急性冠状动脉综合征患者颈动脉斑块与抗氨基甲酰化蛋白抗体水平的关系.pdf

血管与腔内血管外科杂志2024 年 2 月 第 10 卷 第 2 期Journal of Vascular and Endovascular Surgery Vol.10,No.2,Feb 2024急性冠状动脉综合征患者颈动脉斑块与抗氨基甲酰化蛋白抗体水平的关系姚晓阳1，卢凌鹏1，沈海涛1，张传富2，刘路遥1，蒋秀娣11 上海市第七人民医院医学检验科，上海 2001372 上海市第七人民医院风湿免疫科，上海 200137摘要：目的 观察急性冠状动脉综合征（ACS）患者颈动脉斑块与抗氨基甲酰化蛋白（CarP）抗体水平的关系。方法 收集2021年1月至2023年9月于上海市第七人民医院住院治疗的100例ACS患者的临床资料，并按照年龄、性别进行配对，收集同期于上海市第七人民医院进行体检且无ACS病史的100例体检者的临床资料。将所有研究对象按照血清抗CarP抗体水平分为阴性组（n=108）和阳性组（n=92），阳性组分为低水平组（n=53，抗CarP抗体水平中位检测值）和高水平组（n=39，抗CarP抗体水平中位检测值）。根据颈动脉斑块检查结果将ACS患者分为无斑块组（n=23）、稳定斑块组（n=34）和不稳定斑块组（n=43）。比较ACS患者与体检者的临床特征，不同颈动脉斑块类型ACS患者的抗CarP抗体水平、超敏C反应蛋白水平、肌钙蛋白水平，以及不同抗CarP抗体水平研究对象ACS的检出率和颈动脉斑块分布情况。结果 ACS患者的吸烟比例、饮酒比例、高血压比例、糖尿病比例、高脂血症比例、体重指数、收缩压、血糖水平、总胆固醇水平、甘油三酯水平、抗CarP抗体阳性率、抗CarP抗体水平、不稳定颈动脉斑块比例均高于体检者（P 0.05）。无斑块组、稳定斑块组和不稳定斑块组患者的抗CarP抗体水平、抗CarP抗体阳性率、超敏C反应蛋白水平以及肌钙蛋白水平比较，差异均有统计学意义（P 0.05）。其中，不稳定斑块组患者的抗CarP抗体水平、抗CarP抗体阳性率、超敏C反应蛋白水平及肌钙蛋白水平均高于无斑块组和稳定斑块组患者（P 0.05）。高水平组ACS的检出率和不稳定颈动脉斑块的比例最高，阴性组、低水平组、高水平组ACS的检出率和不稳定颈动脉斑块的分布情况比较，差异均有统计学意义（P 0.05）。结论 血清抗CarP抗体与ACS患者颈动脉斑块密切相关，与ACS的发生也有一定的关系，值得进一步深入研究。关键词：急性冠状动脉综合征；颈动脉斑块；抗氨基甲酰化蛋白抗体中图分类号：R543 文献标识码：A doi:10.19418/ki.issn2096-0646.2024.02.18Relationship between carotid artery plaques and levels of anti-carbamylated protein antibody in patients with acute coronary syndromeYao Xiaoyang1,Lu Lingpeng1,Sheng Haitao1,Zhang Chuanfu2,Liu Luyao1,Jiang Xiudi11 Department of Medical Laboratory,Shanghai Seventh Peoples Hospital,Shanghai 200137,China2 Department of Rheumatology and Immunology,Shanghai Seventh Peoples Hospital,Shanghai 200137,ChinaAbstract:Objective To observe the relationship between carotid artery plaques and levels of anti-carbamylated protein(CarP)antibody in patients with acute coronary syndrome(ACS).Method A total of 100 ACS patients who 基金项目基金项目上海市浦东新区卫生系统优秀青年医学人才培养计划项目（PWRq2020-36）；上海市卫生健康委员会科研课题计划项目 （202040147）作者简介作者简介姚晓阳，主管技师，主要从事免疫方向检验医学等相关研究，上海市第七人民医院通信作者通信作者蒋秀娣（Jiang Xiudi，corresponding author），主任技师，E-mail： 临床研究 211Journal of Vascular and Endovascular Surgery Vol.10,No.2,Feb 2024心脑血管疾病是全球主要的疾病负担之一1，也是危害人们生命健康的常见疾病2。急性冠状动脉综合征（acute coronary syndrome，ACS）是常见的急危重症，病死率、致残率均较高3。颈动脉是人体表浅的大动脉，可通过超声检查进行较为准确的评估，主要评估内容是颈动脉斑块和颈动脉狭窄程度4。