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基于高分辨质谱的植物油脂及黄曲 霉脂质组成研究 河南工业大学硕士研究生学位论文第I页摘要本文以甘油脂、磷脂和鞘脂的标准品为材料，基于超高效液相色谱-串联高分辨质 谱技术较为系统地表征了甘油脂、磷脂和鞘脂在质谱中的裂解规律，为后续脂质的定 性和定量分析奠定了基础。以菜籽油、大豆油和花生油及其对应的油料作物为原材料,建立了植物油及其油料作物的鞘脂分析方法，为探索植物油及油料作物中鞘脂组成特 性提供了参考。以广泛存在于植物油及油料作物中的黄曲霉菌为原材料，根据其次生 代谢产物的分泌受到生物膜脂质组成影响的特点，建立了黄曲霉脂质组学研究方法，比较了三种不同脂质提取方法，探索了不同产毒能力黄曲霉抱子的脂质组成差异及黄 曲霉菌丝体的脂质组成特性。主要研究结果如下：(1)系统地表征了甘油脂、磷脂和鞘脂在质谱中的裂解规律，其中甘油一、二、三酯在正离子模式下会形成M+NH4的母离子，其特征离子碎片主要与其甘油骨架所 连接的脂肪酸的丢失有关,在负离子模式下未响应。磷脂在正离子模式下会形成M+H+的母离子，其特征离子碎片与其含有的头基部分，以及所连接的脂肪酸的丢失有关。在负离子模式下，PC、LPC以及SM三类磷脂形成的母离子为M+HCOO，其他磷脂 形成的母离子则为M-H1，其他的特征离子碎片同样与其含有的头基部分，以及所连 接的脂肪酸的丢失有关。鞘脂主要是以长链鞘氨醇骨架为核心结构的一类脂质，其在 质谱中的裂解规律的差异主要存在于与鞘氨醇骨架C1位的氧连接的不同极性部分。(2)建立了基于UPLC-Orbitrap MS鞘脂轮廓分析方法。对三种主要的油料作物 及其植物油的鞘脂分子种类和含量进行了全面研究，在三种油料中分别鉴定出了 24、22 和 24 种鞘脂,其中 So(dl6:0)、So(dl8:0)So(d20:0)和 So P(d22:l)四种鞘脂在 三种油料中均被检测到，且含量均达到了其总鞘脂含量10%以上。在菜籽油、大豆油 和花生油中分别鉴定出了 11、14和18种鞘脂，其中So P(d22:l)是三种植物油的含量 最高的鞘脂，分别达到了 83.37%、71.34%和84.00%。本研究建立的鞘脂分析方法将为 植物油及油料的营养功能评价提供支撑技术。(3)比较了三种脂质提取方法的差异。在正离子模式下，通过MTBE法、Fo lch 法和Bligh-Dyer法提取到的脂质别有871、592和854种。从提取物质的相对丰度来看(峰面积)，MTBE法和Bligh-Dyer法提取的高峰面积脂质(6 xl07)数量为最大 第II页河南工业大学硕士研究生学位论文（MTBE：440；Fo lch：349；BD：478）。在负离子模式下，使用 MTBE 法，Fo lch 法和Bligh-Dyer法提取到的脂质数量分别为469、507和285。MTBE法，Fo lch法和 Bligh-Dyer法三种脂质提取方法提取到的高峰面积（6义1。7）脂质数量分别为82、387 和95。从提取重复性来看，在正离子模式下，通过MTBE法，Fo lch法和Bligh-Dyer 法提取到峰面积相对标准偏差小于20%的脂质为654,485和488种，分别占其脂质总 数量的75%,82%和57%。在负离子模式下，MTBE法，Fo lch法和Bligh-Dyer法提取 到的峰面积相对标准偏差小于20%的脂质数量为432,456和208,分别占其脂质总数 量的 92%,90%和 72%。（4）探索不同产毒能力黄曲霉胞子的脂质组成差异。研究利用了 Th erm。Orbitrap Fusio n mass spectro meter的高分辨率，对黄曲霉抱子实施了一种高覆盖非靶向质谱分析 的策略。结果表明，在正离子模式下，检测到了 844种脂质分子，在负离子模式下，检测到了 252种脂质分子。采用PCA分析方法对不同实验组之间的差异进行了阐明，并使用OPLS-DA模型对具有不同产毒能力的黄曲霉抱子的差异脂质进行了分析。在三 种不同产毒能力的黄曲霉抱子中，在正离子模式下发现了 68种差异脂质，在负离子模 式下发现了 100种差异脂质。采用超高效液相色谱串联质谱法能够高通量、高灵敏度 和高效地对黄曲霉菌丝体的脂质组成特性进行全面的分析，在正离子模式下总共检测 到了 385种脂质组成成分，在负离子模式下总共检测到了 187种脂质组成成分。在正 离子模式下，黄曲霉菌丝体主要检测到磷脂135种、鞘脂31种和甘油脂219种，其占 比分另U达至I了 35.06%、8.05%和56.88%。负离子模式下主要检测到磷脂127种、鞘脂 5种和部分其他脂质18种,其占比分别达到了 84.76%、3.33%和分。