N-酰基高丝氨酸内酯酶对肉仔鸡血清生化、免疫指标以及肠道形态的影响.pdf

动物营养学报，（）：酰基高丝氨酸内酯酶对肉仔鸡血清生化、免疫指标以及肠道形态的影响郑爱娟 陈 星 张广民 王泽栋 陈志敏 常文环 蔡辉益 刘国华（中国农业科学院饲料研究所，农业农村部动物产品质量安全饲料源性因子风险评估实验室，农业农村部饲料生物技术重点实验室，北京）摘 要：本试验旨在研究 酰基高丝氨酸内酯酶对肉仔鸡血清生化、免疫指标和肠道形态的影响。选取 日龄健康、体重相近的科宝肉仔鸡 只，随机分为 组，每组 个重复，每个重复 只鸡。对照组饲喂基础饲粮，试验组在基础饲粮中分别添加、和 的酰基高丝氨酸内酯酶。试验期 。结果表明：）与对照组相比，饲粮中添加 酰基高丝氨酸内酯酶显著提高 和 日龄肉鸡血清中总蛋白、白蛋白、球蛋白和尿酸含量，以及 日龄血清尿素氮含量（）。）与对照组相比，饲粮中添加 酰基高丝氨酸内酯酶显著提高 日龄肉鸡血清中碱性磷酸酶活性（）。）与对照组相比，饲粮中添加 酰基高丝氨酸内酯酶显著提高 日龄肉鸡血清中脂蛋白含量，以及 日龄血清脂蛋白和胆固醇含量（）。）与对照组相比，饲粮中添加 酰基高丝氨酸内酯酶显著提高 和 日龄肉鸡血清中免疫球蛋白 和免疫球蛋白 含量（）。）与对照组相比，饲粮中添加 酰基高丝氨酸内酯酶显著提高肉鸡的胰腺指数（）。）与对照组相比，饲粮中添加 酰基高丝氨酸内酯酶显著提高肉鸡十二指肠、空肠和回肠的绒毛高度和绒隐比（），显著降低回肠隐窝深度（）。综上所述，饲粮中添加 酰基高丝氨酸内酯酶促进蛋白质和脂质在肉鸡体内的代谢和周转，并改善了肠道形态，其中添加 的 酰基高丝氨酸内酯酶对肉鸡健康和生长的效果最佳。关键词：酰基高丝氨酸内酯酶；肉仔鸡；血清生化指标；免疫指标；肠道形态中图分类号：文献标识码：文章编号：（）收稿日期：基金项目：国家肉鸡产业技术体系（）作者简介：郑爱娟（），女，河北唐山人，副研究员，博士，从事家禽分子营养和家禽生态养殖营养调控技术研究。：通信作者：刘国华，研究员，博士生导师，：群体感应（，）是细菌通过释放自诱导信号分子（，）来调控相关基因的表达，进而影响毒素合成、黏附和生物被膜的形成等生物学功能的群体行为。细菌中存在多种由不同种类 介导的 系统，病原菌的致病作用与 系统密切相关。但是，群体感应淬灭（，）是对 系统的干预和破坏，通过 阻止 的积累，干扰其信号传递及其与受体的识别和结合，阻断细菌间的信息交流，抑制毒力基因表达，降低细菌致病性。酰基高丝氨酸内酯（）是研究最透彻的介导革兰氏阴性菌 系统中的信号分子。有超过 种革兰氏阴性菌 系统都是由 进行调节的。随着细菌浓度增加，浓度超过一定阈值水平时，与相应受体蛋白结合来调控细菌的多种生理功能，如溶血素等毒力因子分泌、动 物 营 养 学 报 卷生物发光和色素生产等。群体感应淬灭酶能够降解，使其无法达到引发致病因子表达的临界浓度，病原菌就失去致病力。酰基高丝氨酸内酯酶（酶）主要作用于高丝氨酸内酯环，从五环中酯键碳与氧之间打开内酯环，生物降解信号分子，阻断病原菌的 机制，从而抑制病原菌的致病性。这种淬灭酶不作用于致病菌本身，而是作用于致病菌产生的信号分子，不会使致病菌产生抗药性，是一种高效、安全的抗菌生物制剂。酶活性高，具有较强的蛋白酶抗性，可作为新型的饲料添加剂应用于畜禽饲料。前期研究发现，饲粮中添加 酶显著降低肉鸡的平均日采食量和料重比。