非小细胞肺癌治疗中胸腔积液、血液表皮生长因子受体基因突变检测的价值.pdf

论著 临床辅助检查CHINESE COMMUNITY DOCTORS中国社区医师2024年第40卷第6期中国社区医师2024年第40卷第6期肺癌是临床高发的恶性肿瘤，非小细胞肺癌(NSCLC)占肺癌的80%85%1。NSCLC起病隐匿，多数患者确诊时疾病已处于中晚期，错过最佳治疗时机，临床多采用放化疗等综合方式治疗，可在一定程度上抑制肿瘤进展，但总体5年生存率仍较低2。表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)在晚期NSCLC的治疗中获得了较好的成效。但EGFR-TKI的作用靶点为表皮生长因子受体(EGFR)，应用前提为NSCLC患者存在EGFR突变3。我国卫生部门要求晚期 NSCLC 患者在接受 EGFR-TKI 治疗前应进行EGFR基因突变检测。肿瘤组织病理检查是NSCLC诊断及EGFR基因突变检测的“金标准”，但存在组织取样难度大、操作风险高、无法实时监测等不足。目前，胸腔积液、血液EGFR基因突变检测得到推广，其具有取材方便、快捷、安全性高、实时性强等优点，成为 EGFR 基因突变检测的潜在生物学材料4。本研究旨在分析NSCLC治疗中实施胸腔积液、血液EGFR基因突变检测的价值，现报告如下。doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2024.06.044摘要目的：分析非小细胞肺癌(NSCLC)治疗中实施胸腔积液、血液表皮生长因子受体(EGFR)基因突变检测的价值。方法：选取2022年112月于贵州省人民医院呼吸与危重症医学科治疗的42例NSCLC患者作为研究对象。检测患者血液、组织、胸腔积液3种标本EGFR基因突变状态，以肿瘤组织病理检查结果为“金标准”，分析3种标本检测的诊断效能。结果：42例患者中，共发生EGFR基因突变45.24%(19/42)。其中，L858R突变26.32%(5/19)，19Del突变52.63%(10/19)，G719X 突变 21.05%(4/19)。3 种检查方式检测 EGFR 基因突变的灵敏度、特异度、准确度比较，差异无统计学意义(P0.05)。结论：NSCLC治疗中实施胸腔积液、血液EGFR基因突变检测的价值确切，可以帮助医生更便捷地评估患者对于酪氨酸激酶抑制剂类药物的响应程度，预测治疗效果，从而指导治疗方案的制定和调整，为临床治疗提供依据。关键词非小细胞肺癌；胸腔积液；血液；表皮生长因子受体；基因突变检测中图分类号R446文献标识码AValue of Pleural Fluid and Blood Epidermal Growth Factor Receptor Gene Mutation Detection in Non-Small CellLung Cancer TreatmentZhang Changzhi,Yu Qian,Wang Xiao,Peng Chunhong(corresponding author)Department of Respiratory and Critical Care Medicine,Guizhou Provincial Peoples Hospital,Guiyang 550002,Guizhou Province,ChinaAbstractObjective:To analyze the value of epidermal growth factor receptor(EGFR)gene mutation detection in pleural effusionand blood during non-small cell lung cancer(NSCLC)treatment.Methods:A total of 42 patients with NSCLC who were treated inDepartment of Respiratory and Critical Care Medicine of Guizhou Provincial Peoples Hospital from January 2022 to December2022 were selected as the study subjects.The EGFR gene mutation status in three types of specimens(blood,tissue and pleuraleffusion)was detected.The results of tumor histopathological examination were used as the golden standard,and the diagnosticefficiency of the detection using three types of specimens was analyzed.Results:Among the 42 patients,19 cases had EGFR genemutations,accounting for 45.24%.Among them,there were 5 