高危型HPV阳性患者血清lncRNA SNHG8表达对宫颈癌的预测价值.pdf

分子诊断与治疗杂志2023年7月第15卷第7期J Mol Diagn Ther,July 2023,Vol.15No.7论著基金项目：河南省医学科技攻关计划联合项目（LHGJ20191054）作者单位：郑州大学附属郑州中心医院检验科，河南，郑州 450007通信作者：吕朋举，Email：高危型 HPV 阳性患者血清 lncRNA SNHG8 表达对宫颈癌的预测价值黄永杰王桂珍吕朋举张春艳摘要 目的研究高危型人乳头瘤病毒（HPV）阳性患者血清长链非编码RNA核仁小RNA宿主基因8（lncRNA SNHG8）表达水平对宫颈癌的预测价值。方法纳入2019年1月至2021年12月郑州大学附属郑州中心医院收治的82例高危型HPV阳性宫颈癌患者为病例组，纳入因宫颈良性病变行手术切除的78例高危型 HPV 阳性患者作为对照组。检测两组血清 lncRNA SNHG8 表达水平及患者高危型 HPV；采用多因素Logistic回归分析高危型HPV阳性患者发生宫颈癌的影响因素；绘制ROC曲线分析血清lncRNA SNHG8表达水平对高危型HPV阳性患者发生宫颈癌的预测价值。结果病例组血清lncRNA SNHG8表达水平及年龄50岁患者比例显著高于对照组，差异均有统计学意义（P0.05）。lncRNA SNHG8是高危型HPV阳性患者发生宫颈癌的独立危险因素（P0.05）。血清lncRNA SNHG8预测高危型HPV阳性患者发生宫颈癌的曲线下面积为 0.835，敏感度为 0.756，特异性为 0.910。FIGO 分期期+期、低分化、淋巴结转移的宫颈癌患者血清 lncRNA SNHG8表达水平显著高于FIGO分期期+期、中/高分化、无淋巴结转移的患者，差异均有统计学意义（P0.05）。结论血清lncRNA SNHG8表达水平与高危型HPV阳性患者发生宫颈癌有关。关键词 宫颈癌；高危型人乳头瘤病毒；长链非编码 RNA 核仁小 RNA 宿主基因 8Predictive value of serum lncRNA SNHG8 expression for cervical cancer in highriskHPVpositive patientsHUANG Yongjie，WANG Guizhen，LV Pengju，ZHANG Chunyan（Department of Laboratory Medicine，Zhengzhou Central Hospital Affiliated to Zhengzhou University，Zhengzhou，Henan，China，450007）ABSTRACT ObjectiveTo study the predictive value of serum long noncoding RNA small nucleolar RNA host gene 8（lncRNA SNHG8）expression level for cervical cancer in highrisk human papillomavirus（HPV）positive patients.MethodsEightytwo highrisk HPVpositive cervical cancer patients were includedas the case group，and 78 highrisk HPVpositive patients who underwent surgical resection for benign cervicallesions were included as the control group.The expression level of serum lncRNA SNHG8 and highrisk HPVwas detected.The influencing factors were analyzed by multivariate Logistic regression analysis.The ROCcurve was drawn to analyze the predictive value.ResultsThe expression level of serum lncRNA SNHG8 andthe proportion of patients aged 50 years in the case group were significantly higher than those in the controlgroup，the difference was statistically significant（P0.05）.LncRNA SNHG8 was an independent risk factorfor cervical cancer in highrisk HPVpositive patients（P0.05）.The area under the curve of serum lncRNA SNHG8 for