覆盆子鉴别与含量测定方法学确认专项方案.doc

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覆盆子鉴别与含量测定办法学确认方案文献审批部门姓名签名日期起草人质量部 XXX 年月日审核人质量部 XXX 年月日批准人质量部 XXX 年月日 1、目本实验对覆盆子鉴别与含量测定检查办法进行确认，为了保证检查数据科学性、精确性和可靠性，制定本确认方案，以拟定建立鉴别与含量测定检查办法可以对该产品进行精确检查，为我司化验室后来覆盆子检查办法提供根据。 2、范畴本方案合用于我公司覆盆子鉴别与含量测定检查办法确认。 3、职责职务岗位姓名职责组长质量部部长 XXX 1.确认方案及报告审核；保证方案及报告内容符合GMP及检测规定。 2.组织实行确认工作，保证确认工作严格按照方案实行； 3.确认过程中偏差和变更审核，组织确认过程中发生偏差调查；小构成员 QC主任 XXX 负责确认方案及确认报告起草，确认实行记录审核 QC XXX 按照确认方案进行确认工作，填写记录，并鉴定与否符合承认原则规定 4、确认根据文献《中华人民共和国药典》 5、确认程序 5.1先决条件确认 5.1.1仪器通过校精确认所需仪器通过校准并在有效期内，确认记录见附表01。 5.1.2.人员培训确认确认小组人员参加了本方案培训，以及仪器操作、维护和保养培训、偏差解决、变更控制等SOP培训，确认记录见附表02。 5.1.3有关SOP确认制定仪器操作、校验、维护和保养原则程序并批准，确认记录见附表03。 5.1.4药物确认确认方案确认过程中使用药物符合规定，并在有效期内。确认记录见附表04。 5.2鉴别办法学确认专属性：供试品溶液制备取山柰酸-3-O-芸香糖苷含量测定项下供试品溶液，即得。对照品溶液制备取椴树苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.1mg溶液，即得。阴性溶液制备照供试品溶液制备办法除取样品外，同法制成阴性溶液。测定照《薄层色谱法原则操作规程》实验，吸取上述供试品溶液与阴性溶液各5μl，及对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水-甲酸（90∶4∶4∶0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝溶液，在105℃加热5分钟，在紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相似颜色荧光斑点；阴性液在相应位置上不显斑点（见薄层色谱图05-1）。确认记录见附表05。 5.3含量测定办法学确认 5.3.1鞣花酸含量测定 5.3.1.1检查办法：照《高效液相色谱法原则操作规程》测定。色谱条件与系统合用性实验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.2%磷酸溶液（15∶85）为流动相；检测波长为254nm。理论板数按鞣花酸峰计算应不低于3000。对照品溶液制备　取鞣花酸对照品适量，精密称定，加70%甲醇制成每1ml含5μg溶液，即得。供试品溶液制备取本品粉末（过四号筛）约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液1ml，置5ml量瓶中，用70%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。本品按干燥品计算，含鞣花酸（C14H6O8）不得少于0.20%。 5.3.1.2系统合用性确认 5.3.1.2.1色谱条件高效液相色谱仪 XXXXX 色谱柱 Aglilent TC-C18(2) 250*4.6mm 5um 流速 1.0ml/min 检测波长 254nm，UV检测器柱温 25℃ 进样量 10μl 运营时间 30min 5.3.1.2.2溶液配制名称配制办法流动相分别量取乙腈（色谱纯）与超纯水，以乙腈-0.2%磷酸溶液（15∶85）比例混合，用0.45µm水系微孔滤膜滤过，超声脱气10 min，即得。必要时可依照实际使用状况调节配制溶液体积。空白溶剂样品解决用70%甲醇溶液。对照品溶液取鞣花酸对照品适量，精密称定，加70%甲醇制成每1ml含5μg溶液，即得。平行制备2份，分别为对照品溶液1、2。供试品溶液取本品粉末（过四号筛）约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液1ml，置5ml量瓶中，用70%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。