cases with L858R mutations(26.32%),10 cases with 19Delmutations(52.63%)and 4 cases with G719X mutations(21.05%).There was no significant difference in the sensitivity,specificityand accuracy of three examination methods for detecting EGFR gene mutations(P0.05).Conclusion:The detection of EGFR genemutation in pleural effusion and blood had definite value in NSCLC treatment,and can help doctors assess the response of patientsto tyrosine kinase inhibitors in a more convenient manner,predict the treatment effect,so as to guide the formulation andmodification of treatment regimens,and provide a basis for clinical treatment.Key wordsNon-small cell lung cancer;Pleural effusion;Blood;Epidermal growth factor receptor;Detection of gene mutation非小细胞肺癌治疗中胸腔积液、血液表皮生长因子受体基因突变检测的价值张昌志余倩王霄彭春红(通信作者)550002贵州省人民医院呼吸与危重症医学科，贵州 贵阳128论著 临床辅助检查CHINESE COMMUNITY DOCTORS中国社区医师2024年第40卷第6期中国社区医师2024年第40卷第6期资料与方法选取2022年112月于贵州省人民医院呼吸与危重症医学科治疗的 42例 NSCLC 患者作为研究对象，其中男27例，女15例；年龄3383 岁，60岁19例，60岁23例；TNM分期：A期1例，A期13例，B期28例；病理类型：腺癌40例，非腺癌2例；有吸烟史25例，无吸烟史17例。纳入标准：通过组织学活检及免疫组化检查确诊为 NSCLC；在 EGFR 基因突变检测前未行放疗或化疗；依从性良好；临床资料完整。排除标准：合并其他恶性肿瘤；合并精神或认知障碍。方法：胸腔积液细胞DNA提取：获取胸腔积液样本30 mL，室温下3 000 r/min离心10 min，获取细 胞 沉 淀 样 本，置 于-80 冰 箱 内 保 存。使 用QIAamp DNA FFPE Tissue Kit试剂盒提取胸腔积液细胞DNA。血液细胞DNA提取：采集肘静脉血6 mL，置于抗凝管内，室温下3 000 r/min离心10 min，获取上层清液，置于-80 冰箱内保存。使用QIAam BloodMini Kit试剂盒提取血清游离DNA。肿瘤组织DNA提取：通过手术切除、肺穿刺活检、纤维支气管镜检等方式获取肿瘤组织，常规行石蜡包埋，切片，厚度 5 m，共 10 张，贴于干净的载玻片上，经苏木精-伊红(HE)染色，将HE确定的肿瘤组织刮下置入EP 管中，应用 FFPE DNA 提取试剂盒(AmoyDx公司)进行 DNA 提取。EGFR 基因检测：使用紫外线分光光度计检测DNA浓度和纯度，使A260/280值维持在1.82.0。数据均使用高通量测序得到；应用人类 ADx-EGFR 基因突变检测试剂盒检测所有样本DNA，共检测 21 种已知突变。待测样本 DNA浓度13 ng/L，用ABI7500实时荧光PCR仪检测EGFR基因突变状态。观察指标：记录3种标本检测EGFR基因突变的结果。以病理组织检查结果为金标准，统计胸腔积液、血液、肿瘤组织EGFR基因突变检测的诊断效能，包括准确度、灵敏度、特异度。准确度=(真阳性+真阴性)例数/总例数100%；灵敏度=真阳性例数/(真阳性+假阴性)例数100%；特异度=真阴性例数/(假阳性+真阴性)例数100%。统计学方法：数据应用SPSS 21.0统计学软件分析；计数资料以n(%)表示，采用2检验；计量资料以xs表示，采用t检验；P0.05表示差异有统计学意义。结果不同标本 EGFR 基因突变检测结果：42 例患者中，19例发生EGFR基因突变，占比45.24%。其中，L858R 突变，占比 26.32%(5/19)，19Del 突变，占比52.63%(10/19)，G719X 突变，占比 21.05%(4/19)。见表1、表2。3种标本检测 EGFR 基因突变的效能比较：3 种检查方式检测 EGFR 基因突变的灵敏度、特异度、准确度比较，差异无统计学意义(P0.05)。见表3。