免疫检测常用方法和运用.pptx

免疫检测常用方法和运用免疫检测常用方法和运用免疫检测常用方法和运用第1页l免疫学检测方法是应用免疫学理论设计一系列测定抗原、抗体、补体、细胞因子等免疫相关物质及微量物质如激素、酶、血浆微量蛋白、血液药品浓度、微量元素、毒品等试验方法。免疫检测常用方法和运用第2页l这些方法所含有特异性好、敏感性高、简单、快速和稳定特点为临床上确定诊疗、分析病情、调整改疗方案和判断预后等提供有效试验依据，使它们在临床应用深入普及和推广。免疫检测常用方法和运用第3页凝集反应(agglutination)l颗粒性抗原(细菌、细胞等)与对应抗体，或可溶性抗原(亦可用抗体)吸附于与免疫无关载体形成致敏颗粒与对应抗体(或抗原)，在有适量电解质存在下，形成肉眼可见凝集小块。免疫检测常用方法和运用第4页凝集反应分类l直接凝集反应l间接凝集反应l抗人球蛋白试验（Coombs试验）免疫检测常用方法和运用第5页直接凝集反应l颗粒性抗原(细菌、细胞等)与对应抗体在有适量电解质存在下，形成肉眼可见凝集小块。l常见应用是血型判定免疫检测常用方法和运用第6页血型判定示意图免疫检测常用方法和运用第7页间接凝集反应l将可溶性抗原（或抗体）先吸附于适当大小颗粒性载体表面，然后与对应抗体（或抗原）作用，在适宜电解质存在条件下，出现特异性凝集现象称间接凝集反应（indirectagglutination）或被动凝集反应（assiveagglutination）。免疫检测常用方法和运用第8页间接凝集反应l常见载体微球有些人O型血红细胞、绵羊或家兔红细胞、聚苯乙烯乳胶、活性炭/甲苯胺红、明胶颗粒等免疫检测常用方法和运用第9页间接凝集反应l正向间接凝集反应l反向间接凝集反应免疫检测常用方法和运用第10页正向间接凝集反应l用抗原致敏载体以检测标本中对应抗体免疫检测常用方法和运用第11页正向间接凝集反应 胶乳凝集试验l所用载体颗粒为羧化聚苯乙烯胶乳，是一个直径约为0.8m大小圆形颗粒，带有负电荷，可物理性吸附蛋白分子。l将溶血素O 吸附在羧化聚苯乙烯胶乳颗粒上检测抗”O”。l将变性IgG包被于羧化聚苯乙烯胶乳颗粒上检测RF。免疫检测常用方法和运用第12页正向间接凝集反应 RPR/TRUST试验l血浆反应素试验(RPR)所用载体颗粒为活性炭颗粒l甲苯胺红不加热血清反应素试验 （TRUST）所用载体颗粒为甲苯胺红颗粒免疫检测常用方法和运用第13页正向间接凝集反应 RPR试验免疫检测常用方法和运用第14页正向间接凝集反应 TRUST试验免疫检测常用方法和运用第15页正向间接凝集反应 明胶颗粒凝集试验l所用载体为人工合成惰性明胶颗粒l梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA）l肺炎支原体抗体检测（MP-Ab）免疫检测常用方法和运用第16页正向间接凝集反应 TPPA试验免疫检测常用方法和运用第17页正向间接凝集反应 TPPA试验免疫检测常用方法和运用第18页正向间接凝集反应 MP-Ab试验免疫检测常用方法和运用第19页正向间接凝集反应 MP-Ab试验免疫检测常用方法和运用第20页正向间接凝集反应 MP-Ab试验免疫检测常用方法和运用第21页正向间接凝集反应 MP-Ab试验l检测肺炎支原体总抗体（IgM,IgA IgG)l以滴度方式汇报检测结果（1:80 1:80、1：160、1:320)免疫检测常用方法和运用第22页反向间接凝集反应l用已知特异性抗体致敏载体以检测用已知特异性抗体致敏载体以检测标本中对应抗原。标本中对应抗原。免疫检测常用方法和运用第23页抗人球蛋白试验（Coombs试验）l抗人球蛋白抗体参加间接血凝试验，用于检测抗红细胞不完全抗体l分类：直接Coombs试验 间接Coombs试验 免疫检测常用方法和运用第24页直接Coombs试验免疫检测常用方法和运用第25页间接Coombs试验免疫检测常用方法和运用第26页凝集反应总结一、直接凝集反应 血型判定二、间接凝集反应 胶乳凝集试验 ASO/RF1正向间接凝集反应 RPP/TRUST 明胶颗粒凝集 TPPA/MP2反向间接凝集反应三、抗人球蛋白试验 直接/间接Coombs试验 免疫检测常用方法和运用第27页酶联免疫吸附试验（ELISA）l 使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。l 使抗原或抗体与酶连接成酶标抗原或抗体，且既保留其免疫活性又保留酶活性。l 标本中抗原或抗体、酶标抗原或抗体按一定次序与固相载体表面抗体或抗原反应，并经过底物与酶反应来反应标本中抗原或抗体量。