YY_T 0870.1-2013 医疗器械遗传毒性试验 第1部分：细菌回复突变试验.pdf

1 5 1 1.0 4 0.0 1C 3 0中 华 人 民 共 和 国 医 药 行 业 标 准YY/T 0 8 7 0.1 一2 0 1 3 医疗器械遗传毒性试验第 1 部分:细菌回复突变试验T e s t for g e n o t o x i c i t y o f me d i c a l d e v i c e s 一 P a r tl:Ba c t e r i a l r e v e r s e mu t a t i o n t e s t2 0 1 3 一 1 0 一 2 1 发布2 0 1 4 一 1 0 一 0 1 实施臀 、刮 涂 甩 宜 要 伪.产 产，尸国家食品药品监督管理总局发 布Y Y/T 0 8 7 0.1 一2 0 1 3.JJ 臼 J一月U吕 Y Y/To 8 70 的总标题是 医疗器械遗传毒性试验，包括以下部分:第 1 部分:细菌回复突变试验;第 2 部分:体外哺乳动物细胞染色体畸变试验;第 3 部分:用小鼠淋巴瘤细胞进行的体外哺乳动物细胞基因突变试验;第 4 部分:哺乳动物骨髓红细胞微核试验;第 5 部分:哺乳动物骨髓染色体畸变试验。有关其他方面的遗传毒性试验将有其他部分的标准。本部分为 Y Y/T 0 8 7。的第 1 部分。本部分按照 G B/TI.1 一2。9给出的规则起草。Y Y/T 0 8 70的 本部分是参考O E c D4 71一1 9 9 7 细 菌回 复突变试验 并结合医疗器械/材料自 身特点制定的。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由国家食品药品监督管理总局提出。本部分由全国医疗器械生物学评价标准化技术委员会(S A C/TC 2 4 8)归口。本部分主要起草单位:国家食品药品监督管理局济南医疗器械质量监督检验中心。本部分参加起草单位:国家食品药品监督管理局天津医疗器械质量监督检验中心、国家食品药品监督管理局北京医疗器械质量监督检验中心。本部分主要起草人:曾冬明、黄经春、于兆琴、陶剑、汤菊莉。Y Y/T 0 8 7 0.1 一2 0 1 3引言 G B/T16886.3中给出的检测潜在遗传毒性物质的试验方法均为经济合作与发展组织(O E C D)化学品测试指南 中规定的方法，但这些方法是针对化学品的特性制定而成，同时未给出详细的试验步骤，因此不适宜直接用于医疗器械/材料的检测。Y Y/T 0 8 7。参照 O E C D试验方法基本原则，并根据医疗器械/材料的特性对试验方法进行了适当的修改，规定了详细的试验步骤，可作为 G B/T1 6 8 86.3中遗传毒性试验的补充方法标准。Y Y/To 8 7。的本部分参照 O E C DNo.4 7 1(1 9 9 7)方法，有或无代谢活化系统的情况下，通过观察医疗器械/材料诱导组氨酸营养缺陷型鼠伤寒沙门氏菌株(h 1 5-)和色氨酸营养缺陷型大肠杆菌菌株的突变情况，以评价其潜在的致突变性。点突变是许多人类遗传性疾病的原因。有确切的证据表明，体细胞的癌基因和肿瘤抑制基因的点突变与人类和实验动物的肿瘤形成有关。许多试验菌株因具有多种特性，如回复位点的D NA序列、细胞对大分子通透性的增加、D N A修复系统的缺失或 D N A修复过程中错配的提高等，而使得它们对突变的检测更为敏感。其中，细菌回复突变试验具有快捷、廉价并且相对容易操作等优点，可用来检测D N A碱基对的替代、增加或缺失，为遗传毒性物质诱导的突变类型提供有用的信息。YY/T 0 8 7 01 一2 0 1 3 医疗器械遗传毒性试验第 1 部分:细菌 回复突变试验范围Y Y/TO 8 7 0的本部分规定了医疗器械/材料细菌回复突变试验方法。本部分推荐使用平板掺人法。注:口腔材料的A me s 试验见YY/T 0 1 2 7.1 0。