细胞培养的设施与基本条件.pptx

细胞培养的设施与基本条件无菌操作室无菌操作室:更衣间、缓冲间、操作间培养与观察室培养与观察室:培养箱、显微镜制备室制备室:天平、PH计、磁力搅拌器储藏室储藏室:冰箱、液氮罐、储物柜清洗和灭菌室清洗和灭菌室:消毒柜、干燥箱、纯水设备无菌室操作室无菌室操作室:超净工作台或接种箱培养室培养室:培养架、摇床鉴定室鉴定室:各种显微镜清洗室清洗室:干燥箱、清洗器械灭菌室灭菌室:灭菌装置、过滤器制备室制备室:冰箱、药品柜、器械柜驯化移植室驯化移植室:温室、弥雾装置、荫棚、移植床、塑料布、粗沙等温度温度:252252光照光照:散射光散射光湿度湿度:50%50%动物与植物细胞工程实验动物与植物细胞工程实验 室通用得仪器设备室通用得仪器设备 动物细胞工程实验室得常动物细胞工程实验室得常用仪器设备用仪器设备 植物细胞工程实验室得常植物细胞工程实验室得常用仪器设备用仪器设备超净工作台超净工作台倒置显微镜倒置显微镜电热干燥箱电热干燥箱水纯化装置水纯化装置冰箱冰箱压力蒸汽消毒器压力蒸汽消毒器细胞记数板和电子细胞记数仪细胞记数板和电子细胞记数仪过滤除菌装置过滤除菌装置离心机离心机(离心管离心管)移液管和吸管移液管和吸管k k 移液器移液器l l 天平天平大家有疑问的，可以询问和交流大家有疑问的，可以询问和交流可以互相讨论下，但要小声点可以互相讨论下，但要小声点可以互相讨论下，但要小声点可以互相讨论下，但要小声点n超净工作台得工作原理就是利用鼓风机驱动空气遁过高效超净工作台得工作原理就是利用鼓风机驱动空气遁过高效滤器除去空气中得尘埃颗粒滤器除去空气中得尘埃颗粒,使空气得到净化。净化空气徐使空气得到净化。净化空气徐徐通过工作台面徐通过工作台面,使工作台内构成无菌环境。使工作台内构成无菌环境。n n 烘干和干热灭菌玻璃烘干和干热灭菌玻璃器皿器皿 100度以下时再打度以下时再打开箱门开箱门 金属器械、塑料制金属器械、塑料制品、橡胶等不能在干燥品、橡胶等不能在干燥箱内消毒箱内消毒电热鼓风干燥箱电热鼓风干燥箱电热鼓风干燥箱电热鼓风干燥箱:温度均匀、温度均匀、温度均匀、温度均匀、效果较好。效果较好。效果较好。效果较好。蒸馏式蒸馏式蒸馏式蒸馏式:三重纯水蒸馏器三重纯水蒸馏器三重纯水蒸馏器三重纯水蒸馏器 过滤式过滤式过滤式过滤式:超纯水装置系统超纯水装置系统超纯水装置系统超纯水装置系统n n普通冰箱普通冰箱普通冰箱普通冰箱:储存各种溶液及短期保存组织标本储存各种溶液及短期保存组织标本储存各种溶液及短期保存组织标本储存各种溶液及短期保存组织标本n n-20-200 0C C冰箱冰箱冰箱冰箱:储存需要冷冻保持生物活性储存需要冷冻保持生物活性储存需要冷冻保持生物活性储存需要冷冻保持生物活性(酶、血清酶、血清酶、血清酶、血清)及长期存放得制剂及长期存放得制剂及长期存放得制剂及长期存放得制剂电子细胞计数仪电子细胞计数仪细胞记数板细胞记数板高速冷冻离心机高速冷冻离心机高速冷冻离心机高速冷冻离心机培养箱培养箱显微操作仪显微操作仪细胞融合仪细胞融合仪细胞冷冻储存器细胞冷冻储存器培养用器皿培养用器皿手术器械手术器械CO2培养箱设定得条件为培养箱设定得条件为37 ,5CO2。