predicting cervical cancer in highrisk HPVpositive patients was 0.835，the sensitivity was 0.756，and the specificity was 0.910.The expression level of serum lncRNA SNHG8 in patients with FIGO stage+，poorly differentiated and lymph node metastasis was significantly higher than that in patients with FIGOstage+，moderately/well differentiated，and no lymph node metastasis，the difference was statisticallysignificant（P0.05）.ConclusionThe expression level of serum lncRNA SNHG8 is related to the occurrence 1099分子诊断与治疗杂志2023年7月第15卷第7期J Mol Diagn Ther,July 2023,Vol.15No.7of cervical cancer in highrisk HPVpositive patients.KEY WORDS Cervical cancer；Highrisk human papillomavirus；Long noncoding RNA small nucleolar RNA host gene 8宫颈癌是女性癌症死亡的主要原因之一，也是发展中国家的一个主要问题1。持续性高危型人乳头瘤病毒（human papillomavirus，HPV）感染是宫颈癌的最主要患病因素，除高危型 HPV 感染外，遗传和表观遗传因素也同样有助于恶性转化23。因此，探索高危型 HPV 宫颈癌发生相关因子，可能有利于恶性病变的早期防治。长链非编码 RNA核 仁 小 RNA 宿 主 基 因 8（long noncoding RNAsmall nucleolar RNA host gene 8，lncRNA SNHG8）与子宫内膜癌等多种肿瘤进展有关，在子宫内膜癌细胞和组织中均高表达，通过影响细胞凋亡参与疾病进展4。lncRNA SNHG7 可通过作用于microRNA485 参与调控宫颈癌细胞恶性行为5。然而lncRNA SNHG8在宫颈癌患者血清中的表达情况仍缺乏进一步相关研究。本研究检测并对比了高危型 HPV 阳性宫颈癌患者和高危型 HPV 阳性宫颈良性病变患者血清 lncRNA SNHG8 表达水平，同时探究了血清lncRNA SNHG8表达水平对高危型HPV阳性患者发生宫颈癌的预测价值。现报道如下。1一般资料与方法1.1一般资料纳入 2019 年 1 月至 2021 年 12 月郑州大学附属郑州中心医院收治的 82 例高危型 HPV 阳性宫颈 癌 患 者 为 病 例 组，患 者 年 龄 2179 岁，平 均（50.3411.86）岁。纳入本院同期因宫颈良性病变行手术切除的 78 例高危型 HPV 阳性患者作为对照组，患者年龄 2080 岁，平均（50.4110.70）岁。记录两组患者年龄、分娩史、绝经状况、高危型HPV 分型及宫颈癌患者肿瘤最大直径、FIGO 分期、肿瘤分化程度、淋巴结转移情况。病例组和对照组纳入标准：病例组诊断依据相关临床实践指南6，组织病理检查确诊；对照组包括宫颈部位的慢性炎症、宫颈肥大、宫颈息肉；两组均具有完整病史资料，患者及家属可配合完成检测；两组均为首次确诊，病例组入组前未进行过放化疗等治疗。病例组与对照组排除标准：有其他妇科炎症或其他部位恶性肿瘤者；合并风湿免疫相关疾病者；处于妊娠状态或哺乳状态者；先天性生殖道畸形者。本研究经郑州大学附属郑州中心医院临床伦理委员会审核通过，入组研究对象均知情同意。1.2方法1.2.1血清 lncRNA SNHG8 表达水平检测收集入组患者 5 mL 外周静脉血样置于干燥离心管中，3 000 r/min 离心 15 min（离心半径 10cm）分离血清，-80保存待检。取冻存的血清标本于冰上冻融并放入 EP 管中，采用 RNA 试剂盒（德国 QIAGEN 公司，货号：73404）按说明书步骤分离提取出总 RNA，待检测其完整性及浓度后，反转录试剂盒（北京伊塔生物科技有限公司，货号：YT9036）将总 RNA 反转录为 cDNA。使用 7500 型qRTPCR 仪（美国 Applied Biosystems 公司）进行qRTPCR反应。qRTPCR扩增条件：95预变性10min；95变性 30 s，60退火 30 s，72延伸 30 s，重复 45次循环。GAPDH 作为内参，采用 2CT法统计计算血清lncRNA SNHG8的相对表达量。引物序列（引物由上海生工生物工程有限公司合成）见表1。1.2.2高危型 HPV 检测入组患者检查前准备：三天内不使用阴道内药物或对阴道进行清洗；二十四小时内无性行为；非月经期。