尿路感染细胞实验中庆大霉素对尿路致病大肠杆菌的杀伤作用及细胞毒性研究.pdf

第 卷第期年月西 安 交 通 大 学 学 报(医 学 版)J o u r n a l o fX ia nJ i a o t o ngU n i v e r s i ty(M e d i c a l S c i e n c e s)V o l N o M a r 本刊网址:h t t p:/y x x b x j t u e d u c n微信公众号:西安交通大学学报医学版技术方法研究尿路感染细胞实验中庆大霉素对尿路致病大肠杆菌的杀伤作用及细胞毒性研究张婷,王家兴,陈婉冰,韩锦,李可(西安交通大学第二附属医院肾内科,陕西西安 ;西安交通大学第二附属医院科研中心实验室,陕西西安 ;西北大学医学院血液学研究所,陕西西安 )摘要:目的在尿路感染体外细胞实验中,比较不同浓度庆大霉素(、g/m L)对尿路致病大肠杆菌(U P E C)的杀伤作用,对尿路上皮细胞及炎性细胞如巨噬细胞的毒性作用.方法比较不同浓度庆大霉素对不同量U P E CJ 菌株(、)的杀伤情况;C C K 实验检测不同浓度庆大霉素在不同时间内(h或 h)对原代培养的C B L/雄鼠肾小管上皮细胞、腹腔巨噬细胞、人膀胱上皮细胞系J 的毒性作用;根据实验选择合适的庆大霉素浓度和作用时间,检测J 对小鼠肾小管上皮细胞的黏附、入侵以及小鼠巨噬细胞对J 的吞噬、清除作用.结果庆大霉素(g/m L)对J 的杀伤作用均强于的青霉素/链霉素双抗(P ),高浓度庆大霉素(g/m L)可在 m i n内完全杀伤高达 的J .g/m L庆大霉素作用h可对人膀胱上皮细胞系J 产生毒性作用(P).结论本文明确了不同细胞体外实验时适宜的庆大霉素处理浓度及时间,人膀胱上皮细胞系J 对庆大霉素更为敏感.关键词:尿路感染;庆大霉素;尿路致病大肠杆菌(U P E C);细胞毒性中图分类号:R 文献标志码:AD O I:/j d y x b 收稿日期:修回日期:基金项目:国家自然科学基金资助项目(N o )S u p p o r t e db yt h eN a t i o n a lN a t u r a lS c i e n c eF o u n d a t i o no fC h i n a(N o )通信作者:张婷,助理研究员 E m a i l:A n n e t t a b i o l o g y x j t u e d u c n网络出版地址:h t t p:/k n s c n k i n e t/k c m s/d e t a i l/R h t m l()T h ek i l l i n ge f f e c t so f g e n t a m i c i no nu r o p a t h o g e n i cE s c h e r i c h i ac o l ia n di t s c y t o t o x i c i t i e s i ni nv i t r oe x p e r i m e n t so fu r i n a r y t r a c t i n f e c t i o nZ HANGT i n g,WANGJ i a x i n g,CHE N W a n b i n g,HANJ i n,L IK e(D e p a r t m e n to fN e p h r o l o g y,T h eS e c o n dA f f i l i a t e dH o s p i t a l o fX ia nJ i a o t o n gU n i v e r s i t y,X ia n ;C o r eR e s e a r c hL a b o r a t o r y,T h eS e c o n dA f f i l i a t e dH o s p i t a l o fX ia nJ i a o t o n gU n i v e r s i t y,X ia n ;I n s t i t u t eo fH e m a t o l o g y,S c h o o l o fM e d i c i n eo fN o r t h w e s tU n i v e r s i t y,X ia n ,C h i n a)A B S T R A C T:O b j e c t i v e T oc o mpa r et h ek i l