既往研究显示，颈动脉斑块与心脑血管疾病的发生存在密切的关系，而且ACS患者中也常检出颈动脉斑块5-6。既往研究提示，颈动脉斑块与全身动脉粥样硬化和冠状动脉粥样硬化均具有较明显的相关性，对心脑血管不良事件的发生具有一定的预测作用7-8。既往研究还显示，动脉粥样硬化在病理生理学上属于一种炎性疾病，患者的炎性指标水平可出现升高，局部组织学检查可发现动脉粥样硬化斑块区域有炎症细胞浸润以及炎症因子的大量释放9-10。随着研究的不断深入，多种炎症因子在动脉粥样硬化斑块区域被发现，并且对动脉粥样硬化斑块的发生、发展起到了一定的作用。抗氨基甲酰化蛋白（carbamylated protein，CarP）抗体在结缔组织疾病中发挥着重要的作用，研究表明，多种结缔组织疾病患者体内的抗CarP抗体水平明显高于健康人群，并且与疾病的诊断效能、风险分层及治疗评估相关，有望成为结缔组织疾病的新型生物学标志物11-12。有研究亦发现，类风湿性关节炎患者的抗CarP抗体水平明显升高，并且与疾病的活动性有关13。研究显示，抗CarP抗体与髓过氧化物酶密切相关，而后者在动脉粥样硬化斑块的形成与发展过程中发挥着重要的作用14。本研究对抗CarP抗体水平与ACS患者颈动脉斑块的关系进行探索，以期为进一步的研究提供参考依据，现报道如下。1 资料与方法1.1 一般资料收集2021年1月至2023年9月于上海市第七人民医院住院治疗的ACS患者的临床资料。纳入标准：（1）年龄 18岁；（2）首次发作ACS；（3）临床资料完整。排除标准：（1）合并结缔组织病；（2）合并恶性肿瘤；（3）正在服用免疫抑制剂和激素类药物。根据纳入、排除标准，最终共纳入100例ACS患者。按年龄、性别进行匹配，收集于上海市第七人民医院同期进行体检且无ACS病史的100例体检者的临床资料。将所有研究对象按照抗CarP抗体水平分为阴性组（n=108）和阳性组（n=92）。另外，ACS患者行颈动脉超声检查，并根据颈动脉斑块检查结果分为无斑块were hospitalized in Shanghai Seventh Peoples Hospital from January 2021 to September 2023 were continuously included,and a total of 100 peoples without history of ACS who underwent health examinations in Shanghai Seventh Peoples Hospital during the same period were selected according to age and gender matching.All study subjects were divided into negative group(n=108)and positive group(n=92)based on their serum anti-CarP antibodies levels,and the positive group was divided into low level group(n=53,median detection value of anti-CarP antibody level)and high level group(n=39,median detection value of anti-CarP antibody level).ACS patients were divided into non-plaque group(n=23),stable plaque group(n=34),and unstable plaque group(n=43)based on carotid artery ultrasound examination results.The clinical characteristics of ACS patients and individuals underwent health examinations was compared,as well as the levels of anti-CarP antibodies,hypersensitive C-reactive protein,and troponin in ACS patients with different carotid plaque types,as well as the detection rate of ACS and the distribution of carotid plaques in study subjects with different levels of anti-Carp antibodies.Result The proportion of smoking,drinking,hypertension,diabetes,hyperlipidemia,body mass index,systolic blood pressure,blood sugar level,total cholesterol