规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。G B/T 16886.1 医疗器械生物学评价第 1 部分:风险管理过程中的评价与试验 G B/T 168 8 6.3 医疗器械生物学评价第3 部分:遗传毒性、致癌性和生殖毒性试验 G B/T16886.12医疗器械生物学评价第 12 部分:样品制备与参照样品术语和定义G B/T 1 6 8 8 6.1、G B/T 1 6 8 8 6.3 和 G B/T 1 6 8 8 6.1 2界定的术语和定义适用于本文件。主要设备 生物安全柜、电热干燥箱、恒温培养箱、恒温水浴箱、恒温振荡水浴箱、压力蒸汽灭菌器、低温高速离心机、低温冰箱(一80)或液氮罐、匀浆器、菌落计数仪和电子天平等。5 活 化系统、培养基和试剂试验用活化系统(59 和 59 混合液)、培养基和试剂按附录 A和附录 B的规定制备或购买市售产品。6 菌株及 其鉴定和保存6.1 菌株本部分宜至少采用4 株鼠伤寒沙门氏菌突变型菌株进行试验，推荐的菌株组合为:a)鼠伤寒沙门氏菌株 T A 1 5 3 7 或 T A 97 或 T A 9 7 a;b)鼠伤寒沙门氏菌株 T A 98;c)鼠伤寒沙门氏菌株 T A 1 0 O;d)大肠杆菌 WP Z u v r A，或WP Z u v r A(p K Ml o l)，或鼠伤寒沙门氏菌株T Al o Z;e)鼠 伤寒沙门氏 菌株T A 1 5 3 5(可 供选择)。注:为了检测交联突变剂，所选菌株中最好包括 T A1 02 或增加一种 D NA易修复的大肠杆菌株(如 WP Z或WP Z (p KM 1 0 1)。YY/T 0 8 7 0.1 一2 0 1 36.2 菌株特性 菌株特性应与表1 相符。突变型菌株的某些特性容易丢失或变异，在下列情况下，应进行菌株基因型的鉴定并形成文件:a)在收到培养菌株后;b)当制备一套新的冷冻保存或冰冻千燥菌株时;c)当每皿自发回变数不在正常范围时;d)当对诱变剂丧失敏感性时;e)使用主平板传代时;f)投人使用前。菌株鉴定结果基 因型菌 株 脂多糖屏 障 缺 失“R 因 子(抗 氨 节 青 霉 素)抗 四 环，一修 巍自发 回 变菌 落数 fTA 9 7T A9 8TA 1 0 09 0 1 8 0悬斗一+丁A I O Z 32 0TA 1 5 3 5 3 5 T A1 5 3 7W P Z(p K M I O I骥+-+-+-+“十”表示霭、“+”表示有组钊创 带“+”表示具有月“+”表示有四环子，瓦 性“+，表 示 无 修 复 能 力、该数值为参考值，可在验础 卜室 的 规 定 数6.3菌株鉴定6.3.1 增菌培 养 在 sm L营养肉汤培养基中接种贮存菌培养物，于(37士2)条件下振荡(1 1 5r/m in一1 25 r/mi n)培养 l oh 一1 2h。6.3.2组氨酸缺 陷型的鉴定63.2.1 加热融化底层培养基两瓶(一瓶不加组氨酸，一瓶加组氨酸)，不加组氨酸者每 1 00 mL底层培养基中加。.5 mmol仆生物素0.6mL;加组氨酸者每 1 00 m L底层培养基中加L-组氨酸 lmL(每100 m L中 含。.4 04 3 9)和。.5 m m ol仆生物素。.6 m L，冷却至50左右，各倒两个平皿。2Y Y/T0 8 7 0.1 一2 0 1 36.3.2.2 接种:取有组氨酸和无组氨酸培养基平皿各一个，按菌株号顺序各取一白金耳菌液划线(直线)接种在培养基表面，37 培养48 ho6.3.2.3 结果判定:受试菌株在有组氨酸培养基平皿表面各长出一条菌膜，无组氨酸培养基平皿上除自发回复突变菌落外无菌膜，说明受试菌株确为组氨酸缺陷型。6.3.3 月 旨多糖屏障缺 陷的鉴定6.3.3.1 接种:取菌液 0.1 mL移人平皿，迅速将加热融化的营养肉汤琼脂培养基(冷却至 50 左右)适量倒人平皿，混匀，平放凝固。