基于标准汤剂的蔓荆子配方颗粒质量标准研究.pdf

质 量基于标准汤剂的蔓荆子配方颗粒质量标准研究曹桂云，宁 波，庄雪松，王岱杰，林永强，崔伟亮，董晓弟，罗 毅，孟兆青 山东宏济堂制药股份有限公司，山东省中医药治疗呼吸系统疾病技术创新中心，山东 济南；齐鲁工业大学（山东省科学院），山东省分析测试中心，山东 济南；山东省食品药品检验研究院，山东 济南 收稿日期：基金项目：科 技 部 中 央 引 导 地 方 科 技 发 展 资 金（）；山 东 省 重 点 研 发 计 划 重 大 科 技 创 新 工 程 项 目（）；泰山产业领军人才项目（）；泉城产业领军人才计划（）；泉城“”引才倍增计划（）作者简介：曹桂云（），女，博士，高级工程师，从事中药研发工作。：通信作者：孟兆青（），男，博士，高级工程师，从事中药研发工作。：摘要：目的 建立基于标准汤剂的蔓荆子配方颗粒质量标准。方法 建立 批标准汤剂、批配方颗粒 特征图谱。一测多评法测定原儿茶酸、对羟基苯甲酸、异荭草苷、穗花牡荆苷、蔓荆子黄素的含量，计算从饮片到标准汤剂、配方颗粒的转移率，再进行聚类分析、主成分分析。结果各批样品特征图谱中有 个共有峰，相似度均大于，指认出 个。标准汤剂、配方颗粒中 种成分含量、转移率接近。结论 蔓荆子配方颗粒、标准汤剂一致性良好。该方法合理可靠，可为蔓荆子配方颗粒质量控制、工艺优化提供参考。关键词：蔓荆子配方颗粒；蔓荆子标准汤剂；化学成分；特征图谱；一测多评中图分类号：文献标志码：文章编号：（）：，；，（），；，：（），：；（）年 月第 卷 第 期中 成 药 蔓荆子是马鞭草科植物单叶蔓荆 或蔓荆 的干燥成熟果实，为辛凉解表常用药，具有疏散风热、清利头目、止痛的功效。现代药理研究表明，蔓荆子中的黄酮类、酚酸类化合物具有抗炎、抗菌、抗氧化、改善认知功能、保护心血管和神经、抗肿瘤作用，是其有效物质。中药配方颗粒以炮制规范的单味中药为原材料，充分运用现代工艺进行制备，既能保证与传统汤剂一样随证加减，还可规避后者携带不便、煎煮繁琐等缺点，在一定程度上推动了中药剂型改革创新的进程。国家药典委员会于 年发布 中药配方颗粒质量控制与标准制定技术要求，指出中药配方颗粒以标准汤剂为与临床汤剂疗效基本一致的参照物，并明确以出膏率、特征图谱、指标成分含量、转移率等为表征，进一步衡量中药配方颗粒与标准汤剂的一致性。因此，本实验建立基于标准汤剂的蔓荆子配方颗粒质量标准，并考察该制剂与相关标准汤剂的一致性，以期为其质量控制、制备工艺研究提供参考。材料 仪器 高效液相色谱仪（美国 公司）；高效液相色谱仪（美国 公司）；冻干机（德国 公司）；数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；电子天平赛多利斯科学仪器（北京）有限公司；电子天平（瑞士 公司）；可调控温电热套（山东鄄城华鲁电热仪器有限公司）。试剂与药物蔓荆子黄素（批号，纯度 ）、异荭草苷（批号，纯度 ）对照品均购自中国食品药品检定研究院；原儿茶酸（批号，纯度 ）、对羟基苯甲酸（批号，纯度 ）对照品均购自上海诗丹德标准技术服务有限公司；穗花牡荆苷（批号，纯度 ）对照品购自上海源叶生物科技有限公司。蔓荆子配方颗粒（每 相当于 药材，批号、，由 批次药材制备，山东宏济堂制药集团股份有限公司）。蔓荆子共 批，经山东省食品药品检验研究院中药室林永强主任鉴定为马鞭草科植物单叶蔓荆 的干燥成熟果实，具体见表。