DBNL蛋白影响A型流感病毒复制机制的研究.pdf

中国预防兽医学报Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine第 45 卷 第 11 期2023 年 11 月Vol.45，No.11Nov.2023doi院10.3969/j.issn.1008-0589.202303023DBNL蛋白影响A型流感病毒复制机制的研究孟德锦，李奇兵，胡玉珍，王一涵，王波，石文军，单智博，姜丽，陈化兰，李呈军*(中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 兽医生物技术国家重点实验室/农业农村部动物流感重点开放实验室，黑龙江 哈尔滨 150069)摘要：A型流感病毒(IAV)在宿主细胞内复制过程中需要许多宿主因子的参与，同时IAV也能调控多种宿主因子的表达。为寻找调控IAV复制的宿主因子，本研究通过SDS-PAGE电泳检测发现H1N1亚型流感病毒A/WSN/1933株(简写为WSN)感染A549细胞会上调表达55 ku左右的特异蛋白条带(感染后9 h)，将该55 ku左右的蛋白条带切胶回收后进行质谱分析，根据质谱分析的筛选标准选择蛋白得分(Mass score)较高、谱图数(Matches)和序列数(Sequences)较为可信的宿主因子DBNL作为调控IAV复制的潜在研究对象进一步研究。本研究针对DBNL设计特异的siRNA和对照Scrambled siRNA，将其分别转染A549细胞，通过荧光定量PCR确定DBNL siRNA在转录水平的干扰效果显著；利用细胞活力测定试验确定DBNL siRNA的干扰不影响细胞活力。利用DBNL siRNA下调表达A549细胞中的DBNL后，以WSN感染该细胞，在感染后24 h、48 h分别收集细胞上清，利用MDCK细胞进行噬斑滴定试验。试验结果显示，与对照组相比，下调表达DBNL后IAV的滴度极显著降低(0.01)，表明下调表达DBNL能够抑制A549细胞中的IAV复制。利用siRNA下调表达A549细胞中的DBNL后，以WSN感染A549细胞，采用激光共聚焦试验鉴定IAV NP蛋白的表达与定位情况。结果显示，在病毒感染后6 h，对照组中红色荧光集中分布在细胞质中，而DBNL siRNA组中红色荧光在细胞核与细胞质中均有分布，表明下调表达DBNL能够抑制细胞中IAV NP蛋白的出核。反之，通过转染过表达DBNL的重组质粒，以WSN感染A549细胞，采用激光共聚焦试验鉴定IAV NP蛋白的表达与定位情况。结果显示，在病毒感染后4 h，转染pCAGGS的对照组中红色荧光主要分布在细胞核中，而过表达DBNL组中的红色荧光在细胞核与细胞质中均有分布，表明过表达DBNL能够促进细胞中IAVNP蛋白的出核。以上研究结果证实DBNL正调控IAV的复制与其NP蛋白的出核。本研究丰富了DBNL功能的多样性，为宿主因子调控IAV复制的研究提供参考数据。关键词：流感病毒；DBNL蛋白；NP蛋白中图分类号：S852.65文献标识码：A文章编号：1008-0589(2023)11-1095-06Study on the mechanism of DBNL protein affecting influenza Avirus replicationMENG De-jin,LI Qi-bing,HU Yu-zhen,WANG Yi-han,WANG Bo,SHI Wen-jun,SHAN Zhi-bo,JIANG Li,CHEN Hua-lan,LI Cheng-jun*(Animal Influenza Key Laboratory of the Ministry of Agriculture and Rural Affairs,State Key Laboratory of Veterinary Biotechnology,Harbin Veterinary Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Harbin 150069,China)Abstract:Replication of influenza A virus(IAV)in host cells requires the involvement of numerous host infectors whose收稿日期：2023-03-20基金项目：国家自然科学基金(32192453)作者简介：孟德锦(2000-)，男，山东菏泽人，硕士研究生，主要从事流感病毒与宿主相互作用的研究.*通信作者：E-mail：*Corresponding author流感病毒属于正黏病毒科流感病毒属，是有囊膜的单股负链RNA病毒，分为A(甲)、B(乙)、C(丙)、D(丁)四型。