实验四-酶特性实验.doc

说明：本实验由四个小实验组成，其中第一个实验（酶的专一性）必做，其他三个小实验选做（至少做一个）写实验报告时，可以只写需要做的实验内容！实验四 酶的特性实验一、实验目的酶是生物催化剂，生物体内化学反应基本上都是在酶的催化下进行的。通过本实验了解酶催化的特异性、温度对酶活力的影响、PH对酶活力的影响、激活剂和抑制剂对酶活力的影响，对于进一步掌握代谢反应及其调控机理具有十分重要的意义。二、实验内容本实验由酶的专一性实验、温度对酶活力的影响、PH对酶活力的影响、激活剂和抑制剂对酶活力的影响4个小实验组成。（一）酶的专一性1、实验原理本实验以唾液淀粉酶对淀粉和蔗糖的作用为例，来说明酶的专一性。淀粉和蔗糖无还原性，唾液淀粉酶水解淀粉生成有还原性二糖的麦芽糖，但不能催化蔗糖的水解。用班氏试剂检查糖的还原性。班氏试剂为碱性硫酸铜，能氧化具还原性的糖，生成砖红色沉淀氧化亚铜。2、材料、仪器与试剂(1)材料：新鲜配制的唾液及其稀释液(2)仪器：恒温水浴；沸水浴；试管及试管架；(3)试剂：2%蔗糖溶液；溶于0.3% NaCl的0.5%淀粉溶液；班氏试剂。3、实验操作（1）稀释唾液的制备唾液的获取用一次性杯取一定量的饮用水，漱口以清洁口腔，然后在嘴中含10-20ml饮用水，轻漱2min左右时间，即可获得唾液的原液，内含唾液淀粉酶。不同稀释度唾液的制备（用大试管）本实验需制备1：1、1：5、1：20、1：50、1：200等五个不同浓度的稀释唾液。举例说明：1:5指的是稀释了5倍的唾液，制备方法为1份原液+4份蒸馏水。 1：20指的是稀释了20倍的唾液，制备方法为1份1：5的稀释液+3分蒸馏水。（2）唾液淀粉酶最佳稀释度的确定（严格按表1添加顺序做实验，用小试管做实验）表1 唾液淀粉酶稀释度的确定管号1（1：1）2（1：5）3（1：20）4（1：50）5（1：200）0.5%淀粉溶液（滴）44444稀释唾液（ml）1111137恒温水浴中保温5分钟班氏试剂（ml）11111沸水浴23分钟实验结果（2）淀粉酶的专一性 表2 淀粉酶专一性实验管号1234560.5%淀粉溶液（滴）4442%蔗糖溶液（滴）444最佳稀释度唾液（ml）11煮沸过的最佳稀释度唾液（ml）11蒸馏水（ml）1137恒温水浴中保温5分钟班氏试剂（ml）111111沸水浴23分钟实验结果（二）温度对酶活力的影响1、实验原理酶的催化作用受温度的影响。在最适温度下，酶的反应速度最高。淀粉和可溶性淀粉遇碘呈蓝色，糊精按其分子的大小，遇碘可呈蓝色、紫色、暗褐色或红色。最简单的糊精遇碘不呈颜色，麦芽糖遇碘也不呈色，在不同温度下，淀粉被唾液淀粉酶水的程度可由水解混合物遇碘呈现的颜色来判断。2、材料、仪器与试剂（1）材料：新鲜配制的唾液及其稀释液（2）仪器：试管及试管架；恒温水浴；冰浴；沸水浴；（3）试剂：溶于0.3% NaCl的0.5%淀粉溶液；KII2碘溶液；3、实验操作取4支干燥的试管，编号后按下表加入试剂：表3 温度对酶活力影响实验加样顺序管号1230.5%淀粉溶液（ml）1.51.51.5最佳稀释度唾液（ml）11煮沸过的稀释唾液（ml）1实验结果摇匀后，将1、3号试管放入37恒温水浴中，2号试管放入冰水中。10分钟后1、2、3管均取出（将2号内液体分两半），用KII2溶液来检验1、2、3号管内淀粉被唾液淀粉酶水解的程度。记录并解释结果。将2号管剩下的一半溶液放入37水浴中继续保温10分钟后，再用KII2液实验，记录实验结果。（三）PH对酶活力的影响1、实验原理酶的活力受环境PH值的影响极为显著。不同酶的最适PH不同。本实验观察PH对唾液淀粉酶活性的影响。唾液淀粉酶的最适PH约为6.8。2、材料、仪器与试剂（1）材料：新配制的溶于0.3%NaCl的0.5%淀粉溶液（2）仪器：试管及试管架；吸管；滴管；恒温水浴（3）试剂：PH为5.0、5.8、6.8、8.0的缓冲溶液；KII2碘溶液；PH试纸3、实验操作表4 PH对酶活性的影响实验PH558688.0缓冲液（ml）33330.5%淀粉溶液（ml）1111向第一个试管加入稀释唾液后，置于37的恒温水浴；等待1min后向第二个试管加入稀释唾液，置于37的恒温水浴；依次类推！最佳稀释度的唾液（ml）1111检查淀粉水解程度待向第四只试管加入唾液2min后，每隔1分钟从第3管中取出1滴反应液于白瓷板上，加碘液检查反应进行情况，直至反应液变为淡棕黄色（颜色有点淡即可）。即可从第一只试管依次添加碘液，时间间隔也为1min。碘液(滴)11112现象为了更好的理解表格内容，下面对实验过程进行说明：各取缓冲液3ml，分别注入4支带有号码的试管，随后于各个试管中添加0.5%淀粉溶液1ml和最佳稀释度的唾液1ml。向各试管中加入稀释唾液的时间间隔为1分钟。将各试管中物质混匀，并依次置于37恒温水浴中保温。待向第4管加入唾液2ml后，每隔1分钟由第3管取出一滴混合液，置于白瓷板上，加1小滴KII2溶液。添加KII2溶液，检验淀粉的水解程度。待混合变为淡棕黄色（颜色有点淡即可）后，向所有试管依次添加1-2滴KII2溶液。添加滴KII2溶液的时间间隔，从第1管起，亦均为1分钟。观察各试管中物质呈现的颜色，分析pH对唾液淀粉酶活性的影响。（四）唾液淀粉酶的活化及抑制1、实验原理酶的活性受活化剂或抑制剂的影响，氯离子为唾液淀粉酶的活化剂，铜离子为其抑制剂。2、材料、仪器与试剂（1）材料：0.5%淀粉溶液；最佳稀释度的唾液（2）仪器：试管及试管架；恒温水浴（3）试剂：1% NaCl溶液；1% CuSO4溶液；KII2碘溶液；1%Na2SO4溶液3、实验操作（注意本实验的淀粉溶液为无NaCl的淀粉溶液）表4 唾液淀粉酶活化及抑制实验管号12340.5%淀粉溶液（ml）1.51.51.51.5最佳稀释度唾液（ml）0.50.50.50.51% NaCl溶液（ml）0.51% CuSO4溶液（ml）0.51% Na2SO4溶液（ml）0.5蒸馏水（ml）0.537恒温水浴中保温10分钟KII2溶液（滴）23232323现 象三、注意事项各人唾液中淀粉酶活力不同，故本实验需要先做一个唾液淀粉酶稀释度的确定实验，以确定最佳稀释度。四、思考题1、何谓酶的最适pH和最适温度？2、说明底物浓度、酶浓度、温度和pH对酶反应速度的影响。3、作为一种生物催化剂，酶有哪些催化特点？5 / 5