色谱纯甲醇（国药集团化学试剂有限公司）；色谱纯磷酸（美国 公司）；分析纯甲醇（天津市富宇精细化工有限公司）；水为纯水 杭州娃哈哈有限公司、屈臣氏集团（香港）有限公司。表 样品信息 编号批号产地编号批号产地江西宜春江西九江江西上饶江西上饶江西九江江西九江江西九江安徽阜阳江西宜春浙江淳安江西上饶浙江淳安浙江淳安江西宜春江西九江 方法与结果 样品、溶液制备 标准汤剂冻干粉根据 中药配方颗粒质量控制与标准制定技术要求 采用砂锅煎煮，并结合现代临床用药习惯，将 批蔓荆子饮片捣碎，分别称取 ，煎煮 次，第 次加 倍量水浸泡 ，武火煮沸后改文火煎煮 ；第 次加 倍量水，武火煮沸后改文火煎煮 ，趁热过滤，合并滤液，浓缩，冷冻干燥，即得。对照品溶液精密称取原儿茶酸、对羟基苯甲酸、异荭草苷、穗花牡荆苷、蔓荆子黄素对照品适 量，甲 醇 制 成 质 量 浓 度 分 别 为 、的贮备液，精密吸取除蔓荆子黄素以外的贮备液适量，甲 醇 稀 释，摇 匀，制 成 质 量 浓 度 分 别 为、的溶液；精密吸取蔓荆子黄素贮备液适量，甲醇稀释，摇匀，制成质量浓度为 的溶液，即得。供试品溶液取蔓荆子配方颗粒或标准汤剂冻干粉适量，研细，取约 ，精密称定，置于具塞锥形瓶中，加入 甲醇，称定质量，加热回流提取 ，放冷，甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得（标准汤剂 批、配方颗粒 批）。色谱条件与系统适用性试验 色谱柱（，），以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相乙腈（）磷酸（），梯度洗脱（，；，；，）；体 年 月第 卷 第 期中 成 药 积流量 ；柱温 ；检测波长 。理论塔板数按蔓荆子黄素色谱峰计，应不低于。特征图谱建立 方法学考察 专属性试验取配方颗粒及相应辅料，按“”项下方法分别制备供试品、阴性样品溶液，在“”项色谱条件下进样测定，结果见图。由此可知，阴性无干扰，表明该方法专属性良好。注：分别为供试品、对照品、空白溶剂、阴性样品。图 特征图谱专属性色谱图 重复性试验按“”项下方法平行制备 份供试品溶液，在“”项色谱条件下进样测定，测得各共有峰相对保留时间 为 ，相 对 峰 面 积 为 ，表明该方法重复性良好。中间精密度试验由不同分析人员在不同时间采用另一台仪器进行操作，测得各共有峰相 对保留时间 为 ，相对峰面积 为 ，表明该方法中间精密度良好。稳定性试验取同一份供试品溶液，于、在“”项色谱条件下进样测定，测得各共有峰相对保留时间 为 ，相 对 峰 面 积 为 ，表明溶液在 内稳定性良好。耐用性试验分别采用 、色谱仪及 根色谱柱测定同一份供试品溶液，测得各共有峰相对保留时间 为 ，相 对 峰 面 积 为 ；分别采用不同体积流量、柱温测定同一份供试品溶液，测得两者 分别为 、，表 明 该 方 法 耐 用 性良好。图谱生成 取 批标准汤剂、批配方颗粒，按“”项下方法制备供试品溶液，在“”项色谱条件下进样测定，将数据导入“中药色谱指纹图谱相似度评价系统（版）”，结果见图。以标准汤剂（）特征图谱为参照，选择出峰稳定、峰形和分离度较好的 个共有峰作为特征峰，与对照品比对后，确定峰、分别为原儿茶酸、对羟基苯甲酸、异荭草苷、穗花牡荆苷、蔓荆子黄素，见图。采用多点校正后，对共有峰进行 匹配、相似度分析，结果见表，可知均大于 ，表明标准汤剂与配方颗粒之间的相似度良好。