GH∕T 1395-2022 蜂蜜中苦参碱和氧化苦参碱含量的测定液 相色谱-串联质谱法.pdf

ICS 67.180.10CCS X31GH中华人民共和国供销合作行业标准GH/T 13952022蜂蜜中苦参碱和氧化苦参碱含量的测定 液 相色谱-串联质谱法Determinatio n o f matri ne and o xy matri ne in Ho ney一 Liquid chro mato graphy-tandem mass spectro metry metho d2023-02-09 发布2023-03-01 实施中华全国供销合作总社 发布GH/T 13952022前言本文件按照GB/T 1.1-2020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定 起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由中华全国供销合作总社提出。本文件由全国蜂产品标准化工作组(SAC/SWG2)归口。本文件起草单位：秦皇岛海关技术中心、安徽泓顺源生物科技有限公司、中国蜂产品协会。本文件主要起草人：崔宗岩、刘晓茂、纪欣欣、黄学者、贾光群、王治颖、祖铁红、汪昌宏、姜晓 林、谭丽蕊、张进杰、曹彦忠。1GH/T 13952022蜂蜜中苦参碱和氧化苦参碱含量的测定 液相色谱-串联质谱法1范围本文件规定r蜂蜜中苦参碱和氧化苦参碱含量测定的液相色谱-串联质谱法。本文件适用于蜂蜜中苦参碱和氧化苦参碱含量的测定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本 文件。GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4原理试样用磷酸-甲酸镀缓冲溶液溶解提取，经阳离子固相萃取柱净化，液相色谱-串联质谱仪测定，外 标法定量。5试剂和材料除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为符合GB/T 6682规定的一级水。5.1试剂5.1.1甲酸(CH2O2)：色谱纯。5.1.2甲醇(CH3OH)：色谱纯。5.1.3 氨水(NH34H2O)o5.1.4 磷酸(H3Po4)：纯度285%。5.1.5 甲酸5(NH4HCO2)：纯度N99%。5.2溶液配制5.2.1磷酸甲酸镂缓冲溶液：取20 mL磷酸(5.1.4),6.3 g甲酸铉(5.1.5),用水稀释至1 L,混匀。其中磷酸浓度为2%(v/v),甲酸镂浓度为0.1 mo l/L。5.2.2 5%氨水甲醇溶液:取5 mL氨水(5.1.3),用甲醇(5.1.2)稀释至100 mL,混匀。5.2.3 25%甲醇水溶液：取25 mL甲醇(5.1.2),用水稀释至100 mL,混匀。5.3标准品5.3.1 苦参碱(Matrine,Ci5H24N2O,CAS 号：519-02-8),纯度N98%。5.3.2 氧化苦参碱(Oxymatrine,C15H24N2O2，CAS 号:16837-52-8),纯度598%。5.4标准溶液配制2GH/T 139520225.4.1 苦参碱和氧化苦参碱标准储备液（lmg/mL）：分别准确称取苦参碱（531）或氧化苦参碱（5.3.2）标准品10mg（精确至O.Olmg）,置于10 mL容量瓶中，加入甲醇溶解、稀释并定容，混匀，配制成浓 度均为lmg/mL的苦参碱和氧化苦参碱标准储备液。-18。（：以下避光保存，有效期6个月。5.4.2 混合标准中间液（10Mg/mL）：分别取苦参碱和氧化苦参碱标准储备液（5.4.1）各0.1 mL,于10 mL容量瓶中，用25%甲醇水溶液（523）稀释并定容，混匀，配成浓度为10 pg/mL混合标准中间液，28。20 ng/mL3GH/T 1395202250 ng/mL.100 ng/mL.200 ng/mL的基质匹配系列混合标准溶液，微孔滤膜过滤，液相色谱串联质谱仪 测定。8.4测定8.4.1液相色谱参考条件a）色谱柱:T3（2.1 mm x 150 mm,3 gm）,或相当者；b）流动相：甲醇+0.1%甲酸水溶液（梯度洗脱，见表1）；c）流速：0.2 mL/min；d）柱温：40；e）进样量：2表1梯度洗脱条件（A：甲醇；B：0.1%甲酸水溶液）时间(min)流速（mL/min）A(%)B(%)0.00.21992.00.21996.00.290108.00.290108.50.219912.50.21998.4.2质谱参考条件a）离子源：电喷雾离子源（ESI）：b）扫描方式：正离子扫描；c）检测方式：多反应监测（MRM）；d）离子源温度：120（；e）脱溶剂温度：35CTC；f）脱溶剂气体流速：650 L/h；g）锥孔气流速：o 0 L/h；h）毛细管电压：3kV；i）苦参碱和氧化苦参碱必MRM参数见表2o表2苦参碱和氧化苦参碱的多反应监测（MRM）参数化合物名称定性离子对（m/z）定量向子对（m/z）锥孔电压（V）碰撞能量（eV）苦参碱249.2/148.1249.2/176.16030249.2/176.135氧化苦参碱:265.4/148.1265.4/205.36030265.4/205.330265.4/247.4288.5液相色谱-串联质谱测定8.5.1定性确证每种被测组分选择一个母离子，2个以上子离子，在相同实验条件卜，试样溶液中苦参碱、氧化苦 参碱的保留时间与基质匹配标准溶液中相应组分的保留时间一致，相对偏差在疲.5%之内，所有离子对4GH/T 13952022都出现，且相对离子丰度与浓度相当的基质匹配标准溶液相对离子丰度致，其允许偏差应符合表3 的要求。表3定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度50%20%50%10%20%W10%允许的相对偏差:120%也5%430%:50%8.5.2定量测定按照841和8.4.2设定仪器条件，以基质匹配标准溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准 工作曲线，按外标法计算试样中目标物的残留量。基质匹配标准溶液及试样溶液中的目标物响应值均应 在仪器检测的线性范围内。8.6平行试验按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定。8.7空白试验取空白试料，采用完全相同的测定步骤进行平行操作。9结果计算结果按式（1）计算：VX=C X.（1）m式中：X试样中被测组分含量，单位为微克每千克（国/kg）；C从标准工作曲线|二得到的被测组分溶液浓度，单位为微克每升（/L）：V样品溶液定容体积，单位为毫升（mL）；m一所称试样的质量，单位为克g）o注：计算结果应扣除空白值；结果保留小数点后10定量限本文件中苦参碱和氧化苦参碱的定量限均为10。国/kg。11精密度两次平行测定的绝对差值不超过其算术平均值的10%O5GH/T 13952022附录A（资料性）苦参碱和氧化苦参碱的多反应监测（MRM）色谱图A.1苦参碱和氧化苦参碱的多反应监测（MRM）色谱图见图A.120210618-009 MRM o f 5 Channels ES44.20 4.40 4.60 4.80 5.00 5.20 5.40 5.60 5.80 6.00 6.20 6.40 6.60 6.80 7.00 7.20图A.1苦参碱和氧化苦参碱（浓度均为200 ng/mL）的多反应监测（MRM）色谱图6