饲喂 酶显著提高肉鸡对饲粮中干物质、粗蛋白质和能量的表观代谢率。本试验研究 酶对肉鸡血清生化指标、免疫指标和肠道形态的影响，探究 酶改善肉鸡生长发育的机制，为 酶在肉鸡生产上的应用提供理论依据。材料与方法 试验材料 酶 外 观 性 状 为 乳 白 色 粉 末，活 性 为，由北京某生物技术有限公司惠赠。试验设计 采用单因素试验设计，选取健康、体重相近的 日龄科宝肉仔鸡 只，随机分为 组，每组 个重复，每个重复 只鸡。肉仔鸡初始平均体重为（），保证各组间体重差异不显著（）。对照组饲喂基础饲粮，试验组在基础饲粮中分别添加、和 的 酶。基础饲粮参考 进行配制，基础饲粮组成及营养水平见文献。肉鸡的光照和黑暗时长分别为 和 ，使用乳头式饮水器供水，自由采食。使用水循环式暖气进行供热，前 鸡舍温度维持在 ，此后每周降低，直到维持在 。在 日龄时接种马立克疫苗，日龄时滴鼻点眼、接种新城疫、肾传支二联苗。试验鸡饲养管理、免疫规程和鸡舍卫生管理均按照科宝肉鸡饲养规程进行，试验期 。指标测定 血清生化指标 于 日龄时，每个重复取 只鸡，心脏采血约，制备血清，采用相应试剂盒（南京建成生物工程研究所）在全自动生化分析仪（日立）上测定血清谷丙转氨酶（）、谷草转氨酶（）和碱 性 磷 酸 酶（）活 性，以 及 血 清 总 蛋 白（）、白蛋白（）、球蛋白（）、尿素氮（）、肌酐（）、甘油三酯（）、脂 蛋 白（）、总胆固醇（）含量。血清免疫指标 采用免疫比浊试剂盒（南京建成生物工程研究所）测定血清免疫球蛋白（）、免疫球蛋白（）和免疫球蛋白（）含量。采用红血球凝集抑制法测定血清新城疫抗体滴度。器官指数 于 日龄，每个重复选取 只鸡，采集胰腺、脾脏、胸腺和法氏囊，生理盐水清洗后，使用吸水纸擦拭干称重，计算胰腺、脾脏、胸腺和法氏囊重与活重的比值，即器官指数。肠道形态 十二指肠、空肠和回肠标本用 多聚甲醛固定，按照 程序进行修剪、脱水、包埋、切片、染色和 密 封。使 用 （，匈牙利）选择组织的目标区域。拍照和成像后，使用 分析软件（，美国）测量切片的绒毛高度（）和隐窝深度（），并计算绒隐比（）。统计分析 所有数据均采用 中的一般线性模型（）进 行 分 析，对 主 效 应 显 著 的 指 标 采 用 法进行多重比较。结果用平均值和均值标准误（）表示。在所有分析中，为差异显著。结果与分析 酶对肉鸡血清生化指标的影响 酶 对 肉 鸡 血 清 蛋 白 及 其 代 谢 物含量的影响由 表 可 知，在 日 龄，与 对 照 组 相 比，组和 组肉鸡血清中总蛋白含量显著降低（），但组间无显著差异（）；组血清中总蛋白含量显著高于对照组（），而 组则与对照组无显著差异（）。组肉鸡血清中白蛋白含量显著高于 组（），但均 期郑爱娟等：酰基高丝氨酸内酯酶对肉仔鸡血清生化、免疫指标以及肠道形态的影响与 对 照 组 无 显 著 差 异（）。对 照 组、组、组和 组之间血清球蛋白含量无显著差异（），但显著低于 组（）。与对照组相比，组和 组血清中肌酐含量显著提高（），其中 组显著高于 组（）；组 和 组 与 对 照 组 之 间 无 显 著 差 异（）。血清尿素氮含量在 组表现出最高水平，而对照组、组、组和 组之间无显著差异（）。在 日龄，与对照组相比，组血清中总蛋白含量显著提高（），组显著高于 组（），但与对照组和 组 之 间 无 显 著 差 异（）；组血清白蛋白含量显著高于对照组和 组（），但与 组和 组无显著差异（）；组血清球蛋白含量显著高于对照组、组和 组（），但与 组无显著差异（）；对照组血清中肌酐含量显著低于 组和 组（），但与 组和 组之间无显著差异（）。