实验四-酶特性实验.doc

说明：本实验由四个小实验组成，其中第一个实验（酶的专一性）必做，其他三个小实验选做（至少做一个）
写实验报告时，可以只写需要做的实验内容！
实验四 酶的特性实验
一、实验目的
酶是生物催化剂，生物体内化学反应基本上都是在酶的催化下进行的。通过本实验了解酶催化的特异性、温度对酶活力的影响、PH对酶活力的影响、激活剂和抑制剂对酶活力的影响，对于进一步掌握代谢反应及其调控机理具有十分重要的意义。
二、实验内容
本实验由酶的专一性实验、温度对酶活力的影响、PH对酶活力的影响、激活剂和抑制剂对酶活力的影响4个小实验组成。
（一）酶的专一性
1、实验原理
本实验以唾液淀粉酶对淀粉和蔗糖的作用为例，来说明酶的专一性。淀粉和蔗糖无还原性，唾液淀粉酶水解淀粉生成有还原性二糖的麦芽糖，但不能催化蔗糖的水解。用班氏试剂检查糖的还原性。班氏试剂为碱性硫酸铜，能氧化具还原性的糖，生成砖红色沉淀氧化亚铜。
2、材料、仪器与试剂
(1)材料：新鲜配制的唾液及其稀释液
(2)仪器：恒温水浴；沸水浴；试管及试管架；
(3)试剂：2%蔗糖溶液；溶于0.3% NaCl的0.5%淀粉溶液；班氏试剂。
3、实验操作
（1）稀释唾液的制备
①唾液的获取
用一次性杯取一定量的饮用水，漱口以清洁口腔，然后在嘴中含10-20ml饮用水，轻漱2min左右时间，即可获得唾液的原液，内含唾液淀粉酶。
②不同稀释度唾液的制备（用大试管）
本实验需制备1：1、1：5、1：20、1：50、1：200等五个不同浓度的稀释唾液。
举例说明：1:5指的是稀释了5倍的唾液，制备方法为1份原液+4份蒸馏水。
1：20指的是稀释了20倍的唾液，制备方法为1份1：5的稀释液+3分蒸馏水。
（2）唾液淀粉酶最佳稀释度的确定（严格按表1添加顺序做实验，用小试管做实验）
表1 唾液淀粉酶稀释度的确定
管号
1（1：1）
2（1：5）
3（1：20）
4（1：50）
5（1：200）
0.5%淀粉溶液（滴）
4
4
4
4
4
稀释唾液（ml）
1
1
1
1
1
37℃恒温水浴中保温5分钟
班氏试剂（ml）
1
1
1
1
1
沸水浴2～3分钟
实验结果

（2）淀粉酶的专一性
表2 淀粉酶专一性实验
管号
1
2
3
4
5
6
0.5%淀粉溶液（滴）
4
－
4
－
4
－
2%蔗糖溶液（滴）
－
4
－
4
－
4
最佳稀释度唾液（ml）
－
－
1
1
――

煮沸过的最佳稀释度唾液（ml）
－
－
－
－
1
1
蒸馏水（ml）
1
1
－
－
－
－
37℃恒温水浴中保温5分钟
班氏试剂（ml）
1
1
1
1
1
1
沸水浴2～3分钟
实验结果

（二）温度对酶活力的影响
1、实验原理
酶的催化作用受温度的影响。在最适温度下，酶的反应速度最高。淀粉和可溶性淀粉遇碘呈蓝色，糊精按其分子的大小，遇碘可呈蓝色、紫色、暗褐色或红色。最简单的糊精遇碘不呈颜色，麦芽糖遇碘也不呈色，在不同温度下，淀粉被唾液淀粉酶水的程度可由水解混合物遇碘呈现的颜色来判断。
2、材料、仪器与试剂
（1）材料：新鲜配制的唾液及其稀释液
（2）仪器：试管及试管架；恒温水浴；冰浴；沸水浴；
（3）试剂：溶于0.3% NaCl的0.5%淀粉溶液；KI－I2碘溶液；
3、实验操作
取4支干燥的试管，编号后按下表加入试剂：
表3 温度对酶活力影响实验加样顺序
管号
1
2
3
0.5%淀粉溶液（ml）
1.5
1.5
1.5
最佳稀释度唾液（ml）
1
1

