芒果苷通过调节miRNA-483-3p减轻良性前列腺增生腺体纤维化.pdf

药物研究芒果苷通过调节 减轻良性前列腺增生腺体纤维化杨楚颢陈镜楼陈涛(.江汉大学附属医院药剂科武汉.江汉大学医学部武汉.武汉市第一医院药学部武汉)摘 要 目的 研究芒果苷对良性前列腺增生()腺体纤维化的改善作用和调节微小()的作用机制 方法 雄性小鼠随机分为 组:正常对照组、模型对照组、非那雄胺组、芒果苷组和芒果苷 拮抗剂组 通过摘除睾丸和皮下注射丙酸睾酮建立 模型 后通过前列腺组织切片行 和天狼猩红染色以及检测组织中羟脯氨酸含量评价胶原沉积实时荧光定量 检测前列腺转化生长因子()、丝裂原活化蛋白激酶()和丝裂原活化蛋白激酶()的 水平以及 的水平 检测前列腺、磷酸化()、和磷酸化()的蛋白水平并采用荧光素酶报告评估 与 的靶向结合能力 结果 与正常对照组比较 模型对照组小鼠的前列腺胶原沉积明显且、和 的 水平以及、和 的蛋白水平均显著性升高(.)而 水平显著性下降(.)与 模型对照组比较芒果苷组能够上调前列腺 的水平降低、和 的 水平以及、和 的蛋白水平减轻胶原沉积 与芒果苷组比较联合使用芒果苷和 拮抗组显著性降低 水平升高、和 的 水平以及、和 的蛋白水平(.)荧光素酶报告显示 能够靶向结合 结论 芒果苷能够通过调节 抑制 减轻前列腺纤维化关键词 芒果苷微小 前列腺纤维化中图分类号 文献标识码 文章编号()./.开放科学(资源服务)标识码()(.)()().:.()()().().(.)(.).(.).医药导报 年 月第 卷第 期良性前列腺增生()是中老年男性的常见疾病发病率随年龄递增据报道 在 岁以上男性群体中的发病率已经超过 和其带来的下尿路症状()给患者带来极大的生活障碍和持续性的经济压力 还原酶抑制剂和 受体阻滞剂是 临床干预的推荐药物 然而 受体阻滞剂并不能减小前列腺体积而使用 还原酶抑制剂后 的患者 没有改善甚至有 的患者出现进一步恶化 随着外科手术的改进相对于经尿道电切除手术铥激光前列腺切除术等正得到广泛的应用但依然存在 以上概率的术后 等问题 研究发现 的 个主要病理生物学过程包括腺体增生、平滑肌收缩和前列腺纤维化个过程可以单独或联合作用促进 的临床进展 通常伴随(尽管并非总是)而以细胞外基质过度沉积为特点的纤维化将损伤前列腺尿道柔韧性从而引起尿路梗阻症状 目前针对器官纤维化的防治手段十分有限 芒果苷是一种天然黄酮类化合物具有抗菌、降低胆固醇、抗过敏、强心、抗糖尿病、抗肿瘤、神经保护、抗氧化和免疫调节等多种生物活性 研究显示芒果苷对肾脏、肺、心脏和肝脏等器官纤维化具有改善作用 笔者尚未见有关芒果苷对前列腺纤维化影响的报道 本文研究芒果苷对前列腺纤维化的影响和其可能的作用机制 材料与方法.实验材料特殊化学修饰的微小()拮抗剂购于上海吉玛生物有限公司(批号:)丙酸睾酮注射液购于天津金耀药业有限公司(批号:)芒果苷购于上海阿拉丁生化科技股份有限公司(纯度批号:)非那雄胺片购于杭州默沙东制药有限公司(批号:规格:每片 )荧光素酶报告试剂盒(批号:)和 载体(批号:)购于美国 公司 实时荧光定量 ()检测试剂盒购于美国 公司(批号:)羟脯氨酸()检测试剂盒购于南京建成生物工程研究所(批号:)转化生长因子(收稿日期 修回日期 基金项目国家自然科学基金资助项目()作者简介 杨楚颢()女湖北武汉人主管药师硕士主要从事临床药学研究:电话:)、丝裂原活化蛋白激酶()和丝裂原活化蛋白激酶()引物由武汉天一辉远生物科技有限公司合成.实验动物 周龄无特定病原体()级雄性/小鼠(体质量 )购于华中农业大学(动物生产许可证号:鄂)动物饲养于()湿度 及 光照/黑暗循环环境中.实验设备 型实时定量 仪(美国 公司)型荧光酶标仪(美国 公司).实验方法.实验动物分组与造模 实验动物适应环境 周后采用随机数字表法分为 组():正常对照组、模型对照组、非那雄胺组、芒果苷组和芒果苷 拮抗剂组 小鼠 模型通过手术切除睾丸和每日皮下注射.