使用使用CO2培养箱培养细胞时应注意培养箱培养细胞时应注意得问题得问题:用螺旋口瓶培养细胞时用螺旋口瓶培养细胞时,需将瓶需将瓶盖微松盖微松,以保证通气。以保证通气。保持培养箱内空气干净。定期保持培养箱内空气干净。定期消毒消毒(90 ,14 h)。箱内灭菌蒸馏水箱内灭菌蒸馏水3000毫升蒸馏毫升蒸馏水槽中以保持箱内湿度水槽中以保持箱内湿度,避免培养液避免培养液蒸发。蒸发。显微操作显微操作/注射仪注射仪:细胞核移植、细胞核移植、染色体操作、染色体操作、显微注射、显微注射、胚胎切割等胚胎切割等细胞电融合仪细胞电融合仪程序化冷冻仪程序化冷冻仪 液氮罐液氮罐n n旋转培养器旋转培养器n n多孔培养板多孔培养板多孔培养板多孔培养板4 4、6 6、2424、9696孔孔孔孔n n培养皿培养皿培养皿培养皿3030、6060、100100毫米毫米毫米毫米n n培养瓶培养瓶培养瓶培养瓶 500500毫升、毫升、毫升、毫升、250250毫升、毫升、毫升、毫升、100100毫升毫升毫升毫升n n器器器器 械械械械解剖刀解剖刀解剖刀解剖刀解剖剪解剖剪解剖剪解剖剪虹膜剪虹膜剪虹膜剪虹膜剪镊子镊子镊子镊子注意保护刀锋注意保护刀锋注意保护刀锋注意保护刀锋,钝刀对组织有伤钝刀对组织有伤钝刀对组织有伤钝刀对组织有伤害害害害,不利细胞生不利细胞生不利细胞生不利细胞生长长长长光照培养箱光照培养箱人工气候室人工气候室摇床摇床培养瓶培养瓶人工气候室人工气候室根据密封程度分根据密封程度分:P1、P2、P3、P4四个等级四个等级(P为为protect得缩写得缩写)三不三不:培养物不被污染培养物不被污染 实验人员不被污染实验人员不被污染 环境不被污染环境不被污染SARS实验室实验室生物安全防护水平生物安全防护水平(BSLBSL)由一级防护屏障由一级防护屏障(安全设备安全设备)和二级防护屏障和二级防护屏障(实验室设施实验室设施)组合构成四级生物安全水平组合构成四级生物安全水平 。n n一级生物安全防护水平一级生物安全防护水平(BSLBSL1 1)n n二级生物安全防护水平二级生物安全防护水平(BSLBSL2 2)n n三级生物安全防护水平三级生物安全防护水平(BSLBSL3 3)n n四级生物安全防护水平四级生物安全防护水平(BSLBSL4 4)生物安全一级生物安全一级生物安全一级生物安全一级(BSL-1)(BSL-1):适合于非常熟悉得病源适合于非常熟悉得病源适合于非常熟悉得病源适合于非常熟悉得病源,不不不不会经常引发健康成人疾病会经常引发健康成人疾病会经常引发健康成人疾病会经常引发健康成人疾病,对实验人员和环境潜在对实验人员和环境潜在对实验人员和环境潜在对实验人员和环境潜在危险小。一般也不使用特殊得遏制设备和设施。危险小。一般也不使用特殊得遏制设备和设施。危险小。一般也不使用特殊得遏制设备和设施。危险小。一般也不使用特殊得遏制设备和设施。生物安全二级生物安全二级生物安全二级生物安全二级(BSL2)(BSL2):适合于对人和环境有中度适合于对人和环境有中度适合于对人和环境有中度适合于对人和环境有中度潜在危险得病源潜在危险得病源潜在危险得病源潜在危险得病源,应在生物安全柜中或其她物理遏应在生物安全柜中或其她物理遏应在生物安全柜中或其她物理遏应在生物安全柜中或其她物理遏制设备中进行。制设备中进行。制设备中进行。