level,triglyceride level,anti-CarP antibody positive rate,anti-CarP antibody level,and the proportion of unstable carotid plaque in ACS patients were higher than those in healthy peoples underwent health examinations(P0.05).The anti-Carp antibodies levels,positive rates of anti-Carp antibodies,hypersensitive C-reactive protein levels,and troponin levels were compared in the non-plaque group,stable plaque group,and unstable plaque group,and the differences were statistically significant(P0.05).Among them,the anti-Carp antibody levels,positivity rate of anti-Carp antibody,hypersensitive C-reactive protein levels,and troponin levels of patients in the unstable plaque group were higher than those in the non-plaque group and stable plaque group(P0.05).The detection rate of ACS and proportion of unstable carotid artery plaques were highest in the high-level group,while the detection rate of ACS and the distribution of unstable carotid artery plaques in the negative group,low-level group,and high-level group were compared,and the difference were statistically significant(P0.05).Conclusion Serum anti-CarP antibodies are closely related to the carotid plaques in ACS patients,and also have a certain relationship with the occurrence of ACS.It is worth further research.Key words:acute coronary syndrome;carotid artery plaque;anti-carbamylated protein antibody212血管与腔内血管外科杂志2024 年 2 月 第 10 卷 第 2 期组（n=23）、稳定斑块组（n=34）和不稳定斑块组（n=43）。本研究经过联勤保障部队解放军第九六医院医学伦理委员会审批通过（2019-IRBQYYS-010）。1.2 抗 CarP 抗体水平检测与既往的研究方法13相同，采用全自动生物芯片阅读仪检测所有样本中的抗CarP抗体水平。具体检测步骤如下：留取每例研究对象的清晨空腹静脉血液，采用血清样本稀释液（介质为稳定剂，含100 ml/L山羊血清和5 g/L乳清蛋白）将待检血清以1:100的比例稀释。取200 l稀释后的血清加入芯片杯，放置于样本盘中。在反应盘中加入室温平衡且已点样的蛋白芯片，在试剂盘中加入发光液A（鲁米诺）和发光液B（过氧化氢）。使包被在芯片上的氨基甲酰化牛血清白蛋白（carbamylated bovine serum albumin，Car-BSA）与待检血清中的抗CarP抗体发生反应。清洗芯片后，在芯片杯中加入200 l已稀释的辣根过氧化物酶（horseradish peroxidase，HPP）标记的小鼠抗人免疫球蛋白G（immunoglobulin G，IgG），在37 条件下孵育40 min。自动冲洗芯片后，将芯片移入至发光底物溶液中，使用电荷耦合器件（charge coupled device，CCD）相机读取灰度值。点样在玻片上的抗原为一行4个抗原点，最终结果以4个点灰度值的平均值计算，通过计算机软件自动分析图片。用血清稀释液系列稀释一份高水平抗CarP抗体的ACS血清，绘制标准定量曲线，并制定每毫升血清中抗CarP抗体浓度的任意单位（arbitrary unit，AU）。与Car-BSA结合的吸光度（A）值减去与牛血清白蛋白（bovine serum albumin，BSA）结合的A值为该样本的检测A值，负值视为零。