表 饲粮中添加 酶对肉鸡血清蛋白及其代谢物含量的影响 项目总蛋白（）白蛋白（）球蛋白（）肌酐（）尿素氮（）日龄 对照组 组 组 组 组 值 日龄 对照组 组 组 组 组 值 同列数据肩标不同小写字母表示差异显著（），相同字母或无字母表示差异不显著（）。下表同。，（），（）酶对肉鸡血清酶类指标的影响由 表 可 知，在 日 龄，与 对 照 组 相 比，组、组、组 和 组中血清碱性磷酸酶活性显著提高（），其 中 组 显 著 高 于 组、组 和 组（），但这 组之间无显著差异（）；饲粮中添加 酶对肉鸡血清中谷丙转氨酶和谷草转氨酶活性无显著影响（）。在 日龄，饲粮中添加 酶对血清中谷丙转氨酶、谷草转氨酶和碱性磷酸酶活性均无显著影响（）动 物 营 养 学 报 卷表 饲粮中添加 酶对肉鸡血清酶类指标的影响 项目 谷丙转氨酶 谷草转氨酶 碱性磷酸酶 日龄 对照组 组 组 组 组 值 日龄 对照组 组 组 组 组 值 酶对肉鸡血清脂类指标的影响由 表 可 知，在 日 龄，与 对 照 组 相 比，组血清中脂蛋白含量显著降低（），其他组间无显著差异（）；饲粮中添加 酶对血清总胆固醇和甘油三酯含量无显著影响（）。在 日龄，对照组血清中脂蛋白含量显著高于 组和 组（），但与 组和 组之间无显著差异（）；对照组血清总胆固醇含量显著低于 组（），但与 组、组和 组之间无显著差异（）。表 饲粮中添加 酶对肉鸡血清脂类指标的影响 项目 脂蛋白 （）总胆固醇 （）甘油三酯 （）日龄 对照组 组 组 组 组 值 日龄 对照组 组 期郑爱娟等：酰基高丝氨酸内酯酶对肉仔鸡血清生化、免疫指标以及肠道形态的影响续表 项目 脂蛋白 （）总胆固醇 （）甘油三酯 （）组 组 组 值 酶对肉鸡免疫指标的影响 酶对肉鸡血清免疫球蛋白含量和新城疫抗体滴度的影响由 表 可 知，在 日 龄，与 对 照 组 相 比，组肉鸡血清中 含量显著提高（），但与 组和 组之间无显著差异（）；对照组血清中 含量显著低于 组（），但与 组、组和 组无显著差异（）。在 日龄，组和 组血清中 含量显著高于对照组（）；对照组血清 中 含 量 显 著 低 于 组 和 组（），但 与 组 和 组之间无显著差异（）。对照组 血 清 中 含 量 和 新 城 疫 抗 体 滴 度 与 组、组、组 和 组之间无显著差异（）。表 饲粮中添加 酶对肉鸡血清免疫球蛋白含量和抗体滴度的影响 项目免疫球蛋白 （）免疫球蛋白 （）免疫球蛋白 （）抗体滴度 日龄 对照组 组 组 组 组 值 日龄 对照组 组 组 组 组 值 酶对肉鸡免疫器官指数的影响 由表 可知，与对照组相比，组肉鸡胰腺指数显著提高（）。然而，对照组与 组、组、组 和 组之间脾脏、胸腺和法氏囊指数并无显著差异（）。动 物 营 养 学 报 卷表 饲粮中添加 酶对肉鸡免疫器官指数的影响 项目胰腺指数 脾脏指数 胸腺指数 法氏囊指数 对照组 组 组 组 组 值 酶对肉鸡肠道形态的影响 由表 可见，与对照组相比，组十二指肠绒毛高度显著提高（）；对照组绒毛高度显著高于 组（），但与 组和 组之间无显著差异（）；组和 组绒隐比显著高于对照组、组和 组（），对照组、组和 组间无显著差异（）。