混合光照对雨生红球藻PSII光化学活性与色素积累的影响.pdf

食品研究与开发23 年 10 月第 44 卷第 20 期基础研究基金项目：中央引导地方科技发展资金（22ZYCGSN00010）；天津市水产生态及养殖重点实验室开放基金项目（TJAE201805）；自然资源部海洋生态系统动力学重点实验室开放基金项目（MED202013）；天津市农业科技成果转化与推广项目（202001010）；天津市宝坻区农业科技计划-特派员帮扶项目（202012）；天津市科技局生态环境治理重大专项（18ZXSZSF00080）作者简介：张娟（1998），女（汉），硕士研究生，研究方向：生物信息技术。*通信作者：窦勇（1985），男，讲师，博士，研究方向：生物饵料培养与应用。DOI：10.12161/j.issn.1005-6521.2023.20.006混合光照对雨生红球藻 PSII 光化学活性与色素积累的影响张娟1，李翔宇2，窦勇1*，原雪峰3，周文礼1，尚东维4（1.天津农学院 天津市水产生态及养殖重点实验室，天津 300384；2.天津天食水产科技发展有限公司，天津 300150；3.天津现代天骄农业科技股份有限公司，天津市生态绿色饲料重点实验室，天津 301801；4.天津食品集团有限公司，天津 300074）摘要：该研究以 54 mol/（m2 s）白光为对照组，在 54 mol/（m2 s）白光的基础上研究不同蓝光光照强度 18、36、54、72 mol/（m2 s）对雨生红球藻光化学活性和积累色素的影响。通过对雨生红球藻细胞密度、叶绿素、虾青素含量以及叶绿素荧光参数测定，探究雨生红球藻生长情况以及光照胁迫过程中虾青素含量的变化。结果表明，36 mol/（m2 s）混合蓝光对雨生红球藻的抑制作用最明显。蓝光试验组的雨生红球藻光系统（photosystem，PSII）最大光能转化效率、有效光能转化效率和表观电子传递速率参数普遍高于对照组，说明雨生红球藻光合作用的结构和功能受到光损害，植物产生自我保护机制。54 mol/（m2 s）照度的蓝光是雨生红球藻积累虾青素最适宜的混合光照强度。关键词：雨生红球藻；蓝光；虾青素；叶绿素荧光参数；光化学活性Effects of Mixed Illumination on Photochemical Activity and Pigment Accumulation ofHaematococcus pluvialis PSIIZHANG Juan1，LI Xiangyu2，DOU Yong1*，YUAN Xuefeng3，ZHOU Wenli1，SHANG Dongwei4（1.Tianjin Key Lab of Aquaculture Ecology and Cultivation，Tianjin Agriculture University，Tianjin 300384，China；2.Tianjin Aquatic Science and Technology Development Co.，Ltd.，Tianjin 300150，China；3.TianjinModern Tianjiao Agricultural Science and Technology Co.，Ltd.，Tianjin Key Laboratory of Ecological GreenFeed，Tianjin 301801，China；4.Tianjin Food Group Co.，Ltd.，Tianjin 300074，China）Abstract：With white light at 54 mol/（m2 s）as the control，this study analyzed the effects of different bluelight intensities 18，36，54，72 mol/（m2 s）on the photochemical activity and pigment accumulation of Haematococcus pluvialis on the basis of 54 mol/（m2 s）white light.By measuring the cell density，chlorophyll and astaxanthin content，as well as chlorophyll fluorescence parameters of H.pluvialis，the study investigated thegrowth status and changes in astaxanthin content during light stress.The results showed that the inhibitory effecton H.pluvialis was most