福建省36株人源猪链球菌分离株病原学特征分析.pdf

,()中 国 人 兽 共 患 病 学 报C h i n e s eJ o u r n a l o fZ o o n o s e sD O I:/j i s s n 实验研究福建省 株人源猪链球菌分离株病原学特征分析梁雪晨,高亚东,李曲文,福建省卫生健康科技计划项目(N o G GA ,G GA ),福建省科技创新平台建设项目(N o Y )通讯作者:李曲文,E m a i l:l q w c o m;O R C I D:作者单位:福建医科大学公共卫生学院,福州 ;福建省人兽共患病研究重点实验室(福建省疾病预防控制中心),福州 ;福建医科大学公共卫生学院专业教学实习基地,福州 摘要:目的了解福建省 年猪链球菌菌株病原学和基因组特征,分析 年间分离株进化特征,为人感染猪链球菌病防控提供参考依据.方法对 株福建地区分离自人的猪链球菌菌株进行全基因组测序、药物敏感性测试,检测血清型分布、耐药表型和基因分型,分析菌株之间的遗传多态性.结果福建省 株人感染猪链球菌分离株以血清型()为主,其次是型();全基因组测序结果显示 株分离株有种不同的序列类型,以S T 型()和S T 型()最为常见;药物敏感性测试显示对大环内酯类、四环素和氨基糖苷类药物具有高水平的耐药性.存在多重耐药情况,重耐药菌株(),重耐药菌株(),重耐药菌株(),重耐药菌株();对四环素()、红霉素()、克林霉素()及复方新诺明()耐药率高.分离株携带 种抗生素耐药基因,对类抗生素产生耐药性,耐药基因分型与观察到的表型直接相关.结论应继续加强对福建地区人感染猪链球菌疫情的监测,针对不同地区的不同优势毒力基因型进行预防;限制抗生素的使用,同时加强对耐药相关可移动元件的监测,以减少潜在的抗微生物药物耐药性.关键词:猪链球菌;血清型;抗生素耐药中图分类号:R 文献标识码:A文章编号:()A n a l y s i so f t h ep a t h o g e n i cc h a r a c t e r i s t i c so f i s o l a t e so fS t r e p t o c o c c u s s u i sf r o mh u m a n o r i g i n i nF u j i a nP r o v i n c eL I ANGX u e c h e n,GAOY a d o n g,L IQ u w e n,(T h eS c h o o l o fP u b l i cH e a l t h,F u j i a nM e d i c a lU n i v e r s i t y,F u z h o u ,C h i n a;K e yL a b o r a t o r yo fZ o o n o s i sR e s e a r c ho fF u j i a nP r o v i n c e,F u j i a nP r o v i n c i a lC e n t e r f o rD i s e a s eC o n t r o la n dP r e v e n t i o n,F u z h o u ,C h i n a;P r o f e s s i o n a l t e a c h i n gP r a c t i c eB a s e,S c h o o l o fP u b l i cH e a l t h,F u j i a nM e d i c a lU n i v e r s i t y,F u z h o u ,C h i n a)A b s t r a c t:T h i ss t u d yw a sa i m e da t u n d e r s t a n d i n g t h ee t i o l o g i c a l a n dg e n o m i c c h a r a c t e r i s t i c so fS t r e p t o c o c c u s s u i s(Ss u i s)s t r a i n s i nF u j i a np r o v i n c e f r o m t o ,a n da n a l y z i n g t h e e v o l u t i o n a r y t r a i t s o f t h e i s o l a t e so v e r t h ep a s t y e a r s,t op r o v i d eg u i d a n c e f o rp r e v e n t i n ga n dc o n t r o l l i n gh u m a n i n f e c t i o n s c a u s e db ySs u i s At o t a l o f s t r a i n so fS t r e p t o c o c c u s s u i si s o l a t e df r o mi n d i v i d u a l s i nF u j i a np r o v i n c ew e r es u b j e c t e dt ow h o l eg e n o m es e q u e n c i n ga n dd r u gs u s c e p t i b i l i t yt e s t i n g T h es e r o t y p ed i s t r i b u t i o n,d r u g