关键词：超高效液相色谱-串联高分辨质谱；脂质裂解规律；脂质组学；植物油；黄曲 霉菌河南工业大学硕士研究生学位论文第III页AbstractIn th is paper,glycero lipids,ph o sph o lipids,and sph ingo lipids were used as materials,and based o n th e ultra-h igh perfo rmance liquid ch ro mato graph y and h igh-reso lutio n mass spectro metry tech no lo gy,th e cleavage laws o f glycero lipids,ph o sph o lipids and sph ingo lipids in mass spectro metry were systematically ch aracterized,wh ich laid a fo undatio n fo r subsequent qualitative and quantitative analysis o f lipids.Using rapeseed o il,so ybean o il,peanut o il and th eir co rrespo nding o il cro ps as raw materials,a meth o d fo r analyzing sph ingo lipids in vegetable o ils and o il cro ps h as been establish ed,wh ich pro vided a reference fbr explo ring th e co mpo sitio n ch aracteristics o f sph ingo lipids in vegetable o ils and o il cro ps.In th is paper,using Aspergillus flavus,wh ich is widely present in vegetable o ils and o il cro ps,as raw materials,acco rding to th e ch aracteristics o f th e secretio n o f its seco ndary metabo lites th at are affected by th e lipid co mpo sitio n o f bio films,a research meth o d fbr th e lipido mics o f Aspergillus flavus was establish ed,and th ree different types o f lipid extractio n meth o d were co mpared.Th is paper explo red th e difference in lipid co mpo sitio n o f Aspergillus flavus spo res with different to xin-pro ducing ability and th e lipid co mpo sitio n ch aracteristics o f Aspergillus flavus mycelium.Th e main findings were as fo llo ws:(1)Th e cleavage law o f glycero lipids,ph o sph o lipids and sph ingo lipids in mass spectro metry was systematically ch aracterized.Amo ng th em,mo no glycerides,diglycerides,and triglycerides will fo rm M+NHj parent io ns in th e po sitive io n mo de.Its ch aracteristics Io nic fragments are mainly related to th e lo ss o f fatty acids attach ed to th e glycero l backbo ne,and th ey do no t respo nd in negative io n mo de.Ph o sph o lipids will fo rm th e parent io n o f M+H+in th e po sitive io n mo de,and its ch aracteristic io n fragments are related to th e lo ss o f th e h ead gro up part and th e attach ed fatty acid.In th e negative io n mo de,th e precurso r io ns fo rmed by th e th ree types o f ph o sph o lipids PC,LPC and SM are M+HCOO,and th e parent