significant under mixed blue light at 36 mol/（m2 s）.The maximum light energy conversion efficiency，effective light energy conversion efficiency，and apparent electron transfer rate parameters ofphotosystem II（PSII）in the blue light experimental group were generally higher than those in the control group，indicating that the photosynthetic structure and function of H.pluvialis were affected by light damage，and theplant produced a self-protective mechanism.Among the tested light intensities，blue light at 54 mol/（m2 s）was found to be the most suitable mixed light intensity for H.pluvialis to accumulate astaxanthin.Key words：Haematococcus pluvialis；blue light；astaxanthin；chlorophyll fluorescence parameter；photochemical activity39食品研究与开发23 年 10 月第 44 卷第 20 期基础研究引文格式：张娟，李翔宇，窦勇，等.混合光照对雨生红球藻 PSII 光化学活性与色素积累的影响J.食品研究与开发，2023，44（20）：39-46.ZHANG Juan，LI Xiangyu，DOU Yong，et al.Effects of Mixed Illumination on Photochemical Activity and Pigment Accumulationof Haematococcus pluvialis PSIIJ.Food Research and Development，2023，44（20）：39-46.雨生红球藻（Haematococcus pluvialis）是一种绿藻门的单细胞微藻，其生活史主要有两个阶段，分别是游动细胞阶段和不动细胞阶段。游动细胞阶段依靠两条顶生等长的鞭毛进行运动，细胞富含叶绿素，呈绿色；不动细胞阶段没有鞭毛不能运动，细胞内合成并积累虾青素，呈红色。虾青素（astaxanthin，ASTA）是一种脂溶性类胡萝卜素，是迄今为止在自然界有机体中发现的抗氧化能力最强的物质1，因其具有清除自由基、提高机体免疫力的作用，目前被用作保健品辅料和食品添加剂2-4。此外虾青素还有良好的着色效果，可以进入生物体并贮存在组织中，中国人民共和国农业农村部 2003 年 318 号公告中指定天然虾青素为水产动物唯一着色剂5-6。雨生红球藻不动孢子内虾青素含量可以占到细胞干重的 1.5%4.0%，且虾青素均为具有高生物活性的（3S，3S）异构体，目前雨生红球藻被公认为自然界中生产天然虾青素的最佳生物。自然条件下雨生红球藻合成虾青素的效率和对底物、能源的利用率都很低，无法支撑虾青素的工业化生产，因此调节环境因子进行人工诱导成为提高雨生红球藻产虾青素能力的常用方法。光照是微藻生命活动不可缺少的环境因子，合理调制光照条件可以促进雨生红球藻积累虾青素，同时不产生额外污染，是生产藻源虾青素经济有效的手段。研究表明，不同光照对雨生红球藻的诱导效果不同7，红光利于雨生红球藻生长，而蓝光有助于雨生红球藻积累虾青素，此外连续光照较光暗交替更利于虾青素积累4。Ma 等8使用150 mol/（m2 s）的白光发光二极管（light-emittingdiode，LED）和 70 mol/（m2 s）的蓝光 LED 对雨生红球藻进行照射，发现两种光照条件下微藻细胞内的虾青素和总脂肪酸含量显著上升，与色素合成及脂质积累相关的多种基因表达量也明显上调。目前的研究多集中于单一光照对雨生红球藻积累虾青素的影响，混合光照的作用鲜见报道。本研究探索了蓝光混合白光条件下雨生红球藻光系统（photosystem，PSII）光化学活性和积累色素含量的变化，以期为优化光照组合提高藻源虾青素产量提供一定的数据支持。1材料与方法1.1材料与试剂KOH、甲醇、乙醇、丙酮（均为分析纯）：天津市风船化学试剂科技有限公司。雨生红球藻（H.pluvialis）来自天津市水产生态及养殖重点实验室藻种室，使用改良 Bold 基础培养基（Bolds basal medium，BBM）培养，12 h/12 h 明暗交替，温度（221）。