A型流感病毒(IAV)基因组由8 个RNA节段组成，能编码10 种必需蛋白(PB2、PB1、PA、HA、NP、NA、M1、M2、NS1、NEP/NS2)和多种非必需附件蛋白(PB1-F2、PA-X等)1-3。流感病毒在宿主细胞的复制过程中，需要多种宿主因子协助参与。例如流感病毒吸附阶段需要唾液酸受体、C 型 凝 集 素(C-type lectins)等 的 参 与，肌 动 蛋 白(Actin)、网格蛋白(Clathrin)等协助流感病毒内化4，输入蛋白(Importin)等参与流感病毒核糖核蛋白复合体的入核阶段5。同时，流感病毒复制也会调控宿主因子的表达，例如流感病毒能够诱导宿主PKR、OAS1蛋白的表达，发挥抑制病毒复制的作用6。本研究通过质谱分析得到流感病毒感染后诱导表达的宿主因子Drebrin样蛋白(Drebrin like protein，DBNL)，并进一步开展DBNL影响流感病毒复制的相关研究。DBNL 又 称 ABP1、HIP55 或 SH3P7，是 Abp1/Drebrins家族蛋白的成员。DBNL最早被发现于神经元中，后来发现在其他组织细胞中也有广泛表达7。DBNL能够通过其富含脯氨酸的羧基端和SH3结构域与其他蛋白相互作用。DBNL是F-肌动蛋白和DNM1的衔接蛋白，从而在受体介导的内吞作用中发挥作用8。DBNL对巨噬细胞、多形核中性粒细胞和B淋巴细胞的生物学功能发挥重要作用9。DBNL在肥大细胞和B细胞中表达，在T细胞中不表达，但能调节T细胞的活化以及组胺的释放。DBNL还能够通过调节病毒突触处的肌动蛋白聚合，负调控HIV-1感染CD4+T淋巴细胞10。目前DBNL调控病毒复制的相关研究较少，且尚无DBNL参与流感病毒复制的相关报道。本研究发现流感病毒感染后上调55 ku附近的蛋白表达，经质谱分析，结合蛋白得分(Score)、expression is in turn regulated by virus infection.To search for host factors that regulate influenza virus replication,we found thatinfluenza virus infection upregulated the expression of specific proteins with a band of around 55ku in A549 cells 9 hours afterinfection.After SDS-PAGE,the protein band of approximately 55ku was extracted for mass spectrometry analysis.According tothe screening criteria for mass spectrometry analysis,the host factor DBNL with a high mass score,relatively reliable Matches andSequences was selected as a potential research object of regulating IAV replication for further research.In this study,the specificsiRNA and control Scrambled siRNA for DBNL were designed,and transfected into A549 cells,respectively.The transcriptionlevel of DBNL was detected by relative fluorescent quantitative PCR.The results showed that compared with the control group,DBNL siRNA significantly decreased the transcription level of DBNL in A549 cells,and DBNL siRNA interference had nosignificant impact on cell viability.The results indicated that DBNL siRNA could downregulate the expression of DBNL withoutimpairing cell viability.After knocking down the expression of DBNL by siRNA,A549 cells were infected