io ns fo rmed by o th er ph o sph o lipids are M-H*.Oth er ch aracteristic io n fragments are also th e same as th e h ead gro up part th at it co ntains,and th e lo ss o f co nnected fatty acids is related.Sph ingo lipids are mainly a class o f lipids with a lo ng-ch ain sph ingo sine skeleto n as 第IV页河南工业大学硕士研究生学位论文th e co re structure.Th e difference in th e cleavage law in mass spectro metry mainly exists in th e different po lar parts co nnected to th e o xygen at th e Cl po sitio n o f th e sph ingo sine skeleto n.(2)Th e sph ingo lipid pro filing meth o d was establish ed based o n UPLC-OrbitrapMS.Th e types and co ntents o f sph ingo lipid mo lecules o f th ree main o il cro ps and th eir vegetable o ils were co mpreh ensively studied.24,22 and 24 sph ingo lipids were identified in th e th ree o il cro ps,amo ng wh ich So(dl6:0)and So(dl8:0),So(d20:0)and So P(d22:l)fo ur sph ingo lipids were detected in th e th ree o ils,and th e co ntent reach ed mo re th an 10%o f th eir to tal sph ingo lipid co ntent.11,14,and 18 sph ingo lipids were identified in rapeseed o il,so ybean o il,and peanut o il,respectively.Amo ng th em,So P(d22:l)is th e sph ingo lipid with th e h igh est co ntent o f th e th ree vegetable o ils,reach ing 83.3 7%,71.3 4%,and sph ingo lipids,respectively.84.00%.Th e sph ingo lipid analysis meth o d establish ed in th is study will pro vide suppo rting tech no lo gy fo r th e evaluatio n o f th e nutritio nal functio n o f vegetable o il and o ilseeds.(3)Th e differences o f th e th ree lipid extractio n meth o ds are co mpared.In th e po sitive io n mo de,th ere are 871,592 and 854 kinds o f lipids extracted by th e MTBE meth o d,Fo lch meth o d and Bligh-Dyer meth o d.Fro m th e relative abundance o f th e extracted substances(peak area),th e peak area lipid(6 x10)extracted by th e MTBE meth o d and Bligh-Dyer meth o d is th e largest(MTBE:440;Fo lch:3 49;BD:478).In th e negative io n mo de,th e number o f lipids extracted by th e MTBE meth o d,th e Fo lch meth o d and th e Bligh-Dyer meth o d were 46 9,507 and 285,respectively.Th e peak area(6 DG(18:0/18:0)、TG(18:1/18:1/18:1)；磷脂：PC(16:0/18:2)、LPC(16:0)SM(dl8:l/16:0)PE(18:1/18:1)、LPE(18:1)LPC(16:0)、PA(16:0/18:2)、PS(18:2/22:0)、PI(16:0/18:1)。