平行制备2份，分别为供试品溶液1、2。 5.3.1.2.3实验操作待仪器稳定后，按下列进样序列注入高效液相色谱仪，记录色谱图，以鞣花酸峰面积计算5针对照品溶液1RSD；按外标法以对照品溶液1鞣花酸峰面积计算对照品溶液2回收率。序号样品名称进样体积（ul）进样针数 1 空白溶剂 5 1 2 对照品溶液1 5 5 3 对照品溶液2 5 2 5.3.1.2.4系统合用性回收率按如下公式计算对照品溶液2回收率：式中： AR1、AR21、AR22：分别为对照品溶液1持续5针平均峰面积和对照品溶液2第一针和第二针峰面积； MR1、MR2：分别为对照品1、2称样量； CR1和CR2：分别为对照品1、2中鞣花酸含量； RcR21和RcR22：分别为对照品溶液2第1针和第2针回收率； 5.3.1.2.5可接受原则 5针对照品溶液1鞣花酸主峰保存时间RSD均不不不大于2.0%，鞣花酸主峰面积RSD均应不不不大于1.0%；对照品溶液2回收率应在98.0%～102.0%。理论板数按鞣花酸峰计算应不低于3000。注：若系统合用性不符合原则应及时停止进样，排查因素后再重做系统合用性，系统合用性合格后方可进行如下实验。确认记录见附表06。 5.3.1.3含量测定 5.3.1.3.1操作系统合用性合格后，接着系统合用性进样序列取供试品溶液1、2，用0.45um（尼龙66）一次性针式过滤头弃去5ml后取续滤液，进样，进样序列如下（序号4、5、6）：序号样品名称进样体积（ul）进样针数 1 空白溶剂 5 1 2 对照品溶液1 5 5 3 对照品溶液2 5 2 4 供试品溶液1 5 2 5 供试品溶液2 5 2 6 对照品溶液1 5 2 注：在对照品溶液1运营完毕后普通间隔10针（以时间最短计）后，应重新插入2针对照品溶液1，作为系统跟踪，以此来评价系统稳定性。 5.3.1.3.2计算综合前面5针对照品溶液1和背面2针对照品溶液1计算鞣花酸峰面积RSD，当RSD不不不大于2.0%时，按如下公式计算覆盆子含量：注：综合供试品溶液前面5针对照品溶液1和背面2针对照品溶液1计算鞣花酸峰面积RSD不符合规定期，应排查因素后，再按5.3.1.2项重新测定。 5.3.1.3.3可接受原则：按干燥品计算，含鞣花酸（C14H6O8）不得少于0.20%。确认记录见附表06。 5.3.2山柰酸-3-O-芸香糖苷含量测定 5.3.2.1检查办法：照《高效液相色谱法原则操作规程》测定。色谱条件与系统合用性实验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.2%磷酸溶液（15∶85）为流动相；检测波长为344nm。理论板数按山柰酸-3-O-芸香糖苷峰计算应不低于3000。对照品溶液制备　取山柰酸-3-O-芸香糖苷对照品适量，精密称定，加70%甲醇分别制成每1ml含80μg溶液，即得。供试品溶液制备取本品粉末（过四号筛）约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50ml，称定重量，加热回流提取1小时，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，蒸干，残渣加水20ml使溶解，用石油醚振摇提取3次，每次20ml，弃去石油醚液，再用水饱和正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。本品按干燥品计算，含山柰酸-3-O-芸香糖苷（C27H30O15）不得少于0.03%。 5.3.2.2系统合用性确认 5.3.2.2.1色谱条件高效液相色谱仪 XXX 色谱柱 Aglilent TC-C18(2) 250*4.6mm 5um 流速 1.0ml/min 检测波长 344nm，UV检测器柱温 25℃ 进样量 10μl 运营时间 35min 5.3.2.2.2溶液配制名称配制办法流动相分别量取乙腈（色谱纯）与超纯水，以乙腈-0.2%磷酸溶液（15∶85）比例混合，用0.45µm水系微孔滤膜滤过，超声脱气10 min，即得。必要时可依照实际使用状况调节配制溶液体积。空白溶剂样品解决用70%甲醇溶液。对照品溶液取山柰酸-3-O-芸香糖苷对照品适量，精密称定，加70%甲醇分别制成每1ml含80μg溶液，即得。平行制备2份，分别为对照品溶液1、2。