l i nge f f e c t so fd i f f e r e n tc o n c e n t r a t i o n so fge n t a m i c i n(,a n d g/m L)o nu r opa t h oge n i cE s c h e r i c h i ac o l i(U P E C)a n d i t s cyt o t o x i c i t i e s o nu r i n a ryu r o t h e l i a l c e l l sa n di n f l a mm a t o ryc e l l s s u c ha sm a c r oph age si nv i t r oM e t h o d s T h ek i l l i nge f f e c t so fd i f f e r e n tc o n c e n t r a t i o n so fge n t a m i c i no nd i f f e r e n ta m o u n t s(,a n d)o fU P E Cs t r a i nJ w e r ec o mpa r e d T h ecyt o t o x i c i t i e so fd i f f e r e n t c o n c e n t r a t i o n s o fge n t a m i c i no npr i m a ryc u l t u r e dm a l eC B L/m o u s e r e n a l t u b u l a r epi t h e l i a l c e l l s,m o u s em a c r oph age sa n dh u m a nb l a d d e repi t h e l i a lc e l l l i n eJ a td i f f e r e n tt i m epo i n t s(ha n d h)w e r ed e t e c t e dbyC C K a s s ay A c c o r d i ngt ot h ee xpe r i m e n t sa b o v e,w ec h o s eap pr opr i a t ege n t a m i c i nc o n c e n t r a t i o n sa n di n c u b a t i o nt i m e i ni nv i t r oc e l l c u l t u r ee xpe r i m e n t s t ov e r i fyJ a d h e s i o na n di n v a s i o nt om o u s er e n a l t u b u l a repi t h e l i a l c e l l so rph ago cyt o s i sa n d c l e a r a n c eo f J bym o u s em a c r oph age s R e s u l t s T h ek i l l i nge f f e c t o fge n t a m i c i n(g/m L)o nJ w a s s t r o nge r t h a nt h a to f P/S(P )H ighc o n c e n t r a t i o n so fge n t a m i c i n(g/m L)c o u l dk i l l upt o J w i t h i n m i n g/m Lge n t a m i n c i nt r e a t m e n t f o rhw a s cyt o t o x i cf o rh u m a nb l a d d e repi t h e l i a l c e l l l i n eJ (P)C o n c l u s i o nT h eap pr opr i a t ec o n c e n t r a t i o na n dd u r a t i o no fge n t a m i c i nt r e a t m e n tf o rd i f f e r e n tc e l l si nv i t r ow e r ed e t e r m i n e d U r o t h e l i a l c e l l