免疫检测常用方法和运用第28页酶联免疫吸附剂试验免疫检测常用方法和运用第29页酶联免疫吸附试验l双抗体夹心法l双抗原夹心法l间接法l竞争法 l捕捉法测 IgM 抗体免疫检测常用方法和运用第30页ELISA双抗体夹心法l用特异性抗体进行包被和制备酶标抗体，以检测对应抗原。l乙肝标志物中HBsAg、HBeAg检测常采取本法免疫检测常用方法和运用第31页ELISA双抗体夹心法免疫检测常用方法和运用第32页ELISA双抗体夹心法免疫检测常用方法和运用第33页ELISA双抗原夹心法l用特异性抗原进行包被和制备酶结合物，以检测对应抗体。l抗HBs检测l抗HCV检测l抗HIV检测免疫检测常用方法和运用第34页ELISA双抗原夹心法免疫检测常用方法和运用第35页 ELISA竞争法 l标本中抗体和一定量酶标抗体竞争与固相抗原结合。如受检标本中无抗体，则酶标抗体能顺利地与固相抗原结合。加入酶标抗原后就显色深。如受检标本中含有抗体，则与酶标抗体以一样机会与固相抗原结合，竞争性地占去了酶标抗体与固相抗原结合机会，使酶标抗原与固相载体结合量降低。加入酶标抗原后就显色浅或不显色。免疫检测常用方法和运用第36页 ELISA竞争法 免疫检测常用方法和运用第37页 ELISA竞争法 l最常见应用：l乙肝HBeAb、HBcAb检测免疫检测常用方法和运用第38页ELISA捕捉法l（1）将抗人 IgM 抗体（抗人 IgM 链抗体）连接在固相载体上，形成固相抗人 IgM。l（2）加入标本，IgM 抗体被固相抗体捕捉。洗涤除去其它抗体。l（3）加入特异性抗原试剂，它只与固相上特异性 IgM 结合，洗涤。l（4）加入针对特异性抗原酶标抗体，形成固相二抗 IgM抗体抗原 酶标抗体复合物。l（5）加底物显色，如有颜色显示，则表示血清标本中特异性 IgM 抗体存在，是为阳性反应。免疫检测常用方法和运用第39页ELISA捕捉法l以优生四项IgM抗体检测为例免疫检测常用方法和运用第40页ELISA捕捉法l甲肝IgM抗体测定免疫检测常用方法和运用第41页ELISA总结l酶免疫测定含有高度敏感性和特异性，几乎全部可溶性抗原抗体系统均可用以检测。它最小可测值达 ng 甚至 pg 水平。酶免疫测定标识试剂比较稳定，且无放射性危害。所以，酶免疫测定应用日新月异，酶免疫测定新方法、新技术不停发展。免疫检测常用方法和运用第42页固相膜免疫测定l利用微孔膜（主要是醋酸纤维素膜）作为固相进行免疫检测方法l依据标识物不一样分为两类：l 酶标固相膜免疫测定：酶免疫斑点法 酶免疫印迹法 l 金标法：胶体金斑点渗滤试验 胶体金免疫层析试验免疫检测常用方法和运用第43页酶标固相膜免疫测定原理免疫检测常用方法和运用第44页酶免疫斑点法l常应用于本身抗体检测免疫检测常用方法和运用第45页酶免疫印迹法 免疫检测常用方法和运用第46页胶体金斑点渗滤试验免疫检测常用方法和运用第47页胶体金斑点渗滤试验免疫检测常用方法和运用第48页胶体金免疫层析试验l金标双抗体夹心法测抗原l将试纸条下端浸入液体标本中，下端吸水材料即吸收液体向上端移动，流经C处时使干片上免疫金复合物复溶，并带动其向膜条渗移。若标本中有待测特异抗原，其时可与免疫金复合物之抗体结合，此抗原抗体复合物流至测试区即被固相抗体所获，在膜上显出红色反应线条（T）。过剩免疫金复合物继续前行，至参考区与固相小鼠IgG结合（免疫金复合物中单克隆抗体为小鼠IgG），而显出红色质控线条（R）。反之，阴性标本则无反应线条，而仅显示质控线条。免疫检测常用方法和运用第49页胶体金免疫层析试验免疫检测常用方法和运用第50页胶体金免疫层析试验l检测HIVAb双抗原夹心法免疫检测常用方法和运用第51页金标法应用lHCG检测免疫检测常用方法和运用第52页金标法应用lHBs-Ag检测免疫检测常用方法和运用第53页金标法应用l大便潜血试验（FOB）免疫检测常用方法和运用第54页金标法应用l轮状病毒和腺病毒抗原检测免疫检测常用方法和运用第55页金标法应用l幽门螺杆菌（HP）抗原检测免疫检测常用方法和运用第56页金标法应用lO1群霍乱弧菌检测免疫检测常用方法和运用第57页金标法应用lHCV-Ab检测免疫检测常用方法和运用第58页金标法应用l艾滋病抗体金标检测免疫检测常用方法和运用第59页金标法总结l上述两种试验共同特点是：简便、快速、单份测定、可立等结果，除试剂外无需任何仪器设备，且试剂稳定。所以尤其适合用于急诊检验。l但这类试验不能准确定量，所以主要限于检测正常体液中不存在物质（比如诊疗传染病中抗原或抗体）以及正常含量极低而在特殊情况下异常升高物质（如 HCG 等）。l即使检测敏感性和特异性还不如ELISA高，不过检测项目越来越多和上述特点使其应用越来越广泛。免疫检测常用方法和运用第60页免疫检测常用方法和运用第61页