1575,明，李一医学入门丁没食子酸一I1711,清，洪遵，集验方，樟脑1769-1786,舍勒，酒石酸、苯甲酸、乳酸、苹果酸、没食子酸2.学科真正形成阶段（19世纪）-特点一：以化学成分的发现和分离为主1806,1820,1828,1885,阿片-金鸡纳树皮烟草麻黄吗啡(mo rphine)奎宁(qu i n i ne)烟碱(nic o t ine)麻黄碱(ephedrine)吐根碱、士的宁、小糜碱，阿托品、可卡因等2.学科真正形成阶段特点二：结构鉴定以化学方法为主 氧化、还原等降解反应一推导结构碎片合成、全合成-证明结构特点三：生源合成途径、本质的揭示生源前体的识别：菇类生物碱a-Aa生源合成本质的揭示：生物细胞内多步酶促反应有机反应理论来解释机制生物合成物质用于结构确定3.学科迅速发展时期（20世纪）/I 1 J _tr-n-y 特点一：色谱技术用于天然化合物的分离和纯化1906,俄，Tsweet,碳酸钙为吸附剂，石油醴为洗脱剂，1931,德，Kuhn and Lederer,氧化铝、碳酸钙为吸附剂，4l940,提出了液液色谱法，如逆流分配 1952,James and Mart in,提出气液色谱理论 20世纪60年代，高效液相色谱出现天然化合物的分离向高效、快速、微量发展-特点二:波谱技术用于天然化合物的结构鉴定 IR：1944,Pekin-Elmer公司，第一台红外光谱仪 MS：20世纪，质谱仪El、Cl,FD,FAB,ESI,MALDI ESI-TOF,MALDI-T0FNMR：1953,30MHz的连续波核磁共振仪_ 70年代，脉的傅W叶变暖核枇共振仪/一/I1D NMR2D NMR3060100300MHz 400500600800900MHz UV,X-ray,ORD,CD等学科迅速发展时期世特点三：研究深度、广度、速度发生了革命性的变化深度、广度：机体内源活性物质F-r微量、水溶性、不稳定、大分子速度：吗啡-1804-1925利血平-1952-1956生物碱：1952前100年，95个1952-1962,1107个1962-1972,3443个3.学科迅速发展时期（20世纪特点四:生物活性测试普遍开展单纯的化合物分离活性跟踪分离小规模测试一高通量筛选HTShigh t hro ungput sc reeni中药发展的机遇天然药物在健康保障体系中的作用 中药确切的疗效相对丰富的资源I I I 1传统中药的诸多弊端药效物质基础不明 一质量难于控制药效难于保证 剂型落后必须走中药国际化之路L天然药物化学在中药现代化中的作用/1.2.阐明中药的药效物质基础中药现代化系统工程的前提建立和完善中药的质量评价标准二次开发一3.改进中药制剂剂型二次开发4.创新药物研发原创性研发5.1.阐明中药的药效物质基础探索中药防治疾病机理卡 j：J-1-4功效：发汗散寒、宣肺平喘、利水消肿物质基础：麻黄碱一肾上腺素样作用收缩血管、兴奋中枢一发汗去甲麻黄碱一松弛支气管平滑肌-平喘伪麻黄碱一升压、利尿-消肿1.阐明中药的药效物质基础促进中药药性理论研究的深入o性：热性、温热药-去甲乌药碱肾上腺素O味：辛味药（解表、理气）儿茶酚胺类 挥发油O归经：同一归经药的相同、相似化学成分I I I I一有效成分的作用靶点：麻黄碱-解痉肺经伪麻黄碱-利水膀胱经有效成分体内代谢动力学：川苜一川苜嗪在肝脏、胆囊分布多归肝、胆经1.