s,e spe c i a l lyh u m a nb l a d d e r epi t h e l i a l c e l l l i n e J ,w e r em o r e s e n s i t i v e期张婷,王家兴,陈婉冰,等尿路感染细胞实验中庆大霉素对尿路致病大肠杆菌的杀伤作用及细胞毒性研究本刊网址:h t t p:/y x x b x j t u e d u c n微信公众号:西安交通大学学报医学版t oge n t a m i c i nK E Y WO R D S:u r i n a ryt r a c t i n f e c t i o n;ge n t a m i c i n;u r opa t h oge n i cE s c h e r i c h i ac o l i(U P E C);cyt o t o x i c i ty尿路感染是全球常见的感染性疾病之一,每年全球感染人数可达亿,已造成沉重的医疗负担.绝大多数尿路感染由致病菌经下尿道上行引起,可导致尿道炎、膀胱炎、肾盂肾炎甚至脓毒血症,是困扰妇女儿童,尿路畸形、梗阻患者,肾移植、糖尿病、长期滞留导尿管等慢性病患者的重要临床问题.尿路致病大肠杆菌(u r o p a t h o g e n i cE s c h e r i c h i ac o l i,U P E C)约 占 尿 路 感 染 致 病 菌 的 .U P E C可通过黏附因子如T y p eI、P菌毛等黏附入侵尿路上皮、定殖,引起急性膀胱炎或肾盂肾炎,.天然免疫在应对尿路感染中发挥了重要作用.尿路上皮细胞可分泌趋化因子、细胞因子,募集中性粒细胞和单核/巨噬细胞清除病原菌.在尿路感染的机制研究中,除通过膀胱插管建立动物感染模型外,还涉及细胞实验,如U P E C对尿路上皮 细 胞 的 黏 附、入 侵,免 疫 细 胞 如 巨 噬 细 胞 对U P E C的吞噬、清除,U P E C引起尿路上皮细胞或吞噬细胞焦亡等,.实验过程中需要以一定感染复数(细菌与细胞比例)将细胞与U P E C共孵育一定时间,之后使用抗生素杀死胞外的U P E C.一般选用庆大霉素,而文献报道的庆大霉素使用浓度不尽相同,有、g/m L,.已知庆大霉素有肾脏毒性,较高浓度的庆大霉素是否对尿路上皮细胞或免疫细胞产生毒性作用?本文拟探讨不同浓度庆大霉素对U P E C的杀伤能力,及庆大霉素对小鼠原代肾小管上皮细胞、小鼠巨噬细胞、人膀胱上皮细胞的毒性,现报道如下.材料与方法主要试剂及设备实 验 试 剂庆 大 霉 素(G i b c o),胰 蛋 白 胨(T h e r m oF i s h e r),酵母提取物(T h e r m oF i s h e r),半胱氨酸乳糖电解质缺乏(C L E D)琼脂培养基(O X O I D),细胞增殖毒性检测试剂盒(C C K)(D o j i n d o),青霉素/链霉 素(P/S)双 抗(G i b c o),改 良 硫 乙 醇 酸 盐(B D).实验设备级B 型生物安全柜(鑫贝西),电热恒温培养箱(科伟永兴),紫外可见分光光度仪(T h e r m oF i s h e r),酶标仪(B i o T e k).实验动物使用周左右S P F级C B L/雄鼠 只,于西安交通大学医学部实验动物中心S Y X K(陕)饲养,体质量()g,用于培养小鼠原代肾小管上皮细胞及收集腹腔巨噬细胞.所有动物实验经过西安交通大学动物实验伦理委员会批准,批件号:X J TUA E .实验方法U P E C菌株J 的复苏实验使用人U P E C菌株J (血清型O:K).取出冻存于 的J 菌株,于生物安全柜中取 L菌液加入 m L新鲜L B培养液中,培养 h后从中取 L菌液加入 m L新鲜L B培养液中,再培养 h;r/m i n离心m i n,弃去L B培养液,P B S清洗后,重悬于P B S中,调节体积使 n m处的吸光值为,此时菌液浓度为/m L.庆大霉素对J 的杀伤作用以的P/S为对照,比较 m i n内不同浓度庆大霉素、g/m L对 J 的杀伤能力.比较 m i n或h内高浓度庆大霉素 、g/m L对较高量J (、)的杀伤能力.配置含不同浓度庆大霉素的 培养液,取m L加入E P管中,加入 L菌液,震荡混匀,放置于 恒温培养箱中,达到预设时间后取出,每孔取 L均匀涂布于C L E D培养基上,过夜培养,计算菌落数.