r e s i s t a n c ep h e n o t y p e,a n dg e n e t y p i n gw e r ed e t e r m i n e d,a n dg e n e t i cp o l y m o r p h i s m s a m o n gs t r a i n sw e r ea n a l y z e d Am o n gt h e Ss u i si s o l a t e s i nF u j i a np r o v i n c e,s e r o t y p e a c c o u n t e d f o r t h em a j o r i t y()a n dw a s f o l l o w e db ys e r o t y p e()W h o l eg e n o m es e q u e n c i n gi n d i c a t e dt h a t i s o l a t e sh a dd i f f e r e n ts e q u e n c et y p e s,a m o n gw h i c hS T()a n dS T()w e r e t h em o s t c o mm o n D r u gs u s c e p t i b i l i t y t e s t i n gr e v e a l e dh i g h l e v e l so f r e s i s t a n c e t om a c r o l i d e s,t e t r a c y c l i n e s,a n da m i n o g l y c o s i d e s T h ep r e v a l e n c eo fm u l t i d r u gr e s i s t a n c ew a s(s e v e ns t r a i n s),(f i v es t r a i n s),(f o u rs t r a i n s),a n d(t h r e es t r a i n s)H i g hr e s i s t a n c ew a so b s e r v e dt ot e t r a c y c l i n e(),e r y t h r o m y c i n(),c l i n d a m y c i n(),a n dc o m p o u n ds u l f a m e t h o x a z o l e()T h e i s o l a t e sc a r r i e d a n t i b i o t i cr e s i s t a n c eg e n e sa n dw e r er e s i s t a n t t oe i g h tc l a s s e so fa n t i b i o t i c s R e s i s t a n c eg e n o t y p i n gr e s u l t sd i r e c t l yc o r r e l a t e dw i t ht h eo b s e r v e dp h e n o t y p e S u r v e i l l a n c eo fS t r e p t o c o c c u s s u i s(Ss u i s)i nF u j i a np r o v i n c em u s t b e f u r t h e r e n h a n c e d,a n dp r e v e n t i o nm e a s u r e s s h o u l db e c o n d u c t e da c c o r d i n g t o t h ed o m i n a n tv i r u l e n c eg e n o t y p e s i nd i f f e r e n t r e g i o n s T h eu s eo f a n t i b i o t i c s s h o u l db e l i m i t e d,a n dm o n i t o r i n go f r e s i s t a n c e a s s o c i a t e dm o b i l ee l e m e n t ss h o u l db ee n h a n c e dt od e c r e a s ep o t e n t i a l a n t i m i c r o b i a l r e s i s t a n c e K e y w o r d s:S t r e p t o c o c c u s s u i s;s e r o t y p e;a n t i b i o t i cr e s i s t a n c eS u p p o r t e db yt h eF u j i a nP r o v i n c i a lH e a l t hS c i e n c ea n dT e c h n o l o g yP r o g r a m(N o G G A ,G G A ),a n dt h eF u j i a nP r o v i n c i a lS c i e n c ea n dT e c h n o l o g yI n n o v a t i o nP l a t f o r mC o n s t r u c t i o nP r o j e c t(N o Y )C o r r e s p o n d i n ga u t h o r:L iQ u w e n,Em a i l:l q w c o m猪链球菌是一种重要的人兽共患病病原菌,最早报道于 年,年在丹麦报告首例人感染猪链球菌病例.