阐明中药的药效物质基础 阐明中药复方配伍的科学内涵今单味药的有效成分研究“复方有效成分手各单味药有效成分的简单加和“协同、拮抗作用今物理、化学作用一一一一I 改变溶出度柴胡一人参人参皂苔增加柴胡皂昔的溶出一甘草一甘遂 甘草皂甘增加甘遂留菇类的溶出 发生化学反应逆汤：附子、干姜、甘草等乌头碱与甘草皂昔形成不溶性沉淀减毒黄连一吴茱萸小聚碱与大分子酸性成分形成沉淀1.阐明中药的药效物质基础-阐明中药炮制原理 炮制前后有效成分、有毒成分的变化阐明炮制原理改进炮制工艺制定炮制规范或标准如：延胡索 醋炒 增加生物碱溶出一增效_乌头类一蒸煮二水解双酯型生物碱一减毒一 黄苓冷浸淡黄苓（绿）I黄苓昔酿一变色热煮煮黄苓（黄）2.建立和完善中药的质量评价标准/I 中药材、制剂中有效成分的质量临床疗效III/II I I 1 I I 建立科学、灵敏的质控标准科学质控标准和药效的相关性:有效成分科学的质控指标H卜 以有效成分、有效部位、大类成分、有毒成分为指标,多种分析手段 中药指纹图谱技术 一1I.改进中药制剂剂型二次开发-改革的目标：三效、三小、三便 /剂%选 3 j I 有效成分的溶解性、酸碱性、挥发性、稳定性等水溶性好一注射液 双黄连/参脉口服液 生脉颗粒剂 板蓝根难溶于水片、胶囊、滴丸等 制剂工艺优化一有效成分的理化性质-制剂稳定性一有效成分的理化性质一合适PH、适当包装/./创新药物研发原创性研t-创新药物研发的必要性 割入世后化学药品受到专利保护，仿制须向创新转轨割新的药品注册法，单纯改变剂型已不能按新药申报_-创新药物研究的关键切入点：先导化合物的发现-从天然药物中发现先导物、创制新药一世界公认的有效途径 r从中药中发现先导物的优势 1I1 1M数千年临床实践一疗效确切割丰富的资源结构、活性的多样性/j:.大落,-资源可持续可用：甘草、肉欣蓉植物化学分类学原理：一亲缘关系近的植物含有相同或相似的化学成分黄连素：黄连一小聚科、防己科、芸香科植物第二节生物合成一、一次代谢和二次代谢 二、生物合成假说的提出 三、主要的生物合成途径一、一次代谢和二次代谢 一次代谢：对维持植物生命活动不可缺少的过程几乎所有绿色植物中都存在糖代谢、脂肪代谢、蛋白质代谢、核酸代谢 一次代谢产物 Pr imary met abo l it s对机体生命活动不可缺少的物质糖、脂肪、蛋白质、核酸乙酰辅酶A、丙二酸单酰辅酶A、莽草酸、氨基酸一、一次代谢和二次代谢-二次代谢：对维持植物生命活动来说不起重要作用并非所有植物中都存在 二次代谢产物 Sec o ndary met abo I it s对机体生命活动并非不可缺少的物质生物碱、黄酮、菇类、葱酿、香豆素等c o2 h2o光合作用糖代谢ATP 丙酮酸 磷酸烯醇丙酮酸 赤薛糖-4-磷酸NADPH I-乙酰辅酶A 莽草酸三度酸循环核糖核酸肽类蛋白质生物碱桂皮酸苯丙素类 木脂素 木质素 黄酮类二、生物合成假说的提出天然化合物之间的结构联系天然化合物与一次代谢产物间的联系:、生物合成假说的提出二、生物合成假说的提出6tVohBIZ薄荷(-卜 menthol)C5X2a-山道年(a-santonin)C5X3COOH海松酸 齐墩果酸(piimric acid)(oleanolic acid)C5X4 C5X6B 胡萝卜素(P-carotene)C5X8图12异戊二烯法则三、主要的生物合成途径1.醋酸-丙二酸途径:脂肪酸、酚、意酮类2.甲戊二羟酸途径:菇、笛体类3.桂皮酸途径：苯丙素、香豆素、木质素、木脂素、黄酮类4.