煮沸过的稀释唾液（ml）

1
实验结果

摇匀后，将1、3号试管放入37℃恒温水浴中，2号试管放入冰水中。10分钟后1、2、3管均取出（将2号内液体分两半），用KI－I2溶液来检验1、2、3号管内淀粉被唾液淀粉酶水解的程度。记录并解释结果。将2号管剩下的一半溶液放入37℃水浴中继续保温10分钟后，再用KI－I2液实验，记录实验结果。
（三）PH对酶活力的影响
1、实验原理
酶的活力受环境PH值的影响极为显著。不同酶的最适PH不同。本实验观察PH对唾液淀粉酶活性的影响。唾液淀粉酶的最适PH约为6.8。
2、材料、仪器与试剂
（1）材料：新配制的溶于0.3%NaCl的0.5%淀粉溶液
（2）仪器：试管及试管架；吸管；滴管；恒温水浴
（3）试剂：PH为5.0、5.8、6.8、8.0的缓冲溶液；KI－I2碘溶液；PH试纸
3、实验操作
表4 PH对酶活性的影响实验
PH
5
5．8
6．8
8.0
缓冲液（ml）
3
3
3
3
0.5%淀粉溶液（ml）
1
1
1
1

向第一个试管加入稀释唾液后，置于37℃的恒温水浴；等待1min后
向第二个试管加入稀释唾液，置于37℃的恒温水浴；依次类推！
最佳稀释度的唾液（ml）
1
1
1
1
检查淀粉水解程度
待向第四只试管加入唾液2min后，每隔1分钟从第3管中取出1滴反应液于白瓷板上，加碘液检查反应进行情况，直至反应液变为淡棕黄色（颜色有点淡即可）。即可从第一只试管依次添加碘液，时间间隔也为1min。
碘液(滴)
1～２
1～２
1～２
1～2
现象

为了更好的理解表格内容，下面对实验过程进行说明：
各取缓冲液3ml，分别注入4支带有号码的试管，随后于各个试管中添加0.5%淀粉溶液1ml和最佳稀释度的唾液1ml。向各试管中加入稀释唾液的时间间隔为1分钟。将各试管中物质混匀，，并依次置于37℃恒温水浴中保温。
待向第4管加入唾液2ml后，每隔1分钟由第3管取出一滴混合液，置于白瓷板上，加1小滴KI－I2溶液。添加KI－I2溶液，检验淀粉的水解程度。待混合变为淡棕黄色（颜色有点淡即可）后，向所有试管依次添加1-2滴KI－I2溶液。添加滴KI－I2溶液的时间间隔，从第1管起，亦均为1分钟。观察各试管中物质呈现的颜色，分析pH对唾液淀粉酶活性的影响。
（四）唾液淀粉酶的活化及抑制
1、实验原理
酶的活性受活化剂或抑制剂的影响，氯离子为唾液淀粉酶的活化剂，铜离子为其抑制剂。
2、材料、仪器与试剂
（1）材料：0.5%淀粉溶液；最佳稀释度的唾液
（2）仪器：试管及试管架；恒温水浴
（3）试剂：1% NaCl溶液；1% CuSO4溶液；KI－I2碘溶液；1%Na2SO4溶液
3、实验操作（注意本实验的淀粉溶液为无NaCl的淀粉溶液）
表4 唾液淀粉酶活化及抑制实验
管号
1
2
3
4
0.5%淀粉溶液（ml）
1.5
1.5
1.5
1.5
最佳稀释度唾液（ml）
0.5
0.5
0.5
0.5
1% NaCl溶液（ml）
0.5
－
－
－
1% CuSO4溶液（ml）
－
0.5
－
－
1% Na2SO4溶液（ml）
－
－
0.5
－
蒸馏水（ml）
－
－
－
0.5
37℃恒温水浴中保温10分钟
KI－I2溶液（滴）
2～3
2～3
2～3
2～3
现 象

三、注意事项
各人唾液中淀粉酶活力不同，故本实验需要先做一个唾液淀粉酶稀释度的确定实验，以确定最佳稀释度。
四、思考题
1、何谓酶的最适pH和最适温度？
2、说明底物浓度、酶浓度、温度和pH对酶反应速度的影响。
3、作为一种生物催化剂，酶有哪些催化特点？

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