注：为标准汤剂，为配方颗粒。图 批标准汤剂、批配方颗粒 特征图谱 以峰 为参照（），测得各共有峰相对保留时间 为 ，并且其差异较小，均在 范围内，故选择其平均值作为测定值，分别为 （峰）、（峰）、（峰 年 月第 卷 第 期中 成 药 原儿茶酸 对羟基苯甲酸 异荭草苷 穗花牡荆苷（）蔓荆子黄素 （）图 对照特征图谱 ）、（峰）、（峰）、（峰）。另 外，各 共 有 峰 相 对 峰 面 积 差 异 较大，见表，故不限定其特征图谱的相对峰面积范围。比较 批配方颗粒（、）及相应标准汤剂（）的特征图谱，发现前三者均呈现与后者相同的 个共有峰，并且相对保留时间基本一致；批配方颗粒与相应标准汤剂共有峰的相对峰面积无明显差异，相似度均大于 ，表明现行生产制造工艺能使蔓荆子特征图谱量值得到稳定传递，从而保证配方颗粒与标准汤剂的一致性。各成分含量测定 采用一测多评法。方法学考察 专属性试验取配方颗粒及相应辅料，按“”项下方法分别制备供试品、阴性样品溶液。取供试品、对照品、阴性样品溶液及空白溶剂适量，在“”项色谱条件下进样测定，结果见图。由此可知，阴性无干扰，表明该方法专属性良好。线性关系考察精密吸取对照品溶液适量，依次稀释、倍，在“”项色谱条件下进样测定。以对照品质量浓度为横坐标（），峰面积为纵坐标（）进行回归，结果见表，可知各成分在各自范围内线性关系良好。重复性试验 取配方颗粒 份，按“”项下方法制备供试品溶液，在“”项色谱条件下进样测定，测得原儿茶酸、对羟基苯甲酸、异荭草苷、穗花牡荆苷、蔓荆子黄素含量 分 别 为 、，表明该方法重复性良好。中间精密度试验由不同分析人员在不同时间采用不同仪器进行操作，测得原儿茶酸、对羟基苯甲酸、异荭草苷、穗花牡荆苷、蔓荆子黄素含 量分 别 为 、，表明该方法中间精密度良好。表 批标准汤剂、批配方颗粒相似度 编号 （）年 月第 卷 第 期中 成 药 表 共有峰相对保留时间、相对峰面积 编号峰 峰 峰 峰 峰 峰 峰（）相对保留时间相对峰面积相对保留时间相对峰面积相对保留时间相对峰面积相对保留时间相对峰面积相对保留时间相对峰面积相对保留时间相对峰面积相对保留时间相对峰面积 平均值 原儿茶酸 对羟基苯甲酸 异荭草苷 穗花牡荆苷 蔓荆子黄素 图 含量测定专属性色谱图 表 各成分线性关系 成分回归方程线性范围（）原儿茶酸 对羟基苯甲酸 异荭草苷 穗花牡荆苷 蔓荆子黄素 稳定性试验取同一份供试品溶液，于、在“”项色谱条件下进样测定，测得原儿茶酸、对羟基苯甲酸、异荭草苷、穗花牡荆苷、蔓荆子黄素含量 分别为 、，表 明溶液在 内稳定性良好。加样回收率试验 取 份配方颗粒粉末，每份约 ，精密称定，加入适量对照品溶液，在“”项色谱条件下进样测定，计算回收率。结果，原儿茶酸、对羟基苯甲酸、异荭草苷、穗花牡荆苷、蔓荆子黄素加样回收率分别为 、。相对校正因子计算 以蔓荆子黄素为内标，计算原儿茶酸、对羟基苯甲酸、异荭草苷、穗花牡荆苷 相 对 校 正 因 子 ，公 式 为 （）（），其中 为其他成分含量，为其他成分峰面积，为内标含量，为内标峰面积，结果见表。耐用性考察 仪器、色谱柱本实验考察了、色谱仪及 根色谱柱对相对校正因子的影响，结果见表，可知均无明显影响（）。体积流量、柱温本实验考察了体积流量 、及柱温、对相对校正因子的影响，结果见表，可知均无明显影响（）。