学位论文：中药益智仁的炮制工艺及其质量标准研究.pdf

安徽中医学院硕士学位论文中药益智仁的炮制工艺及其质量标准研究中药益智仁的炮制工艺及其质量标准研究摘要目的：研究中药益智仁和盐炙益智仁的炮制工艺、建立相应质量标准，并对其进 行初步药效学对比研究，为益智仁及其盐炙品的工业化生产提供稳定可行、参数 可控的生产工艺，并为临床用药提供依据.方法：通过对益智仁及益智壳的各类成分进行比较研究，初步建立其质量评价指 标，并经过预试验选择出炮制工艺中主要影响因素；经过正交试验优选出最佳实 验室炮制工艺，并经过实验室放大试验后，进行十批中试放大试验，确定最佳工 艺参数；通过对十批中试益智仁和盐炙益智仁进行全面质量研究，并对在两种包 装条件下的三批样品进行稳定性考察试验，建立益智仁和盐炙益智仁的质量标 准；通过对十批益智仁的药材进行HPLC分析，建立益智仁药材的指纹图谱；对益智仁及盐炙益智仁的挥发油进行GC-MS研究，分析炮制前后其挥发油成分 的变化；通过对动物应激反应和“阳虚证”和“阴虚证”小鼠免疫器官重量的影 响，对益智仁及盐炙益智仁的药效学进行初步研究。结果：确定益智仁和盐炙益智仁的炮制工艺，建立了益智仁和盐炙益智仁的质量 标准，并建立了益智仁药材的HPLC指纹图谱；益智仁和盐炙益智仁均能显著 增强小鼠耐寒能力和抗疲劳能力，显著增加阳虚和阴虚小鼠的免疫器官的重量。结论：炮制工艺稳定、可行、参数可控，质量标准能有效控制产品质量；该药材 及其盐炙品具有较强的增强免疫作用.关键词：益智仁；盐炙益智仁；炮制工艺；质量标准；正交试验；皿指纹图 谱；气相色谱一质谱联用；药效试验.中药益智仁的炮制工艺及其质量标准研究ABSTRACTObjective:To stud y th e pr ecessing tech no l o gy a nd q ua l ity sta nd a r d o f Fr uctus a l pinl a e o xyph yl ia e(FAO)a nd Fr uctus a l pinl a e o xyph yl ia e fr ied with Sa l t(FAOFWS),a nd to co mpa r e th e pr el imina r y ph a r ma co l o gic exper iments o f th em,wh ich pr o vid e th e stea d y wo r ka bl e a nd th e fa cto r ca n be co ntr o l l ed pr o d uctive tech no l o gy fo r ind ustr ia l pr o cess a nd th e exper imenta l ba sis fo r th e cl inica l a ppl ica tio n.Methods:By stud y o n th e ma ny ch emica l ingr ed ients o f FAO a nd FAOFWS esta bl ish th e pr el imina r y eva l ua ting ind ica to r a nd th r o ugh pr epa r a tio n exper iment to ch o se th e ma in fa cto r o f pr ecessing tech no l o gy.We scr eened th e o ptimum l a b pr ecessing tech no l o gy ma inl y th r o ugh o r th o go na l d esign.After enl a r gel a b exper iment a nd pr o d uced tenba tch essa mpl es,wescr eened th eo ptimum tech no l o gy pa r a meter.Byr o und l yr esea r ch th eq ua l ity o f ten ba tch es pr o d uct o f FAOa nd FAOFWS,weesta bl ish ed th eq ua l ity sta nd a r d o f FAO a nd FAOFWS.we stud y o nth e finger pr into f FAO fr