聚合酶链反应方法检测阴道毛滴虫准确性的meta分析.pdf

168现代检验医学杂志第 39 卷第 2 期2024 年 3 月J Mod Lab Med,Vol.39,No.2,Mar.2024聚合酶链反应方法检测阴道毛滴虫准确性的 meta 分析周欣，黄翠兰（岳池县人民医院妇产科，四川广安 638300）摘要：目的系统评价聚合酶链反应检测阴道毛滴虫的应用价值。方法 检索中国知网数据库(CNKI)、万方数据知识服务平台、维普数据库和 PubMed 数据库自建库到 2023 年 5 月 30 日以来基于 PCR 方法检测阴道毛滴虫的研究文献。经文献筛选、数据提取后，使用软件 RevMan 5.4.1 和网页服务 Meta-Disc 2.0 进行 Meta 分析。结果共纳入 36 篇文献，16 454 个临床样本。Meta 分析结果显示：聚合酶链反应检测阴道毛滴虫的合并敏感度为 0.972（0.943，0.987），合并特异度为 0.979（0.968，0.986），诊断比值比为 1 643.398（673.168，4 012.008），阳性似然比为 46.209（30.549，69.897）和阴性似然比为0.028（0.013，0.059）；亚组分析表明不同性别的临床样本不会影响聚合酶链反应的检测准确性，但不同的 PCR 检测方法的准确性有差异。结论聚合酶链反应检测阴道毛滴虫的准确性较高，具有良好的应用价值。关键词：阴道毛滴虫；聚合酶链反应；meta 分析中图分类号：R382.21；Q503文献标识码：A文章编号：1671-7414（2024）02-168-07doi:10.3969/j.issn.1671-7414.2024.02.031Accuracy of Polymerase Chain Reaction Based Assays for Trichomonas Vaginitis:A Meta-Analysis ZHOU Xin，HUANG Cuilan（Department of Obstetrics and Gynecology,the Peoples Hospital of Yuechi County,Sichuan Guangan 638300,China）Abstract:ObjectiveTo investigate the accuracy of polymerase chain reaction(PCR)based assays for Trichomonas Vaginitis.MethodsThe research literature on the detection of TV based on PCR method since the establishment of the database to May 30，2023 was retrieved from China National Knowledge Infrastructure(CNKI),Wanfang Data Knowledge Service Platform,VIP Database and PubMed Database.After literature screening and data extraction,Meta-analysis was performed using software RevMan 5.4.1 and web service Meta-Disc 2.0.ResultsA total of 36 literatures and 16 454 clinical samples were included.The results of meta-analysis showed that the combined sensitivity and specificity of polymerase chain reaction for the detection of TV were 0.972(0.943,0.987)and 0.979(0.968,0.986),respectively,the diagnostic odds ratio was 1 643.398(673.168,4 012.008),the positive likelihood ratio was 46.209(30.549,69.897),and the negative likelihood ratio was 0.028(0.013,0.059).Subgroup analysis showed that clinical samples of different genders would not affect