原代培养小鼠肾小管上皮细胞无菌采集C B L/雄鼠肾脏,沿皮髓交界处切取皮质部分,经 型胶原酶 消化 m i n,经 、m三层筛网过滤后,再经 m筛网过滤,置于含 m L/L胎 牛 血 清、胰 岛 素转 铁 蛋 白硒(I T S)、n g/m L氢化可的松、n m o l/L三碘甲状原腺氨酸的DME D F 培养液中,于 C O孵箱培育d左右至细胞基本全满.收集小鼠腹腔巨噬细胞C B L/雄鼠经腹腔注射硫乙醇酸盐建立无菌型腹膜炎模型,在注射第天收集腹腔细胞,红细胞裂解液去除红细胞,重悬于 培养基中,m筛网过滤,其中巨噬细胞可达到 以上.通过无血清饥饿可以使巨噬细胞贴壁,弃去未贴壁的其他细胞,可得到较纯的巨噬细胞.培养人膀胱上皮细胞系J 细胞人膀胱上皮细胞系J 细胞使用含 m L/L胎牛血清的DMEM培养基.庆大霉素对细胞的毒性检测原代培养小鼠肾小管上皮细胞于 孔板中,待长至 以上使西 安 交 通 大 学 学 报(医 学 版)第 卷本刊网址:h t t p:/y x x b x j t u e d u c n微信公众号:西安交通大学学报医学版用.将小鼠腹腔细胞以 每孔种至 孔板中,无血清饥饿h使巨噬细胞贴壁,弃去未贴壁的其他细胞.每次实验取只小鼠收集肾脏用于原代培养,或将只小鼠腹腔细胞等比例合并.每组设两个复孔,实验重复次.J 细胞系以 每孔种至 孔板中,生长过夜至 以上.J 细胞系每组设两个复孔,实验重复次.将上述细胞用P B S洗一遍洗去原培 养 基,按 庆 大 霉 素 浓 度、g/m L的分组加入含相应庆大霉素的培养液,培养不同时间后,P B S洗次,每孔加入不含庆大霉素的细胞培养液 L、C C K 试剂 L,同时设置不含细胞的空白孔,孵育h后,于 n m及 n m检测吸光度值.吸光度值(A值)计算如下A n m n m(细胞孔)A n m n m(空白孔).以不含庆大霉素对照组细胞活力为 ,计算其他组与对照组相比的细胞活力.U P E C对尿路上皮细胞的黏附、入侵培养小鼠原代肾小管上皮细胞或人膀胱上皮细胞系J 于 孔板至贴壁全满,每孔中加入一定量J 菌悬液(根据实验结果寻找最佳细菌与细胞比例),孵育 m i n,P B S洗去未黏附于上皮细胞的细菌,检测U P E C对上皮细胞的黏附:加入含 T r i t o n的无菌双蒸水裂解细胞,将裂解液稀释后均匀涂布在C L E D培养基上,隔夜培养,菌落计数;检测内化入侵上皮细胞的细菌:培养液中加入庆大霉素一段时间杀灭胞外菌,P B S清洗后裂解细胞,裂解液涂布,隔夜培养,菌落计数.U P E C入侵尿路上皮细胞实验示意图见图.图U P E C入侵尿路上皮细胞实验示意图F i g S c h e m a t i cd i a g r a mo fU P E Ci n v a s i o no fu r o t h e l i a l c e l l se x p e r i m e n t巨噬细胞对U P E C的吞噬、杀伤收集小鼠腹腔巨噬细胞,与J 以一定比例共孵育,P B S洗去游离细菌,加入含庆大霉素的培养液作用一段时间杀死胞外菌,检测巨噬细胞对J 的吞噬:将细胞裂解液稀释后涂布,隔夜培养,菌落计数;检测巨噬细胞对U P E C的杀伤:吞噬后将细胞在含庆大霉素的培养液中作用一段时间,超过h以上改用低浓度庆大霉素维持,裂解细胞后将细胞裂解液原液或稀释液涂布,隔夜培养,菌落计数.示意图见图.图巨噬细胞吞噬、杀伤U P E C实验示意图F i g S c h e m a t i cd i a g r a mo fm a c r o p h a g e sp h a g o c y t o s i sa n dk i l l i n go fU P E Ce x p e r i m e n t期张婷,王家兴,陈婉冰,等尿路感染细胞实验中庆大霉素对尿路致病大肠杆菌的杀伤作用及细胞毒性研究本刊网址:h t t p:/y x x b x j t u e d u c n微信公众号:西安交通大学学报医学版统计学分析使用G r a p h P a dP r i s m处理数据、作图,计量资料数据用均数标准差表示,单一变量多组比较用O n e W a yANOVA分析,组间两两比较采用L S D t检验,P 为差异有统计学意义.结果庆大霉素对J 的杀伤作用在 P/S或不同浓度庆大霉素对 J 的杀伤实验中,与P/S组相比,庆大霉素对J 的杀伤能力较强.