检查医生将宫颈刷置于宫颈口，顺时针旋转 5圈，宫颈刷取出后，放入专用取样管中，管内已加有专用细胞保存液。采用聚合酶链式反应（PCR）加膜杂交法检测21种分型（HPV6、HPV11、HPV53、HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV58、HPV35、HPV39、HPV45、HPV51、HPV52、HPV56、HPV59、HPV66、HPV68、HPV42、HPV43、HPV44、CP8304），采用潮州凯普生物化学有限公司核酸提取试剂盒和人乳头瘤病毒分型检测试剂盒，依次用全自动核酸提取仪基因lncRNA SNHG8GAPDH上游引物 53GCTGCCCCTGTGGTGGACTAGGGCACACGCGTCGAGCTCCC下游引物 53CTGTACCCAGGACCACGTGCGACACGTGGGACTGGCACGTGA表 1qRTPCR 引物序列Table 1qRTPCR primer sequence 1100分子诊断与治疗杂志2023年7月第15卷第7期J Mol Diagn Ther,July 2023,Vol.15No.7（HBNP4801A）进行DNA分离提取，ABI7500 RealTime PCR System 扩增，PCR 产物在全自动核酸分子杂交仪（HBHM9000A）仪器上进行杂交。阳性判定标准：杂交膜上Biotin对照显色，同时膜条HPV对应分型点也显色（清晰可见的蓝紫色圆点）7。1.3统计学分析采 用 SPSS 25.0 统 计 软 件 进 行 统 计 分 析。计数资料以 n（%）表示，采用卡方检验比较；计量资料服从正态分布并以（xs）表示，两组间采用 t检验比较，多组间行单因素方差分析；高危型 HPV 阳性患者发生宫颈癌的影响因素采用多因素 Logistic回归分析；绘制 ROC 曲线分析血清 lncRNA SNHG8表达水平对高危型 HPV 阳性患者发生宫颈癌的预测价值。以P0.05为差异有统计学意义。2结果2.1两组血清 lncRNA SNHG8 表达水平比较病例组血清 lncRNA SNHG8 表达水平显著高于对照组，差异有统计学意义（P0.05）。病例组年龄50 岁患者比例高于对照组，差异有统计学意义（P0.05）。见表 3。2.3高危型 HPV 阳性患者发生宫颈癌的多因素Logistic 回归分析以高危型 HPV 阳性患者是否发生宫颈癌作为因变量，以 lncRNA SNHG8、年龄作为自变量行多因素 Logistic 回归分析，结果显示，lncRNA SNHG8是高危型 HPV 阳性患者发生宫颈癌的独立危险因素（P0.05）；FIGO 分期期+期、低分化、淋巴结转移的宫颈癌患者血清 lncRNA SNHG8 表达水平显著高于 FIGO 分期期+期、中/高分化、无淋巴结转移的患者，差异有统计学意义（P0.05）。见表 5。组别对照组病例组t 值P 值n7882lncRNA SNHG81.010.221.620.4810.2460.000表 2两组血清 lncRNA SNHG8 表达水平比较（xs）Table 2Comparison of serum lncRNA SNHG8 expressionlevels between the two groups（xs）表3高危型HPV阳性患者发生宫颈癌的单因素分析n（%）Table 3Single factor analysis of cervical cancer in highriskHPV positive patientsn（%）临床特征年龄分娩史绝经高危型 HPV 分型50 岁50 岁无有否是HPV16HPV18其他型对照组（n=78）51（65.38）27（34.62）36（46.15）42（53.85）32（41.03）46（58.97）15（19.23）14（17.95）49（62.82）病例组（n=82）18（21.95）64（78.05）38（46.34）44（53.66）30（36.59）52（63.41）16（19.51）19（23.17）47（57.32）c2值30.7460.0010.3320.732P 值0.0000.9810.5640.694表 4高危型 HPV 阳性患者发生宫颈癌的多因素 Logistic回归分析Table 4Multivariate Logistic regression analysis of cervicalcancer in highrisk HPV positive patients影响因素lncRNA SNHG8年龄b值1.0060.092SE 值0.3140.122Wald 值10.2670.565OR 值2.7351.09695%CI1.4785.0610.8631.392P 值0.0010.45200.20.40.60.81.01特异性1.00.80.60.40.2敏感度图 1ROC 曲线Figure 1ROC curve 1101分子诊断与治疗杂志2023年7月第15卷第7期J Mol Diagn Ther,July 