年 月第 卷 第 期中 成 药 表 各成分相对校正因子 序号相对校正因子蔓荆子黄素 原儿茶酸蔓荆子黄素 对羟基苯甲酸蔓荆子黄素 异荭草苷蔓荆子黄素 穗花牡荆苷 平均值 表 不同仪器、色谱柱对相对校正因子的影响 仪器色谱柱蔓荆子黄素 原儿茶酸蔓荆子黄素 对羟基苯甲酸蔓荆子黄素 异荭草苷蔓荆子黄素 穗花牡荆苷（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）平均值 表 不同体积流量、柱温对相对校正因子的影响 体积流量（）柱温 蔓荆子黄素 原儿茶酸蔓荆子黄素 对羟基苯甲酸蔓荆子黄素 异荭草苷蔓荆子黄素 穗花牡荆苷 色谱峰定位 计算各成分相对保留值、相对保留时间差，并考察两者在不同仪器、色谱柱上的重复性，结果见表，可知保留时间差波动较小，故选择其平均值作为峰定位依据。表 各成分相对保留值、相对保留时间差 仪器色谱柱原儿茶酸蔓荆子黄素原儿茶酸蔓荆子黄素对羟基苯甲酸蔓荆子黄素对羟基苯甲酸蔓荆子黄素异荭草苷蔓荆子黄素异荭草苷蔓荆子黄素穗花牡荆苷蔓荆子黄素穗花牡荆苷蔓荆子黄素（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）平均值 样品含量测定 分别采用一测多评法、外标法计算各成分含量，结果见表。由此可知，种方法所得结果无明显差异，相对误差（），表明一测多评方法准确可靠，可用于含量测定。年 月第 卷 第 期中 成 药 表 各成分含量测定结果（）（）样品批号蔓荆子黄素原儿茶酸对羟基苯甲酸异荭草苷穗花牡荆苷外标法一测多评法 外标法一测多评法 外标法一测多评法 外标法一测多评法 蔓荆子标 准汤剂冻 干粉 蔓荆子配 方颗粒 一致性研究 取 批蔓荆子，每批约 ，精密称定，置于具塞锥形瓶中，加入 甲醇，称定质量，加热回流提取 ，放冷，甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，在“”项色谱条件下进样测定，计算原儿茶酸、对羟基苯甲酸、异荭草苷、穗花牡荆苷含量；按照 年版 中国药典 方法，计算蔓荆子黄素含量，再按表 结果计算标准汤剂转移率，结果见表。各成分含量均取 倍标准差的平均值范围，则 批配方颗粒折算后分别为 、，修正后分别为 、，具体见表，并且各成分转移率均在标准汤剂转移率平均值的 范围内，表明其制备工艺较为合理。化学计量学研究 聚类分析 采用 软件对 批标准汤剂中各成分含量进行聚类分析，结果见图。由此可知，当刻度距离为 时可分为 类，、为一类，含量均较低；、为一类，含量均较高，表明不同批次饮片制成标准汤剂后各成分含量有一定差异，但不同产地饮片无明显聚集性。主成分分析采用 软件对 图 批标准汤剂聚类分析图 批标准汤剂中各成分含量进行主成分分析，结果见表、图。由此可知，各批标准汤剂分布较离散，可能与各成分含量差异有关，与“”项下结果一致。讨论研究表明，单叶蔓荆子中总黄酮、紫花牡荆素、蔓荆子黄素含量明显高于三叶蔓荆子中，镇痛、镇静作用明显更强，并且市场流通、临床应用也以其为主。综合考虑，本实验选择药材基源为单叶蔓荆干燥成熟果实。