丙酸睾酮建立持续 其中非那雄胺组和芒果苷组分别每日灌胃给予 的非那雄胺(.溶解)或 的芒果苷 芒果苷 拮抗剂组每日灌胃给予 的芒果苷并参考说明书每隔 进行 次尾静脉注射 的 拮抗剂 正常对照组和 模型对照组小鼠每日灌胃给予等体积的.后通过腹膜内注射 戊巴比妥钠来麻醉小鼠颈椎脱臼处死动物分离前列腺取部分组织制备石蜡切片行 和天狼猩红染色部分新鲜组织行、和生化指标检测 动物实验操作遵从湖北省实验动物管理条例操作人员资格号.前列腺纤维化评价通过天狼猩红和 染色观察前列腺胶原沉积情况以及定量检测前列腺组织 含量综合评价腺体纤维化程度 每张切片随机选取 个视野采用 .版软件计算染色阳性面积占比 前列腺 含量按照试剂盒说明书步骤检测.信号通路评估 信号通路的活跃程度一方面通过 检测前列腺、和 的 水平评价()前引物为后引物为()前引物为 后 引 物 为 ()前引物为 后引物为 根据试剂盒说明书行 检测 另一方面通过 检测前列腺、和 的蛋白水平评价 具体步骤参考前期研究基础.水平检测 的前引物 为 后 引 物 为 逆转录 引物为 参考说明书行 检测.荧光素酶报告测试 克隆 并将其导入 载体 分别构建 野生型()和 突变型()的荧光素酶报告质粒 采用 将 共转染入工具细胞空白对照组转染空白质粒 后根据荧光素酶报告试剂盒说明书检测荧光素酶活性.统计学方法 采用.版软件进行单因素方差分析结果数据经检验符合正态性和方差齐性表示为 组间比较采用 检验以.为差异有统计学意义 结果.芒果苷减轻前列腺纤维化天狼猩红和 染色结果表明与正常对照组比较 模型对照组小鼠前列腺胶原沉积明显(如箭头所示天狼猩红染为红色 染为蓝色)且胶原蛋白的主要成分 的含量显著性升高(.)与 模型对照组比较芒果苷组能够有效抑制小鼠前列腺的胶原沉积降低组织 的含量(.)与芒果苷组比较 拮抗剂和芒果苷同时干预显著加剧了前列腺胶原沉积升高 的含量(.)结果表明芒果苷具有减轻前列腺纤维化的潜力且与调节前列腺 水平有关 见图 .正常对照组.模型对照组.非那雄胺组.芒果苷组.芒果苷 拮抗组 与 模型对照组比较(天狼猩红).().().与芒果苷组比较(天狼猩红).().().图 前列腺组织天狼猩红和 染色及 含量().().().().().().().()医药导报 年 月第 卷第 期.芒果苷抑制前列腺、和 水平 检测结果(图)显示与正常对照组比较 模型对照组小鼠前列腺、和 的 水平显著性升高(.)而 的水平显著性下降(.)与 模型对照组比较芒果苷组能够显著性升高前列腺 的水平并降低、和 的 水平(.)与芒果苷组比较 拮抗剂组显著升高了前列腺、和 的 水平(.)降低了 的水平(.).正常对照组.模型对照组.非那雄胺组.芒果苷组.芒果苷 拮抗剂组 与 模型对照组比较().().().().与芒果苷组比较().().().与芒果苷组比较().图 前列腺组织 及、和的 水平.().().().().().().().().从图 可以看出与正常对照组比较 模型对照组小鼠前列腺、和 的蛋白水平显著性升高(.)与 模型对照组比较芒果苷组能够显著性降低前列腺、和 的蛋白水平(.)与芒果苷组比较 拮抗剂组显著升高了前列腺前列腺、和 的蛋白水平(.).正常对照组.模型对照组.非那雄胺组.芒果苷组.芒果苷 拮抗剂组 与 模型对照组比较().().().与芒果苷组比较().().().图 前列腺组织、和 的水平.().().().().().().靶向抑制 通过生物信息学预测发现 与 存在结合位点 荧光素酶报告检测结果显示相对于空白对照组 模拟物共孵育能够显著抑制野生型 的荧光素酶活力(.)但对结合位点突变后的 无此效应提示 具有靶向抑制 的能力 见图 讨论器官纤维化是一种渐进性的病理过程通常表现为细胞外基质()的异常积聚 其中胶原沉积是重要特征之一终点将是器官的 与野生型()空白对照比较.图 与 荧光素酶报告结果 ().