with H1N1 influenzavirus,and the cell supernatant was collected at 24 hours and 48 hours post infection and subjected to plaque titration using MDCKcells.Plaque titration test showed that the titer of IAV significantly decreased after down-regulation of DBNL compared to thecontrol group(0.01).The results indicated that downregulating the expression of DBNL inhibited IAV replication.Afterknocking down the expression of DBNL using siRNA,we use indirect immunofluorescence assay(IFA)to observe the expressionand localization of IAV NP protein.The results showed that the red fluorescence was concentrated in the cytoplasm in the controlgroup,while distributed in both the nucleus and cytoplasm in the DBNL interference group at 6 hours post virus infection.Theresults indicated that downregulation of DBNL expression inhibited NP protein export from the nucleus.Similarly,A549 cells weretransfected with the DBNL recombinant plasmid,and then infected with IAV,and the expression and localization of IAV NPprotein were observed using IFA.The results showed that at 4 hours after virus infection,red fluorescence was mainly distributedin the nucleus in the control group,while in the DBNL overexpression group,red fluorescence was distributed in both the nucleusand cytoplasm.The results indicated that overexpression of DBNL could promote the export of IAV NP protein from nucleus.Together,the above results demonstrated that DBNL promotes the nuclear export of IAV NP,thereby positively regulates thereplication of IAV.This study enriched the functional diversity of DBNL and could provide reference for the study of host factorsregulating IAV replication.Key words:influenza virus;DBNL protein;NP protein中 国 预 防 兽 医 学 报2023 年1096谱图数(Matches)、序列数(Sequences)等参考标准选择质谱结果中的DBNL作为研究对象，探究DBNL对IAV复制的调控以及调控IAV复制的机制，以期进一步完善调控IAV复制的宿主因子网络。