鞘脂：Sph inganine(dl8:0)Sph ingo sine(dl8:l)C18Ceramide(dl8:l/18:0)SM(dl8:l/16:0)Galacto syl(p)Sph ingo sine(dl8:l)0 所有脂质标准品购于Sigma公司。2.3实验方法2.3.1脂质标准品的配制将脂质标准品置于棕色小瓶中，分别用对应量的甲醇和氯仿的混合溶液(1：2,体积比)进行溶解，最终配制成浓度为1000 gg/mL的标准储备液，上机前使用甲醇 梯度稀释成所需标准溶液。2.3.2液相色谱参数超高效液相色谱系统为Dio nex系统，采用C18反相色谱柱对脂质进行分离。采用 二元梯度洗脱模式进行洗脱，流速为0.2 mL/min,流动相A是含有10 mmo l/L甲酸 钱和0.1%的甲酸的乙月青和水(4：6,体积比)的混合溶液，流动相B是含有10mmo l/L甲酸锭和0.1%的甲酸的异丙醇和乙睛(9：1,体积比)的混合溶液。进样量5L。柱温 40。洗脱梯度为：0 min,15%B；4 min,30%B；5 min,48%B；22 min,82%B；23-24 min,99%B；24.2-3 0 min,15%B。2.3.3质谱参数使用的质谱仪为 Th ermo Orbitrap Fusio n(Th ermo Fish er Scientific,Walth am,MA,河南工业大学硕士研究生学位论文第13页USA)质谱，离子源的工作参数设置如下：离子源类型，ESI源，扫描模式，正(+)离 子模式；喷雾电压，3500 v(+)3000 v(-)；离子转移管温度，320；蒸发器温度320。鞘气和辅助气均为氮气，鞘气流量为40arb,辅助气流量为5arb,扫气流量为Oarb。全面扫描的主要参数如下：MSI,Orbitrap分辨率:240 000；扫描范围，m/z 150-2000；射频透镜()，60；AGC目标1.0e6。MS?和MS?,激活类型，HCD；HCD碰撞能 量,355 eV；Orbitrap 分辨率：30 000：AGC target,5.0 e4。2.4数据分析使用 Xcalibur 软件(Th ermo Fish er Scientific,Walth am,MA,USA)进行质谱数 据分析，根据标准品一级分子离子精确质量数提取相应色谱峰，进一步提取相应的二 级、三级质谱，进行质谱碎片的结构解析。2.5结果与分析2.5.1甘油脂的裂解规律甘油脂可分为甘油一、二、三酯以及它们的糖基衍生物。由醛或乙烯酸连接的甘 油单酯、甘油二酯和甘油三酯在自然界中含量较低。目前对酸连接的甘油脂的裂解规 律尚不完全清楚，因此本章仅对酯连接的甘油脂的破碎特征进行讨论。在ESI模式下,即便是在含有有机酸的溶液中，甘油单酯、甘油二酯和甘油三酯也难以被非水溶剂通 过质子化形成离子化。但在正离子模式中，这些物质均易于被离子化为其镂、锂、钠 等加合物。甘油单酯是有丙三醇与酸脱水缩合形成的单酯化合物，广泛用于食品、药品和化 妆行业。从MG(18:1)的一级质谱图(图2-1)可以看出，MG(18:1)会产生 M+NH4-NH3+=3 56.3 510碎片离子，这是由于MG(18:1)形成了钱加合物并失去了一分 子氨。从MG(18:1)的二级质谱图可以看出,MG(18:1)会产生RxCO=26 5.0929、M+NH4-NH3+=3 56.3 507 M+NH4-NH3-H2O+=3 3 8.3 402 的二级碎片离子。负离子模式 下未响应。第14页河南工业大学硕士研究生学位论文(a)(b)图2-1 MG(18:1)的质谱图(a)MG(18:1)一级质谱图(b)m/z 3 56.3 510二级质谱图Fig.2-1 Mass spectra o fMG(18:l)甘油二酯是丙三醇与两个脂肪酸脱水缩合得到的酯化产物。天然的动植物油脂中 存在含量较低的甘油二酯。因其具有降低体脂、调节血脂、降低血糖的功效而受到人 们的广泛关注。在正离子模式下，从DG(18:0/18:0)的一级质谱图(图2-2)中可以看出，产生了 DG(18:0/18:0)的铁力口合物M+NH4=6 42.6 017。从二级质谱图中可以看出，产生了一个 脂肪酸酰基链碎片离子RxCO=26 7.26 74,DG(18:0/18:0)的铁加合物失去一分子氨和 一分子水产生M+NH4-NH3-H2O=6 07.56 42,DG(18:0/18:0)的铁加合物失去一分子脂 肪酸和一分子氨产生M+NH4-(RxCOOH+NH3)+=34L3036。负离子模式未响应。(a)(b)图 2-2 DG(18:0/18:0)的一、二、三质谱图(a)DG(18:0/18:0)一级质谱图(b)m/z 6 42.6 017 二级质谱 图Fig.2-2 Mass spectra o f DG(18:0/18:0)甘油三酯是丙三醇与三个脂肪酸脱水缩合形成的酯化产物，是为生物体储存和提 供能量的重要物质。