对照组与 组和 组 空 肠 绒 毛 高 度 无 显 著 差 异（），但 显 著 低 于 组 并 高 于 组（）；组绒隐比显著低于对照组、组和 组（），但与 组之间无显著差异（）。对 照 组 回 肠 绒 毛 高 度 显 著 低 于 组、组、组 和 组（）；与 对 照 组 相 比，组、组、组 和 组隐窝深度显著降低（），但组间无显著差异（）；与对照组相比，回肠绒隐比 显 著 低 于 组、组、组和 组（），其中 组、组和 组显著高于 组（），但 组之间无显著差异（）。表 饲粮中添加 酶对肉鸡肠道形态的影响 项目 绒毛高度 隐窝深度 绒隐比 十二指肠 对照组 组 组 组 组 值 空肠 对照组 组 组 组 组 期郑爱娟等：酰基高丝氨酸内酯酶对肉仔鸡血清生化、免疫指标以及肠道形态的影响续表 项目 绒毛高度 隐窝深度 绒隐比 值 回肠 对照组 组 组 组 组 值 讨 论 酶对肉鸡血清生化指标的影响 血清生化指标反映动物机体健康状况。血清总蛋白含量是反映机体肝脏蛋白质合成与代谢以及组织蛋白质吸收利用率的重要指标。总蛋白包含白蛋白和球蛋白，白蛋白比例与肝脏功能损伤程度呈正相关，而球蛋白则与机体免疫功能密切相关。本研究中，饲粮中添加 酶显著提高了 和 日龄肉鸡血清中总蛋白、白蛋白和球蛋白含量，其中添加 酶组的效果最佳。此外，肌酐作为肉鸡肌肉中肌酸和磷酸肌酸的分解产物，与机体的肌肉总量密切相关。尿素氮是机体蛋白质代谢的主要终产物，经肾小球滤过后随尿液排出，是评价动物肝脏功能的重要指标。饲粮中添加 酶显著提高了生长前期（日龄）肉鸡血清中尿素氮含量，表明 酶可能提高了肉鸡蛋白质代谢率。饲粮中添加 酶显著提高了 以及 日龄时肉鸡血清中肌酐的含量。同时，本试验发现饲粮中添加 酶显著提高了 日龄肉鸡血清中脂蛋白含量以及 日龄肉鸡血清脂蛋白和总胆固醇含量。总蛋白、白蛋白、球蛋白和肌酐均是机体蛋白质新陈代谢的关键指标。血清脂蛋白和总胆固醇含量在一定程度上反映肉鸡体内脂类代谢状况。饲粮中添加 酶显著改善了 和 日龄肉鸡对蛋白质和脂质的表观代谢率，这可能是通过 酶破坏了高丝氨酸内酯环，使信号分子 得到降解，阻断病原菌之间的 机制进而抑制了病原菌的致病性。肠道黏膜受到病原菌的刺激降低，营养物质在肠道中的吸收环境得到改善，进而提高了机体对蛋白质和脂质的利用能力。谷丙转氨酶、谷草转氨酶和碱性磷酸酶的活性是评估肝脏毒性的重要依据，病理表现或毒性都会导致谷草转氨酶和谷丙转氨酶活性升高。此外，谷丙转氨酶、谷草转氨酶和碱性磷酸酶的活性是衡量肝脏损伤的特定指标。在本研究中，饲粮添加 酶对 和 日龄肉鸡血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶活性无显著影响，表明 酶的使用未对肉鸡肝脏造成负面影响。碱性磷酸酶参与脂肪的转化吸收、抵御脂多糖对肠上皮细胞的破坏，也在一定程度上反映机体的生长速度。酶提高了 日龄肉鸡血清中碱性磷酸酶活性，但对 日龄肉鸡血清中碱性磷酸酶活性无显著影响，这与杨伟平等的研究结果一致。酶对肉鸡血清免疫指标的影响 肉鸡体内的免疫球蛋白，如、和，在对抗细菌、病毒和毒素，保护免疫系统和维持机体健康方面发挥重要作用。由浆细胞分泌，作为抗病毒、抗菌和毒素中和剂。作为抵御病原体入侵的 先驱，已被证明可以改善肠道黏膜的屏障功能，抑制病毒生长。此外，作为与抗原反应的第 个抗体，通过激活补体系统来发挥溶解细菌和病毒等免疫功能。在饲粮中添加 酶显著提高 和 日龄肉鸡血清中 和 含量。