o m a na l yzed th e tenba tch espr o d ucts byHPLC.We fir st a ppl ied GC-MS to id entify a nd co mpa r e th e ch emica l co nstituents o f vo l a til e o il fr o m FAO a nd FAOFWS.By pr el imina r y ph a r ma co l o gic exper iments,we wo ud stud y th a t FAO a nd FAOFWS infl unced str ess r ea ctio n a nd th e weigh t o f Ya ng-Deficiency Synd r o me a nd Yin-Deficiency Synd r o me r a ts5 immune o r ga n.Results:We esta bl ish ed th e pr ecessing tech no l o gy a nd q ua l ity sta nd a r d o f FAO a nd FAOFWS.At sa me time,we esta bl ish ed th e finger pr int o f FAO to o.we fo und th a t FAO a nd FAOFWS co ul d enh a nced r a ts co l d r esista nce a nd a nti-fa tigue a bil ities.Th ey co ul d enh a nced th e weigh t o f Ya ng-Deficiency Synd r o me a nd Yin-Deficiency Synd r o me r a ts immune o r ga n to o.Conclusion:Th e pr ecessing tech no l o gy is sted d y a nd wo eka bl e,a nd ifs tech no l o gy pa r a meter co ul d be co ntr o l l ed.Th e q ua l ity sta nd a r d co ul d r o und l y mo nito r th e q ua l ity o f pr o d uct.FAO a nd FAOFWS co ul d str ength ened 2中药益智仁的炮制工艺及其质量标准研究immune functio ns.Key words:Fr uctus a l pinl a e o xyph yl ia e(FAO);Fr uctus a l pinl a e o xyph yl ia e fr ied with Sa l t(FAOFWS);pr ecessing tech no l o gy;q ua l ity sta nd a r d;o r th o go na l d esign;(h igh per fo r ma nce l iq uid ch r o ma to gr a ph y)HPLC;finger pr int;Ga s ch r o ma to gr a ph yma ss spectr um(GC-MS);(th in l a yer ch r o ma to gr a ph y)TLC;pr el imina r y ph a r ma co l o gic test.3中药益智仁的炮制工艺及其质量标准研究中英文名词对照表缩略词中文名英文名英文缩写益智Al pinia o xyph yl l a Miq.AOM益智仁Fr uctus a l pinl a e o xyph yl ia eFAO益智壳Al pinia o xyph yl l a Miq.Hul lAOMH盐益智仁Fr uctus a l pinl a e o xyph yl ia e fr ied with Sa l tFAOFWS紫外ul tr a vio l etuv红外infr a r edIR质谱ma ss spectr umMS高效液相色谱h igh per fo r ma nce l iq uid ch r o ma to gr a ph yHPLC气相色谱-质谱联用ga s ch r o ma to gr a ph y-ma ss spectr umGC-MS薄层色谱th in l a yer ch r o ma to gr a ph yTLC相对标准偏差r el a tive sta nd a r d d evia tio nRSD娜免疫吸附法Enzyme-l inked Immuno So r bent Assa yELISA4中药益智仁的炮制工艺及其质量标准研究中药益智仁的炮制工艺及其质量标准研究刖百益智仁为姜科植物益智Al pinia o xyph yl l a Miq.