如图所示,、g/m L庆大霉素能完全杀死 的细菌,、g/m L庆大霉素培养液中残余细菌量分别为 、,杀伤能力呈现浓度依赖趋势.而 P/S为常用细胞培养浓度,该组残余细菌量为 ,其对J 的杀伤能力甚至弱于庆大霉素最低浓度 g/m L组.庆大霉素对更高量J 的杀伤作用结果如表所示,高浓度庆大霉素 、g/m L作用 m i n,或 g/m L庆大霉素延长作用时间至 m i n,都能完全杀死高达 的J .n,与 P/S组比较,P .图庆大霉素对 J 的杀伤能力F i g T h ek i l l i n ge f f e c t so fg e n t a m i c i no n J 表高浓度庆大霉素作用于较高量J 后每管的残余细菌量T a b T h er e s i d u a lb a c t e r i a i ne a c ht u b ea f t e rh i g hc o n c e n t r a t i o n so fg e n t a m i c i nt r e a t m e n tw i t hh i g hd o s e so f J 庆大霉素浓度及作用时间细菌量 g/m L(m i n)g/m L(m i n)g/m L(m i n)每个实验重复次,残余细菌量由均数标准差表示.同一浓度庆大霉素作用于不同量细菌组间,或同细菌量和作用时间下不同浓度庆大霉素组间均无统计学差异.庆大霉素对小鼠原代肾小管上皮细胞、巨噬细胞及人膀胱上皮细胞系J 的毒性作用C C K 检测不同浓度庆大霉素对种细胞的毒性.如图所示,与不含庆大霉素的对照组相比,g/m L庆大霉素孵育h或 h,都使小鼠肾小管上皮细胞活力显著下降;不同浓度庆大霉素与小鼠巨噬细胞共孵育h或 h,对小鼠巨噬细胞的活力无显著影响;当、g/m L庆大霉素与J 共孵育h或 h,与对照组相比,都使J 细胞系活力显著下降;而缩短孵育时间至h,与对照组相比,不同浓度庆 大霉素对J 细 胞 系 活 力 无 显 著影响.J 对肾小管上皮细胞的黏附、入侵作用如图 A所示,J 对小鼠肾小管上皮细胞的黏附总量呈浓度依赖趋势,每孔加入、J 时,黏附量分别为()、()、(),组间有统计学差异.该黏附量包括黏附于肾小管上皮细胞外及进入胞内的细菌.但黏附比率(黏附细菌量占加入总细菌量的百分比)随着加入细菌量增多而减少(图 B),每 孔 加 入 J 的 黏 附 率 最 高(),组黏附率为(),组黏附率仅().由于细胞总量不变,细胞上的细菌黏附位点一定,随着加入细菌量的增多,黏附位点呈饱和趋势,且加入细菌量越多,细菌与细胞间空间位阻增大,表现为黏附比率的降低.内化实验中,加入庆大霉素杀死胞外菌,根据项的 结 果 可 使 用 、g/m L庆 大 霉 素 孵 育 m i n或 g/m L的庆大霉素孵育h.本实验选用 g/m L庆大霉素孵育h,杀死游离或黏附于胞外的J ,清洗去除庆大霉素后,裂解细胞涂板检测内化入胞内的细菌量.如图 C所示,每孔加入、J 时,内化量分别为()、()、(),组间有统计学差异,内化的细菌量也呈浓度依赖趋势.但内化的细菌占黏附细菌的百分比、组分别为、,说明细菌黏附于肾小管上皮细胞后,会以一定的比例内化入侵肾小管上皮细胞内部.巨噬细胞对J 的吞噬、清除作用J 与巨噬细胞按感染复数()()共孵育,根据加入的细菌量,本吞噬实验选西 安 交 通 大 学 学 报(医 学 版)第 卷本刊网址:h t t p:/y x x b x j t u e d u c n微信公众号:西安交通大学学报医学版用 g/m L庆大霉素孵育 m i n,杀伤实验选择 g/m L庆大霉素孵育 m i n、h,h后改为 g/m L庆大霉素孵育至 h.如图所示,随着吞噬时间延长(m i n),巨噬细胞对J 的吞噬明显升高;吞噬 m i n后的杀伤实验发现,吞噬后h巨噬细胞内细菌量()较吞噬后 m i n()呈增高趋势,而吞噬后 h胞内残余细菌量为(),与吞噬后 m i n比较,杀伤率可达 ;如吞噬过程中加入未灭活小鼠血清,血清中的补体成分会对细菌起到调理作用,辅助吞噬,实验发现吞噬 m i n时,未灭活血清组巨噬细胞吞噬的细菌量最大.n,与对照组比较,P,P,P .