1材料与方法1.1主要实验材料H1N1亚型流感病毒A/WSN/1933株(简写为WSN)、MDCK细胞、A549细胞和pCAGGS载体质粒由本实验室保存；DBNL siRNA和对照Scrambled siRNA由吉玛生物科技有限公司合成；Lipofectamine RNAiMAX 转 染 试 剂 和 Lipofec-tamine 2000转染试剂购自ThermoFisher公司；10%蛋白预混胶购自上海雅酶生物科技有限公司；5伊蛋白上样缓冲液购自上海碧云天生物科技有限公司；核酶购自新海基因检测有限公司；R I和I限制性核酸内切酶购自NEB公司；Clon Express II同源重组试剂盒购自南京诺唯赞生物科技股份有限公司；兔源Myc多克隆抗体购自金斯瑞生物科技有限公司；鼠源NP多克隆抗体由本实验室制备；CellTiter-Glokit细胞活力检测试剂盒购自Promega公司；山羊抗鼠IgG-FITC和山羊抗兔IgG-Cy5购自KPL公司。1.2引物的设计与合成在GenBank中下载人源DBNL(Gene ID：28988)基因序列，利用Primer Pre-mier 5设计特异的同源重组引物以及荧光定量PCR(qPCR)引物，引物序列见表1。1.3IAV感染后对55 ku附近表达上调蛋白的质谱分析将生长状况良好的A549细胞铺于12孔板，待细胞生长至密度约80%时，以MOI 10的WSN感染A549细胞，置于37 培养箱培养，分别于感染后的0(Mock组)、3 h、6 h、9 h收集细胞，加入100 滋L 1伊蛋白上样缓冲液裂解细胞。收集细胞裂解液，于95 加热变性后进行SDS-PAGE电泳，切胶回收位于IAVNP蛋白(55 ku)下方，且在病毒感染后9 h表达上调的蛋白条带，由北京华大蛋白质研发中心有限公司进行质谱分析。对质谱结果处理分析，选取以下指标作为评价标准，蛋白得分：分值越高可信度越大；谱图数：括号外为总谱图数，括号内为可信的谱图数，可信谱图数比例越高，可信度越大；序列数：括号外为总序列数，括号内为可信序列数，可信序列数比例越高，可信度越大。综合上述评价标准，筛选出宿主因子DBNL进一步展开研究。1.4重组质粒的构建及鉴定提取A549细胞总RNA，经反转录得到cDNA作为模板，利用表1中DBNL基因的同源重组引物经PCR扩增DBNL基因片段，将pCAGGS-Myc载体质粒经R I和I酶切后，利 用 Clon Express II 同 源 重 组 试 剂 盒 构 建pDBNL-Myc表达质粒。经PCR鉴定的阳性质粒通过测序进一步确定其序列。1.5DBNL siRNA的干扰效果检测及干扰DBNL的表达后对细胞活力的检测根据GenBank中人源DBNL基因序列设计DBNL siRNA和对照ScrambledsiRNA(表2)。将生长状态良好的A549细胞按照细胞数 比 例 1 颐3 铺 至 12 孔 板 中，利 用 LipofectamineRNAiMAX转染试剂分别将DBNL siRNA和ScrambledsiRNA转染A549细胞。36 h后提取细胞总RNA，反转录为cDNA后作为模板。根据表1中DBNL基因的qPCR引物，利用SYBR Green I qPCR检测。qPCR反应程序如下：95 10 min；95 15 s、60 60 s，40个循环；融解曲线：95 15 s，60 60 s，95 10 s。分析结果，检测转录水平上DBNL siRNA的干扰效果。分别将DBNL siRNA和Scrambled siRNA转染A549细胞，在干扰后36 h，利用细胞活力检测试剂盒检测下调表达DBNL后对细胞活力的影响。1.6siRNA干扰DBNL后IAV滴度的检测分别将DBNL siRNA和Scrambled siRNA转染A549细胞，干扰后36 h利用WSN感染细胞。分别于感染后24 h、48 h 收集细胞上清，将细胞上清10倍倍比稀释，利用MDCK细胞进行噬斑滴定试验，统计并计算噬斑表1DBNL基因的同源重组引物和qPCR引物名称NameDBNL-FDBNL-RqPCR-DBNL-FqPCR-DBNL-R序列(5-3)Sequence(5-3)GCTGTCTCATCATTTTGGCAAAGAATTCATGGCGGCGAACCTGAGCCGTTTGTTCTGCGGCCGCGCTAGCCTCGAGCTCAATGAGCTCCACGTAGTTCCTATGAAGGCAACAGCAATAATTTGGGCAGTCCAGAGTT表2siRNA序列siRNAScrambled-senseScrambled-antisenseDBNL-senseDBNL-antisenseSequence(5-3)UUCUCCGAACGUGUCACGUTTACGUGACACGUUCGGAGAATTUUCAUAGGUAAAGAGAGCCTTUUCAUAGGUAAAGAGAGCCTT孟德锦，等.DBNL蛋白影响A型流感病毒复制机制的研究第 11 期1097图1流感病毒感染上调55 ku附近蛋白表达的SDS-PAGE检测形成单位(PFU)，利用GraphPad Prism 8进行数据的分析和绘图。