的成熟果实.为中医临床常 用药材,由于益智仁的炮制方法历代不统一，目前尚未见客观统一的炮制品种及 炮制工艺，有生品去壳用、生品带壳用；盐炙品传统炮制工艺操作多凭药工经验 进行、缺乏统一的工艺技术参数，产品质量评价以感观为主，多为定性描述，缺 乏定量的内控指标参数，造成产品质量参差不齐，影响临床效果，难以适应规模 化生产和日益增长的用药需求。鉴于此，本课题组成员在对益智仁炮制的历史沿 革和现代文献研究的基础上，选择益智仁常用的两种商品规格，即益智仁、盐炙 益智仁，通过对益智仁的挥发油含量、水浸出物、醇浸出物和酸浸出物、多糖、总黄酮的含量进行系统分析，并以水浸出物、醇浸出物和酸浸出物等的含量作为 其主要考察指标，研究确定益智的去壳工艺和盐制的工艺技术参数，建立益智仁、盐制益智仁二种饮片的中试生产工艺，同时建立益智仁、盐制益智仁二种饮片的 质量标准，进一步探讨益智仁、盐制益智仁二种饮片的皿指纹鉴别图谱，以 便对其进行质量控制，从而为振兴中药事业，加快中药产业现代化发展战略步伐 作出贡献.5中药益智仁的炮制工艺及其质量标准研究第一部分：益智的成分及初步质量研究2000版、2005版中国药典对益智仁和盐益智仁的质量控制仅以性状检 查、显微和薄层鉴别以及挥发油的含量测定来进行质量评价，然而随着储存时间 的长短、储存方式的不同甚或产地的不同，对挥发油均有较大的影响，从而难以 评价益智的质量.由于益智的质量控制比较粗糙、笼统，为了给益智仁及其炮制 品的质量评价提供一个准确的量化指标作为参考，本课题希望通过对益智的化学 成分进行全面研究后，从中分离得到益智的指标性成分或有效成分及其有效部 位，以便为益智的炮制工艺的优选和质量控制提供依据。L益智化学成分的研究L1样品制备：取净益智，粉碎，制成粗粉后备用。L 2实验试剂及仪器：薄层层析硅胶（青岛海洋化工有限公司）、硅胶（青岛海 浪硅胶干燥剂厂，柱层析用）、分析天平（江苏常熟恒器厂）、Hi S11-2电 热恒温水浴锅（北京长安科学仪器厂）、SB-取循环水式多用真空泵（郑州长 城科工贸有限公司）、真空干燥箱（上海浦东跃欣科学仪器）、VRS4B型熔点 测定仪（上海索光光电技术有限公司）、VGAUTO Spec-3000质谱仪、所用试 剂均为分析纯61.3益智有效成分的提取及分离称取10%的益智粗粉，以乙醇拌匀浸润后，装入渗漉筒中，再以乙醇浸泡 24小时后，以20ml/h in的速度用乙醇进行渗漉提取，收集渗漉液，减压回收乙 醇，得浓缩液。取浓缩液，加蒸播水将含醇量调至7仍后分次以氯仿萃取，减压 回收氯仿得氯仿萃取物。取氯仿萃取液，以乙醇溶解完全后，用硅胶拌样，水浴蒸干，再在红外灯下 完全烘干.装入已处理好的硅胶色谱柱中，以石油酸一乙酸乙酯进行梯度洗脱，每500ml收集一份，回收洗脱液，并将每份洗脱液进行检识，将组分相同的 洗脱液合并。结果在180 201份的合并液中有大量片状结晶析出，在1407 1516份的 合并液中有大量白色沉淀产生，分别滤取后得样品结口样品B将样品A再经过硅胶小柱分离后得化合物I,经测定熔点为139-140C,与对照品。一谷笛醇的Rf值一致，并经过对该化合物的NB进行分析，如图如6中药益智仁的炮制工艺及其质量标准研究下所示:图1-1。一谷笛醇NB图综上所述，该化合物为。一谷笛醇.将样品B经过丙酮重结晶，得到无定形粉末，再以甲醇加热使之完全溶解，趁热过滤，浓缩，静置后得到大量白色化合物n析出，化合物n Mo l ish反应为 阳性反应，经硫酸水解后对水解糖液进行PS分析，检出葡萄糖，对水解后的昔 元进行检识并用6一谷备醇对照品对照检出。一谷留醇，熔点测定值为：298-29究并经过对该化合物的NB进行分析，NB图如下所示：图1-2胡萝卜昔NE图7中药益智仁的炮制工艺及其质量标准研究由以上试验及N6结果，确定化合物II为胡萝卜甘.