制设备中进行。生物安全三级生物安全三级生物安全三级生物安全三级(BSL3)(BSL3):该会引发严重得、可能致该会引发严重得、可能致该会引发严重得、可能致该会引发严重得、可能致死得疾病得病源。在生物安全柜或其她物理遏制死得疾病得病源。在生物安全柜或其她物理遏制死得疾病得病源。在生物安全柜或其她物理遏制死得疾病得病源。在生物安全柜或其她物理遏制装置中进行装置中进行装置中进行装置中进行,或由穿戴合适防护服及设施得实验人或由穿戴合适防护服及设施得实验人或由穿戴合适防护服及设施得实验人或由穿戴合适防护服及设施得实验人员进行。实验室经过特殊设计和施工。员进行。实验室经过特殊设计和施工。员进行。实验室经过特殊设计和施工。员进行。实验室经过特殊设计和施工。n n生物安全四级生物安全四级生物安全四级生物安全四级(BSL4)(BSL4):处理特别危险得传染源处理特别危险得传染源处理特别危险得传染源处理特别危险得传染源Pneumococcus:肺炎球菌肺炎球菌Salmonella:沙门氏菌沙门氏菌Hepatitis:肝炎肝炎Lyme Disease:莱姆病莱姆病Influenza:流感流感Ebola:埃博拉埃博拉Lassa:拉沙热拉沙热Hanta virus:汉坦病毒汉坦病毒n n无菌条件无菌条件无菌条件无菌条件:净化工作室净化工作室净化工作室净化工作室,高效过滤器高效过滤器高效过滤器高效过滤器,生物安全柜生物安全柜生物安全柜生物安全柜,n n 超净工作台超净工作台超净工作台超净工作台,紫外灯紫外灯紫外灯紫外灯,电热干燥箱电热干燥箱电热干燥箱电热干燥箱,滤器滤器滤器滤器,n n 高压灭菌器高压灭菌器高压灭菌器高压灭菌器,抗生素抗生素抗生素抗生素 n n细胞生长条件细胞生长条件细胞生长条件细胞生长条件:纯水蒸馏器纯水蒸馏器纯水蒸馏器纯水蒸馏器,纯水仪纯水仪纯水仪纯水仪,培养板培养板培养板培养板,培养瓶培养瓶培养瓶培养瓶,n nCO2CO2培养箱培养箱培养箱培养箱,培养基培养基培养基培养基,血清血清血清血清n n细胞检测条件细胞检测条件细胞检测条件细胞检测条件:倒置显微镜倒置显微镜倒置显微镜倒置显微镜,酶标仪酶标仪酶标仪酶标仪,微孔板震荡器微孔板震荡器微孔板震荡器微孔板震荡器,n n 高速离心机高速离心机高速离心机高速离心机,移液器移液器移液器移液器 n n细胞保存条件细胞保存条件细胞保存条件细胞保存条件:液氮罐液氮罐液氮罐液氮罐n n实验室安全实验室安全实验室安全实验室安全:生物实验室安全生物实验室安全生物实验室安全生物实验室安全,P1,P2,P3P1,P2,P3实验室安全实验室安全实验室安全实验室安全Summary:细胞培养得基本条件Anthrax:炭疽炭疽Typhus:斑疹伤寒斑疹伤寒HIV:培养室一角培养室一角培养室一角培养室一角培养室一角培养室一角培养室一角培养室一角倒置显微镜倒置显微镜超低温冰箱超低温冰箱无菌培养室无菌培养室光照培养室光照培养室菌种培养室细胞培养室细胞培养室四川省种子管理站建人工气候室对农作物种子进行发芽试验和幼苗鉴定,通过技术手段检测监督种子质量 北京大学人类疾病基因研究中心成立。该中心首批将启动32项研究课题,在人类疾病基因组学、人类功能基因组学方面开展研究与开发工作。苍蝇,人类得新资源