因其具有重要的临床意义，人们对甘油三酯的研究就显得格外重 视。河南工业大学硕士研究生学位论文第15页从 TG(18:1/18:1/18:1)的一级质谱图(图 2-3)中可以看出，TG(18:1/18:1/18:1)4 正离子模式下产生镀加合物M+NH4=902.8146。从二级质谱图中可以看出，一个高强 度离子碎片 M+NH4-(RxCOOH+NH3)=6 03.53 25,来源于游离脂肪酸及一分子氨的丢 失。一个脂肪酸酰基链RxCO=26 5.2515。一个脂肪酸酰基链失去一分子水 RxO-H2O=247.2412TG(18:1/18:1/18:1)的镀加合物失去两分子脂肪酸和一分子氨的 丢失产生M+NH，RiCOOH-R2COOH-NH3+=339.2878o TG(18:1/18:1/18:1)的钱加合物 失去两分子脂肪酸、一分子氨和一分子水产生 M+NH4-RiCOOH-R2COOH-NH3-H2O+=321.2778o 从 6 03.53 52 的三级质谱可以看出，M+NH4-(RxCOOH+NH3)+=603.5325会进一步丢失一分子脂肪酸，产生 R)CO+=26 5.2515离子碎片，该离子碎片失去一分子水产生RCO-氏0=247.2412离 子碎片。负离子模式不响应。90381798918179M+NH/[phone] I .I907.7697904 8210 9087733906.8240 909 77631910.7801 913 7847 916 8304 918 8464900.7993(b)第16页河南工业大学硕士研究生学位论文(c)图 2-3 TG(18:1/18:1/18:1)的质谱图(a)TG(18:1/18:1/18:1)一级质谱图(b)m/z 902.8146 二级质谱 图(c)m/z 902.8146三级质谱图Fig.2-3 Mass spectra o fTG(18:1/18:1/18:1)2.5.2磷脂的裂解规律甘油磷脂是甘油中有一个羟基被磷酸或者磷酸盐酯化后形成的最常见一类磷脂，其中磷脂和磷酸盐以及连接的支链部分统称为头基，决定脂质的种类。虽然血小板活 化因子、溶血性甘油磷脂等脂质作为第二信使在生物系统中发挥重要的作用，但绝大 多数甘油磷脂主要作为细胞膜的重要组成部分，为膜蛋白正常功能的发挥提供基质或 者作为释放信号脂质分子的底物。甘油磷脂主要有PC、LPC、PE、LPE、PA、PG、PE、PL PS和SM这几种。实 验结果表明，在正离子模式下，磷脂会形成M+H的母离子。PC、LPC以及SM三 类具有相同磷酸胆碱头基的磷脂，在二级产物离子中，产生胆碱头基的特征离子碎片 Head+OH+H+(m/z 184.0719),进一步丢失N(CH3)3/在三级质谱产生特征碎片 Head+H+OH-N(CH3)3+(m/z 124.9989)。PE 会中性丢失磷酸头基形成 C3 H5O2+R1CO+R2c0+的结构碎片，C3 H5O2+R1CO+R2c0+进一步丢失脂肪酸酰连形 成C3 H5O2+RxCO+H、RxCO特征离子碎片，脂肪酸酰链碎片会进一步失水产生 RxCO-H2O+；C3 H5O2+R1CO+R2c0+在三级质谱中会形成与二级质谱中相同的特征碎 片。LPE的裂解规律与甘油磷脂PE基本一致，但由于其结构中只有一条脂肪酰基链，因此在二级质谱中产生结构碎片为C3 H6 O2+RCO、RCO和RCO-H2O+。河南工业大学硕士研究生学位论文第17页(al)(bl)(cl)(a2)第18页河南工业大学硕士研究生学位论文(b2)124 9990Head+OH+H-N(CH3)3184.07191008070602 5040?02010100q8070604030：j;10Head+OH+H+168 011713669185.0752(c2)703.57517M57797：)02乂9 718485 701 3308 702214270070121397028646703704.21047038663 I1 mz(a3)184 0732 Head+OH+HT1589540典7”签9514徼伪I7355 07 耍150200300705.5811二二汕 I型10?705706 5&M7075867707 TO84209444 4530997 502 4970 569 缚 的2 0190 6351623 哪 82,500550600700(b3)河南工业大学硕士研究生学位论文第19页 Head+OH+H-N(CH3)；r)图2-4正离子模式下PC、LPC和SM的一、二、三级质谱图Fig.2-4 Mass spectra o f PC LPC and SM in th e po sitive io n mo de(al)PC(3 6:4)的一级质谱图(bl)m/z 782.56 40的二级质谱图(cl)m/z 184.0719的三级质谱图(a2)LPC(18:0)的一级质谱图(b2)m/z 