氨基酸途径:生物碱5.复合途径：醋酸-丙二酸一莽草酸径醋酸一丙二酸一甲戊二羟酸途径 氨基酸一甲戊二羟酸途径 氨基酸-醋酸-丙二酸途径氨基酸一莽草酸径乙酷沛桥ACHiCO-ACPATPADPCOOHCH2CO-SCoA内二酸年型铺的ACOOHCHjCOACPCHCOCHQAACP 乙酰幅 限(ac eto ac etic ac id)还原NADPHNADP CH5CH2CH?CO-ACP缩合,COOH CH2(c dACPc n.ci kc i izCo c ii-c o-ACP NADPHNADPCH xCH2CH?CH2CH2CCACP醋酸丙二酸途径脂肪酸生物合成，ii为偶数)CHK CH2)nCOOH图1-3饱和月旨肪酸的生物合成途径COOHI _CH3-C0-S-C0A+3xCH2-CO-S-CoAlb醋酸丙二酸途径酚类生物合成图14醐类的生物合成途径I arc th yi Co A+6 malo nyl Co A醋酸丙二酸途径慈酸类生物合成CH3O大.黄素甲琳图15决明子的部分成分ac etyl Co A乙酰辅酶AS*CoASCoA乙酰乙酰辅酶A 甲戊二羟酸单酰辅酶A(HMG Co A)1 2NADPH S.2NADPHOV hoocXoh 甲戊二羟酸(MVA)甲 戊2ATP 卜TADP焦磷酸二甲烯丙酯(DAPP)PPt单赭*(mo no terpeno ids0(5焦磷酸香叶酯(GerPP)焦磷酸异戊烯酯(IPP)甲戊二羟酸5-焦磷酸(mevalo yl-5-pyro ph o sph ate)倍半葩类 Kb)P100 1次萃取，基本分离10(3100 1012 次P50 A.有机溶剂/水 B.有机溶剂/酸、碱水PH物质存在状态溶解性K C.PH梯度萃取梯度调节PH,每次改变一种成分的存在状态，依次分离-缺点：手工操作繁琐、溶剂用量大、易乳化例：HA1V HA2v B,且HA HA2j 如何分离?水溶液(HA八HA2v B)_|调PH3,有机溶剂萃取水层(BH+)有机层(HA1V HA2)|调PH10,有机溶剂萃取|调PH9,缓冲溶液萃取水层 有机层 水层(B)I-水层PH 12 B A-3 BH+HA(A；)有机层(HA2)|调PH3,强机溶剂萃取 调PH13,|缓冲溶液萃取有机层|(HA)水层(A?)有机层|调PH6,有机溶剂萃取I I水层 有机层(HA2)2.根据物质在两相溶剂中的分配比不同进行分离(2)逆流分溶法 p50工作原理：多次、连续的液液萃取 c raig逆流分溶仪萃取单元及工作过程 优点：避免手工操作 缺点：溶剂用量大机械操作导致破损、漏液乳化图112 CCD法的分过程示意图 D图逆流分港仪萃取单元的工作过程,.!图1/3逆流分 溶仪萃取单元2.根据物质在两相溶剂中的分配比不同进行分离-(3)纸色谱(paper c hro mat o graphy,PC)滤纸湿重/干重工2时 P=Rfa(1-Rf b)/Rfb(1-Rf a)2.根据物质在两相溶剂中的分配比不同进行分离(4)液液分配柱色谱定义S定相涂覆于硅胶等多孔载体上，装柱流动相通过色谱柱进行洗脱-物质在两相溶剂中作逆流分布分配比不同，被洗脱速度不同2.