表1不同标本EGFR基因突变检测结果(n)血液病理检查合计肿瘤病理检查合计胸腔积病理检查合计标本阳性阴性组织标本阳性阴性液标本阳性阴性阳性13013阳性18018阳性12012阴性62329阴性12324阴性72330合计192342合计192342合计192342表2EGFR基因突变不同类型的检测结果n(%)项目EGFR基因突变(n=43)EGFR基因突变类型(n=19)L858R突变19Del突变G719X突变病理检查19(45.24)5(26.32)10(52.63)4(21.05)血液标本13(30.95)5(38.46)5(38.46)3(23.08)肿瘤组织标本18(42.86)4(22.22)10(55.56)4(22.22)胸腔积液标本12(28.57)2(16.67)9(75.00)1(8.33)表33种标本检测EGFR基因突变的效能比较%(n)项目灵敏度特异度准确度血标本68.42(13/19)100.00(23/23)85.71(36/42)肿瘤组织标本94.74(18/19)100.00(23/23)97.62(41/42)胸腔积液标本63.16(12/19)100.00(23/23)83.33(35/42)20.2470.0000.462P0.6411.0000.239129论著 临床辅助检查CHINESE COMMUNITY DOCTORS中国社区医师2024年第40卷第6期中国社区医师2024年第40卷第6期讨论晚期NSCLC在临床尚无特效治疗手段，也无法手术根治，整体预后差，病死率高。酪氨酸激酶抑制剂(TKI)分子靶向治疗是一种新兴的癌症治疗技术，是目前存在EGFR基因突变的晚期NSCLC患者的主要治疗方法，对抑制该类患者肿瘤增殖有重要意义5。研究发现，NSCLC 患者在应用 TKI 类药物进行治疗时，有效性与EGFR基因关联密切。患者存在EGFR基因突变现象时，其临床敏感度和有效性偏高；反之，不存在EGFR基因突变者治疗敏感度和有效性较低。因此，诊断 EGFR 基因突变对于指导临床实施TKI分子靶向治疗至关重要。肿瘤组织病理学检查是诊断EGFR基因突变情况的“金标准”，但NSCLC患者肿瘤组织获取途径有限，约70%的晚期患者无法获得足够的组织学标本，且肿瘤增殖呈动态性，组织标本无法反映肿瘤即时活动状况，导致EGFR基因突变检测存在一定局限性。液体活检技术是一种新兴的检测方法，其选用血液、胸腔积液等标本，具有快捷、安全、简便、高效等优点，越来越多地应用于临床。通过对胸腔积液和血液中EGFR基因突变的检测，医生可更加精确地评估患者对于TKI类药物的响应情况，从而制定出更为精准和有效的治疗方案。临床已证实，组织DNA和循环DNA有较高的一致性，为临床通过血液、胸腔积液等标本检测 EGFR基因突变提供了理论依据。传统组织标本需经 4%中性甲醛固定使 DNA 交联，使得DNA易于降解或碎片化，影响DNA提取和扩增；胸腔积液标本能较好地保持DNA的完整性，提高DNA纯度及浓度。美国胸科医师学会循证临床实践指南指出，胸腔积液细胞学的诊断敏感度高达63%6。但值得注意的是，检测胸腔积液标本可能受到非肿瘤细胞的干扰，易发生假阴性结果。外周血循环中的肿瘤DNA是肿瘤细胞坏死凋亡后游离在血浆中的DNA片段，与肿瘤进展情况呈正相关7。因此，血液标本检测EGFR基因突变的可靠性较高。本研究结果显示，3种检查方式检测EGFR基因突变的灵敏度、特异度、准确度无差异。提示肿瘤组织获取困难的NSCLC患者可通过检测血液、胸腔积液标本，获得较为可靠的EGFR基因突变诊断。胸腔积液、血液样本的采集相对容易，使得EGFR基因突变的检测相对便捷。通过对样本的分析，医生可了解患者EGFR基因的突变状态，从而预测TKI类药物对患者的治疗效果。若检测到EGFR基因突变，患者可能更适合接受TKI类药物的治疗，反之，如未检测到突变，应考虑其他治疗方案8。综上所述，NSCLC治疗中实施胸腔积液、血液EGFR 基因突变检测的价值确切，可以帮助医生更便捷地评估患者对于 TKI类药物的响应程度，预测治疗效果，从而指导治疗方案的制定和调整，为临床治疗提供依据。参考文献1张艳,杜芸,郭晓凯,等.非小细胞肺癌患者外周血及胸水中EGFR 基因突变的研究J.诊断病理学杂志,2019,26(9):566-569.2张标,杨军.非小细胞肺癌表皮生长因子受体基因突变236例分析J.江苏大学学报,2017,27(2):179-182.3高山,高岩,杨俊省,等.晚期非小细胞肺癌患者肿瘤组织、血液、胸腔积液EGFR基因突变一致性研究J.中国药物滥用防治杂志,2021,27(6):956-959.4黄健,王于理,代平,等.胸水、血液EGFR 基因突变检测在非小细胞肺癌治疗中的应用价值J.山东医药,2018,58(6):61-63.5中国非小细胞肺癌患者表皮生长因子受体基因突变检测专家组.中国非小细胞肺癌患者表皮生长因子受体基因突变检测专家共识(2016版)J.中华病理学杂志,2016,45(4):217-220.6吴一龙.非小细胞肺癌血液EGFR基因突变检测中国专家共识J.中华医学杂志,2015,95(46):3721-3726.7徐敏,何婉,李岚,等.非小细胞肺癌患者胸腔积液与外周血ctDNA中EGFR基因突变检测的对比研究J.新医学,2018,49(5):346-349.8鲁涛,李强,李岚,等.132 例晚期非小细胞肺癌胸腔积液EGFR 基因突变检测结果及其临床意义:一项来自单中心的回顾性研究J.中国肺癌杂志,2020,23(12):1059-1065.130