524.3 6 74的二级质谱图(c2)m/z 184.0720的三级质谱图(a3)SM(dl8:l/16:0)的一级质谱图(b3)m/z 703.5751的二级质谱图(c3)m/z 184.073 2的三级质谱图(a2)(b2)(c2)图2-5正离子模式下PE和LPE的一二三级质谱图Fig.2-5 Mass spectra o f PE and LPE in th e po sitive io n mo de(al)PE(18:1/18:1)的一级质谱图(bl)m/z 744.5486的二级质谱图(cl)m/z 6 03.5197的三级质谱图(a2)LPE(18:1)的一级质谱图(b2)m/z480.3 104的二级质谱图(c2)m/z 283.26 50的三级质谱图在负离子模式下，具有胆碱头基的PC、LPC以及SM三类磷脂生成母离子为 M+HCOO,其他磷脂则产生母离子为在二级质谱中，PC、PE、PG、PS、第20页 河南工业大学硕士研究生学位论文PI和PA这6类甘油磷脂，均产生两条脂肪酰基链碎片RiCOO1和R2co01，除此之 外，PE、PS、PG、PI和PA,均产生M-RxCO1以及与磷酸头基相关的特征碎片。其中，PC类磷脂形成M-CH3 1碎片以及磷酸头基特征碎片Head+OH-CH3 1(m/z 16 8.043 3)；PG 类和PE类形成Head+OH-H1特征离子碎片；PS类形成M-H-C3 H5NO2-特征离子碎片；PI类形成Head+OH-H-H2O1特征离子碎片。70驯1006875430/M0J1001：0 WI 40 H 呼+OH6HJ168 042640307尊翊 1788049 750 铲 3731617010膏484493141150 200 250 300 360 400 450 500 550 68nfz6164690(a3)(b3)图2-6负离子模式下LPC、PC和SM的一、二级质谱图Fig.2-6 Mass spectra o f LPC、PC and SM in th e negative io n mo de(al)LPC(18:0)的一级质谱图(bl)m/z 56 8.3 6 3 4的二级质谱图(a2)PC(3 6:4)的一级质谱图(b2)m/z826.56 29的二级质谱图(a3)SM(dl8:l/16:0)的一级质谱图(b3)m/z 747.56 46的二级质谱图河南工业大学硕士研究生学位论文第21页1CME(CijCOOl黑中 2,M 40 m已学.T?I酬 M0 刚 洌(a2)(b2)图2-7负离子模式下PE、PG和PA的一、二级质谱图Me的两Fig.2-7 Mass spectra o f PE、PG and PA in th e negative io n mo de(al)PE(18:1/18:1)的一级质谱图(bl)m/z 742.5411 的二级质谱图(a2)PG(17:0/20:4)的一级质谱图(b2)m/z 783.5153的二级质谱图(a3)PA(16:0/18:2)的一级质谱图(b3)m/z 6 71.46 74的二级质谱图(bl)(al)第22页河南工业大学硕士研究生学位论文(b2)(a2)图2-8负离子模式下PS和PI的一、二级质谱图Fig.2-8 Mass spectra o f PS and PI in th e negative io n mo de(al)PS(18:2/22:0)的一级质谱图(bl)m/z 842.5883的二级质谱图(a2)PI(16:0/18:1)的一级质谱图(b2)m/z 83 5.53 13的二级质谱图2.5.3鞘脂的裂解规律鞘脂是一类以长链鞘氨醇骨架为核心结构的脂质。这些鞘氨醇骨架来源于由丝氨 酸与长链脂肪酰辅酶A缩合而成的二氢鞘氨醇。二氢鞘氨醇由C2伯氨基的酰化反应 生成二氢神经酰胺，而后通过去饱和酶或转移酶作用转化为神经酰胺，鞘磷脂和鞘糖 脂等鞘脂物质。由图2-9和图2-10可以知道，在正离子模式下，鞘氨醇骨架（鞘氨醇和二氢鞘氨 醇）可以形成M+H的母离子，M+H-H2O+,M+H-2H2O+M+H-H2O-CH2O+-个主要的子离子。M+H-H2O和M+H-2H2。+分别表示的是母离子非特异性的脱去一 分子水和两分子水有关。M+H-H2O-CH2O表示的是母离子在脱去一分子水的基础上 还会脱去一分子甲醛。实验结果表明，质子化鞘氨醇与质子化二氢鞘氨醇的裂解规律 是基本相同的，其结构上的差异不会对其裂解方式产生明显影响。(a)河南工业大学硕士研究生学位论文第23页100q9二 9。匚8万 可，。