将一片无菌滤纸片放人已凝固的培养基平皿中央，用移液器在滤纸片上滴加。.1%结晶紫溶液10 尸 L，37培养24 h，每个菌株做一个平皿。6.3.3.2 结果判定:阳性者在纸片周围出现一个透明的抑制带，说明存在rfa(深粗型)突变。T A 97、T A9 8、T A1 0 0、T A 1 5 3 5、T A1 5 3 7、T A 1 0 2和 WP Z(p K M1 0 1)均有抑制带，野生型鼠伤寒沙门氏菌和野生型WP Z(p K M1 0 1)没有抑制带。6.3.4R因子的鉴定6.3.4.1 加热融化营养肉汤琼脂培养基，冷却至50 左右，适量倒人平皿中，平放凝 固，用移液器吸。.8%氨 节青霉素10胖 L，在 凝固的培养基 表面 依中 线涂 成一条带，待氨节青霉素溶液干后，用接种环与氨节青霉素带相交叉划线接种要鉴定的菌株，并且接种一个不具有 R因子的菌株作氨节青霉素抗性的对照(一个平皿可同时鉴定几个菌株)，37 培养 24 ha6.3.4.2 结果判定:菌株经过 24 h培养，在氨节青霉素带的周围依然生长不受抑制，即有抗氨节青霉素效应，证 明带有 R因子。6.3.5 uvr B修复缺陷型的鉴定6.3.5.1 在营养肉汤琼脂培养基平皿表面用接种环划线接种需要的菌株。接种后的平皿一半用黑纸覆盖，在距 15W紫外线灭菌灯33 c m处照射8 5，37 培养24 h。63.5.2 结果判定:对紫外线敏感的菌株仅在没有照射过的部分生长。6.3.6四环 素抗性的鉴定6.3.6.1 用移液器各吸取 5拌 L 一10“L 0.8%的四环素溶液和。.8%的氨苇青霉素溶液，在营养肉汤琼脂培养基平皿表面依中线各涂成一条带，待四环素和氨节青霉素液干后，用接种环于四环素和氨节青霉素带相交叉划线接种T A1 02 和一种有 R因子的菌株(作为四环素抗性的对照)，37 培养 24 h。6.3.6.2 结果判定:T A 1 02 菌株生长不受抑制，对照菌株有一段生长抑制区，表明T A102 菌株有抗四环素效 应。6.3.7自发 回变菌落数的鉴定6.3.7.1 每株菌准备底层培养基平皿 2 个，同时融化顶层培养基 2 管，每管 Z mL，在 45 水浴中保温。6.3.7.2 在每管顶层培养基中，分别加人待鉴定的试验菌株的菌液0 1 mL，各 2 管，轻轻摇匀，迅速将此试管的内容物倾人已固化的底层培养基平皿中，转动平皿，使顶层培养基均匀分布，平放固化，37 培养 48 h计数菌落数，计算平均自发回变菌落数。6.3.7.3 结果判定:每一菌株的平均自发回变菌落数应落在表 1 所列正常范围内。6.4菌株保存鉴定合格的菌种应加人冷冻保护剂(例如光谱级二甲基亚矾(D MS O)或甘油)，保存在深低温 3Y Y/T 0 8 7 0.1 一2 0 1 3(如一80)或液氮中，或者冰冻干燥制成干粉，4保存。除液氮条件外，保存期一般不超过 2 年。主平板贮存在4，超过两月后丢弃，T A 1 02主平板保存两周后应该丢弃。7 试验前准备7.1 器具灭菌 与试验和对照样品接触的所有器具应采用可靠方法灭菌，置压力蒸汽灭菌器内 1 21 30 min，或置电热干燥箱内1 60 Zh。7.2试验环境要求试验应在生物安全柜中进行。样品制备 根据 GB/T16怀疑试验样 品可有 目引 京贝 制备试验液。可采用生理盐水和/或其他适株产生抑制作用时，应进行预试验。齐 啊 为浸提介质。如全 乡 走p 试验洋，提 供行、反 的验，可 考 虑 单 持 性 数 据。化验注 1:1 5 0 1 0 9注2:与经;剂 量 生9对照样品翻备9.1 阴性对同批号试骚样占2阳性对照“撇，浸提介每一试验菌株变剂和浓度见表 2，适宜时也可采用其他已知诱变表 2推荐的诱变荆试 验 菌 株5 9馄 合 +诱 变 剂 浓 度T A9 7苯 重 氮 磺C A S No.1 4 0 一 5 6 一 7 曰 1.。