1.7siRNA干扰DBNL后NP蛋白表达与定位的激光共聚焦检测将A549细胞铺于激光共聚焦小皿，置于37 培养箱，待细胞生长至密度为80%时，分别转染DBNL siRNA和Scrambled siRNA。在干扰后24 h，以MOI 5的WSN感染A549细胞。感染后0、2 h、4 h、6 h时利用4%的多聚甲醛在室温固定30 min，0.1%Triton X-100通透处理20 min，5%脱脂乳封闭1 h后，以鼠源NP多克隆抗体(1颐500)和兔源Myc多克隆标签抗 体(1 颐300)为 一 抗，山 羊 抗 鼠 IgG-FITC(1颐400)和山羊抗兔IgG-Cy5(1颐400)为二抗，以DAPI(1颐500)对细胞染核，通过激光共聚焦显微镜观察下调表达DBNL对IAV NP蛋白表达和定位的影响。1.8过表达DBNL后NP蛋白表达与定位的激光共聚焦检测将A549细胞铺于激光共聚焦小皿中，置于37 培养箱，待细胞生长至密度为80%时，利用Lipofectamine 2000转染试剂分别转染pDBNL-Myc表达质粒和pCAGGS载体质粒。继续培养24 h后以MOI5的WSN感染A549细胞，在感染后的0、2 h、4 h、6 h固定细胞并根据1.7中的步骤进行后续操作，通过激光共聚焦显微镜观察过表达DBNL对流感病毒NP蛋白表达和定位的影响。2结果2.1IAV感染后对55 ku附近表达上调蛋白的质谱分析结果以MOI 10的WSN感染A549细胞，分别在感染 后 的 不 同 时 间 点 裂 解 细 胞，收 集 样 品 进 行SDS-PAGE电泳。LI-COROdyssey扫描结果显示在55ku附近流感病毒NP蛋白(大小为55 ku)下方，发现在病毒感染9 h后与Mock组相比表达明显上调的特异性蛋白条带(图1)，切胶回收后由北京华大蛋白质研发中心有限公司进行质谱分析。经质谱分析，宿主因子DBNL的蛋白得分较高(135)，可信谱图数比例75%(3/4)，且可信序列数比例100%(2/2)，因此选择宿主因子DBNL作为研究对象展开进一步研究。2.2DBNL siRNA的干扰效果检测、干扰后对细胞活力的检测以及干扰后IAV滴度的检测结果利用Lipofectamine RNAiMAX转染试剂将DBNL siRNA和对照Scrambled siRNA分别转染A549细胞，于干扰后36 h提取细胞总RNA反转录为cDNA作为模板，采用qPCR检测DBNL siRNA在转录水平的干扰效果。结果显示，与对照 Scrambled siRNA组 相比，DBNLsiRNA组极显著下调 A549细 胞DBNL的 转录水 平(0.0001)(图2A)。利用siRNA下调表达DBNL后，检测A549细胞的细胞活力。结果显示与ScrambledsiRNA组相比，DBNL siRNA组细胞活力无明显差异(图2B)。以MOI 0.01的WSN感染siRNA干扰后的细胞，分别于24 h、48 h收集细胞上清进行噬斑滴定。结果显示，与Scrambled siRNA组相比，DBNL siR-NA组IAV滴度在感染后24 h和48 h均极显著降低(0.01)(图2C)。上述结果表明，DBNL siRNA的干扰效果良好，且不影响细胞活力，下调表达DBNL能够抑制IAV的复制。*:0.01,*:0.0001A：siRNA干扰效率检测；B：细胞活力测定；C：siRNA干扰DBNL后流感病毒的噬斑滴定结果A:siRNA interference efficiency;B:Cell viability determination;C:Plaque titration detection of influenza virus infections after siRNAinterference with DBNL图2下调表达DBNL后细胞活力及流感病毒滴度测定结果Marker Mock3hpi6hpi9hpi72ku55ku45kuNPTarget protein bandScrambled siRNADBNL siRNA24hpi48hpi6543210C150100500150100500ABns中 国 预 防 兽 医 学 报2023 年1098*2.3siRNA干扰DBNL后NP蛋白表达与定位的激光共聚焦检测结果以MOI 5 的WSN感染siRNA干扰后的细胞，在感染后的不同时间点固定细胞进行激光共聚焦检测。结果显示：在病毒感染后的4 h，Scrambled siRNA对照组和DPNL siRNA组中红色荧光的定位无明显差异，在细胞核与细胞质中均可观察 到 红 色 荧 光(图 3A)；而 在 IAV 感 染 后 的 6 h，Scrambled siRNA对照组中红色荧光几乎全部分布于细胞质中，DPNL siRNA组则在细胞核与细胞质中均能 观察到 红色荧 光(图 3B)。