the accuracy of polymerase chain reaction,but the accuracy of different PCR detection methods was different.ConclusionThe accuracy of polymerase chain reaction in the detection of TV was high and it has good application value.Keywords：Trichomonas Vaginitis；polymerase chain reaction；meta-analysis阴道毛滴虫（Trichomonas Vaginitis，TV）是最常见的非病毒性传播病原，主要寄生于人体阴道和泌尿道，常导致女性患上滴虫性阴道炎、尿道炎和膀胱炎等阴道毛滴虫病，同时也是引起男性非淋菌性尿道炎的重要病原体。临床上 TV 感染者多数无症状，但感染 TV 将增加女性感染人类免疫缺陷病毒（HIV）和人类乳头瘤病毒（HPV）的风险1-2，也有研究表明 TV 与男性前列腺癌相关3，因此有必要加强对 TV 的检测。显微镜检查阴道分泌物悬液是运用最普遍的检测方法，该法成本低、操作简单，但不敏感；相比之下培养法敏感度更高且特异度可达 100%，是检测 TV 的“金标准”，但其成本较高、耗时较长且对低载量感染不敏感。聚合酶链反应（polymerase chain reaction，作者简介：周欣（1993-），女，学士，住院医师，主要从事妇产科疾病防治，E-mail：。PCR）是一种具有高度敏感度和特异度的成熟体外核酸扩增技术，已广泛应用于医学检验中。早在 20世纪 90 年代初，用于检测 TV 的 PCR 方法便已开发成功4。至今，PCR方法检测TV的研究越来越多，中国阴道毛滴虫病诊疗指南（2021 版）已将PCR 方法列入指南，但目前尚无研究对其诊断性能进行系统评价，且不同来源样本的检测结果存在差异。因此，本文通过检索国内外相关文献，对 PCR方法检测不同来源样品中的 TV 的准确性进行定量评价，以期为临床和科研上选择合适的 TV 检测方法提供参考。1材料与方法1.1文献检索利用计算机检索中国知网、万方数据知识服务平台、维普中文期刊全文数据库、169现代检验医学杂志第 39 卷第 2 期2024 年 3 月J Mod Lab Med,Vol.39,No.2,Mar.2024PubMed 数据库中公开发表的相关中、英文文献，末次检索日期为 2023 年 5 月 30 日。在中国知网数据库中全文检索关键词“阴道毛滴虫”，在结果中全文检索关键词“PCR”；在万方数据知识服务平台中题名或关键词检索“阴道毛滴虫与 PCR”；在维普中文期刊全文数据库中任意字段检索“阴道毛滴虫”，在结果中选择摘要检索“PCR”。在 PubMed 数据库采用主题词与自由词相结合的方式检索，分别检索主题词“Trichomonas Vaginitis”“Trichomonas vaginalis”“Trichomonas Infections”，并在检索结果中检索关键词“polymerase chain reaction”或“PCR”。此外对所得文献的参考文献进行追溯，以减少遗漏。1.2文献纳入与数据提取分别由两名研究人员独立筛选文献，不一致的通过讨论或请教第三方专业人员确定是否纳入。文献纳入标准：涉及利用PCR方法检测阴道毛滴虫；检测金标准为培养法；可直接或间接获得真阳性数（TP）、假阳性数（FP）、假阴性数（FN）和真阴性数（TN）数据。文献排除标准：综述、评论类文献；无法完整提取数据的文献。数据提取内容包括：作者、地点、发表年份、样本类型、样本量、检测方法、检测靶标或引物、真阳性数、假阳性数、假阴性数、真阴性数等信息，利用 Excel 表格汇总数据。若同一文献中不止一次运用 PCR 方法检测阴道毛滴虫，则将其视为多个独立的研究分别提取数据。1.3数据分析1.3.1文献质量评价：应用软件 RevMan 5.4.1 中的QUADAS-2 工具对纳入文献进行“病例选择”“待评价试验”“金标准”和“病例流程和进展情况”四个方面的偏倚风险评价。1.3.2meta分析：应用网页程序meta-disc 2.0（https:/ciberisciii.shinyapps.io/MetaDiSc2/）进行 meta 分析5。绘制敏感度、特异度森林图，计算合并敏感度、特异度、诊断比值比、阳性似然比、阴性似然比，用Logistic 回归模型下敏感度和特异度的方差、双变量 I2指数、中值优势比等量化评价纳入研究的异质性，并进行亚组分析。