图庆大霉素对小鼠原代肾小管上皮细胞(A)、小鼠巨噬细胞(B)及人膀胱上皮细胞系J (C)的毒性作用F i g T h ec y t o t o x i c i t i e so fg e n t a m i c i nt op r i m a r yc u l t u r e dm o u s e r e n a l e p i t h e l i a l c e l l s(A),m o u s em a c r o p h a g e s(B),a n dh u m a nb l a d d e re p i t h e l i a l c e l l l i n eJ n,P,P .图J 对小鼠肾小管上皮细胞的黏附、入侵作用F i g J b i n d i n ga n d i n v a s i o no fm o u s er e n a l e p i t h e l i a l c e l l s讨论在正常细胞培养时加入的 P/S双抗,可在一定程度上抑制少量细菌的生长,如在超净台操作时可能掉入的细菌,但对大量细菌的抑制作用较差.在需要加入活菌的实验中,可使用庆大霉素在短时间内杀死大量胞外菌.在尿路感染的体外细胞实验研究中,加入活的U P E C可检测其对尿路上皮细胞的黏附、内化,吞噬细胞对U P E C的吞噬、清除,尿路上皮细胞或吞噬细胞在U P E C作用后的焦亡情况等.特别是感染复数大的情况,需要明确加入的庆大霉素能否完全杀伤胞外大肠杆菌.本研究显示,、g/m L期张婷,王家兴,陈婉冰,等尿路感染细胞实验中庆大霉素对尿路致病大肠杆菌的杀伤作用及细胞毒性研究本刊网址:h t t p:/y x x b x j t u e d u c n微信公众号:西安交通大学学报医学版J 与巨噬细胞感染复数.A:巨噬细胞不同时间吞噬的细菌量,n,与 m i n吞噬量比较;B:巨噬细胞吞噬 m i n后,庆大霉素处理不同时间胞内细菌量,n,与庆大霉素处理 m i n比较;C:加入不同浓度未灭活小鼠血清对巨噬细胞 m i n吞噬细菌量的影响,n,与不加血清的对照组比较;P,P,P .图小鼠巨噬细胞对J 的吞噬、杀伤作用F i g M o u s em a c r o p h a g e sp h a g o c y t o s i sa n dk i l l i n go f J 庆大霉素可在 m i n内完全杀死高达 的J ,而 g/m L庆大霉素在h内也可杀死同样量的J .庆大霉素是我国独立自主研制的广谱抗生素,属于氨基糖苷类抗生素,主要用于细菌特别是革兰氏阴性菌的感染.庆大霉素能与细菌核糖体 s亚基结合阻断细菌蛋白质合成.但因其对肾的毒性较大,肾功能不全患者禁用,同时也不适于长期用药.体外细胞实验中,庆大霉素自身对巨噬细胞、尿路上皮细胞是否存在毒性作用尚不十分明确.本研究中使用的最高剂量庆大霉素(g/m L)在与小鼠巨噬细胞孵育 h后,未对其活力产生明显影响;而 g/m L庆大霉素孵育h可显著降低小鼠原代肾小管上皮细胞活力;人膀胱上皮细胞系J 对庆大霉素的敏感性更高,g/m L庆大霉素孵育h后即可显著降低其活力,而不同浓度庆大霉素与J 细胞系孵育h对细胞活力无显著影响.本研究提示:巨噬细胞吞噬、清除U P E C实验中,随着感染复数增加,可提高庆大霉素浓度而不会对巨噬细胞活力产生影响,可采用高浓度庆大霉素如 、g/m L处理 m i n或h杀死胞外菌;如需检测巨噬细胞的杀伤作用,可在高浓度庆大霉素处理后改用低浓度、g/m L维持,一般为所选高浓度的十分之一.对于尿路上皮细胞,如人膀胱上皮细胞系J ,高浓度庆大霉素的处理时间不宜过长,即使选用 g/m L,也不宜超过h.对于不同的尿路上皮细胞系或原代培养细胞,可先经预实验以确定合适的庆大霉素处理浓度和时间.一般认为庆大霉素不能进入哺乳动物细胞内,因此仅能杀伤胞外菌.但有文献报道氨基糖苷类抗生素可在肾小管上皮细胞累积,K I YOM I YA等 通过H标记庆大霉素发现其可通过猪肾脏近曲小管细胞系L L C P K刷状缘侧或基底膜侧进入胞内,从刷状缘侧的摄入量随着孵育时间延长而增加.该文献中使用的庆大霉素量高达mm o l/L(约 g/m L),孵育h后,从刷状缘侧进入胞内的H标记庆大霉素可达 n m o l s(g).本研究中加入的庆大霉素最高仅为 g/m L,且能检测到内化入小鼠肾小管上皮的细菌量高达,提示即使小鼠肾小管上皮细胞可摄入庆大霉素,摄入量也并不足以杀伤胞内细菌,且摄入的庆大霉素与胞内细菌可能并不位于同一空间结构中.