结 果 表 明 下 调 表 达DBNL后能够抑制IAV NP蛋白的出核。2.4过表达DBNL后NP蛋白表达与定位的激光共聚焦检测结果利用1.3中的方法构建的pDBNL-Myc重组表达质粒，经PCR鉴定筛选得到阳性质粒并通过测序进一步确定其序列(图略)。采用Lipofectamine2000转染试 剂分别 将pDBNL-Myc和 pCAGGS转染A549细胞。转染后24 h，以MOI 5的WSN感染细胞。在感染后的不同时间点固定细胞进行激光共聚焦检测。结果显示：在IAV感染后4 h，pCAGGS转染组中，红色荧光几乎全部分布于感染细胞的细胞核内；在pDBNL-Myc转染组中，红色荧光不仅在细胞核内有分布，在部分细胞的细胞质中也有分布(图4)。结果表明过表达DBNL能够促进流感病毒NP蛋白的出核。3讨论流感病毒感染宿主细胞后的复制过程十分复杂，大致可分为病毒吸附细胞、细胞吞入病毒粒子后进入内体、内体运输(早期内体和晚期内体)、酸化后病毒与内体膜融合、病毒脱衣壳后病毒核糖核蛋白(vRNP)入核、转录与复制、vRNP出核、病毒装配与出芽11。细胞内的多种宿主因子能够参与流感病毒的复制过程12-14。例如流感病毒能激活酪氨酸激酶受体(RTK)，进一步激活肌动蛋白，促进微丝重建，从而促进宿主细胞以巨胞饮的方式吞入病毒粒子15。并且在感染过程中，流感病毒也能够调控某些宿主因子的表达。例如流感病毒感染上调宿主因子PLSCR1的表达，并在与流感病毒NP蛋白及琢输入蛋白(Importin-琢)形成复合体后阻碍茁输入蛋白(Im-portin-茁)的进一步结合，从而抑制NP蛋白入核，抑制流感病毒复制5,16。本研究发现，在流感病毒的刺激下，分子量大小在55 ku左右的特异性蛋白条带表达被上调。将SDS-PAGE电泳后切下的蛋白条带进行质谱分析，筛选出宿主因子DBNL进行下一步研究。本研究首先设计DBNL的特异siRNA，通过qPCR检测DBNL在转录水平的干扰效果，并在干扰DBNL的转录后检测A549细胞的细胞活力。结果显示，siRNA干扰后，DBNL转录水平极显著降低，且siRNA干扰后，对A549细胞的细胞活力无明显影响，表明DBNL siR-NA不影响细胞活力，且干扰效果良好。接着通过噬斑滴定检测DBNL对流感病毒复制的影响，结果显A：感染后4 h；B：感染后6 hA:4 hours post infection;B:6 hours post infection图3下调表达DBNL后抑制NP蛋白出核孟德锦，等.DBNL蛋白影响A型流感病毒复制机制的研究第 11 期1099ScrambledsiRNADBNLsiRNADBNLsiRNAScrambledsiRNAMergeDAPINPAMergeDAPINPB图4过表达DBNL促进NP蛋白的出核MergeDAPINPMycpCAGGSpDBNL-Myc示siRNA下调表达DBNL后，流感病毒滴度极显著降低，表明下调表达宿主因子DBNL会抑制流感病毒复制。为进一步研究DBNL调控流感病毒复制的具体机制，利用激光共聚焦试验检测下调表达或过表达DBNL后流感病毒NP蛋白的表达及定位。结果显示下调表达DBNL，抑制了代表NP蛋白的红色荧光在细胞质中的分布；而过表达DBNL则相反，促进了红色荧光在细胞质中的分布，表明DBNL正调控流感病毒NP蛋白出核，其是否影响NP蛋白通过im-portin-琢和importin-茁的入核过程有待进一步研究。DBNL是一种细胞骨架适配器蛋白，在多种细胞组织中广泛表达。DBNL蛋白由ADF-H结构域、富含脯氨酸的区域和SH3结构域构成。DBNL通过SH3结构域与肌动蛋白相互作用，从而参与受体介导的内吞作用，且能够在多种免疫细胞中表达并参与调控宿主的免疫反应17。但目前尚未发现DBNL与流感病毒的相关研究。本研究结果证实宿主因子DBNL抑制流感病毒复制，并促进流感病毒NP蛋白出核，充实了宿主因子DBNL在流感病毒方面的相关研究，丰富了调控流感病毒复制的宿主因子网络，但DBNL正调控流感病毒NP蛋白出核的具体机制有待进一步研究。参考文献：CHEN W,CALVO P A,MALIDE D,et al.A novel influenzaA virus mitochondrial protein that induces cell death J.NatMed,2001,7:1306-1312.MURAMOTO Y,NODA T,KAWAKAMI E,et al.Identifica-tion of novel influenza A virus proteins translated from PA mR-NA J.J Virol,2013,87:2455-2462.原耀贤，李舜，何威，等.PB1-F2长度改变对H3N2犬流感病毒影响的研究J.