1.2仪器与设备血细胞计数板（718620）：普兰德（上海）贸易有限公司；紫外-可见分光光度计（TU-1810）：北京普析通用仪器有限责任公司；浮游植物分类荧光仪（IMAGING-PAM）：德国 WALZ 有限公司。1.3方法1.3.1试验设计使用培养至对数生长期的雨生红球藻进行试验，各试验组的初始细胞密度均设置为 5105个/mL。混合光照处理组为 54 mol/（m2 s）白光基础上增加蓝光（主波长为 455.8 nm，峰值波长为 450.3 nm），蓝光的光照强度设置为 18、36、54、72 mol/（m2 s），对照组为54 mol/（m2 s）白光，各试验组设置 3 次平行。每天摇晃培养瓶 6 次，防止藻细胞出现沉积。试验周期为27d，每3d取样测定雨生红球藻细胞密度、叶绿素含量、PSII 光化学活性参数以及虾青素含量。1.3.2藻细胞密度的测定采用血细胞计数板法测定藻细胞密度，试验每隔3 d 取样，在光学显微镜下每个样品计数 3 次，取平均值。其中细胞总数为 A，计数板为 80 小格，稀释倍数为D。藻细胞密度含量（T，105个/mL）参照下式计算。T=A/80400104D1.3.3叶绿素荧光参数的测定使用浮游植物分类荧光仪测定叶绿素荧光参数，在测定开始前将所得样品暗处理 15 min，直接测得可变荧光（Fv）、最大荧光（Fm）、平行组可变荧光（Fv）、平行组最大荧光（Fm）、叶绿素 a（Chla），继而得出有效光能转化效率（Yield）、最大光能转化效率（Fv/Fm）、实际光能转化效率（electron transport rate，ETR）的值9-12。1.3.4叶绿素含量的测定参照郑小恽等13的方法，采用分光光度计法，分别测定 645 nm 和 663 nm 处乙醇提取液的吸光度（A645、A663），每隔 3 d 取藻液一次，5 000 r/min 离心 10 min，保留沉淀，即藻泥。按 150（g/mL）料液比，在藻泥中加入95%乙醇，避光浸提 24 h 至藻体发白，5 000 r/min 离心40食品研究与开发23 年 10 月第 44 卷第 20 期基础研究10 min 后取上清液，测定其 A645和 A663。依据下式计算叶绿素含量（C，mg/L）。C=20.29A645-8.05A6631.3.5雨生红球藻中虾青素（astaxanthin，ASTA）含量的测定参照韦韬等14以及李嘉仪等15的方法测定虾青素含量。取 5 mL 藻液进行离心，弃上清液，加入 5 mL 超纯水清洗，重复 2 次。然后用 5 mL 的 5%氢氧化钾+30%甲醇溶液破坏叶绿素 5 min，弃上清液后加 5 mL超纯水清洗两次。弃去上清液后在收集到的藻泥中加入 2 mL 丙酮，用细胞破碎仪处理 10 min，后 4 离心15 min（10 000 r/min），保留上清液，测定其 A480，重复以上操作，直至藻团呈白色，色素提取完全为止。依据下式计算虾青素含量（X，mg/L）。X=4.6A480D式中：D 为稀释倍数。1.4数据处理使用 SPSS 22.0 统计软件对获得的试验数据进行单因素方差分析，利用 Duncans 多重比较法检验平均值的差异显著性，显著性水平设定为 P=0.05，用 EXCEL 2007 软件作图。2结果与分析2.1混合光照对雨生红球藻细胞密度的影响在白光一定的条件下，混合蓝光对雨生红球藻细胞密度的影响如图 1 所示。如图 1 所示，总体藻细胞密度随着时间延长，混合蓝光试验组和白光对照组的差距逐渐减小。在第 9 天之后，试验组的藻细胞密度整体呈下降趋势，表明混合蓝光对雨生红球藻细胞具有逆境胁迫作用。说明蓝光对雨生红球藻细胞密度具有胁迫影响并能抑制雨生红球藻的生长，且整体来看 36 mol/（m2 s）强度的光照抑制性更强。2.2混合光照对雨生红球藻最大光能转化效率（Fv/Fm）的影响在荧光测定中，可变荧光（Fv）与最大荧光（Fm）的比值 Fv/Fm 为最大光能转化效率，体现了植物 PSII 潜在的最大光合能力。Fv/Fm 在植物正常生理状态下，变化非常小，几乎不受物种和生长条件的影响，但在胁迫条件下该参数会明显降低16-17。植物利用的光能极为有限，当植物吸收的光能超出利用范围时，会出现光抑制和光破坏现象18。为防止该现象损伤植物的光合系统，植物自身形成了保护系统19。因此，Fv/Fm 是反映微藻生长态势的一个关键性指标。图 2 为雨生红球藻的 Fv/Fm 值在 27 d 内的变化情况。由图 2 可知，增加不同光照强度蓝光的处理组的Fv/Fm 参数整体上都低于白光对照组，这表明虾青素主要以虾青素酯的形式存在，所以 Kobayashi 等20推测虾青素能清除活性氧分子，从而保护光合器官和光合色素，保护其不被氧自由基伤害18-19。