由于6一谷备醇和胡萝卜昔大量分布在多种植物中，自身的生理活性较弱，无法作为益智的指标性定量成分用来控制其质量.2益智仁中总黄酮含量测定据文献报道，益智中主要含有：挥发油、菇类、黄酮类、庚烷衍生物类成分.现代研究表明，黄酮类化合物均在临床上有多种生物学活性，近年来对益智化学 成分的深入研究，发现其中几个重要成分便是黄酮类。而且黄酮类成分均较挥发 油易于控制，鉴于此，本实验以益智仁中总黄酮的含量为研究指标，探讨其测定 方法，从而为益智的质量评价提供一定的依据.21仪器与试剂757-CRT型紫外可见分光光度计（上海棱光仪器有限公司），心285型电子 天平（梅特勒书利多仪器有限公司）、石油酸，乙酸，亚硝酸钠，无水氯化铝，氢氧化钠均为分析纯 2 2方法与结果 2 2 1样品液的制备取益智仁生品适量，经粉碎机打粉过30目筛，得到益智仁粉末，置于洁净 干燥的广口瓶中，并密封好后备用。取本品粉末约2克，6cpe干燥6小时，精密称定，置于圆底烧瓶中，先加 15倍量60 9cpe沸程的石油酸脱脂l h过滤.滤渣中再加12 5倍量60 9cpe 沸程的石油酸脱脂0.5h弃去石油酸液.再加入25倍量8跳勺乙醇回流2h 20 倍量的8g醇回流l h过滤,用80定醇少量洗涤容器和药渣，合并提取液和 洗液，挥去溶剂，以8%醇溶解过滤，定量转移至10311容量瓶中，加8%醇至刻度，摇匀，即得样品液。2 2 2标准液的配制精密称取于12cpe下干燥至恒重的芦丁对照品19.2mg置于l OOnl容量瓶中，加8%醇溶解，定容至l OQnl即得。2 2 3吸收波长的选择精密移取样品溶液3.0ml和对照品溶液3.0ml分别置25ml容量瓶中，分别 8中药益智仁的炮制工艺及其质量标准研究加入5/a?Q和各1.0ml,静置6min再加入1(WHQ Qml,加水至 刻度摇匀后放置5min同法用相应的溶剂作空白，在300 600nm范围内进行扫 描，以确定样品溶液和芦丁对照品溶液的最大吸收波长.吸收图谱见图和图 1T由图可知，最大吸收波长为510nr aUV7S7CRT*叶T兄介尤先戊计黄杵-0。】200 220 24C no no 300 320 MO 360 3M _ 420 JO 400 460 520 540 50 SSOIfttt 2.，。*猊“冏：I2.M na 中坦 戈”向制：It*图IT对照品溶液吸收图2 2 4标准曲线的绘制精密移取 2 2.2 项下标准液 2.5ml,3.Ch il,3.5ml,4.Qml,4.5ml,5.Onl于6个25ml容量瓶中，再依次用80X醇补足至5.Ch il,再加入5%娅Q和1仿公1。3 9中药益智仁的炮制工艺及其质量标准研究各1.Qnl,静置6min再加入ICWHIO.0ml,加水至刻度摇匀后放置15min 同法用相应的溶剂做空白，510nm下测定，结果在线性范围19.2-38如范 围内，吸收度与浓度呈良好的线性关系，其回归方程：A=0.0151GH）.0381,相关 系数r=0.9999测定结果见表1-1绘制标准曲线见图1&表1T标准液吸光度（D样品取样量（ml）-F6-40 5.0吸光度 A 0.328 0.388 0.445 0.503 0.560 0.620图15标准曲线2.2 5稳定性实验2 2 5.1母液的稳定性以样品液定容后计时，每小时测定一次，考察其稳定性.取样品液3.Qnl置 25ml容量瓶中，如2.2,3项下方法显色.测定结果见表1-2表12母液稳定性考察（n=6）时间Oh l h 2h 3h 4h 5h吸光度0.299 0.289 0.309 0.303 0.303 0.303结果X=0.301 RSEA2 224%结果表明，样品液在5h内基本稳定,2 2 5.2显色后样液的稳定性以样品显色放置5min后记时，考察其显色后l h内稳定性。测定结果见表 结果表明显色后l h内样液基本稳定。10中药益智仁的炮制工艺及其质量标准研究表1-3显色后母液的稳定性（nW）时间（min）010 20 30 405060收度度 Q 2990.305 0.297 0.292 0.2940.2950.294结果X=O.297 RSM.615%2.2 6精密度实验精密移取同一份样品溶液共6份，每份3.0ml置25ml容量瓶中，如2.2 3 项下方法显色，同法以相应的溶剂做空白，于510nm下测定,结果见表1TRSD=0.531%精密度良好.