m g/mL，用 无 菌 注 射 用 水 配 制T Ag s对二甲基氨基苯重氮磺酸钠(敌克松)C AS No.1 4 0 一 5 6 一 7 1.0 mg/mL，用无菌注射用水配制 2 一 氨 基 药 C AS N o.1 5 3 一 7 8 一 6 0.1 mg/mL，用 D MS O配制TA 1 0 0对二甲基氨基苯重氮磺酸钠(敌克松)C AS N o，1 盛。一 5 6 一 7 1.omg/mL，用无菌注射用水配制T A1 0 2 甲基磺酸甲醋仁 C AS No.6 6 一 2 7 一 3。.l ing/m L，用无菌注射用水配制YY/T 0 8 7 0.1 一2 0 1 3表 2(续)如对试验菌株有抑制作用，应对试睑样试验 菌 株5 9馄 合 物阳 性 对 照诱 变 剂 浓 度W P Z、WP Z u v r A 和WP Z u v r A(P KM1 0 1)+叠 氮 化 钠 C A S No.2 6 6 2 5 一 2 2 一 8 1.Omg/mL，用无菌注射用水配制T A1 5 3 5+2 一 氨 基 荀巨 CA S No.1 5 3 一 7 5 一 6 0.1 mg/mL，用 D MS O配制1.omg/mL，用无菌注射用水配制TA 1 5 3 7+月声矛产 月品或浸提液进行梯度稀释，所选的剂量浓度范围宜包括细胞毒性从最大到小或无细胞毒性，一般至少包括 5 个试验浓度梯度，并以小或无细胞毒性浓度按平板掺人法进行试验。注:细胞毒性表现为，回复突变的菌落数减少，背景菌苔减少等。12平板掺入法12.1 融化顶层培养基分装于无菌小试管，每管2 mL，在 45 水浴中保温。12.2 在保温的顶层培养基中依次加人每种试验菌株新鲜菌液。.1 m L，混匀;试验样品组分别加。.l m L试验材料浸提液，活化组再加10%59混合液。.s m L，无活化组加。.Z m ol/L磷酸盐缓冲 液0.5 mL，每组 3 管，再混匀，迅速将每管溶液分别倾人底层培养基上，转动平皿使顶层培养基均匀分布YY/T0 8 7 0.1 一2 0 1 3在底层上，平放固化。12.3 阴性对照组分别加人。.1 mL浸提介质，活化组再加 10%59 混合液。5 m L，无活化组加人。.Zmol/L的磷酸盐缓冲液。.smL。阳性对照组分别加表2 列出的诱变剂。.lmL，活化组再加 10%59 混合液 0.5 mL，无活化组加 0.2 mol/L磷酸盐缓冲液 0 5 mL，其他步骤同12.2。12.4 全部平皿倒置于 37 培养箱中培养 48 h 一72 h观察结果。13结果评价13.1 计数并记录每一平皿的回变菌落数，并计算出3 个平皿的平均值。13.2 阴性对照组回变菌落数应在预期的范围内(见表 1)，阳性对照组回变菌落数应至少为阴性对照的3 倍，否则对不在范围内的菌株应重新试验。13.3 在背景生长良好条件下，试验样品组回变菌落数至少为阴性对照组回变菌落数的两倍或两倍以上(即回变菌落数)Z X阴性对照数)即为阳性反应。如回变菌落数的增加与剂量相关并具有统计学意义，或者至少在一个剂量水平出现可重复的并有统计学意义的阳性反应时，即可认为试验样品为阳性诱变剂。14试验报告试验报告中应包含下列信息:a)试验样品名称、规格型号和批号;b)试验和对照样品制备方法及说明;c)试验用菌株名称及特性鉴定;d)试验条件和试验步骤;e)试验结果;f)结果评价;9)结论。Y Y/T0 8 7 0.1 一2 0 1 3 附录A (资料性附录)5 9和5 9 混合液制备A.1 大鼠肝 59 液A.1.1 选健康雄性成年 S D或 Wis tar 大白鼠，体重 1 5 09 左右，约 5 一6周龄。将多氯联苯(A rod or1 2 5 4)溶于玉米油中，浓度为2 00 mg/mL，按 5 00 m g/k g(体重)无菌操作一次腹腔注射。