2结果2.1文献检索与筛选共检索出 2 890 篇文献，其中中国知网 1 696 篇、万方 128 篇、维普 98 篇、PUBMED 数据库 968 篇。经筛选排除，最终纳入文献 36 篇，中文 3 篇，英文 33 篇。见图 1。2.2纳入文献的基本特征和偏倚风险评价纳入文献基本情况见表 1。对纳入文献进行发表偏倚评价的结果显示，纳入文献总体偏倚风险较小，整体可信度较高，仅有 1 篇文献在病例选择方面存在较高偏倚风险。图2为纳入文献的QUADAS-2评价结果。表 1 纳入文献基本特征作 者发表年份地点样本类型样本量（n）检测方法检测靶标或引物对TPFPFNTNJEREMIAS 61994美国阴道分泌物52普通 PCRA6p 基因61045SHAIO71997中国阴道分泌物491巢氏 PCRE650 基因3730451HEINE 81997美国阴道分泌物300普通 PCRA6p 基因44125239LIN 91997中国阴道分泌物165巢氏 PCRE650 基因1600149MADICO101998美国阴道分泌物350普通 PCR-微管蛋白基因22171310MAHMOUD 111999埃及阴道分泌物450巢氏 PCRE650 基因350035SCHEE 121999荷兰阴道分泌物804普通 PCRTVK3，TVK744172741尿液（女性）202普通 PCRTVK3，TVK7650191HOBBS131999美国尿道拭子（男性）293普通 PCRTVK3，TVK731137242MAYTA142000秘鲁阴道分泌物372普通 PCR18S 核糖体基因2470341尿液（女性）361普通 PCR18S 核糖体基因2410336LAWING152000美国阴道分泌物190普通 PCRTVK3，TVK74743133尿液（女性）190普通 PCRTVK3，TVK732219137JORDAN162001美国阴道分泌物552普通 PCRA6p 基因44141493SCHWEBKE172002美国尿液（男性）300普通 PCRTVK3，TVK715350250尿道拭子（男性）300普通 PCRTVK3，TVK712193266CRUCITTI182003比利时阴道分泌物416普通 PCRTVK3，TVK725584329A6p 基因22327355-微管蛋白基因25544333170现代检验医学杂志第 39 卷第 2 期2024 年 3 月J Mod Lab Med,Vol.39,No.2,Mar.2024续表 1 纳入文献基本特征作 者发表年份地点样本类型样本量（n）检测方法检测靶标或引物对TPFPFNTN姚志远192003中国尿液（男性）105普通 PCRTVK3，TVK7401100尿道拭子（男性）105普通 PCRTVK3，TVK741199LOBO202003巴西阴道分泌物1 008普通 PCR18S 核糖体基因48130947徐敏212003中国阴道分泌物106普通 PCRTVK3，TVK7420100马蕾222004中国阴道分泌物859巢氏 PCRE650 基因14660707CALIENDO232004美国阴道分泌物524实时 PCR18S 核糖体基因36180470RADONJIC242006塞尔维亚阴道分泌物200普通 PCR-微管蛋白基因1754174BARBARA252006美国尿液（男性）503普通 PCRTVK3，TVK72441474PILLAY262007美国阴道分泌物119实时 PCRTVK3，TVK7787034尿液（女性）119实时 PCRTVK3，TVK76612032SCHIRM272007荷兰阴道分泌物2 069实时 PCRL23861 基因271302 029PIPERAKI282010希腊阴道分泌物502普通 PCR-微管蛋白基因2310478OZDEMIR292011土耳其精液80普通 PCRE650 基因11078ERTABAKLAR302011土耳其阴道分泌物102普通 PCRE650 基因41196PAUL312012印度阴道分泌物198普通 PCRA6p 基因640188QUEZA322013菲律宾阴道分泌物969普通 PCRTVK3，TVK76402903SALEH332014苏丹阴道分泌物297普通 PCRTVK3，TVK72536038NATHAN342015英国阴道分泌物246实时 PCR-微管蛋白基因1843221SVIBEN352015克罗地亚尿沉渣（男性）700实时 PCR67 个碱基重复序列27180655ADAO362016菲律宾阴道分泌物121普通 PCRTVK3，TVK7812110TESTARDINI372016阿根廷阴道分泌物386普通 PCR18S 核糖体基因1464362NABWEYAMBO382017乌干达阴道分泌物150普通 PCRAP65 基因1111137GHALLAB392021埃及阴道分泌物234巢氏 PCR肌动蛋白基因36270171HEIKAL402023埃及阴道分泌物96实时 PCR18S 核糖体基因1018068HUANG412023中国阴道分泌物438多重 PCR未表明7204202.3Meta 分析结果最终纳入的 36 篇文献中涉及3项独立研究的有1篇，涉及2项独立研究的有6篇，仅进行一项研究的有 29 篇，总共纳入 44 项研究，16 464 个临床样本，森林图展示了每一项研究的敏感度、特异度及相应的 95%置信区间，见图 3。