猪链球菌宿主存在多样性,主要宿主是猪,定植部位为猪的上呼吸道.人感染猪链球菌的主要途径是呼吸道和接触,例如通过破损的伤口、黏膜、消化道、鼻咽腔等.感染猪链球菌会引起化脓性关节炎、听力丧失、败血症等疾病,甚至威胁生命.根据荚膜多糖抗原差异,将猪链球菌分为 个血清型,为 、和/.其中型、/型、型、型、型和 型为引起猪链球菌病的主要血清型.年和 年次疫情暴发,均为猪链球菌型.猪链球菌发病率与致病性和其数量无关,而与其毒力因子相关.猪链球菌毒力因子众多,根据其携带毒力因子的不同,被分为高致病性毒株、低致病性毒株和无致病性毒株.常用多位点序列分析分型(M u l t i l o c u ss e q u e n c i n gt y p i n g,ML S T)测定细菌的多个管家基因获得菌株的序列型(s e q u e n c e t y p e,S T)对其进行分类.随着高通量测序成本的降低,全基因组测序技术广泛运用于分析猪链球菌的流行病学、致病性、耐药性以及进化等研究.猪链球菌血清型众多,疫苗防治效果不理想,养殖场常在饲料中添加抗生素进行预防.抗生素的滥用导致猪链球菌产生了耐药性,甚至出现多重耐药菌株,因此调查和分析猪链球菌的耐药性与耐药基因不仅对临床治疗猪链球菌感染引起的相关疾病有极大帮助,还有助于新型抗菌药物的研发.自 年期间,福建地区共报告了 例人感染猪链球菌的病例.为了解福建省人源猪链球菌分离株毒力基因、耐药情况,进行了全基因组分析、药敏试验等研究,以了解福建流行菌株的病原特征,对福建地区的猪链球菌防控提供理论指导.材料与方法菌株来源福建省 年分离自人的猪链球菌分离株,共计 株(菌株标号为 号,见表),均通过P C R、质谱、生化鉴定为猪链球菌.表福建省人源猪链球菌信息表T a b I n f o r m a t i o no nh u m a n i n f e c t i o n sw i t hS t r e p t o c o c c u ss u i si nF u j i a nP r o v i n c e菌株编号样品来源地区年份血清型S T型血液漳州 血液漳州 血液漳州 脑脊液漳州 血液福州 血液厦门 血液厦门 血液泉州 脑脊液厦门 血液泉州 血液宁德 血液福州 血液三明 血液漳州 血液漳州 血液三明 血液漳州 血液厦门 血液漳州 血液漳州 血液漳州 血液漳州 血液漳州 血液漳州 关节积液厦门 血液漳州 脑脊液厦门 脑脊液厦门 脑脊液厦门 血液厦门 血液厦门 脑脊液泉州 脑脊液厦门 脑脊液泉州 血液龙岩 血液龙岩 中 国 人 兽 共 患 病 学 报 ,()主要仪器设备荧光P C R仪购自中国杭州博日科技股份有限公司;常规P C R仪购自美国A B I有限公司;全自动快速生物质谱检测仪购自B RUK E R公司;链球菌药敏试剂板D L S T R M I C购自珠海迪尔生物工程股份有限公司;猪链球菌荧光P C R核酸检测试剂盒购自深圳生科原有限公司;血琼脂平板购自北京陆桥技术股份有限公司.方法菌株的复苏将实验室保存的 株猪链球菌菌株分别划线接种于血琼脂平板上,放入 、C O恒温培养箱中培养 h.D NA提取使用凯杰基因组试剂盒,参照试剂盒说明书提取细菌基因组,用于毒力、耐药、基因组测定等实验.毒力因子检测选择猪链球菌主要的毒力基因(m r p、s l y、e p f、g d h、f p b s、g a p d h)进行P C R检测,参考文献 合成引物.引物由生工生物工程股份有限公司合成.P C R反应体系(L):模板D NAL,上、下游引物各L,T a qP C RM a s t e rM i x L,d d HOL.P C R反应结束后,取L产物进行琼脂糖凝胶电泳,通过凝胶成像系统观察并记录结果.全基因组测序由上海生工生物工程股份有限公司有限公司进行细菌基因组框架图测序.使用I l l u m i n aH i s e q进行基因组二代测序,对测序的原始数据通过F a s t Q C进行质量评估,使用S P A d e s拼接二代测序数据,拼接的序列用于后续分析.药敏试验药敏实验按照链球菌药敏试剂盒微量肉汤稀释法(M I C法)说明书进行,质控菌株为肺炎链球菌AT C C .耐药折点值参考 版美国临床实验室标准协会(C L S I)药敏实验判断标准中肺炎链球菌的判断标准.耐药基因及耐药基因预测使用C A R D网站预测菌株可能携带的林可酰胺类、大环内酯类、四环素类、氯霉素类等耐药基因,并通过I C E f i n d e r网站预测可能含有的I C E.多位点序列分型将全基因组序列结果在P u b ML S T网站进行个管 家基因(m u t S、r e c A、a r o A、c p n、t h r A、d p r、g k i)及序列S T型查询.将全基因组测序数据上传至B a c WG S T d b网站绘制S N P进化树(参考菌株A _C P _S T).使用i TO L(h t t p s:/i t o l e m b l d e/)对进化树进行美化.统计分析采用E x c e l 软件录入实验室检测结果和全基因组分析数据,进行统计分析.