糖类、蛋白质、脂肪的鉴定.ppt

实验实验(shyn)生物组织中糖类脂生物组织中糖类脂肪和蛋白肪和蛋白质鉴定质鉴定第一页，共二十三页。思考题：1、糖类、脂肪、蛋白质鉴定的实验原理2、常见的还原糖有哪些？取材的要求3、斐林试剂的组成，使用时的注意事项4、双缩脲试剂的组成，使用时注意事项5、斐林试剂和双缩脲试剂的比较(bjio)6、脂肪鉴定中酒精的用法和作用7、脂肪鉴定中能否直接观察颜色？借助什么来观察？8、如何鉴定淀粉，颜色反应如何第二页，共二十三页。1.实验原理实验原理：化学试剂化学试剂+有机化合物有机化合物特定特定(tdng)的颜色的颜色(1)还原糖还原糖+斐林试剂斐林试剂 水浴加热水浴加热砖红色砖红色 沉淀沉淀(2)脂肪脂肪(zhfng)+苏丹苏丹橘黄色橘黄色 脂肪脂肪+苏丹苏丹红色红色(3)蛋白质蛋白质+双缩脲试剂双缩脲试剂 紫色紫色第三页，共二十三页。2、常见的还原糖有哪些？取材的要求还原糖还原糖：可被氧化充当还原剂的糖。：可被氧化充当还原剂的糖。(常见的有：葡萄糖、果糖常见的有：葡萄糖、果糖(gutng)、麦芽糖、麦芽糖、乳糖、半乳糖乳糖、半乳糖)注意：蔗糖不是还原糖注意：蔗糖不是还原糖3、斐林试剂的组成，使用时注意事项、斐林试剂的组成，使用时注意事项斐林试剂：甲液：斐林试剂：甲液：0.1g/mL的的NaOH溶液溶液 乙液：乙液：0.05g/mL的的CuSO4溶液溶液使用注意事项：等量使用注意事项：等量混合，混合，现配现用现配现用（NaOH+CuSO4）第四页，共二十三页。1.点拨：点拨：还原糖还原糖+斐林试剂斐林试剂 砖红色沉淀砖红色沉淀 可溶性可溶性还原糖还原糖与与斐林试剂斐林试剂发生发生(fshng)(fshng)作用，可生作用，可生成成砖红色砖红色的的CuCu2 2OO沉淀沉淀。（放在放在盛有盛有50-6550-65温水的大烧杯）温水的大烧杯）水浴水浴(shu y)加热加热颜色(yns)变化：浅蓝色 棕色 砖红色第五页，共二十三页。1步骤：步骤：样液制备样液制备:（取材（取材5g，加入石英砂和，加入石英砂和 5ml水）水）(1)取样取样(qyng)液液2ml于试管中于试管中(2)加加入入新新配配制制的的斐斐林林试试剂剂1ml（甲甲液液和和乙乙液液等等量量混混合合均均匀匀后后再再加加入入）盛盛有有50-50-6565温水的大烧杯）温水的大烧杯）(3)水水浴浴加加热热2min左左右右(（4）观观察察颜颜色色变化（变化（浅蓝色浅蓝色棕色棕色砖红色）砖红色）第六页，共二十三页。注注意意事事项项：（1）材材料料的的选选取取：还还原原糖糖含含量量(hnling)高高，白白色色或或近近于于白白色色，如如苹苹果果梨梨白白萝卜。萝卜。思思考考：西西瓜瓜、甘甘蔗蔗、甜甜菜菜可可以以吗吗？为为什什么么？（2）试剂：斐林试剂）试剂：斐林试剂(等量混合、等量混合、现配现用现配现用)甲液：甲液：0.1g/mL的的NaOH溶液溶液 乙液：乙液：0.05g/ml的的CuSO4溶液溶液 第七页，共二十三页。4、双缩脲试剂组成(z chn)，使用时注意事项第八页，共二十三页。双缩脲试剂双缩脲试剂(shj)组成：组成：A液：液：0.1g/mL的的NaOH溶液溶液B液：液：0.01g/mL的的CuSO4溶液溶液 使用使用(shyng)注意事项：注意事项：先加先加A液液1mL于样液中，于样液中，再加再加B液液4滴滴于样液中于样液中（1）蛋白质）蛋白质+双缩脲试剂双缩脲试剂(shj)紫色紫色第九页，共二十三页。