参考文献:T AMADO N F ARKO,OMA T T AG ENS,S P AU L D I NGCN,e t a l R e a c h i ngt h ee n do f t h e l i n e:u r i n a ryt r a c t i n f e c t i o n sJM i c r o b i o lSpe c t r,():/m i c r o b i o l spe c b a i 朱晨,王钰,柳鸿鹏,等泌尿系统感染风险评估工具的研究进展与展望J中华现代护理杂志,():ZHUC,WANG Y,L I U H P,e ta l R e s e a r c hpr ogr e s sa n dpr o spe c t o fr i s ka s s e s s m e n tt o o l sf o ru r i n a rysys t e mi n f e c t i o nJC h i nJM o dN u r s,():WAG E N L EHN E R F M E,B J E RK L UNDJ OHAN S E N T E,C A IT,e t a l Epi d e m i o l og y,d e f i n i t i o na n dt r e a t m e n to fc o m pl i c a t e du r i n a ryt r a c t i n f e c t i o n sJ N a tR e vU r o l,():西 安 交 通 大 学 学 报(医 学 版)第 卷本刊网址:h t t p:/y x x b x j t u e d u c n微信公众号:西安交通大学学报医学版姬文娟,牛俊杰,于拽拽,等泌尿系统感染发生危险因素及病原菌感染分布、药物敏感性和细菌耐药性情况研究J医学动物防制,():J IWJ,N I UJ J,YU YY,e ta l R i s kf a c t o r so fu r i n a ryt r a c ti n f e c t i o na n ds t u d i e so f t h ed i s t r i b u t i o no fpa t h oge n i cb a c t e r i a,d r ugs u s c ept i b i l i ty,a n db a c t e r i a l r e s i s t a n c eJ JM e dP e s tC o n t r o l,():YANG W B,L I UP,CH E N Y,e ta l D i c t a m n i n e i n h i b i t s t h ea d h e s i o nt o a n di n v a s i o n o fu r opa t h oge n i cE s c h e r i c h i ac o l i(U P E C)t ou r o t h e l i a l c e l l sJ M o l e c u l e s,():S O R I CHO S MANI,C V I T KOV I CRO I CA,L AMO TL Asys t e m a t i cr e v i e wo ft h e(u n)k n o w nh o s ti mm u n er e spo n s eb i o m a r k e r s f o rpr e d i c t i ngr e c u r r e n c eo fu r i n a ryt r a c t i n f e c t i o nJF r o n tM e d(L a u s a n n e),:WE IY,L IK,WANGN,e t a l A c t i v a t i o no f e n d oge n o u s a n t i i n f l a mm a t o rym e d i a t o rcyc l i cAMPa t t e n u a t e sa c u t ep ye l o n e ph r i t i s i nm i c ei n d u c e dbyu r opa t h oge n i cE s c h e r i c h i ac o l iJAmJP a t h o l,():GU H W,C A IX W,ZHANG X Y,e ta l Apr e v i o u s lyu n c h a r a c t e r i z e dt w o c o mpo n e n t s ign a l i ngsys t e