结果毒力基因检测通过P C R对 株猪链球菌分离株m r p、s l y、e p f、g d h、f p b s、g a p d h毒力基因进行 了 检 测,其 携 带 率 分 别 为 、.s l ye p fm r p为优势毒力基因型,共 株,占,其次为s l ye p fm r p毒力基因型,共 株,占,s l ye p fm r p毒力基因型共株,s l ye p fm r p、s l ye p fm r p与s l ye p fm r p毒力基因型各株,s l ye p fm r p毒力基因型株.ML S T分型及毒力基因携带模式 株猪链球菌的ML S T分析结果显示,有种不同的S T型,其中以S T 型(/)与S T 型(/)最为常见.株猪链球菌分离株S T型与血清型和毒力基因型的关系见表,S T 主要毒力基因型为s l ye p fm r p与s l ye p fm r p;S T 主要毒力基因型为s l ye p fm r p;S T 毒力基因型是s l ye p fm r p与s l ye p fm r p.表猪链球菌S T型与血清型和毒力基因型分布T a b D i s t r i b u t i o no fS Ta n ds e r o t y p e sa n dv i r u l e n c eg e n o t y p e so fSs u i sS T型数量血清型毒力基因型数量 s l ye p fm r p/s l ye p fm r p/s l ye p fm r p/s l ye p fm r p/s l ye p fm r p/s l ye p fm r p/s l ye p fm r p/s l ye p fm r p/s l ye p fm r p/s l ye p fm r p/s l ye p fm r p/s l ye p fm r p/s l ye p fm r p s l ye p fm r p耐药表型及基因型 株药敏结果显示:对四环素的耐药率高达 (/),红霉素(/)、克林霉素(/),复方新诺明耐药率(/),氯霉素(/),头孢噻肟、美罗培南、头孢吡肟、万古霉素、青霉素均为期梁雪晨,等:福建省 株人源猪链球菌分离株病原学特征分析(/).株猪链球菌中重耐药菌株有株,占比(/),重耐药菌株有株,占比(/),重耐药菌株 有 株,占 比 (/),重耐药菌株有 株,占比(/),重耐药菌株有株,占比(/),耐种药物的菌株株,占比(/).其中最常见的是重耐药,具有两种耐药模式:四环素红霉素克林霉素复方新诺明(株);四环素红霉素克林霉素氯霉素(株),见表.对四 环 素 耐 药 基 因(t e t、t e t B、t e t E、t e t L、t e t M、t e t O)、大环内酯类耐药基因(m e f A、e r mA、e r m B)、氨基糖苷类耐药基因(a c c()a p h()、a n t()I a、a n t()I a、a p h()I I I)、叶酸通道拮抗剂 耐 药 基(d f r G)、恶 唑 烷 酮 类 耐 药 基 因(o p t r A)、氯霉素类耐药基因(c a t、F l o R、c m l A)进行预测,不同菌株携带耐药基因种类也不同,最常见的是c m l A(株,),其次是e r m B(株,)、t e t L(株,)、t e t E(株,)、t e t B(株,)、t e t M(株,)、F l o R(株,)、t e t O(株,)和d f r G(株,)等.同时结合耐药基因及S N P进化系统发育树分析显示,株菌株可分为个进化谱系,其中谱系包括 株()均为S T 型,谱系中株为S T 和株S T ;谱系中株S T 型和株S T 型;谱 系中株S T 型 和株S T 型,见图.表猪链球菌耐药情况T a b A n t i m i c r o b i a l r e s i s t a n c e i nS t r e p t o c o c c u s s u i s药物种类药物名称M I C(g/m L)耐药数(n)耐药率()内酰胺类头孢噻肟 头孢吡肟 美罗培南 阿莫西林 糖肽类替考拉宁万古霉素 氟喹诺酮类莫西沙星 左氧氟沙星氯霉素类氯霉素 林可酰胺类克林霉素 大环内酯类红霉素 青霉素类青霉素 叶酸拮抗途径复方新诺明/四环素类四环素 注:用最大似然法构建进化树,黑色填充表示存在参数.图 株猪链球菌S N P进化树及相关耐药基因分析F i g P h y l o g e n e t i c t r e eo fS N P sa n da s s o c i a t e dr e s i s t a n c eg e n e so f S t r e p t o c o c c u s s u i si s o l a t e s中 国 人 兽 共 患 病 学 报 ,()讨论猪链球菌是一种人兽共患病病原体,人可通过破损的伤口接触而感染.本研究通过全基因组测序和抗生素敏感性实验,分析了福建省近 年分离到的 株人源猪链球菌的毒力、耐药和分子流行病学特征.血清型被认为是最致命的血清型,曾在中国造成了两次 大规模的 人类疫 情 和 大 量 的 猪 死亡 .血清型、和在许多国家也广泛传播.本研究的猪链球菌分离株中,血清型()最常见,与现有报道一致.猪链球菌的毒力因子与致病力之间的作用机理还未明确,但两者之间存在密切联系.猪链球菌根据毒力基因不同分为强毒株、弱毒株和无毒株.s l y、e p f、m r p是 血 清 型菌 株 的 常 用 毒 力 指标,本研究中猪链球菌的毒力基因携带情况,其中以s l ye p fm r p有 株,占比,为最主要毒力基因携带型别,表明我省人感染分离株多为强毒株.