表IT 精密度实验（nW）样品号 12 3 456吸收度 0.3150.317 0.316 0.3130.3130.316结果 X=o.315 RSML 531%2.2.7重复性实验取同一份样品6份，每份约2以2 2.1项方法如法制样，再分别精密移 取各样液3.0ml置25ml容量瓶中，如2 2 3项方法显色，于510nm下测定.结果见表1-*RSM.925%表明重复性良好.表1-5重复性实验（n=3）样品号12 3 456样品含量结果0.92%0.897%0.93映 0.918%X=Q.928%RSD=1.925%0.945%0.940%2.2 8回收率实验精密移取已知总黄酮含量的6份样液各1.0ml,再分别加入芦丁标准液（0.325mml）1.0ml,再如2 2 3项方法显色，于510nm下测定，结果见表1-611中药益智仁的炮制工艺及其质量标准研究表/回收率实验样品号样品含量芦丁加量测定结果回收率计算结果10.19990.32500.5278100.88%20.20950.32500.533699.72%30.17920.32500.5064100.68%X=100.4 1.045%3.2 4 2显色后稳定性：以样品煮沸后放冷计时，考察其稳定性，测定结果 见表3-12结果表明，显色后的供试样品液在5小时内基本稳定。表1-10显色后样液的稳定性时间吸光度 0.468 0.456 0.453 0.457 0.456 0.4530.457;RS1.22%3.2 5精密度实验15中药益智仁的炮制工艺及其质量标准研究取同一份样品液6份各0.2ml,同3.2 2项下进行显色，在48811n下测定各吸光度,同法用蒸储水做空白对照，测定结果见表i-n_表11精密度实验的测定结果_样品号 1 2 3 4 5 6吸光度)0.317 0.3130.315 0.316 0.314 0.315结论 治 0.314 RSEAL 3%结果表明该测定方法的精密度良好.3.2 6重复性实验取同一份原样品粉末，同3.2.1项下制成供试品液6份，同3.2 2项下显色样品号 1 2 34 56多糖含量%8.63 8.55&41结论 义&50a 59 a 36RSD=2.14%8.48后，在488nm下测定各样液的吸光度,测定结果见下表：表1-12重复性实验的测定结果结果表明，此法的重复性良好.3.2 7回收率实验精密移取已知多糖含量的供试液5份各0.1ml,均精密加入葡萄糖标准液(13.4ng-100ml)0.2ml,补加蒸储水Q 7ml，加入5燎酚2 0ml,摇匀，同3.2 2 项下进行测定，结果见下表：表1-13回收率实验的测定结果样品号样品含量葡萄糖加量测定结果回收率(%计算结果128 9326.8055.86100.4822&526.8055.1999.59330.9926.8057.7199.71X=1OO.41429.5326.8056.78101.69RSD=O.837%524 1326.8051.08100.56结果表明该测定方法的准确度良好,3.2 8样品的含量测定分别精密移取3.2.1项下的各样液0.2ml,同3.2 2项下显色、测定，结果16中药益智仁的炮制工艺及其质量标准研究见下表：表1-14多糖样液的测定结果样品号多糖含量%18.5428.6238.5348.39结果表明，益智经过手工剥取外壳和通过炒制砸碎后，筛去外壳的样品以及 通过盐制前后的样品的多糖的含量没有明显区别.4浸出物的含量测定水溶性浸出物、醇溶性浸出物按2005版中国药典“浸出物”项下热浸法 进行测定，酸溶性浸出物按2005版中国药典“酸溶性浸出物”项下测定；具 体方法如下。4 1水溶性浸出物的含量测定取4g左右粉末以分析天平精称，置锥形瓶内一并加入沸石，精密移取l OOnl 蒸储水加入锥形瓶，称量锥形瓶及其内容物的总质量，静置l h加热，微沸回 流l h放凉，补足损失的溶剂至质量与回流前相同，用干燥的滤纸滤过。精密 移取滤过的提取液25ml于已恒重精称的蒸发皿中，在水浴上蒸干后于恒温干燥 箱中105c干燥3h取出置干燥器中放凉，精称，计算其水浸出物含量。结果见 下表：表1-15水溶性浸出物的含量测定结果样品号水溶性浸出物必124 59224.65324 72428 76结果表明，益智经过手工剥取外壳和通过炒制砸碎后，筛去外壳的样品水溶 17中药益智仁的炮制工艺及其质量标准研究性浸出物的含量没有明显区别；而通过盐炙前后的样品的水溶性浸出物的含量有 了较为明显的增加.4.2醇溶性浸出物的含量测定取4g左右粉末以分析天平精称，置锥形瓶内一并加入沸石，精密移取l OOnl 95%醇加入锥形瓶，称量锥形瓶及其内容物的总质量，静置l h后，加热，微沸 回流l h放凉，补足损失的溶剂至质量与回流前相同，用干燥的滤纸滤过。