就混合光照处理组的 Fv/Fm 整体来看，从试验开始第 0 天到第 9 天之间呈现下降趋势，但在第 18 天有回升现象，说明雨生红球藻的 PSII 反应中心经过一段时间后对白光产生了依赖，且随时间的延长，雨生红球藻的保护机制越发成熟。试验第 27 天，不同光照强度的试验组与试验第 0 天比较，Fv/Fm 分别升高了 0.120、0.130、0.010、0.001。结果说明在固定白光的条件下混合不同强度的蓝光处理组对雨生红球藻加强了保护作用，并36U fN-U&KE+并NPMUNeTU:并NPMUNeTU:并NPMUNeTU:并NPMUNeTU:并NPMUNeTU图 1混合蓝光对雨生红球藻细胞密度的影响Fig.1Effects of mixed blue light on cell density of Haematococcus pluvialis41食品研究与开发23 年 10 月第 44 卷第 20 期基础研究且 36 mol/（m2 s）的处理组 Fv/Fm 值改变幅度最大。2.3混合光照对雨生红球藻有效光能转化效率的影响有效光能转换效率可以反映 PSII 反应中心在有部分关闭的情况下实际原初光能捕获效率，叶片不需经过暗适应在光下可直接测得21。有效光能转换效率升高说明混合光照的光保护系统存在，能避免氧自由基破坏光合器官和光合色素22。混合光照对雨生红球藻光能转化效率的影响如图 3 所示。&KEBBBBBBBBBBBBBBBBBBCBBBBBBCBBBBBBBBBBBBDBBBBBBBBBBBBCD7E)+。NPMUNeTU:。NPMUNeTU:。NPMUNeTU:。NPMUNeTU:。NPMUNeTU同一光照时间不同字母表示差异显著，P0.05。图 2雨生红球藻的最大光能转化效率变化Fig.2Changes of maximum light energy conversion efficiency of Haematococcus pluvialis同一光照时间不同字母表示差异显著，P0.05。图 3雨生红球藻的实际光能转化效率变化Fig.3Changes of actual light energy conversion efficiency of Haematococcus pluvialisBBBBBBBBBBBBBBBBBBBCDBBBCBBBBBBBCBBBBBBBBBBCBBBBBCBCDB&KEK6D(+sNPMUNeTU:sNPMUNeTU:sNPMUNeTU:sNPMUNeTU:sNPMUNeTU由图 3 可知，在固定白光时，混合不同光照强度蓝光试验组的有效光能转换效率在 9、12、21、24、27 d 整体上高于对照组，这表明混合光照强化了雨生红球藻的实际光和能力。到试验的第 27 天，雨生红球藻混合蓝光光照强度为 18、54 mol/（m2 s）组的 Yield 值与第0 天相比分别上升了 22%、9%，其他光照强度均呈现下降趋势，说明 18、54 mol/（m2 s）光照强度的混合蓝光对于升高 PSII 的实际光合能力更加明显。2.4混合光照对雨生红球藻的表观光合电子传递效率（ETR）的影响表观光合电子传递效率又称非循环光合电子传递效率，是反映植物 PSII 反应中心活性与光合电子传递效率的重要指标，转折点的大小可以反映植物对光强敏感度的强弱23-24。混合光照对雨生红球藻表观光合电子传递效率的影响变化如图 4 所示。由图 4 可知，在白光条件下混合不同蓝光处理组42食品研究与开发23 年 10 月第 44 卷第 20 期基础研究同一光照时间不同字母表示差异显著，P0.05。图 4雨生红球藻的表观光合电子传递效率变化Fig.4ETR changes of Haematococcus pluvialis的 ETR 值在 12、21、24、27 d 整体高于对照组，说明混合蓝光有利于发挥雨生红球藻 PSII 反应中心的活性，同时也使光合电子传递效率上升。试验第 27 天时，与试验第 0 天相比 18 mol/（m2 s）和 54 mol/（m2 s）照度组分别升高了 21%和 5%，说明 18 mol/（m2 s）和54 mol/（m2 s）光照强度的混合蓝光对增高 ETR 的作用更加明显。2.5混合光照对雨生红球藻积累虾青素的影响混合不同光照强度蓝光对雨生红球藻积累虾青素含量的影响见图 5。&KE=*E(+。NPMUNeTU:。NPMUNeTU:。NPMUNeTU:。NPMUNeTU:。NPMUNeTUBBBBBBBCBCBBBBBBBBBBCBBCBCBBBBCBBBCBBBBCDBBCCBCCDBBBBBBDDBBCBBBBBBBBBBB BBBBB;L2FUNH-UBBCBBCBBBBBB BCBBBCBBBBBCBCBCBCBBDCCBBB BB&KE+NPMUNeTU:NPMUNeTU:NPMUNeTU:NPMUNeTU:NPMUNeTU同一光照时间不同字母表示差异显著，P0.05。