2 2步骤：步骤：（1 1）试管中加样液试管中加样液2mL2mL（2 2）加加双双缩缩脲脲试试剂剂A A液液1mL1mL（造造成成碱碱性性环环 境境），摇摇匀匀（3 3）加双缩脲试剂加双缩脲试剂B B液液4 4滴滴，摇匀摇匀（4 4）观察颜色变化（观察颜色变化（紫色紫色）注注：样样液液浓浓度度(nngd)(nngd)不不宜宜过过高高，以以免免实实验验后后黏黏住住试管壁，洗不干净。试管壁，洗不干净。BB液液不不能能过过量量，多多余余的的B B液液会会与与A A液液反反应应成成蓝蓝色，而掩盖生成的紫色色，而掩盖生成的紫色。第十页，共二十三页。斐林试剂斐林试剂 双缩脲试剂双缩脲试剂 甲液甲液乙液乙液A A液液B B液液成分成分 鉴定物鉴定物质质 添加顺添加顺序方法序方法反应条反应条件件 反应现反应现象象 5.比较比较(bjio)斐林试剂斐林试剂和和双缩脲试剂双缩脲试剂0.1g/mLNaOH同甲液0.01g/mLCuSO40.05g/mLCuSO4还原性糖还原性糖蛋白质蛋白质等量等量(dn lin)(dn lin)混混合后再加入合后再加入先加先加A A液液1mL1mL，摇匀，摇匀，再加再加B B液液4 4滴滴50-6550-65水浴加热水浴加热砖红色砖红色(hngs)(hngs)沉沉淀淀紫色紫色络合物络合物不需不需加热，摇匀加热，摇匀第十一页，共二十三页。6、脂肪鉴定中酒精的用法和作用7、脂肪鉴定中能否直接观察颜色？借助(jizh)什么来观察？第十二页，共二十三页。3.脂肪脂肪(zhfng)+苏丹苏丹橘黄色橘黄色 脂肪脂肪+苏丹苏丹红色红色第十三页，共二十三页。（2）步骤）步骤材料的选取：含脂肪量高的组织，如花生的子叶。材料的选取：含脂肪量高的组织，如花生的子叶。取材：取材：取一粒浸泡过的花生种子，去掉种皮取一粒浸泡过的花生种子，去掉种皮切片切片制制片片：（切片越薄越好）将：（切片越薄越好）将最薄最薄的花生切片放在载玻的花生切片放在载玻片中央片中央染色：滴染色：滴23滴苏丹滴苏丹(sdn)染液染液，染色，染色3min，用吸，用吸水纸水纸吸去染液吸去染液，再，再滴滴体积分数体积分数50%的的酒精洗去浮色酒精洗去浮色，再用吸水纸吸去再用吸水纸吸去多余的酒精（多余的酒精（苏丹苏丹易溶于酒精中，易溶于酒精中，避免影响实验结果）避免影响实验结果），滴滴12滴清水于材料切片上滴清水于材料切片上盖上盖玻片盖上盖玻片镜检镜检观察观察：光学：光学显微镜显微镜对光对光低倍镜寻找着色圆形低倍镜寻找着色圆形小颗粒小颗粒高倍镜观察染成橘黄色的脂肪颗粒高倍镜观察染成橘黄色的脂肪颗粒第十四页，共二十三页。8、如何鉴定淀粉，颜色(yns)反应如何第十五页，共二十三页。用试管取用试管取2mL2mL待测组织待测组织(zzh)(zzh)样液，向试管样液，向试管内滴加内滴加1 12 2滴碘液，观察颜色变化。滴碘液，观察颜色变化。4、淀粉、淀粉(dinfn)+碘碘蓝色蓝色加加12滴碘液滴碘液第十六页，共二十三页。1.1.鉴定生物组织中可溶性还原糖的试剂鉴定生物组织中可溶性还原糖的试剂(shj)(shj)A A斐林试剂斐林试剂 B B双缩脲试剂双缩脲试剂 C C苏丹苏丹染液染液 D D苏丹苏丹染液染液2.2.能与斐林试剂反应产生砖红色沉淀的是能与斐林试剂反应产生砖红色沉淀的是A A淀粉淀粉 B B果糖果糖C C蔗糖蔗糖D D纤维素纤维素3.3.下列哪个实验用到显微镜（下列哪个实验用到显微镜（）A A可溶性还原糖的鉴定可溶性还原糖的鉴定 B B蛋白质的鉴定蛋白质的鉴定C C脂肪的鉴定脂肪的鉴定 D D淀粉的鉴定淀粉的鉴定ACB第十七页，共二十三页。4.4.