精 密移取滤过的提取液25ml于已恒重精称的蒸发皿中，在水浴上蒸干后于恒温干 燥箱中105c干燥3h取出置干燥器中放凉，精称，计算其醇浸出物含量.结果 见下表：表1-16醇溶性浸出物的含量测定结果样品号醇溶性浸出物物111.18211.26311.35413.57结果表明，益智经过手工剥取外壳和通过炒制砸碎后，筛去外壳的样品醇溶 性浸出物的含量没有明显区别；而通过盐制前后的样品的醇溶性浸出物的含量有 了较为明显的增加。4 3酸溶性浸出物的含量测定粗称2蹶末（过四号筛），置硫酸干燥器中干燥12h后取出精称，后以乙酸 用索氏提取器提取3h提取液倒于至恒重的蒸发皿中，待乙醛自然挥干，置硫 酸干燥器中干燥18h精称，后于恒温干燥箱中105c恒温干燥至恒重（5h）,取 出置干燥器中放凉，精称，计算其醒浸出物含量。结果见下表：表1T7酸溶性浸出物的含量测定结果样品号酸溶性浸出物物11.8621.8231.7641.4118中药益智仁的炮制工艺及其质量标准研究结果表明，益智经过手工剥取外壳和通过炒制砸碎后，筛去外壳的样品醴溶 性浸出物的含量没有明显区别；而通过盐制前后的样品的酸溶性浸出物的含量有 了较为明显的降低.挥发油含量测定称取益智仁粉末100s加60QH1蒸播水按2000版中国药典一部“挥发 油测定”项下甲法提得透明黄色油状物，并进行测定.结果见下表：表1-18挥发油含量测定结果样品号 挥发油W/LOO01 L462 1.393 1.364 1.25结果表明，益智经过手工剥取外壳和通过炒制砸碎后，筛去外壳的样品挥发 油的含量稍有降低；而通过盐制前后的样品的挥发油的含量有了较为明显的降 低。6益智不同药用部位成分的比较研究益智有生品去壳用和生品带壳用等不同用法，目前主要为去壳后使用，为了 探讨其去壳使用的机理，本实验通过对益智壳和益智仁的成分进行初步比较研 究，为其去壳工艺提供依据.6 1原材料益智购自安徽沪谯中药饮片厂，经安徽中医学院药学院周建理教授鉴定为姜 科植物益智Al pinia o xyph yl l a Miq.的干燥成熟果实将之手工去壳后分为益智 仁和益智壳6.2实验试剂及器材分析天平（江苏常熟恒器厂）、电热恒温水浴锅（北京长安科学仪器厂，田,S11 2）、SHB-琢循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）、真空干燥 箱（上海浦东跃欣科学仪器厂，西。2002型）、As5150A超声提取器，所用试 剂为分析纯。19中药益智仁的炮制工艺及其质量标准研究6 3出粉率和出膏率由于益智中含有较多的挥发油成分，为了尽量减少对其它成分的破坏和能够 尽量的将益智中的化学成分提取完全，以便对益智中的各种化学成分的提取分离 的条件有大概的掌握，本实验采用乙醇渗漉提取法.取净益智仁、益智壳各500g粉碎成粗粉后，分别以95%醇拌匀，让其 充分浸润后装柱，再用95浓醇浸泡后，以l Oml/min的速度渗漉，收集渗漉液,并将所得到的渗漉液减压回收乙醇后浓缩；最终得益智仁浓缩液550ml,益智壳 浓缩液545mL取益智的仁和壳浓缩液各50ml,置于100的水浴锅上加热，挥去其中的大 部分乙醇和水分后，于105的真空干燥箱中干燥6小时，称重，得出膏率结果 见下表：表1-19.益智仁和益智壳的出粉率、出膏率样品出粉率%干膏得率益智仁929.81益智壳967.656 4总黄酮分别取益智仁和益智壳的样品同前法制成供试样品液，同前法进行测定，结 果见下表：表1-20益智仁总黄酮含量测定3样品 总黄酮的含量（%益智仁 L221益智壳 0.9526 5多糖分别取益智仁和益智壳的样品同前法制成供试样品液，同前法进行测定，结 果见下表：表121益智仁总多糖测定n=3样品 总多糖的含量（%益智仁 8.251益智壳 4.65820中药益智仁的炮制工艺及其质量标准研究6 6挥发油和浸出物分别取益智仁和益智壳的样品同前法分别对其挥发油、水浸出物、醇浸出物 和酸浸出物同前法进行测定，结果见下表：表122益智不同部位挥发油、酸浸出物含量比较样品挥发油含量fnl/400g）挥发油颜色醛浸物（%水浸物（%醇浸物（%益智仁1.40浅黄色1.96 23.25 11.62益智壳0.46浅绿色1.12 25.69 13.18结果表明，益智仁中挥发油含量较高，益智壳中挥发油含量较低；同时益智 仁中醛浸出物含量较高。