既往研究表明，酶可以通过干扰 系统来防止病原体感染宿主。饲粮中添加 酶可以抑制肠道中有害细菌的生长，并在维持肠道稳态和抑制炎症反应中发挥积极作用，这可能被解释为肉鸡免疫功能改善的原因。研究还发现，酶可以显著提高肉鸡动 物 营 养 学 报 卷胰腺指数，其中 的添加剂量效果最为显著。酶对肉鸡肠道形态的影响 绒毛高度和隐窝深度可用于评估肠道的发育、消化和吸收能力。绒毛高度和隐窝深度代表小肠的消化和吸收能力以及上皮细胞的成熟度，而绒隐比代表小肠的消化和吸收功能。在本研究中，饲粮添加 酶显著提高肉鸡十二指肠、空肠和回肠的绒毛高度和绒隐比，并降低了回肠的隐窝深度。绒毛高度的增加表明肉鸡吸收饲粮中营养物质的消化利用能力得到改善，而隐窝深度的降低则表明了绒毛尖端受到的损伤减弱。本试验结果表明，酶显著提高了肉鸡对营养物质的利用率，这也解释了生长性能改善的原因。饲粮中添加 酶提高了肉鸡肠道对饲粮的消化利用率，从而显著降低平均日采食量和料重比，因此显著提高蛋白质和能量的利用率。结 论 饲粮中添加 酶提高了 和 日龄肉鸡血清总蛋白、白蛋白、球蛋白、肌酐和脂蛋白的含量，以及 日龄血清尿素氮含量、碱性磷酸酶活性和 日龄血清总胆固醇含量；饲粮中添加 酶提高了 和 日龄肉鸡血清中 和 含量，以及 日龄的胰腺指数；饲粮中添加 酶显著提高肉鸡十二指肠、空肠和回肠的绒毛高度和绒隐比，显著降低了回肠隐窝深度。综合各项指标，酶在肉鸡饲粮中的适宜添加剂量为 。参考文献：，（）：，（）：，：，（）：，：王岩，于雅萌，张静静，等海洋微生物群体感应与群体感应淬灭的开发利用 生物资源，（）：，（）：（），：，：李胜利淬灭酶及沙蒿多糖对绵羊瘤胃微生态和营养代谢及免疫影响研究博士学位论文呼和浩特：内蒙古农业大学，：，（）郑爱娟，陈星，张广民，等酰基高丝氨酸内酯酶对肉仔鸡生长性能、屠宰性能和养分表观代谢率的影响 动物营养学报：，：（）伏春燕，王文彬，李霞，等饲粮苏氨酸水平对肉鸡生长性能、血清生化指标、免疫器官指数及小肠形态发育的影响动物营养学报，（）：，（）：（）期郑爱娟等：酰基高丝氨酸内酯酶对肉仔鸡血清生化、免疫指标以及肠道形态的影响 吴正可，张安荣，陈志敏，等凝结芽孢杆菌对肉鸡生长性能、血清生化指标和胫骨强度指标的影响畜牧兽医学报，（）：，（）：（），（）：贺绍君，李静，刘德义乙酰半胱氨酸对慢性热应激肉鸡肾脏功能损伤的缓解作用黑龙江畜牧兽医，（）：，（）：（），（）：郑伟萍，王洪军，张民，等葡萄糖氧化酶和过氧化氢酶对肉鸡生长性能及养分代谢率的影响饲料工业，（）：，（）：（），（）：，（）：，（）：，（）：，（）：，（），（）：林丽花，柯芙容，詹湉湉，等凝结芽孢杆菌对黄羽肉鸡生产性能、血清生化指标及抗氧化功能的影响动物营养学报，（）：，（）：（），（）：杨伟平，鄢珣，藏大存不同品种鸭血清碱性磷酸酶活力与生长性能的关系研究安徽农业科学，（）：，（）：（），（）：，（）：，（）：，动 物 营 养 学 报 卷，（）：，（）：，：，（）：，（）：蒋正宇，周岩民，王恬外源 淀粉酶对 日龄肉鸡消化器官发育、肠道内源酶活性的影响畜牧兽医学报，（）：，（）：（），（）：，：，（）：，（）：，（）：，（）：，（）：期郑爱娟等：酰基高丝氨酸内酯酶对肉仔鸡血清生化、免疫指标以及肠道形态的影响 ，：（责任编辑 陈 鑫），（，）：，：），（）（），（）（）（）（），（），（），（）：；