2023,Vol.15No.7临床特征年龄分娩史绝经高危型 HPV 分型肿瘤最大直径FIGO 分期分化程度淋巴结转移宫颈癌类型50 岁50 岁无有否是HPV16HPV18其他型5 cm5 cm期期期期中/高分化低分化无有腺癌鳞癌n18（21.95）64（78.05）38（46.34）44（53.66）30（36.59）52（63.41）16（19.51）19（23.17）47（57.32）46（56.10）36（43.90）44（53.66）38（46.34）50（60.98）32（39.02）45（54.88）37（45.12）15（18.29）67（81.71）lncRNASNHG81.580.481.630.451.610.471.630.431.590.481.640.461.630.471.620.451.620.431.600.471.640.441.530.401.720.421.530.411.760.431.490.421.780.451.610.431.620.45t/F 值0.4100.2010.4670.0030.3932.0962.4313.0130.078P 值0.6830.8410.6420.9970.6950.0390.0170.0030.9383讨论发展中国家的宫颈癌患者预后较差，治疗效果因分期、转移或复发而异，提高生存率仍然是临床治疗的最终目标89。大多数宫颈癌是由高危型HPV 持续感染引起的，然而高达 5%的肿瘤与 HPV持续感染无关，此外，世卫组织新的女性生殖道肿瘤分类将宫颈鳞癌和腺癌细分为 HPV 相关和非HPV 相关肿瘤1011。作为各种过程中的关键调节剂，lncRNA对宫颈癌的发生有重要影响12。lncRNA SNHG是snoRNAs的宿主基因，被发现与多种疾病的发展有关，包括癌症进展、细胞凋亡和生存13。本研究结果显示，高危型 HPV 阳性宫颈癌患者血清 lncRNA SNHG8表达水平显著高于高危型 HPV 阳性的宫颈良性病变患者，与 Qu 等14研究结果中 lncRNA SNHG8 在HPV 诱导的宫颈癌细胞中的表达趋势一致。进一步验证了血清 lncRNA SNHG8 水平在高危型 HPV阳性宫颈癌患者中出现表达失调，其表达升高可能参与HPV阳性宫颈癌疾病进展。既往研究显示，宫颈癌与炎症反应密切相关，HPV 感染会导致机体出现炎症反应，而 lncRNA SNHG8 是一种与炎症反应有密切联系的 RNA 分子15 16。据此推测高危型HPV 阳性宫颈癌患者中 lncRNA SNHG8 表达上调的可能原因为：部分高危型HPV阳性患者在感染高危型 HPV 病毒后，免疫系统发生异常变化，从而产生大量炎性细胞因子，造成机体出现严重的炎症反应，同时使其血清lncRNA SNHG8表达水平上调。本研究多因素 Logistic 回归分析结果显示，lncRNA SNHG8 是高危型 HPV 阳性患者发生宫颈癌的独立危险因素。Qu 等14研究结果中 lncRNASNHG8 可导致 HPV 诱导的宫颈癌加重。上述结果均表明 lncRNA SNHG8 可能参与高危型 HPV 阳性患者发生宫颈癌的过程。此外，本研究结果显示，高危型 HPV 阳性患者发生宫颈癌与年龄、分娩史、绝经情况以及高危型 HPV 分型无相关性，此结果与刘铭等7研究结果一致，说明与lncRNA SNHG8表达情况相比，年龄、分娩史、绝经情况等对宫颈癌发生并无显著影响。进一步 ROC 曲线结果证明lncRNA SNHG8 可作为一种预测宫颈癌的有效指标，其特异性较高，可达 0.910。而刘曼曼等17研究中 miRNA26a 预测高危型 HPV 阳性宫颈癌的特异性为 88.0%。其结果的差异性可能由研究对象纳入数量不同及个体差异所致，需进一步临床研究验证。Xuan 等18研究结果表明，SNHG8 高表达与卵巢癌低生存率有关，其过度表达增强了卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结合本研究发现血清 lncRNA SNHG8 表达水平与宫颈癌患者临床病理特征 FIGO 分期、肿瘤分化、淋巴结转移有关，这说明 lncRNA SNHG8 高表达可能参与宫颈癌细胞的恶性生物学行为发生。进一步说明 lncRNASNHG8 可能同时可作为宫颈癌分期、分化、淋巴结转移等进展征象的评估依据。综上所述，lncRNA SNHG8 在高危型 HPV 阳性宫颈癌患者血清中显著高表达，其可能参与宫颈癌的恶性进展，有利于肿瘤病情评估。参考文献1Zhang S，Batur P.Human papillomavirus in 2019：An update on cervical cancer prevention and screening guidelinesJ.Cleve Clin J Med，2019，86（3）：173178.2陈春妃，胡天琼，韩一栩，等.miR146a 和 miR196a2 基因多态性对高危型 HPV 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