多位点序列分型(ML S T)是通过测定核酸序 列 来 对 细 菌 进 行 分 型 的 方 法,猪 链 球 菌 的ML S T分型已经有 多种.根据报道,在我国主要流行的ML S T分型主要为S T 和S T 型,本研究通过全基因组测序并上传到p u b ML S T网站进行分型,发现福建省近 年分离到的人感染猪链球菌多为S T 型(),与文献中报道的猪链球菌易感染人主要是血清型的S T 为主的结论相一致.年中国临床分离到的猪链球菌大多对克林霉素()、四环素()和红霉素()耐药 .本研究中我们检测了 株猪链球菌对 种抗生素药物的敏感性,所有分离株至少对一类抗生素耐药,其中,株均对四环素耐药,对红霉素和克林霉素也发现具有较高的耐药率,而对替考拉宁、阿莫西林、左氧氟沙星、青霉素、万古霉素、莫西沙星、利奈唑胺敏感,与其他地区研究结果类似.研究发现福建省的分离株中林可酰胺类、大环内酯类和四环素类耐药基因的携带率较高.抗生素在食品动物养殖过程中不仅用于预防控制和治疗病原菌感染,也常作为生长促进因子,增加肉的产量.据报道,在所有抗生素中,四环素是猪生产中使用最广泛的,很多研究也报道了中国养猪场使用磺胺类、四环素类、氟喹诺酮类、大环内酯类和类酰胺类抗生素 .这导致猪链球菌对四环素、红霉素和克林霉素耐药率高,提示应及时调整抗生素治疗策略,合理使用抗生素,避免产生耐药性.而青霉素、万古霉素、利奈唑胺属于人常用药物,一般很少兽用,因此几乎所有的菌株都对这几种抗生素敏感,但近些年也有许多研究发现有携带利奈唑胺耐药基因的菌株其表现对利奈唑胺及氟苯尼考等耐药.对 株猪链球菌的耐药基因进行了预测,发现福建省的人感染猪链球菌分离株普遍存在耐药基因,且菌株携带耐药基因型与其耐药表型一致.其中氯霉素类、大环内酯类和四环素类耐药基因的携带率较高,这可能与这些抗生素在养殖业中的广泛使用有关,使耐药基因发生选择和扩散.同时通过I C E f i n d e r网站对菌株分析发现本研究中的 株有 株含有整合性接合元件(I n t e g r a t i v ea n dc o n j u g a t i v ee l e m e n t,I C E),还需进一步对该类菌株研究,以防携带这些元件菌株成为耐药性传播的重要载体.综上所述,本研究揭示了福建省人感染猪链球菌菌株的毒力、耐药和部分基因组特征具有一定的地域性特征.应加强对福建省各地区猪链球菌的监测,加大对相关从业人员的健康教育,防止人感染猪链球菌病的暴发.利益冲突:无引用本文格式:梁雪晨,高亚东,李曲文福建省 株人源猪链球菌分离株病原学特征分析J中国人兽共患病学报,():,D O I:/j i s s n 参考文献S t a a t sJ J,F e d e r I,O k w u m a b u aO,e ta l S t r e p t o c o c c u sS u i s:p a s ta n dp r e s e n tJ V e tR e sC o mm u n,():D O I:/A:G o t t s c h a l kM,X uJ,C a l z a sC,e t a l S t r e p t o c o c c u s s u i s:an e we m e r g i n go ra no l dn e g l e c t e dz o o n o t i cp a t h o g e nJ F u t u r eM i c r o b i o l,():D O I:/f m b D uP,Z h e n gH,Z h o uJ,e ta l D e t e c t i o no fm u l t i p l ep a r a l l e lt r a n s m i s s i o no u t b r e a ko fS t r e p t o c o c c u s s u i sh u m a n i n f e c t i o nb yu s eo fg e n o m ee p i d e m i o l o g y,C h i n a,J Em e r gI n f e c tD i s,():D O I:/e i d 朱水荣,李萍,吕沈聪,等浙江省首例 型猪链球菌人源分离株鉴定及分子特征分析J中国人兽共患病学报,():D O I:/j i s s n U r u e nC,G a r c i aC,F r a i l eL,e t a l H o wS t r e p t o c o c c u s s u i se s c a p e sa n t i b i o t i c t r e a t m e n t sJ V e tR e s,():D O I:/s 张纯瑶,解倩倩,宋子杰,等猪链球菌的分离鉴定及耐药性分析J黑龙江畜牧兽医,():D O I:/j c n k i h l j x m s y (下转第 页)期梁雪晨,等:福建省 株人源猪链球菌分离株病原学特征分析s x()Z h a n gW,Z h a n gZ,W uW,e t a l E p i d e m i o l o g ya n dc o n t r o l o fe c h i n o c o c c o s i s i nc e n t r a lA s i a,w i t hp a r t i c u l a rr e f e r e n c et ot h eP e o p l e sR e p u b l