根据物质在两相溶剂中的分配比不同进行分离(4)液液分配柱色谱正相色谱与反相色谱载体固定相流动相适用范围正相色谱硅胶Si-OH硅藻土、纤维素水缓冲液弱极性溶剂CHC13,Et OAC,BuOH 等极性小的成分CHG13,Et OAC 部位反相色谱 re v e rs e ph a s e c h ro ma t o gra ph y键合硅胶Si-ORRP-2/RP-8/RP-18石蜡油强极性溶剂Me OHv CH3CNMe 0H-H20v CH3GN-H2O极性大的成分BuOH部位2.根据物质在两相溶剂中的分配比不同进行分离(4)液液分配柱色谱 _a加压液相色谱特点 加压流动相，流速快-载体颗粒小，机械强度大，比表面极大 耐压柱材 自动检测、收集、分部2.根据物质在两相溶剂中的分配比不同进行分离(4)液液分配柱色谱加压液相色谱种类：快速色谱 Flash c hro mat o graphy-低压液相色谱LPLC,中压液相色谱MPLC.高压液相色谱HPLC,h i gh perfo rmanc e2.02 X105Pa20.2X105PaIiquid c hro mat o graphy2.根据物质在两相溶剂中的分配比不同进行分离(4)液液分配柱色谱优点克服了简单萃取及CCD溶剂容量大、易乳化的缺点缺点载体可能造成化学吸附，如硅胶2.根据物质在两相溶剂中的分配比不同进行分离（5）液滴逆流色谱DCCCdro p Iet c o unt erc ur rent c hro maro graphy流动相液滴垂直上下,经过固定相液2.根据物质在两相溶剂中的分配比不同进行分离(6)高速逆流色谱HSCCChigh speed c o unt erc urrent c hro maro graphy行星式旋转产生的离心力场固定性保留在蛇形管内流动相单向、低速经过固定相3.根据物质吸附性差异进行分离(D吸附的类型(2)物理吸附的基本规律(3)极性及强弱判断-(4)简单吸附法用于物质的浓缩与精制-(5)吸附柱色谱法用于物质的分离(6)聚酰胺柱色谱-(7)大孔吸附柱色谱3.根据物质吸附性差异进行分离(1)吸附的类型物理吸附：分子间力，无选择性，可逆。硅胶、氧化铝、活性炭化学吸附：化学键，选择性较强，常不可逆。硅胶生物碱碱性氧化铝黄酮、慈配等-半化学吸附：氢键，选择性较弱，多可逆 聚酰胺3.根据物质吸附性差异进行分离(2)物理吸附的基本规律极性相似者易于吸附极性吸附剂：硅胶、氧化铝因对极性物质亲和力强冈溶剂极性T吸附剂对溶质的吸附力Js溶质可被极性强的溶剂洗脱非极性吸附剂：活性炭S对非极性成分吸附强冈溶剂极性T吸附剂对溶质的吸附力T国溶质可被极性弱的溶剂洗脱3.根据物质吸附性差异进行分离（3）极性及强弱判断-一般物质：官能团的种类、数目、位置、碳链长短R-COOH Ar-OH R-OH R-NH-R-CO-NH-R-CHO R-CO-R7 R-COO-R,R-O-Rz R-X R-H溶剂：介电常数eT,极性t环己烷（1.88）苯（2.29）无水乙醛（4.47）氯仿（5.20）乙酸乙酯（6.11）乙醇（26.0）甲醇（31.2）水（81.0）3.根据物质吸附性差异进行分离(4)简单吸附法用于物质的浓缩与精制活性炭吸附法结晶、重结晶中脱色、脱臭揖从大量稀水液中浓缩微量物质一一叶秋碱的浓缩、精制3.根据物质吸附性差异进行分离（5）吸附柱色谱法用于物质的分离硅胶吸附柱色谱 氧化铝吸附柱色谱A.吸附剂:3060倍,有时100200倍B.装柱：径高比（d/h）1:151:20 干法装柱/湿法装柱C.上样：干法上样/湿法上样D.洗脱：等度/梯度（洗脱剂极性递增）E.