日6二8 60：i 50：S.40：二三!H2O+M+H-H2O-CH2O+M+H/M+H-H2O-CH2O+(bl)(b2)2822767M+H-H2O+171 8284 192.49741TOS49|160 180 200241 2881(b3)图2-10正离子模式下Sph ingo sine(d 18:1)的一、二级质谱图(a)Sph ingo sine(d 18:1)的一级质谱图河南工业大学硕士研究生学位论文第25页(bl)m/z 252.26 6 5 的二级质谱图(b2)m/z 26 4.26 59 的二级质谱图(b3)m/z 282.276 7 的二级质谱图Fig.2-10 Mass spectra o f Sph inganine(dl8:l)in th e po sitive io n mo de由图2-11可以得知，神经酰胺在正离子模式下，容易形成(M+H+)的母离子，接着会非特异性丢失一分子水形成M+H-H2O的子离子，M+H-H2O这个碎片离子进 一步丢失一分子水形成一个中高强度的M+H-2H离子。第三种碎片离子与鞘氨醇 骨架特征有关，既由含有鞘氨醇的神经酰胺产生m/z 264和m/z 282,及由二氢鞘氨醇的神经酰胺产生的m/z 266和284。m/z 282和284离子分别由神经酰胺和二氢神经 酰胺的主要碎片离子M+H-H2OT通过丢失一分子中性脂肪酸烯酮而产生。而m/z 264 和266碎片离子则由m/z 282和284进一步丢失一分子水，或是由M+H-2H离子 通过丢失一分子脂肪酸烯酮而产生。在负离子模式下，神经酰胺能与负离子模式中存在于基质内的多种小阴离子加和 形成对应的加合物(即M+H1,x=某种小阴离子)。这些神经酰胺加合物在经HCD碎 裂后由子离子ESLMS分析得出的图谱仅显示有一个X离子和一个由丢失HX所产生的离子。M+H-3HQ-RxCOM+H-3H2O-RxCO+180 190 200 210ITft(bl)(b2)图 2-11 正离子模式下，C18Ceramide(dl8:l/18:0)的一、二级质谱图(a)C18Ceramide(dl8:l/18:0)的一级质谱图(bl)m/z 26 4.26 87的二级质谱图(b2)m/z 282.2792的二级质谱图M+H-2H,O-RXCO*M+H-2H,O-RXCO*第26页河南工业大学硕士研究生学位论文Fig.2-11 Mass spectra o f C18Ceramide(dl8:l/18:0)in th e po sitive io n mo de在正离子模式下，由鞘磷脂SM(dl8:l/16:0)的一级质谱图中可以看出，SM(dl8:l/16:0)会形成一个M+H=703.5751的母离子，从SM(dl8:l/16:0)的二级质谱图中 可以看出，SM(dl8:l/16:0)头基掉落形成了Head+OH+H=184.073 2的特征碎片离子，从SM(dl8:l/16:0)的三级质谱图中可以看出，Head+OH+H=184.073 2这个掉落的头 基会接着丢失一分子三甲基镂形成Head+OH+H-N(CH3)了=124.9997的特征碎片离子。负离子模式：鞘磷脂很容易形成阴离子加合物。经HCD碎裂后，其阴离子加合物的子 离子ESI-MS图谱中，显示一个由丢失一分子甲基而产生的M-CH31碎片离子。703.5751/M+H-100：9080704 5779衽J 70121391火 IJOO咨 了譬6 叫理，吗1,700 701 702 703704 21M703 觥 3|704705 5811704.8686 I705 7067055844V 707707.5867-1 1,i70810090a 301840732208070300 350 Head+OH+HT299 0617 35507M 420 9444 4530997 502.497Q 569 2卿 5920190 635.1623 688 82400 450 500 550nft600 660 700(b)124.9997 Head+OH-HNCH/1M,0731135 140 145呼呷百2155 160 惭 170 175 180图2-12正离子模式下，SM(dl8:l/16:0)的一、二、三级质谱图(a)SM 8:1/16:0)的一级质谱图(b)河南工业大学硕士研究生学位论文第27页m/z 703.5751的二级质谱图(c)m/z 184.073 2的三级质谱图Fig.2-12 Mass spectra o f SM(dl8:l/16:0)in th e po sitive io n mo de100：90 M+HCOO80 70605040748 5579302010749:5711100q90807060 50742瞥 743 蛾8 744,771 7U 8787 74乂831743 744745itfz7478358748 822974830相 750?43 7518170750 751 75240302010449 31416E85465150 200 250 300 350 400 450 500 550 600 650 700 750frtZ（b）图2-13负离子模式下，SM（dl8:l/16:0）的一、二级质谱图（a）SM（dl8:l/16:0）的一级质谱图（b）m/z 747.56 46的二级质谱图Fig.2-13 Mass spectra o f SM（dl8:l/16:0）in th e negative io n mo de由图2-14可以得知，神经鞘氨醇