年 月第 卷 第 期中 成 药 表 标准汤剂中各成分含量、转移率测定结果 批号药材中含量（）原儿茶酸对羟基苯甲酸异荭草苷穗花牡荆苷蔓荆子黄素出膏率标准汤剂中含量（）转移率 原儿茶酸对羟基苯甲酸异荭草苷穗花牡荆苷蔓荆子黄素原儿茶酸对羟基苯甲酸异荭草苷穗花牡荆苷蔓荆子黄素制成量按制成量换算配方颗粒中含量（）原儿茶酸对羟基苯甲酸异荭草苷穗花牡荆苷蔓荆子黄素 平均值 平均值标准差 平均值 倍标准差 平均值 倍标准差 平均值 表 配方颗粒中各成分含量、转移率测定结果 批号对应药材批号出膏率 含量（）转移率 原儿茶酸对羟基苯甲酸异荭草苷穗花牡荆苷蔓荆子黄素原儿茶酸对羟基苯甲酸异荭草苷穗花牡荆苷蔓荆子黄素 年 月第 卷 第 期中 成 药 表 主成分特征值、方差贡献率 主成分特征值方差贡献率 累积方差贡献率 表 主成分得分系数矩阵 编号主成分 得分主成分 得分编号主成分 得分主成分 得分 图 标准汤剂碎石图 图 标准汤剂主成分得分图 本实验发现，蔓荆子配方颗粒 特征图谱中呈现与相应标准汤剂相同的 个共有峰，相似度均大于 ，表明现行生产工艺能使该药材特征图谱得到稳定传递；峰、分别为原儿茶酸、对羟基苯甲酸、异荭草苷、穗花牡荆苷、蔓荆子黄素，其中原儿茶酸具有抗菌、抗炎、抗氧化、抑 制 肝 肺 损 伤、神 经 保 护、抗 肿 瘤 等 作用，异荭草苷、穗花牡荆苷、蔓荆子黄素具有抗炎、抗肿瘤、改善代谢并发症、促血管生成、神经保护等活性，均为蔓荆子配方颗粒主要有效成分。一测多评法灵敏度高，重复性好，可在对照品紧缺的情况下实现多成分含量测定的要求，具有一定推广价值。本实验采用该方法测定蔓荆子标准汤剂、配方颗粒中 种指标成分含量，发现相关数据合理，并且转移率、配方颗粒出膏率均在标准汤剂转移率、出膏率平均值 范围内，表明该制备工艺合理可行。结论本实验以蔓荆子标准汤剂出膏率、特征图谱、种指标成分含量、转移率为表征，多维度衡量了蔓荆子配方颗粒与标准汤剂的一致性，能全面反映前者内在质量，从而为其临床应用提供理论基础。参考文献：国家药典委员会 中华人民共和国药典：年版一部 北京：中国医药科技出版社，：房士明，樊官伟，姚进龙，等 蔓荆的化学成分及药理活性研究进展 中草药，（）：岳佑凇，张 璐，谢梦迪，等 茯苓传统汤剂与配方颗粒汤剂化学成分的对比研究 中草药，（）：刘燎原，曾昭君，张雪兰，等 基于标准汤剂的鲜鱼腥草配方颗粒质量标准研究 中药材，（）：胡 坪，桑情妮，牛丽源，等 栀子标准汤剂的量值传递规律 中成药，（）：孙艺琦 中药蔓荆子基源植物的亲缘关系及品质评价研究 沈阳：辽宁中医药大学，：，：，：，（）：，年 月第 卷 第 期中 成 药 ，（）：，：，：，（）：，（），（）：，：，：，：，：，（）：，：，：，：，：，（）：，：，：法同时测定芩黄喉症胶囊中 种成分梁秀坤，许学丽，崔 帅，李漫漫，王洪明，滨州市检验检测中心，山东 滨州；滨州市化学药物研发与质量控制重点实验室（筹），山东 滨州；汶上县白石医院，山东 济宁 收稿日期：作者简介：梁秀坤（），女，硕士，主管中药师，研究方向为中药质量控制。：，：摘要：目的 建立 法同时测定芩黄喉症胶囊中栀子苷、盐酸小檗碱、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、芦荟大黄素、汉黄芩素、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量。方法该药物甲醇提取液的分析采用 色谱柱（，）；流动相乙腈甲醇 磷酸，梯度洗脱；体积流量 ；柱温 ；检测波长。结果 种成分在各自范围内线性关系良好（），平均加样回收率 ，。结论 该方法简便灵敏，重复性好，可用于芩黄喉症胶囊的质量控制。关键词：芩黄喉症胶囊；化学成分；中图分类号：文献标志码：文章编号：（）：年 月第 卷 第 期中 成 药