对研究的异质性进行了量化处理，Logistic 回归模型下敏感度和特异度的方差分别为 2.997，1.613，敏感度和特异度的中值优势比分别达 5.214，3.358，双变量 I2指数为 0.404，提示研究间存在异质性。采用双变量随机效应模型合并效应量及 95%置信区间，合并敏感度 0.972（0.943，0.987）、合并特异度 0.979（0.968，0.986）、诊断比值比 1 643.398（673.168，4 012.008）、阳性似然比 46.209（30.549，69.897）、阴性似然比 0.028（0.013，0.059）。按照性别、检测方法进行亚组分析。在纳入研究中检测女性样本的有 36 项，检测男性样本的有 8项，Meta 回归显示女性样本 vs 男性样本的相对敏感度为 0.968（0.887，1.055），P=0.312；相对特异度为 0.997（0.973，1.022），P=0.822，表明不同性别的临床样本不会影响 PCR 方法的检测准确性。纳入研究中采用普通 PCR 的研究有 32 项，采用非普通 PCR 的研究有 12 项，包括实时荧光定量PCR 7 项、巢氏 PCR 4 项、多重 PCR 1 项。Meta回归显示非普通 PCR vs 普通 PCR 的相对敏感度为1.04（1.006，1.075），P=0.011；相对特异度为 0.997（0.977，1.018），P=0.795，表明不同的 PCR 方法检测 TV 的敏感度有差异，见表 2。图 1文献筛选流程及结果171现代检验医学杂志第 39 卷第 2 期2024 年 3 月J Mod Lab Med,Vol.39,No.2,Mar.2024图 2纳入文献的 QUADAS-2 评价图 3PCR 方法检测 TV 敏感度和特异度的森林图表 2 PCR 方法检测阴道毛滴虫的亚组分析亚组纳入研究数合并敏感度（95%CI）合并特异度（95%CI）诊断比值比（95%CI）性别女360.976（0.946，0989）0.979（0.968，0.987）1 932.015（729.429，5 117.27）男80.944（0.784，0.988）0.977（0.941，0.991）712.523（108.956，4 659.564）方法普通 PCR320.956（0.910，0.979）0.980（0.967，0.988）1 043.121（407.116，2 672.708）非普通 PCR120.994（0.969，0.999）0.977（0.951，0.989）6 882.543（1 077.339，43 968.885）3讨论人类是阴道毛滴虫（TV）唯一的自然宿主。根据世界卫生组织公报，全世界每年约有 1.56 亿新增 TV 感染者42。大部分女性和绝大多数男性感染 TV 不表现出临床症状，但却可以通过性接触或污染物品直接或间接传播感染，因此有必要开展TV 感染的临床筛查。目前培养法依然被视为检测TV 感染的“金标准”，但该法敏感度较差，有 TV病患者经药物治疗后数月均未通过培养法检测到TV，却在未暴露的情况下再次确诊发病，这表明需要比培养法更敏感的检测方法43。随着分子生物学的发展，PCR 方法逐渐被用于检测 TV。PCR 遵循碱基互补配对原则和半保留复制原理，具有高灵敏度和高特异度，且一般能在数小时完成核酸扩增和扩增产物的电泳检测。国内外运用 PCR 方法检测 TV 的研究较多，但目前尚无文献对 PCR 方法检测 TV 的有效性进行定量评价。诊断试验 Meta 分析通过对多个试验条件相似的诊断试验汇总分析，可以更准确地了解诊断方法的价值。meta-disc 2.0是一款专门用于诊断试验 Meta 分析的网页程序，172现代检验医学杂志第 39 卷第 2 期2024 年 3 月J Mod Lab Med,Vol.39,No.2,Mar.2024由西班牙团队在 meta-disc 软件的基础上开发，并于 2022 年 11 月 28 日公布。