进行性结构重塑 最近研究报道和我们的前期研究发现均表明阻断纤维化是防治 和改善 的可行方向 现已知有多种信号通路参与器官纤维化的过程 丝裂原活化蛋白激酶()家族在细胞增殖分化、血管生成、氧化应激等多种生理活动中发挥重要作用 是 活化蛋白激酶在多种病理条件下均已观察到 的异常活跃现象 此外 通路的另一重要组成成分 在前列腺癌、卵巢癌和乳腺癌等疾病中均呈过表达状态 不仅如此 是 的上游调控者它们的异常表达将影响肌成纤维细胞的生物行为是 的另一上游节点 迄今为止是已知的最强力的促纤维化因子之一能够直接介导肌成纤维细胞的增殖和分化以及 的合成和分泌从而加速器官纤维化的进程 阻断 能够在一定程度上抑制 诱导的成纤维细胞分化和 蛋白分泌 笔者前期研究发现特异性阻断 能够明显抑制人前列腺细胞的细胞增殖和胶原沉积 本研究进一步证实芒果苷改善前列腺胶原沉积和抑制腺体纤维化的能力与降低 信号通路活跃程度有关 是一种内源性短链非编码 通过 端与靶基因 的 端中非翻译区特异性结合而抑制靶基因的功能 近年来 家族基因参与多种疾病的发生发展从而引起越来越多的关注 然而有关其确切的生物效应和作用机制仍有待阐明 报道显示一方面 在多种肿瘤中呈现高表达现象另一方面 具有抑制肝脏肿瘤和纤维化的潜力 笔者在本实验观察到良性前列腺增生组织中 的水平明显下降 通过芒果苷干预升高小鼠前列腺 的水平能够显著性抑制前列腺的胶原沉积情况 并且 特异性拮抗剂能够很大程度抵消芒果苷的上述作用 进一步的生物信息学预测和荧光素酶报告验证结果显示 能够阻断 表达综上所述本研究结果证实良性前列腺增生组织 的表达水平下降芒果苷能够通过调节抑制 表达来减轻前列腺纤维化我国老年人群占比不断上升因此受前列腺纤维化相关的 困扰的人群也逐年增加本研究丰富了治疗药物的潜在来源参考文献 .():.():.():.():./.():.():.:.():.:.():.:.医药导报 年 月第 卷第 期 陈涛陈镜楼黄文涛.调控 抑制前列腺基质细胞增殖和胶原沉积的机制研究.中国药师():.李嫚华许威向晓辉等.信号通路在组织器官纤维化中作用的研究进展.临床与实验病理学杂志():.:.:.朱振东皮娜何琴等.滇龙胆草抑制 信号通路对小鼠肺纤维化的影响.医药导报():.().():.().:.():./.():.王肖辉周霖杜秋争等.五味子甲素对四氯化碳诱导小鼠肝纤维化的保护作用及其机制研究.中国药房():.():.李玲艳傅硕王彦臻等.人 与疾病最新研究进展.现代生物医学进展():.张静益李俊君方春燕等.淫羊藿苷对男性生殖系统的药理作用研究进展及文献可视化分析/.医药导报:.:/./.医药导报对学术不端论文的认定标准和处理办法 为防范学术论文剽窃、造假、重复发表、一稿多投等学术不端行为营造风清气正的学术氛围努力打造共建共享共治、诚实守信、传播创新成果的良好交流平台依据有关文件规定结合近年来出现的学术不端案例医药导报对学术不端论文认定标准和处理办法做以下说明 学术不端行为认定标准抄袭 将他人已发表或未发表研究成果全部照抄据为己有或随意使用他人部分研究成果而不注明出处并以自己的名义公开发表包括将他人外文文章翻译成中文再发表剽窃 直接盗用他人的学术思想、观点、成果而不说明其来源伪造或者篡改 在研究过程中弄虚作假、以假乱真编造或篡改实验数据及支撑文献等资料以使研究结果符合自己研究预期不当署名 违反论文署名规范未经他人许可不当使用他人署名或未参与创作而在他人研究成果上署名等一稿多投 作者故意将自己的成果投给多家学术刊物或在文章已被录用或发表的情况下仍将论文投给其他学术刊物或者将已被录用或发表的文章只做部分文字修改而主要实验方法、内容、图表、数据结果相同或相似的论文重复发表代写代发 由第三方机构或个人代为写作以自己的名义公开发表研究成果违背研究伦理 涉及人和动物的生物医学研究伦理问题未按规定获得伦理审查批件或超出伦理审批许可范围或违背研究伦理规范 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