图 5混合不同光照强度蓝光对虾青素含量的影响Fig.5Effects of blue light with different illumination on astaxanthin content由图 5 可知，随时间的延长，虾青素含量整体上呈现缓慢上升态势，但是试验第 0 天对照组和试验组之间变化不显著。在第 24 天处理组虾青素含量大幅增长，且达到最高峰，此时 18 mol/（m2 s）光照强度的蓝光处理组的虾青素含量达最大值，为 7.32 mg/L，是对照组的1.27 倍。由图 5 可以看出，混合蓝光可明显促进雨生红球藻积累虾青素，尽管峰值在 18 mol/（m2 s）光照强度组，但从不同时间点综合分析来看 54 mol/（m2 s）光照强度的蓝光对虾青素积累的作用更强。在白光固定的条件下混合蓝光对微藻的生长具有抑制作用，试验时间内，54 mol/（m2 s）光照强度的蓝光组，雨生红球藻单位细胞内虾青素含量累积的速度整体比其他试验组高。通过对比不同光照强度蓝光下雨生红球藻积累虾青素高峰期（24 d）总虾青素产量的变化，得出结果为总虾青素的含量显著比对照组高。但总虾青素产量并不能反映单细胞合成虾青素的能力，在本研43食品研究与开发23 年 10 月第 44 卷第 20 期基础研究同一光照时间不同字母表示存在显著性差异（P0.05）。图 6混合不同光照强度蓝光对虾青素/叶绿素的影响Fig.6Effects of blue light with different illumination on astaxanthin/chlorophyll究中根据测得的总虾青素产量和雨生红球藻的细胞密度数值，来计算单位细胞虾青素的含量25-26。2.6混合光照对虾青素和叶绿素比值的影响利用虾青素和叶绿素的比值可以了解虾青素与叶绿素之间的关系，还可以对经过不同光照强度蓝光照射的雨生红球藻中虾青素含量的变化作进一步的分析。混合光照对虾青素和叶绿素比值的影响如图 6所示。BBBBCBBBCBCBCCBCBBCCDBCBCDBBBCBCBBCBBCBBCBBCBDDDCBCBCDCDBBCCDBBCC&KE;L242+。NPMUNeTU:。NPMUNeTU:。NPMUNeTU:。NPMUNeTU:。NPMUNeTU由图 6 可知，叶绿素的变化没有规律，该变化说明在虾青素的积累过程中无过分消耗叶绿素的现象27。图 5 中虾青素随培养时间的延长呈上升趋势，54 mol/（m2 s）的蓝光积累效果最好。但在图 6 中，虾青素和叶绿素的比值整体呈上升趋势，虾青素和叶绿素的比值在前 21 d 几乎无明显变化。分别从不同时间点单独分析，在 3、6、9、21、24、27 d 时 54 mol/（m2 s）的蓝光光照强度在虾青素积累中最为明显。其中第24 天试验组虾青素和叶绿素的比值达到峰值，综合可得蓝光照强度为 54 mol/（m2 s）时可加强雨生红球藻积累虾青素的能力。3讨论光是环境中重要的信号因子，对微藻的生长发育具有重要的调控作用，光不仅提供光合作用所需要的能量，自身也蕴含光质、光强和光周期等信息28-31。微藻通过光受体分子感知光照信号，并通过信号转导系统调控多种生理过程，包括形态建成、生物节律、趋光性以及次级代谢产物合成与积累等32。不同种类微藻的生命活动对光强和光质具有明显的选择性。研究证实，北方娄氏藻（Lauderia borealis）适宜在 4563 mol/（m2 s）光强下生长32，而王祎哲等33发现，54 mol/（m2 s）的光强最适合纤细裸藻（Euglenagracilis）生长，而蓝光与白光对纤细裸藻生长有显著促进作用（P0.05），蓝光条件下细胞内色素质量浓度达到峰值。另有研究指出，蓝光条件下蛋白核小球藻（Chlorella pyrenoidosa）不仅生长效果最佳，而且叶绿素 b 合成旺盛31。而本试验发现白光抑制了雨生红球藻生长，尤其是试验后期微藻细胞密度显著降低，而混合蓝光后抑制效果更加明显，说明不同微藻对光质的需求有较大差异，这可能是因为不同微藻细胞内存在着差异化的光敏色素，这些色素分子具有不同的光质和光强偏好所致32。光照条件不仅影响微藻正常的生命活动，而且影响其细胞内次级代谢产物合成与积累。已有文献证实，不同光质对雨生红球藻的诱导效果不同7，红光有利于雨生红球藻生长，蓝光有助于雨生红球藻积累虾青素4，本研究的结果印证了这一结论。Ma 等8使用72 mol/（m2 s）的蓝光对雨生红球藻进行处理，结果表明，微藻细胞内的虾青素和总脂肪酸含量显著上升，与色素合成及脂质积累相关的基因 psy、crtO、bkt2、lcy、crtR-B、fata 和 dgat 表达量明显上调。此外光周期也会影响雨生红球藻积累虾青素的过程，有研究说明连续光照较光暗交替更利于虾青素积累4，江红霞等34发现微藻细胞内的虾青素含量随光照强度上升而提高，在 270 mol/（m2 s）条件下连续照射 10 d 微藻细胞内的虾青素水平和抗氧化能力最高。