mi nu r opa t h oge n i cE s c h e r i c h i ac o l ic o o r d i n a t e spr o t e c t i o naga i n s t h o s t d e r i v e do x i d a t i v es t r e s sw i t ha c t i v a t i o no fh e m o lys i n m e d i a t e dh o s t c e l lp yr opt o s i sJ P L o SP a t h og,():e WU K Y,C AOB,WANG C X,e ta l T h eC a/C a R a x i sc o n t r i b u t e st ot h epa t h oge n e s i so fa c u t ecys t i t i st h r o ughe n h a n c e m e n to f a d h e s i o n a n d c o l o n i z a t i o n o f u r opa t h oge n i cEc o l iJ F r o n tC e l l I n f e c tM i c r o b i o l,:S T O C K SCJ,P HAN M D,A CHARD MES,e t a l U r opa t h o ge n i cE s c h e r i c h i ac o l ie mpl oysb o t he v a s i o na n dr e s i s t a n c et os u b v e r t i n n a t e i mm u n e m e d i a t e dz i n c t o x i c i tyf o rd i s s e m i n a t i o nJP r o cN a t lA c a dS c iUSA,():M V MUR T HYA,P HAN M D,P E T E R SK M,e t a l R egu l a t i o no fh e m o lys i ni nu r opa t h oge n i cE s c h e r i c h i ac o l if i n e t u n e sk i l l i ngo fh u m a nm a c r oph age sJ V i r u l e n c e,():YUAN H,GAOZ,L U X H,e t a l R o l eo f c o l l e c t i n i n i n n a t ed e f e n c eaga i n s tu r opa t h oge n i cE s c h e r i c h i ac o l ii n f e c t i o nJI n n a t eI mm u n,():S YM I NG T O N J W,WANG C,TWE N T YMAN J,e ta l A T G L d e f i c i e n cyi nm a c r oph age sd r i v e sc l e a r a n c eo fu r o pa t h oge n i cEc o l ii na nI L d epe n d e n tm a n n e rJ M u c o s a lI mm u n o l,():S T A L E NHO E FJE,VAN N I E UWKO O PC,ME NK E NPH,e ta l I n t r a v e s i c a lge n t a m i c i nt r e a t m e n tf o rr e c u r r e n tu r i n a ryt r a c t i n f e c t i o n sc a u s e dbym u l t i d r ugr e s i s t a n tb a c t e r i aJ JU r o l,():K I YOM I YAK,MA T S U S H I T AN,MA T S UOS,e t a l D i f f e r e n t i a l t o x i ce f f e c t so fge n t a m i c i no nc u l t u r e dr e n a lepi t h e