该程序采用双变量随机效应分析模型，可得出合并敏感度、合并特异度、亚组分析等统计结果，研发团队使用 meta-disc 2.0对已发表的 5 篇诊断试验 Meta 分析进行了计算，得出的结果与其它方法基本一致5。本研究对 PCR 方法检测 TV 的准确性进行了系统评价，全面检索了国内外数据库建库至今收录的TV 相关文献，并通过二次检索和文献追溯准确纳入所需文献，检索范围广、时间跨度长，共纳入 36篇文献，44组研究。QUADAS-2工具评价结果显示，纳入文献多数为低偏倚分险文献，文献整体质量较好，均可直接或间接提取四格表数据。除个别研究未随机选择病例和少数研究病例选择不明确外，多数研究的临床样本采自特定时间段到专科诊所或医院的随机病例，纳入文献在“病例选择”方面风险整体偏小；“待评价试验”、“金标准”和“病例流程和进展情况”三方面总体呈低偏倚风险。Meta 分析显示 PCR 方法检测 TV 的敏感度和特异度较好，分别为 97.2%，97.9%；阳性似然比为 46.209（30.549，69.897）、阴性似然比为 0.028（0.013，0.059），诊断比值比达 1 643.398（673.168，4 012.008），表明 PCR 方法对 TV 感染者和未感染者判别能力较强；假阳性率 0.021（0.014，0.032），假阴性率 0.028（0.013，0.037），提示误诊率、漏诊率均较低。这与 RAHMATI 等44人对 PCR 检测肺结核的诊断价值系统评价结果相类似。亚组分析表明 PCR 方法对不同性别的样本均具有高敏感度、高特异度，相对敏感度 P0.05，相对特异度 P0.05，差异不显著。双变量随机模型下，来自女性的阴道分泌物样本的合并敏感度为 0.981（0.952，0.992），合并特异度为 0.978（0.965，0.987）；女性尿液样本的合并敏感度为0.898（0.457，0.989），合并特异度为 0.986（0.967，0.994），说明女性阴道分泌物样本检测更准确、更稳定。研究发现，非普通 PCR 和普通 PCR 检测 TV 的相对敏感度 P0.05，表明二者检测 TV 的敏感性存在差异。普通 PCR 合并灵敏度为 0.949（0.908，0.972），合并特异度 0.979（0.967，0.987）；而非普通 PCR合并敏感度可达 1（0.972，1），合并特异度为 0.978（0.948，0.991），表明不同 PCR 方法敏感性有差异，是产生异质性的可能来源。综上，PCR 方法检测 TV 的准确性较高，能有效检测出女性阴道分泌物、尿液以及男性尿液中的TV，具有广泛推广的应用价值和良好的科研价值。参考文献：1 TUDDENHAM S,HAMILL M M,GHANEM K G.Diagnosis and treatment of sexually transmitted infections:a reviewJ.Journal of the American Medical Association,2022,327(2):161-172.2 HERNNDEZ-BUELVAS L,CAMARGO M,SNCHEZ R,et al.Trichomonas vaginalis follow-up and persistence in Colombian womenJ.Scientific Reports,2021,11(1):22597.3 TSANG S H,PEISCH S F,ROWAN B,et al.Association between Trichomonas vaginalis and prostate cancer mortalityJ.International Journal of Cancer,2019,144(10):2377-2380.4 RILEY D E,ROBERTS M C,TAKAYAMA T,et al.Development of a polymerase chain reaction-based diagnosis of Trichomonas vaginalisJ.Journal of Clinical Microbiology,1992,30(2):465-472.5 PLANA M N,AREVALO-RODRIGUEZ I,FERNNDEZ-GARCA S,et al.Meta-disc 2.0:a web application for meta-analysis of diagnostic test accuracy dataJ.BMC Medical Research 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