雨生红球藻的生活史受环境影响很大，条件适宜时表现为富含叶绿素的营养细胞，环境恶劣时表现为累积虾青素的休眠孢子。本研究设定的光照条件已成为雨生红球藻的胁迫因子，可以看到微藻细胞内的虾青素/叶绿素大体呈上升趋势，这与雨生红球藻应对和44食品研究与开发23 年 10 月第 44 卷第 20 期基础研究适应恶劣环境直接相关。4结论混合蓝光处理组的细胞密度随试验时间延长呈整体下降趋势，说明混合蓝光对雨生红球藻生长具有抑制作用，其中 36 mol/（m2 s）混合蓝光的光照强度组对雨生红球藻的抑制作用最为明显。其中蓝光试验组的 Fv/Fm、Yield 和 ETR 参数普遍高于对照组，说明胁迫状态下，雨生红球藻光合作用的结构和功能都受到了光损害，植物因此产生自我保护机制。但在研究的第 27 天，18、36、54、72 mol/（m2 s）光照强度组的蓝光与试验第 0 天相比，Fv/Fm 值整体都有所升高，其中 36 mol/（m2 s）光照强度组变化的数值最大。研究表明，蓝光光照强度为 54 mol/（m2 s）时对于雨生红球藻积累虾青素效果整体强于其他组，尽管18 mol/（m2 s）到达峰值时的积累量为 7.32 mg/L，但整体看来 54 mol/（m2 s）光照强度的蓝光是雨生红球藻中积累虾青素最适宜的混合光照强度。参考文献：1刘伟.雨生红球藻规模化培养工艺的构建及相关生物学特性的研究D.青岛:中国科学院研究生院(海洋研究所),2006.LIU Wei.Technological assembly and related biological study in apilot scale culture of Haematococcus pluvialisD.Qingdao:Instituteof Oceanology,Chinese Academy of Sciences,2006.2苏芳.类胡萝卜素在藻虾蟹鱼中的结构分布特征及虾青素异构化研究D.青岛:中国科学院大学(中国科学院海洋研究所),2018.SU Fang.A study on the structure distribution of carotenoids in algae,shrimps,crabs and fishes and the isomerization of astaxanthinD.Qingdao:Institute of Oceanology,Chinese Academy of Sciences,2018.3SAHA M,GOECKE F,BHADURY P.Minireview:Algal naturalcompoundsandextractsasantifoulantsJ.Journal ofApplied Phycology,2018,30(3):1859-1874.4章真.雨生红球藻异养细胞光诱导积累虾青素工艺的优化与放大D.上海:华东理工大学,2016.ZHANG Zhen.Optimization and scale up of astaxanthin productionfrom Haematococcus pluvialis with sequential heterotrophy-dilution-photoinduction strategyD.Shanghai:East China University ofScience and Technology,2016.5KHOO K S,LEE S Y,OOI C W,et al.Recent advances in biorefineryofastaxanthinfromHaematococcuspluvialisJ.BioresourceTechnology,2019,288:121606.6ZHONG Y J,HUANG J C,LIU J,et al.Functional characterizationof various algal carotenoid ketolases reveals that ketolating zeaxanthin efficiently is essential for high production of astaxanthin intransgenic ArabidopsisJ.Journal of Experimental Botany,2011,62(10):3659-3669.7侯冬梅.雨生红球藻高产虾青素的光诱导工艺研究D.上海:华东理工大学,2014.HOU Dongmei.Study on the photoinduction of Haematococcus pluvialis 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