中国预防兽医学报，2022，44(3)：243-249.EDINGER T O,POHL M O,STERTZ S.Entry of influenza Avirus:host factors and antiviral targets J.J Gen Virol,2014,95(2):263-277.LUO WEI-YU,ZHANG JIE,LIANG LI-BIN,et al.Phospho-lipid scramblase 1 interacts with influenza A virus NP,impair-ing its nuclear import and thereby suppressing virus replicationJ.PLoS Pathog,2018,14(1):e1006851.TAKEUCHI O,AKIRA S.Pattern recognition receptors and in-flammation J.Cell,2010,140:805-820.KEON B H,JEDRZEJEWSKI P T,PAUL D L,et al.Isoformspecific expression of the neuronal Factin binding protein,drebrin,in specialized cells of stomach and kidney epithelia J.J Cell Sci,2000,113(2):325-336.PEREZ-MARTINEZ M,GORDON-ALONSO M,CABRERO JR,et al.F-actin-binding protein drebrin regulates CXCR4 re-cruitment to the immune synapse J.J Cell Sci,2010,123(7):1160-1170.MAJOUL I,SHIRAO T,SEKINO Y,et al.Many faces ofdrebrin:from building dendritic spines and stabilizing gap junc-tions to shaping neurite-like cell processes J.Histochem CellBiol,2007,127(4):355-361.ROCHA-PERUGINI V,GORDON-ALONSO M,SANCHEZ-MADRID F.Role of Drebrin at the immunological synapse J.Adv Exp Med Biol,2017,1006:271-280.EDINGER T O,POHL M O,STERTZ S.Entry of influenza Avirus:host factors and antiviral targets J.J Gen Virol,2014,95(2):263-277.温霞，赵玉辉，李奇兵，等.宿主因子CENPV与流感病毒NP蛋白相互作用的研究J.中国预防兽医学报，2021，43(1)：1-6.王倩，李俊平，梁立滨，等.流感病毒PA蛋白与宿主SSR4蛋白的相互作用研究J.中国预防兽医学报，2021，43(10)：1029-1033.叶苗苗，孙楠，李奇兵，等.TRIM74 对流感病毒复制机制影响的研究J.中国预防兽医学报，2022，44(10)：1025-1033.ROSSMAN J S,LESER G P,LAMB R A.Filamentous influen-za virus enters cells via micropinocytosis J.J Virol,2012,86:10950-10960.JIANG LI,CHEN HUA-LAN,LI CHENG-JUN.Advances in de-ciphering the interactions between viral proteins of influenza Avirus and host cellular proteins J.Cell Insight,2023,2(2):100079.LARBOLETTE O,WOLLSCHEID B,SCHWEIKERT J,et al.SH3P7 is a cytoskeleton adapter protein and is coupled to signaltransduction from lymphocyte antigen receptors J.Mol Cell Biol,1999,19:1539-1546.(本文编辑：李爽；英文编辑：李芳)1234567891011121314151617中 国 预 防 兽 医 学 报2023 年1100