托尾：化学吸附：硅胶一碱性成分 洗脱剂中加入碱 氧化铝一酸性成分洗脱剂中加入酸F.洗脱系统的选择：TLC Rf=0.20.3性质3.根据物质吸附性差异进行分离(6)聚酰胺柱色谱 高分子聚合物-不溶于常见有机溶剂 对碱稳定 对酸特别是无机酸稳定性差可溶于浓盐酸、冰乙酸、甲酸中3.根据物质吸附性差异进行分离(6)聚酰胺柱色谱_吸附原理分子间氢键一半化学吸附固定相 移动相3.根据物质吸附性差异进行分离(6)聚酰胺柱色谱影响吸附力的因素化合物在含水溶剂中大致有以下规律：形成氢键的基团数目：越多，越强。形成氢键的基团所处的位置：处于易形成分子内氢键者，减弱。分子中芳香化程度：高，增强。OHOHOH3.根据物质吸附性差异进行分离(6)聚酰胺柱色谱影响吸附力强弱的因素化合物在不同溶剂中的吸附力，随溶剂极性增强而增强 水中最强-常以水装柱、样品以水溶解上样 含水醇中次之-醇中最弱-常以浓度渐高的含水醇梯度洗脱Et OH-%。最常用各种溶剂在聚酰胺柱上的洗脱能力水甲醇乙醇氢氧化钠水溶液甲酰胺二甲基甲酰胺尿素水溶液 弱-强3.根据物质吸附性差异进行分离(6)聚酰胺柱色谱酸类、黄酮类等酚性的制备和分离。应脱糅处理-生物碱、菇类、苗类、糖类、氨基酸等极性 与非极性化合物的分离也有用途3.根据物质吸附性差异进行分离(7)大孔吸附树脂性质 高分子聚合物 白色球形颗粒 多孔网状结构 不溶于酸、碱、有机溶剂原理吸附原理：分子间力氢键分子筛3.根据物质吸附性差异进行分离影响吸附力强弱的因素(7)大孔吸附树脂树脂的性质：非极性树脂易吸附非极性化合物溶剂的性质:极性树脂易吸附极性化合物物质在溶剂中的溶解度大，树脂对此物质的吸附力就小3.根据物质吸附性差异进行分离(7)大孔吸附树脂洗脱剂水、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等。最常用：乙醇一水广泛应用于化合物的分离与富集工作中如：昔类、糖类的分离生物碱的精制多糖、黄酮、三菇类化合物的分离。4.根据物质分子大小差异进行分离 透析法 超滤法 超速离心 凝胶滤过法 gel f i It rat io n：凝胶渗透色谱 gel permeat io n c hro mt o graphy 分子筛滤过 mo lec ular sieve f i It rat io n4.根据物质分子大小差异进行分离-凝胶滤过法gel f i It rat io n：-凝胶三维网状结构的分子筛作用I 按分子量由大到小的顺序分离原理 2_3O代表凝胶颗粒。代表大分子物质 代表小分子物质凝胶的种类、性质及应用根据物质分子大小差异进行分离-凝胶滤过法gel f i It rat io n：葡聚糖凝胶Sephadex G：葡聚糖+交联剂(环氧氯丙烷)分子筛水中应用分离水溶性成份商品型号按交联度分类，以10倍吸水量(ml/g)表示 羟丙基葡聚糖凝胶Sephadex LH-20:Sephadex G-25羟丙基化所得 分子筛和反相色谱相结合 水、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿中使用 水溶性、脂溶性成分都可分5.根据物质离解程度不同分离进行分离离子交换法离子交换原理-离子交换树脂为固定相，水，含水溶剂装柱-含水流动相通过树脂-可交换离子与树脂上的交换基团交换，吸附到树脂上-中性及无交换离子的成分流出将吸附到柱上的成分洗脱下来5.