i co fC h i n aJ A c t aT r o p,(P tB):D O I:/j a c t a t r o p i c a F uM,H a nS,X u eC,e t a l C o n t r i b u t i o n t o t h ee c h i n o c o c c o s i sc o n t r o l p r o g r a mm e i nC h i n ab yN I P D C T D RJ A d vP a r a s i t o l,:D O I:/b s a p a r K n a p pJ,S a k oY,G r e n o u i l l e tF,e ta l C o m p a r i s o no f t h es e r o l o g i c a l t e s t sI C Ta n dE L I S Af o rt h ed i a g n o s i so fa l v e o l a re c h i n o c o c c o s i s i nF r a n c eJ P a r a s i t e,:D O I:/p a r a s i t e/E r t ugS,a l k a nS,M a l a t y a l E,e ta l I n v e s t i g a t i o no f t h ea p p l i c a b i l i t yo f ar a p i dd i a g n o s i st e s t i nt h ed i a g n o s i so fc y s t i ce c h i n o c o c c o s i sJ T u r k i y eP a r a z i t o lD e r g,():D O I:/t p d W a n gJ Y,G a oC H,S t e v e r d i n gD,e t a l D i f f e r e n t i a ld i a g n o s i so f c y s t i ca n da l v e o l a re c h i n o c o c c o s i su s i n ga ni mm u n o c h r o m a t o g r a p h i c t e s tb a s e do nt h ed e t e c t i o no fs p e c i f i ca n t i b o d i e sJP a r a s i t o lR e s,():D O I:/s 高春花,汪俊云,杨玥涛,等 种抗原检测囊型包虫病血清学评价J中国人兽共患病学报,():D O I:/j i s s n O r i o lR,W i l l i a m s I F,P e r v e z E s a n d iMV,e t a l P u r i f i c a t i o no fL i p o p r o t e i na n t i g e n so fE c h i n o c o c c u sg r a n u l o s u sf r o m s h e e ph y d a t i df l u i dJ AmJT r o pM e dH y g,():Q uJ Q,B a oY F D o tE L I S Au s i n gm o n o c l o n a la n t i b o d i e sf o ri d e n t i f i c a t i o no fL e i s h m a n i ad o n o v a n iJ C h i nM e dJ,:R o eC D,C o u r t o yP J,B a u d h u i nP A m o d e lo fp r o t e i n c o l l o i d a lg o l di n t e r a c t i o nJ J H i s t o c h e m C y t o c h e m,():W a r c h o l J B,B r e l i s k aR,H e r b e r tD C A n a l y s i s o f c o l l o i d a l g o l dm e t h o d sf o rl a b e l l i n gp r o t e i n sJH i s t o c h e m i s t r y,():Z h a n gW,M c M a n u sD P R e c e n ta d v 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e t w e e n i n t e r m e d i a t e l yp a t h o g e n i c,h i g h l yp a t h o g e n i c,a n de p i d e m i cS t r e p t o c o c c u ss u i sJ JI n f e c tD i s,():D O I:/H a t r o n g j i tR,F i t t i p a l d iN,J e n j a r o e n p u nP,e ta l G e n o m i cc o m p a r i s o no f t w oS t r e p t o c o c c u s s u i ss e r o t y p es t r a i n s