供试品溶液取本品粉末（过四号筛）约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50ml，称定重量，加热回流提取1小时，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，蒸干，残渣加水20ml使溶解，用石油醚振摇提取3次，每次20ml，弃去石油醚液，再用水饱和正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。平行制备2份，分别为供试品溶液1、2。 5.3.2.2.3实验操作待仪器稳定后，按下列进样序列注入高效液相色谱仪，记录色谱图，以山柰酸-3-O-芸香糖苷峰面积计算5针对照品溶液1RSD；按外标法以对照品溶液1山柰酸-3-O-芸香糖苷峰面积计算对照品溶液2回收率。序号样品名称进样体积（ul）进样针数 1 空白溶剂 5 1 2 对照品溶液1 5 5 3 对照品溶液2 5 2 5.3.2.2.4系统合用性回收率按如下公式计算对照品溶液2回收率：式中： AR1、AR21、AR22：分别为对照品溶液1持续5针平均峰面积和对照品溶液2第一针和第二针峰面积； MR1、MR2：分别为对照品1、2称样量； CR1和CR2：分别为对照品1、2中山柰酸-3-O-芸香糖苷含量； RcR21和RcR22：分别为对照品溶液2第1针和第2针回收率； 5.3.2.2.5可接受原则 5针对照品溶液1山柰酸-3-O-芸香糖苷主峰保存时间RSD均不不不大于2.0%，山柰酸-3-O-芸香糖苷主峰面积RSD均应不不不大于1.0%；对照品溶液2回收率应在98.0%～102.0%。理论板数按山柰酸-3-O-芸香糖苷峰计算应不低于3000。注：若系统合用性不符合原则应及时停止进样，排查因素后再重做系统合用性，系统合用性合格后方可进行如下实验。确认记录见附表07。 5.3.2.3含量测定 5.3.2.3.1操作系统合用性合格后，接着系统合用性进样序列取供试品溶液1、2，用0.45um（尼龙66）一次性针式过滤头弃去5ml后取续滤液，进样，进样序列如下（序号4、5、6）：序号样品名称进样体积（ul）进样针数 1 空白溶剂 5 1 2 对照品溶液1 5 5 3 对照品溶液2 5 2 4 供试品溶液1 5 2 5 供试品溶液2 5 2 6 对照品溶液1 5 2 注：在对照品溶液1运营完毕后普通间隔10针（以时间最短计）后，应重新插入2针对照品溶液1，作为系统跟踪，以此来评价系统稳定性。 5.3.2.3.2计算综合前面5针对照品溶液1和背面2针对照品溶液1计算山柰酸-3-O-芸香糖苷峰面积RSD，当RSD不不不大于2.0%时，按如下公式计算覆盆子含量：注：综合供试品溶液前面5针对照品溶液1和背面2针对照品溶液1计算山柰酸-3-O-芸香糖苷峰面积RSD不符合规定期，应排查因素后，再按5.3.2.2项重新测定。 5.3.2.3.3可接受原则：按干燥品计算，含山柰酸-3-O-芸香糖苷（C27H30O15）不得少于0.03%。确认记录见附表07。 6、偏差解决在确认过程中，应严格按照确认方案进行操作和鉴定，浮现个别指标不符合原则成果时，针对不合格指标应展开调查分析，对于确认是因操作不当等自身因素导致，应重新进行测试。确认过程中所产生偏差记录在附表08中。 7、变更控制涉及到方案变更时，填写“变更申请表”，需要对其进行因素分析，依照分析成果决定与否需要重新制定确认方案还是修改可接受原则，并将涉及到变更状况记录在附表09中。 8、附表清单编号附表名称编号附表名称 01 仪器校验确认登记表 06 鞣花酸含量测定办法确认登记表 02 人员培训确认登记表 07 山柰酸-3-O-芸香糖苷含量测定办法确认登记表 03 有关SOP确认登记表 08 偏差解决确认记录 04 药物确认记录 09 变更控制确认记录 05 鉴别办法确认登记表 9、变更记录版本号批准日期变更描述 00 / 新文献。附表01：仪器校验确认登记表仪器校验确认仪器名称型号检定有效期至检定证书编号符合规定电子天平 XXX □是 □否 XXX □是 □否高效液相色谱仪 XXX □是 □否玻璃仪器校验确认玻璃仪器名称规程编号校正日期符合规定容量瓶 10ml □是 □否 25ml □是 □否 50ml □是 □否 100ml □是 □否移液管 □是 □否 □是 □否 10ml □是 □否 50ml □是 □否与否存在偏差或不一致项： □是偏差或不一致记录在偏差报告中，偏差编号：。 □否结论：所有仪器均经校验且在有效期内。检查人/日期复核人/日期附表02：人员培训确认登记表培训记录覆盆子鉴别与含量测定办法学确认方案 XXX电子天平原则操作与维护规程 XXX型高效液相色谱仪原则操作与维护规程偏差解决原则管理规程变更控制原则管理规程培训时间培训地点学时讲师姓名与否已接受培训（是用“√”表达，否用“×”表达）与否存在偏差或不一致项： □是偏差或不一致记录在偏差报告中，偏差编号：。 □否结论：执行本方案人员已得到必要培训。检查人/日期复核人/日期附表03：有关SOP确认登记表 SOP名称检查原则检查成果 XXX电子天平原则操作与维护规程已批准生效 □是 □否 XXX型高效液相色谱仪原则操作与维护规程已批准生效 □是 □否偏差解决原则管理规程已批准生效 □是 □否变更控制原则管理规程已批准生效 □是 □否与否存在偏差或不一致项： □是偏差或不一致记录在偏差报告中，偏差编号：。 □否结论：有关SOP均已批准生效。检查人/日期复核人/日期附表04:药物确认记录名称批号来源符合规定覆盆子留样室 □是 □否椴树苷对照品中华人民共和国食品药物检定研究院 □是 □否鞣花酸对照品中华人民共和国食品药物检定研究院 □是 □否山柰酸-3-O-芸香糖苷对照品中华人民共和国食品药物检定研究院 □是 □否与否存在偏差或不一致项： □是偏差或不一致记录在偏差报告中，偏差编号：。 □否结论：样品、对照品符合规定。检查人/日期复核人/日期附表05:鉴别办法确认记录人员项目薄层板点样方式温度湿度图谱鉴定原则成果符合规定专属性市售手动见05-1 供试品与对照品色谱相应位置上，显相似颜色斑点；阴性液不显斑点。 □是 □否与否存在偏差或不一致项： □是偏差或不一致记录在偏差报告中，偏差编号：。 □否结论：椴树苷鉴别分析办法已确认符合规定。检查人/日期复核人/日期附表06：鞣花酸含量测定办法确认记录色谱柱柱温检测器波长流动相进样量系统合用性确认项目理论板数对照品1 对照品2 供试品1 供试品2 鞣花酸可接受原则按鞣花酸峰计算应不低于3000 与否符合规定 □是 □否 □是 □否项目分离度对照品1 对照品2 供试品1 供试品2 鞣花酸可接受原则与相邻色谱峰之间分离度应不不大于1.5 与否符合规定 □是 □否 □是 □否项目重复性对照品1 RSD值对照品2回收率鞣花酸可接受原则 5针峰面积相对原则偏差（RSD值）应不不不大于2.0%；对照品溶液2回收率应在98.0%～102.0% 与否符合规定 □是 □否 □是 □否项目保存时间空白溶剂对照品溶液供试品溶液鞣花酸可接受原则空白溶剂在相应保存时间处没有峰；供试品与对照品在相应保存时间处浮现峰。与否符合规定 □是 □否 □是 □否含量测定确认项目平均峰面积对照品1 对照品2 供试品1 供试品2 鞣花酸含量测定成果供试品1 供试品2 平均值可接受原则：按干燥品计算，含鞣花酸（C14H6O8）不得少于0.20%。与否符合规定 □是 □否与否存在偏差或不一致项： □是偏差或不一致记录在偏差报告中，偏差编号：。 □否结论：覆盆子鞣花酸含量测定分析办法已确认符合规定。检查人/日期复核人/日期附表07：山柰酸-3-O-芸香糖苷含量测定办法确认记录色谱柱柱温检测器波长流动相进样量系统合用性确认项目理论板数对照品1 对照品2 供试品1 供试品2 山柰酸-3-O-芸香糖苷可接受原则按山柰酸-3-O-芸香糖苷峰计算应不低于3000 与否符合规定 □是 □否 □是 □否项目分离度对照品1 对照品2 供试品1 供试品2 山柰酸-3-O-芸香糖苷可接受原则与相邻色谱峰之间分离度应不不大于1.5 与否符合规定 □是 □否 □是 □否项目重复性对照品1 RSD值对照品2回收率山柰酸-3-O-芸香糖苷可接受原则 5针峰面积相对原则偏差（RSD值）应不不不大于2.0%；对照品溶液2回收率应在98.0%～102.0% 与否符合规定 □是 □否 □是 □否项目保存时间空白溶剂对照品溶液供试品溶液山柰酸-3-O-芸香糖苷可接受原则空白溶剂在相应保存时间处没有峰；供试品与对照品在相应保存时间处浮现峰。与否符合规定 □是 □否 □是 □否含量测定确认项目平均峰面积对照品1 对照品2 供试品1 供试品2 山柰酸-3-O-芸香糖苷含量测定成果供试品1 供试品2 平均值可接受原则：按干燥品计算，含山柰酸-3-O-芸香糖苷（C27H30O15）不得少于0.03%。与否符合规定 □是 □否与否存在偏差或不一致项： □是偏差或不一致记录在偏差报告中，偏差编号：。 □否结论：覆盆子山柰酸-3-O-芸香糖苷含量测定分析办法已确认符合规定。检查人/日期复核人/日期附表08：偏差解决确认记录偏差解决单号发生日期记录标题偏差解决日期解决成果符合规定 □是 □否 □是 □否 □是 □否 □是 □否检查人/日期复核人/日期附表09：变更控制确认记录变更号日期变更描述批准日期解决成果符合规定 □是 □否 □是 □否 □是 □否 □是 □否 □是 □否 □是 □否 □是 □否检查人/日期复核人/日期

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