根据物质离解程度不同分离进行分离离子交换法离子交换原理-离子交换树脂为固定相，水，含水溶剂装柱-含水流动相通过树脂-可交换离子与树脂上的交换基团交换，吸附到树脂上-中性及无交换离子的成分流出将吸附到柱上的成分洗脱下来5根据物质离解程度不同分离进行分离 一离子交换法离子交换树脂的性质离子交换树脂的结构母核离子交换基团球形颗粒，不溶于水，可在水中溶胀5.根据物质离解程度不同分离进行分离离子交换法离子交换树脂的种类阳离子交换树脂：强酸性 弱酸性阴离子交换树脂：强碱性 弱碱性(-so3-h+)(-COO-H+)(-N+(CH3)3CI-)(-NH2,-NH-,-N=)5.根据物质离解程度不同分离进行分离离子交换法离子交换树脂的应用a-不同电荷离子的分离如水提液中酸性 碱性 两性化合物的分离相同电荷但解离程度不同离子的分离如碱性不同的生物碱的分离水提液强酸性阳离子交换树脂流出液 树脂（酸性、中性成分）（碱性、两性成分）强碱性阴离子交换树脂 I氨水洗脱;I 洗脱液流出液 树脂 I强碱性阴离子交换树脂（中性成分）（酸性成分）I流出液 树脂（碱性成分）（两性成分）水提液中酸性、碱性、两性化合物的分离流出液碱性 I v n V III洗脱液水提液弱酸性阳离子交换树脂树脂（i、n、ni）水洗脱/PhO-CO-CH、CH20H（i）树脂（n、ni）|nh4cl洗脱洗脱液（ii）树脂（in）Na2cO3洗脱,I I洗脱液（ni）树脂碱性不同的生物碱的分离第四节结构研究法结构研究的特点：难于合成品结构研究的总原则：尽可能不消耗或少消耗试样波谱综合分析 与文献数据比较 必要时辅以化学手段第四节结构研究法 一、纯度的测定 二结构研究的主要程序 三、结构研究中采用的主要方法v纯度的测定 纯度检查法：均一的晶形 敏锐的熔点、沸点、折光率、比旋度 TLC、PC、GC、HPLC二、结构研究的主要程序 程 序、一 方法.;初步推断“二 1.注意观察试样在提最、分寓过程中的行为。化合物类型：、2.测定其宥关理4b常数；如木冏曲(本树溶剂中的溶:；I-，密度及色谱行为、灼烧试睑、牝学定性反应等。一3,靖令文献调砾切举，、金壬武谢定可采用取il#袜(1)元素定量分析配合分子量测定;(2)同位丰度比法;(3)HR-MSO,测定分子式；计算不饱和度计算不日和度(1)官能团定性及定量分析b(2)测定并解析化合物的有关谱学数据，如UV、IR、MSjHNMR 及 GNMR。:绩合文献潮改;综合分斫谱学数据及事能团定性、定意分析结果。与已南化合物提存衽盘或化孥沟通t化学降解、,桁 生物制备或人工合成)。理常用方法、;(1)演)定CD或ORC谱。(2)测定N(押谱或2dMMR谱。、(3)进行X射线衍射分输(4)进行人工合成。I I*I|*I I I 1 I r I I r I I r*I f|6 4 2 0二维核磁共振(2D-NMR)13()_唱远程相关谱(Lr.13C-1H COSY)异核多键相关谱(HMBC)3Jc_h,用和与其相隔3个化学键的13c出现相关峰 用来进行信号归属，判断碳的级别,pm67 6 6 6 6 6602658494 5608 OJ 5 8 o 1 5 9 3 o 9 61985852361 2 10 9 7 7 6 6 6 5 2 2 0 09-000 TCH 2.上3.01842.98242.92892.90052.85332.5026p p0,0004o-50100一 5 0ppm