用斐林试剂鉴定可溶性还原糖时，溶液颜用斐林试剂鉴定可溶性还原糖时，溶液颜色的变化过程为（色的变化过程为（）A A无色一砖红色（沉淀无色一砖红色（沉淀(chndin)(chndin)）B B浅蓝色一砖红色（沉淀）浅蓝色一砖红色（沉淀）C C浅蓝色一蓝色一砖红色（沉淀）浅蓝色一蓝色一砖红色（沉淀）D D浅蓝色一棕色一砖红色（沉淀）浅蓝色一棕色一砖红色（沉淀）5.5.下列物质中，能被苏丹下列物质中，能被苏丹IVIV染液染成红染液染成红色的是（色的是（）A A马铃薯块茎马铃薯块茎 B B浸软的蓖麻浸软的蓖麻(b m)(b m)种子种子C C蛋清液蛋清液 D D苹果苹果 DB第十八页，共二十三页。6.6.还原糖的实验中，加入斐林试剂时必须要还原糖的实验中，加入斐林试剂时必须要 A A先加入斐林试剂甲液，后加入乙液先加入斐林试剂甲液，后加入乙液B B先加入斐林试剂乙液，后加入甲液先加入斐林试剂乙液，后加入甲液C C将斐林试剂的甲液和乙液混合均匀后再加将斐林试剂的甲液和乙液混合均匀后再加D D以上以上A A、B B、C C三种操作方法都正确三种操作方法都正确(zhngqu)(zhngqu)7.7.鉴定蛋白质样品时加双缩脲试剂正确做法鉴定蛋白质样品时加双缩脲试剂正确做法是是A A先加先加A A液，混合后再加液，混合后再加B B液摇匀观察液摇匀观察B B先加先加B B液，混合后再加液，混合后再加A A液摇匀观察液摇匀观察C CA A、B B液混合后加入，摇匀后观察液混合后加入，摇匀后观察D DA A、B B液同时加入样液，摇匀后观察液同时加入样液，摇匀后观察CA第十九页，共二十三页。即：还原糖中的醛基（即：还原糖中的醛基（CHO）被）被Cu(OH)2氧化氧化，Cu(OH)2被还原成被还原成砖红色砖红色(hngs)的的Cu2O沉淀沉淀 还原(hun yun)糖的鉴定原理：还还原糖原糖+斐林斐林试剂试剂砖红色沉淀砖红色沉淀第二十页，共二十三页。斐林试剂斐林试剂 双缩脲试剂双缩脲试剂 甲液甲液乙液乙液A A液液B B液液成分成分 鉴定物质鉴定物质 添加顺序添加顺序方法方法反应条件反应条件 反应现象反应现象 5.比较比较(bjio)斐林试剂斐林试剂和和双缩脲试剂双缩脲试剂0.1g/mL的NaOH溶液(rngy)0.1g/mL的NaOH溶液(rngy)0.01g/mLCuSO4溶液0.05g/mL的CuSO4溶液还原性糖还原性糖蛋白质蛋白质甲液和乙液等量混甲液和乙液等量混合均匀后再加入合均匀后再加入先加双缩脲试剂先加双缩脲试剂A A液液1mL1mL，摇匀，再加双缩脲试剂摇匀，再加双缩脲试剂B B液液4 4滴滴50-6550-65水浴加热水浴加热砖红色沉淀砖红色沉淀紫色络合物紫色络合物不需加热，摇匀即可不需加热，摇匀即可第二十一页，共二十三页。蛋白质的鉴定蛋白质的鉴定(jindng)原理：原理：蛋白质与双缩脲试剂发生作用，产生紫蛋白质与双缩脲试剂发生作用，产生紫色反应。色反应。蛋白质分子中含有很多蛋白质分子中含有很多肽键肽键，在在碱性溶液碱性溶液(rngy)(rngy)（即（即A A液可造成碱液可造成碱性环境）性环境）中能与双缩脲试剂中的中能与双缩脲试剂中的CuCu2+2+作用，产生紫色络合物。作用，产生紫色络合物。第二十二页，共二十三页。内容(nirng)总结实验。8、如何鉴定淀粉，颜色反应如何。还原糖：可被氧化充当还原剂的糖。思考：西瓜、甘蔗、甜菜可以吗。（2）试剂：斐林试剂(等量(dn lin)混合、现配现用)。制片：（切片越薄越好）将最薄的花生切片放在载玻片中央。A先加入斐林试剂甲液，后加入乙液。B先加入斐林试剂乙液，后加入甲液。D以上A、B、C三种操作方法都正确。CA、B液混合后加入，摇匀后观察。蛋白质与双缩脲试剂发生作用，产生紫色反应第二十三页，共二十三页。