将制备好的定量标准品分装后在-80冰箱中冻存以备每次检测时使用。参考之前的研究方法13，血清抗CarP抗体水平以20 AU/ml为界限，其中，20 AU/ml为阴性，20 AU/ml为阳性13，并以中位检测值将阳性患者分为低水平组（抗CarP抗体水平中位检测值）和高水平组（抗CarP抗体水平中位检测值）。1.3 颈动脉斑块的超声检查所有研究对象均行颈动脉斑块超声检查，根据超声检查结果将颈动脉斑块分为无颈动脉斑块、稳定斑块和不稳定斑块15。1.4 观察指标比较ACS患者与体检者的临床特征，不同颈动脉斑块类型ACS患者的抗CarP抗体水平、超敏C反应蛋白水平、肌钙蛋白水平，以及不同抗CarP抗体水平研究对象ACS和颈动脉斑块的分布情况。1.5 统计学方法应用SPSS 24.0软件对数据进行统计学分析。正态分布的计量资料以（xs）表示，组间比较采用两独立样本t检验，组内比较采用配对t检验；计数资料以n（%）表示，组间比较采用2检验。P 0.05为差异有统计学意义。2 结果2.1 ACS 患者与体检者临床特征的比较ACS患者与体检者的年龄、性别相同。ACS患者的吸烟比例、饮酒比例、高血压比例、糖尿病比例、高脂血症比例、体重指数、收缩压、血糖水平、总胆固醇水平、甘油三酯水平、抗CarP抗体阳性率、抗CarP抗体水平、不稳定颈动脉斑块的比例均高于体检者，差异均有统计学意义（P 0.05）。（表1）2.2 不同颈动脉斑块类型 ACS 患者抗 CarP 抗体水平、超敏 C 反应蛋白水平及肌钙蛋白水平的比较3组患者的抗CarP抗体水平、抗CarP抗体阳性率、超敏C反应蛋白水平以及肌钙蛋白水平比较，差异均有统计学意义（P 0.05）。其中，不稳定斑块组患者的抗CarP抗体水平、抗CarP抗体阳性率、超敏C反应蛋白水平以及肌钙蛋白水平均高于无斑块组和稳定斑块组患者，差异均有统计学意义（P 0.05）。（表2）2.3 不同抗 CarP 抗体水平研究对象 ACS 和颈动脉斑块分布情况的比较抗CarP抗体水平的中位检测值为32.7 AU/ml，据此将阳性患者分为低水平组（32.7 AU/ml，n=53）和高水平组（32.7 AU/ml，n=39）。高水平组ACS和不稳定颈动脉斑块的比例最高，3组ACS的检出率和不稳定颈动脉斑块的分布情况比较，差异均有统计学意义（P 0.05）。（表3）3 讨论ACS通常发病突然，很多患者由于在医院之外发病，无法及时抢救而死亡16。在未发病时，常规的检查难以准确预测患者发生ACS的风险，因此，目前临床研究者仍然致力于寻找ACS相关的生物标志物。基于ACS炎症活动的本质，结合近年来相关研究的进展，本研究设想抗CarP抗体可能与ACS有关，但是，由于目前仅在少数患者中采用血管内超声检查或光学相干断层成像技术进行冠状动脉粥样硬化斑块的评估，因此，大部分患者都难以获取其冠状动脉粥样硬化斑块的具体信息，而颈动脉斑块是全身动脉粥样硬化情况的良好指示。本研究发现，与体检者相比较，ACS患者的血清抗CarP抗体水平明显升高。ACS患者213Journal of Vascular and Endovascular Surgery Vol.10,No.2,Feb 2024中，不稳定颈动脉斑块患者的血清抗CarP抗体阳性率和血清抗CarP抗体水平均高于无颈动脉斑块患者和稳定颈动脉斑块患者；进一步分析发现，抗CarP抗体阴性组、低水平组和高水平组患者ACS的检出率和颈动脉斑块分布情况比较，差异均有统计学意义。这些结果初步提示抗CarP抗体与ACS患者的颈动脉斑块密切相关。既往一些研究对ACS与颈动脉斑块的关系进行了深入的研究。钟世根等17的研究采用超声造影和剪切波弹性成像评估颈动脉斑块与ACS的关系，通过多因素Logistic回归分析发现，颈动脉斑块的最大增强密度是ACS发生的独立危险因素（OR=2.853，95%CI：0.1617.091，P=0.027）。唐清华和罗开琴18的研究应用彩色多普勒超声评价心肌梗死合并高血压患者的颈动脉粥样硬化狭窄程度及斑块分布情况，结果显示，颈动脉粥样硬化狭窄程度与心肌梗死合并高血压相关，颈动脉粥样硬化血管狭窄程度及斑块稳定性可在一定程度上反映患者发生心血管病变的风险，可将颈动脉粥样硬化狭窄程度作为心肌梗死等心血管疾病的预测指标。冯卫涛等19的研究分析了颈动脉斑块和踝肱指数协同预测老年人群远期新发心脑血管不良事件的临床价值，结果显示，合并颈动脉斑块的老年患者远期缺血性心脑血管事件、急性心肌梗死及脑梗死的发生风险均明显高于未合并颈动脉斑块的患者。许智超20的研究进一步分析了颈动脉斑块长度对冠状动脉狭窄严重程度和心血管事件的预测价值，结果显示，颈动脉斑块最大长度是阻塞性冠心病和严重冠心病的独立预测因素，对于阻塞性冠心病和严重冠心病的预测能力明显优于斑块厚度和颈动脉内膜中层厚度，是冠状动脉粥样硬化患者发生主要心血管事件的独立预测因素，且长度较长的颈动脉斑块与更高的主要心血管事件的累积发病率相关。炎症是动脉粥样硬化斑块发生的主要机制，多种炎症细胞和炎症介质在其中发挥作用。