注:也 可 采 用 苯 巴 比 要 和压 葵 昔 酮 联 翻户口.知A.1 .2 第 6天用颈动脉放动 物0 m L液 进 行 肝 门 静 脉 灌 注 鸟续 冲 洗 数 次 以 便 与娇3 mL，连同烧杯租队 冰分沪初千 脏 完 整 取 出 取 的，喊粒 体酶 活性 的血红 蛋 白。每克重后，用灭菌剪刀剪碎肝脏，在玻璃匀浆器(4的。.巧 mol/L氯化钾溶裂 “m ol/L 氯 化 钾 溶 液 连涌咬 m ol/L 氯 化 钾 溶 液40 1月 r/mi n，往复 lmi n 组织署 钻归)。00 r/min，1 m in)中制成肝匀浆。以上操作需注意部冷环境(4)L 清 液 为 肝59液成 留 经大Omg，并经间接后，用液氮或干或将59Zmi n)，AI.3A1 4致癌物(诱冰速冻后崖嘿定其生低温保A.2 5 91合辅助 因A.2.1A.2.2A.2.3L氯，匕 妇 _L蒙化钾百，篡类 黑 翡。4保存。4保存。gg一蓄彝磷酸煞knol门11n磷酸氢二磷酸二氢Na6 0 m L 调p H为7.润A.2.4 辅酶一 11(蛋保存(一20以下)0 HZ O)(1 3.89/5 0 0 m L)睦I P a 2 0 mi n灭菌或滤菌。4保存。:准确称取辅酶一 n，用无菌蒸馏水溶叮 成月 同2 5 m ol/L溶液，低温A.2.5 葡萄糖一 6 一 磷酸钠盆保存(一20以下)。:称取菌蒸翻味溶解配制成。.05 mol/L，低温A.3 1 0%5 9混合液每 10mL由以下成分组成:磷酸盐缓冲液(0.2 m ol/L，p H 7.4)氯化钾溶液(i6 5mo l/L)氯化镁溶液(0.4 mol/L)葡萄糖一 6 一 磷酸盐溶液(0.05 m ol/L)辅酶一 11溶液(0.0 2 5 mo l/L)肝 59 液临用时新鲜无 菌配制，混匀，置 冰浴中待用。6.0 mL0。Z mL0.2 m L1.0 m L1.6 m L1.0 m LYY/T 0 8 7 0.1 一2 0 1 3 附录B (资料性附录)培养基和试荆制备B.1 培养基与试荆B.1.1 营养肉汤培养基牛肉膏1，59胰陈(或混合蛋白膝)5.0 9氯化钠2.5 9蒸馏水5 00 mL加热溶解，调节 p H为 7.2，分装后0.1 0 3 MP a 2 0 m i n灭菌。4保存。B.1.2 营养肉汤琼脂培养基琼脂粉营养肉汤培养基加热 融化 后调节p H为7.2，0.1 0 3 MP a 2 0 m i n 灭菌。1.591 0 0 m LB.1.3底层培养基B.1.3.1 磷酸盐贮备液磷酸氢钠 按(N a N H H p O;4 H Z O)1 7.5 9柠檬酸(C 6 H。07 H:0)1 0.09磷酸氢二钾(K，HP O)5 0.09硫酸 镁(M g S O;7 H:0)1.0 9加蒸馏水至 1 0 0 mL，0.1 0 3 MP a 2 0 mi n 灭菌。4保存。注:待其他试剂完全溶解后再将硫酸镁缓慢放人其中继续溶解，否则易析出沉淀.B.1.3.2 4 0%葡萄糖溶液将 4 0.0 9葡萄糖加蒸馏水至1 0 0 mL，0.0 5 5 MP a 2 0 mi n 灭菌。4保存。B.1.3.3 1.5%琼脂培养基琼脂粉加蒸馏水至融化后 0.1 0 3 MP a 2 0 mi n 灭菌。6.094 0 0 mLB.1.3.4底层培养基制备无菌操作在灭菌琼脂培养基中(4。mL)依次加人:磷酸盐贮备液smL4。%葡萄糖溶液20 m L充分混匀，待冷却至 80 左右时注人培养皿，每皿仔9 0 mm)约25 mL，待培养基凝固后放人 37 Y Y/T 0 8 7 0.1 一2 0 1 3恒温箱内，培养过夜以除去水分并检查有无污染。