6.7甲醇提取液的HHC比较分别选取同一产地的益智药材，手工去壳后得到益智仁、益智壳和益智全果,按照供试样品的制备方法得到三份供试样品液，精密吸取20ul注入液相色谱仪,进行分析（样品制备方法和色谱条件见P58）,结果见图1-7：（L益智壳 2益智全果 a益智仁 S.内标内药昔）试验结果表明，益智仁和益智壳的成分相差较大，的0色谱图中色谱峰差 异明显，益智全果和益智仁的峰形相近，但各峰的相对峰面积差异较大。68 IR分析鉴别21中药益智仁的炮制工艺及其质量标准研究分别选取同一产地的益智药材，手工去壳后得到益智仁和益智壳，将上述样 品粉碎后制成过120目筛的细粉，后以嗅化钾压片后进行IR(Nico l et Ava ta r 370 DTGS)分析，结果见下图：图1-8益智仁IR图4000 3500 3000 2500 2000 1500 1000 500Wavenumbers(cm-1)图1-9益智壳IR图22中药益智仁的炮制工艺及其质量标准研究图1-10益智仁和益智壳IR合并图结果表明：益智仁和益智壳的 限图有较为明显的区别，提示其成分间可能 有较大的区别.1讨论7.1益智仁中已分离得到的各类成分主要以脂溶性成分为主的液状成分和以6-谷留醇和胡萝卜昔为主的固体成分，由于液体成分不便于定量，而6一谷笛醇和 胡萝卜昔存在于多种植物中，专属性不强，自身的生理活性较弱，无法作为益智 的指标性定量成分用来控制其质量，因此也就无法实施以测定单一的有效成分或 者指标性成分的含量来控制其质量。7.2通过对益智仁和益智壳的各类成分以及甲醇提取物的曲3色谱图和粉末的 IR进行比较后发现，益智仁和益智壳的成分差异较大，在未对益智壳的药效进 行全面研究的基础上，益智还应以去壳使用为宜.23中药益智仁的炮制工艺及其质量标准研究第二部分：益智仁去壳工艺和盐炙工艺规范化研究益智仁为姜科植物，炮制方法历代不统一，目前尚未见客观统一的炮制品种 及炮制工艺，主要有生品去壳用、生品带壳用；盐炙品传统炮制工艺操作多凭药 工经验进行、缺乏统一的工艺技术参数，产品质量评价以感观为主，多为定性描 述，缺乏定量的内控指标参数，造成产品质量参差不齐，影响临床效果，难以适 应规模化生产和日益增长的用药需求。同时由于益智仁含挥发性成分较多，且有 效成分不够明确，为了评价益智仁炮制前后饮片的质量，在结合益智仁成分研究 及有关文献的基础上，本课题采用以水溶性浸出物，醇溶性浸出物，酸溶性浸出 物，挥发油和总黄酮、多糖的含量为质量指标，以不同炒制温度，炒制时间为考 察因素，探讨益智仁去壳的炮制工艺；并通过正交设计方法，以药材加盐水量，炒制温度，炒制时间为考察因素，探讨其盐制益智仁的炮制工艺，以期建立益智 仁去壳工艺和益智仁盐制品规范的炮制工艺及其质量标准.由于益智仁的有效成 分不明确，总黄酮、多糖的含量变化不大，所以采用以水溶性浸出物、醇溶性浸 出物、酸溶性浸出物等成分作为考察指标；测定方法及结果如下：1、实验材料L 1药材益智购自安徽沪谯中药饮片厂，经安徽中医学院药学院周建理教授鉴定为 姜科植物益智Al pinia o xyph yl l a Miq.的干燥成熟果实L 2仪器Hi S11-2电热恒温水浴锅4匕京长安科学仪器厂），SK啦循环水式多用真 空泵郑州长城科工贸有限公司），EZJ2002型真空干燥箱 比海浦东跃欣科学仪 器厂），JZ09A4型粉碎机（天津市第二微电机厂），多功能炒药机，ST30型红外 测温枪（上海中药仪器厂制造），炒药机，想T60型轧扁机，鼓风机，75MRT 型紫外可见分光光度计（上海棱光仪器有限公司），工-85型电子天平（梅特勒 书利多仪器有限公司）.1.3试剂95浓醇、石油酸（6O-90C）、乙醛、甲苯止海苏懿化学试剂有限公司，阳，24中药益智仁的炮制工艺及其质量标准研究色谱甲醇化海苏懿化学试剂有限公司），食盐（购自安徽省合肥市盐业局），蒸 福水.2益智仁（益智去壳）工艺研究中医临床用益智仁多去壳取仁，药典中亦规定：除去杂质及外壳,然后 去壳方法各异，且多为手工去壳，费工费时,在文献研究的基础上，结合现代生 产企业实际，拟采用清炒法去除益智仁外壳.由于益智仁中主要成分为挥发油，在清炒过程中，炒制温度、时间对其有一定影响同时，也直接影响去壳难易度。