基础研究显示，早期富含脂质区域的动脉粥样斑块中含有大量的髓过氧化物酶，是影响早期的动脉粥样病变的主要因素之一，同时临床研究显示，髓过氧化物酶是ACS的新型标志物，与其他传统表1 ACS患者与体检者临床特征的比较临床特征ACS患者（n=100）体检者（n=100）t/2值P值年龄（岁，xs）61.76.961.76.9性别n（%）男性68（68.0）68（68.0）女性32（32.0）32（32.0）吸烟n（%）6.125 0.013是27（27.0）13（13.0）否73（73.0）87（87.0）饮酒n（%）5.521 0.019是36（36.0）21（21.0）否64（64.0）79（79.0）高血压n（%）10.125 0.002是29（29.0）11（11.0）否71（71.0）89（89.0）糖尿病n（%）5.107 0.024是16（16.0）6（6.0）否84（84.0）94（94.0）高脂血症n（%）25.418 0.05是58（58.0）23（23.0）否42（42.0）77（77.0）体重指数（kg/m2，xs）25.12.624.32.22.349 0.020收缩压（mmHg，xs）134.79.5129.87.93.966 0.05血糖（mmol/L，xs）6.40.9 5.90.74.385 0.05总胆固醇（mmol/L，xs）5.70.6 5.40.53.841 0.05甘油三酯（mmol/L，xs）2.60.5 2.30.54.243 0.05抗CarP抗体阳性n（%）23.269 0.05是63（63.0）29（29.0）否37（37.0）71（71.0）抗CarP抗体水平（AU/ml，xs）24.34.110.92.4 28.206 0.05颈动脉斑块n（%）20.471 0.05无23（23.0）53（53.0）稳定34（34.0）26（26.0）不稳定43（43.0）21（21.0）注：1 mmHg=0.133 kPa；“”表示未进行统计学比较表2 不同颈动脉斑块类型ACS患者抗CarP抗体水平、超敏C反应蛋白水平及肌钙蛋白水平的比较指标无斑块组（n=23）稳定斑块组（n=34）不稳定斑块组（n=43）2/F值 P值抗CarP抗体阳性（AU/ml，n（%）5（21.7）*20（58.8）*38（88.4）28.928 0.05抗CarP抗体水平（AU/ml，xs）8.41.9*19.13.3*36.94.9 454.4550.05超敏C反应蛋白（mg/L，xs）3.60.8*4.00.9*4.71.1 10.788 0.05肌钙蛋白 （ng/L，xs）1.20.3*1.50.4*2.00.5 29.188 0.05注：与不稳定斑块组相比，*P0.05表3 不同抗CarP抗体水平研究对象ACS和颈动脉 斑块分布情况的比较n（%）指标阴性组（n=108）低水平组（n=53）高水平组（n=39）2值P值ACS37（34.3）27（50.9）36（92.3）38.646 0.05颈动脉斑块83.076 0.05无61（56.5）10（18.9）5（12.8）稳定42（38.9）11（20.7）7（18.0）不稳定5（4.6）32（60.4）27（69.2）214血管与腔内血管外科杂志2024 年 2 月 第 10 卷 第 2 期生物标志物（肌钙蛋白、肌酸激酶同工酶、C反应蛋白等）相比，髓过氧化物酶的血浆浓度升高得更早，一般在急性胸痛发生后的2 h内就会显著高于正常值，并在3 h时达到高峰值21-22。抗CarP抗体与髓过氧化物酶的密切关系提示抗CarP抗体可能也深度参与到了冠状动脉粥样硬化斑块形成及不良心血管事件的发生之中，本研究结果支持了这一假说，但本研究仅初步建立了血清抗CarP抗体水平与ACS和颈动脉斑块之间的统计联系，其潜在的分子机制仍然需要通过基础研究进一步探索。本研究存在一些不足之处：第一，本研究为探索性、观察性研究，仅初步探讨了抗CarP抗体与ACS、颈动脉斑块的统计学联系，但目前尚不清楚抗CarP抗体在动脉粥样硬化斑块形成中的具体作用机制。第二，本研究仅分析了抗CarP抗体与颈动脉斑块的关系，并没有探讨抗CarP抗体与冠状动脉粥样硬化斑块的关系。第三，目前仍然采用实验用的抗CarP抗体试剂进行检测，还没有统一的标准化检测试剂和公认的参考值。未来可以开展相关基础实验，通过分子、细胞水平的研究进一步观察抗CarP抗体在动脉粥样硬化斑块中的作用，同时可以通过开展临床研究进一步观察抗CarP抗体与心血管事件发生的关系。综上所述，抗CarP抗体水平与ACS患者的颈动脉斑块存在密切的关系，与稳定颈动脉斑块和无颈动脉斑块的患者相比，不稳定斑块患者的抗CarP抗体水平和抗CarP抗体阳性率更高，值得进一步深入研究。参考文献1 Joseph P,Leong D,McKee M,et al.Reducing the global burden of cardiovascular disease,part 1:the epidemiology and risk factorsJ.Circ Res,2017,121(6):677-694.2 Liu S,Li Y,Zeng 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