B.1.4 顶层培养基B 1.4.1 顶层琼脂琼脂粉氯化钠加蒸馏水至3.092.595 0 0 m LB.1.4.2 0.sm mol/L组氨酸一 0.sm m ol/L生物素溶液(诱变试验用)D-生物素(相对分子质量 2 4 4)L 一 组氨酸(相对分子质量 1 5 5)加蒸馏水至 2 50 mL。4保存。3 0.5 mg1 9.5 mgB.1.4.3顶层培养基制备 加热融化顶层琼脂，每 1 00 m L顶层琼脂中加0.5 mmol/L组氨酸一生物素溶液 10 mL。混匀，分装在 1 00 mL锥形瓶中，0.1 03 MP a 20 min灭菌。用时融化分装小试管，每管 2 mL，在 45 水浴中保温。B.1.5 特殊试剂和培养基B.1.5.1 0.8%氨节青霉素溶液称取氨节青霉素40 mg，用。.02 m ol/l 氢氧化钠溶液稀释至smL。无菌配制，4保存。B.1.5.2 0.1%结晶紫溶液称取 1 00 m g结晶紫，溶于 1 00 mL无菌水。4 保存。B.1.53 L 一 组氨酸溶液和0.smm ol/L仆生物素溶液(鉴定菌株用)称取L-组氨酸0.4 0 4 39 和 仆生物素 1 2.2 mg，分别溶于 1 0 0 m L蒸馏水。0.1 0 3 MP a 2 0 m i n灭菌，4保存。B 1.5.4 0.8%四环素溶液(用于四环素 抗性试验和氨节青霉素一 四 环素平板):称取40 m g 四 环素，用0.0 2 mol/L盆酸缓冲液稀释至 5 mL，保存 于 4冰箱.B.1.5.5氨节青霉素平板和氨节青霉素一 四环素平板 每1 000 m L中由以 下成分组成:底层培养基910 mL 磷酸盐贮备液20 mL 4 0%葡萄糖溶液50 mL 组氨酸水溶液(0.4 0 4 39 八 o o mL)1 0 mL 0.5 m mol/L介生物素溶液6 mL 。.8%氨节青霉素溶液3 15 m L 0.8%四环素溶液。.25 mL 以上成分均分别灭菌或无菌制备，冷却至大约50，无菌条件下加人氨节青霉素溶液和/或四环素溶 液。YY/T 0 8 7 0.1 一2 0 1 3B.1.5.6组氨酸一 生物素平板每1 000 m L中由以下成分组成:底层培养基磷酸盐贮备液40%葡萄糖溶液组氨酸 水溶液(04 0 4 3 9/i o o m L)0.5 mmol/L仆生物素溶液以上成分均分别灭菌或无菌制备。9 1 4 m L2 0 mL5 0 mL1 0 mL6 m LB.1.5.7二甲基亚砚(DMS O)光谱纯，0.1 0 3 MP a 2 0 mi n 灭菌.YY/T 0 8 7 0.1 一2 0 1 3 参考 1 Y Y/To i 2 7.1 0 口 腔材料生物学评价杆菌回复突变试验(A ME S试验)文献第 2 单元 口腔材料生物试验方法 鼠伤寒沙门氏二1门LO闪!一.0卜田0曰卜卜 中 华 人 民 共 和 国 医 药 行 业 标准 医疗器械遗传毒性试验第 1 部分:细菌回复突变试验 Y Y/T O 8 7 0.1 一 2 0 1 3 中 国标准 出版 社 出版发 行 北京市朝阳区和平里西街甲2 号(l。1 3)北京市西城区三里河北街 1 6号(1 0 0 0 4 5)网址 www.s P c.n e t.c n总编室:(0 1 0)6 4 2 7 5 3 2 3 发行中心:(0 1 0)5 1 7 8 0 2 3 5 读者服务部:(0 1 0)6 8 5 2 3 9 4 6 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷 各地新华书店经销开 本8 8 0 X 1 2 3 0 1/1 62 014年2月第一版 印张 1 字数 24 千字2 0 1 4 年 2 月第一次印刷一一 一 1一一一一一一1一一书 号 备1 5 5 0 6 6 2 一 2 6 3 6 0定 价2400元Y Y/T 0 8 7 0 1 一 2 0 1 3如有印装差错 由本社发行中心调换 版权专有 侵权必究 举报电话:[phone]