为此，本课题组选择挥发油、水溶性浸出物，醇溶性浸出物，酸溶性浸出物、总 黄酮和多糖等为考察指标，系统研究炒制温度、炒制时间对益智仁去壳难易度及 质量的影响.2 1不同温度对益智仁去壳及质量的影响在大量预实验的基础上，各取500g益智，分别选择益智表面炒制温度为 140、180、220、260、300的条件下炒制El in,取出，放凉后，砸碎后，筛去外壳，留下益智仁。观察去壳难易程度，同时进行水溶性浸出物、醇溶性浸 出物、酸溶性浸出物、挥发油、总黄酮、多糖含量测定，不同温度对益智仁去壳 及质量的影响s实验结果见下表：表2-1不同温度对益智仁去壳及质量的影响 n=2炒制温度（）挥发油(ml ZLOOg)水溶性浸出物（%醇溶性浸出物（%酸溶性浸出物（%总黄酮（%多糖（%去壳难易程度1401.3823.5111.261.920.86a 57较难1801.3923.4911.211.860.89a 6i难2201.3323.6211.351.890.81a 59难2601.3423.7511.491.820.89a 5i易3001.2823.5111.671.710.82a 46易结果表明，随着炒制温度的升高，益智仁中水溶性浸出物、醇溶性浸出物含 量呈增高趋势，而挥发油、酸溶性浸出物呈下降趋势，总黄酮、多糖无明显变化。2 2不同炒制时间对益智仁去壳及质量的影响在预实验及2 1研究基础上，各取500g益智，分别选择在益智药材表面温 25中药益智仁的炮制工艺及其质量标准研究度为160 170炒制6min Snin l Omin 12min取出，放凉，砸碎后，筛去 外壳，留下益智仁；观察去壳难易程度，同时进行质量分析，实验结果见下表：表2-2不同炒制时间对益智仁去壳及质量的影响n=2结果表明，随着炒制时间的延长，益智仁中水溶性浸出物、醇溶性浸出物含 量呈增高趋势，而挥发油、酸溶性浸出物呈下降趋势，总黄酮、多糖无明显变化。炒制时间 挥发油 水溶性浸醇溶性浸酸溶性浸总黄酮 多糖(%(min)(ml/LOOg)出物(%出物(%出物(%(%去壳难易程度6 1.35 23.35 11.55 1.95 0.91&628 1.33 23.46 11.61 1.89 0.95&491 0 1.29 23.79 11.75 1.80 0.89&561 2 1.26 24 19 11.96 1.72 0.92&65难 易 易 易2.A实验室去壳工艺参数在上述实验的基础上，初步选定益智实验室去壳工艺参数为：锅温220、260、300,炒制时间6 min 7min 8 min分别进行益智去壳实验，结合其 质量分析，以进一步确定益智实验室去壳工艺参数。实验结果如下：2 3.1样品制备样品1:取500g益智，投入预热锅中，中火加热，在锅温220、炒制时间Siin 取出，放凉，砸碎后，筛去外壳，留下益智仁。样品2：取500g益智，投入预热锅中，中火加热，在锅温260、炒制时间Siin 取出，放凉，砸碎后，筛去外壳，留下益智仁。样品3：取500g益智，投入预热锅中，中火加热，在锅温300、炒制时间Siin 取出，放凉，砸碎后，筛去外壳，留下益智仁。样品4：取500g益智，投入预热锅中，中火加热，在锅温220、炒制时间7min 取出，放凉，砸碎后，筛去外壳，留下益智仁.样品5：取500g益智，投入预热锅中，中火加热，在锅温220、炒制时间a nin 取出，放凉，砸碎后，筛去外壳，留下益智仁。样品6：取500g益智，投入预热锅中，中火加热，在锅温260、炒制时间7min 取出，放凉，砸碎后，筛去外壳，留下益智仁。样品7:取500g益智，投入预热锅中，中火加热，在锅温260、炒制时间&nin 26中药益智仁的炮制工艺及其质量标准研究取出，放凉，砸碎后，筛去外壳，留下益智仁.样品8：取500g益智，投入预热锅中，中火加热，在锅温300、炒制时间7min 取出，放凉，砸碎后，筛去外壳，留下益智仁.样品9:取500g益智，投入预热锅中，中火加热，在锅温300、炒制时间8min 取出，放凉，砸碎后，筛去外壳，留下益智仁.2 3.2质量分析分别取上述9种样品，按前法进行质量分析；实验结果见下表:表23不同条件对益智仁去壳及质量的影响m2样品挥发油水溶性浸醇溶性浸出物酸溶性浸出物去壳难易程度(ml/L00g)出物(为(%(%样品11.3223.5011.681.75难样品21.3023.8311.841.71易样品31.2523.4212 171.56易样品41.2924.1111.941.68难样品51.2324.2112 251.62难样品6