红树林沉积物产酶微生物的分离和鉴定.pdf

第 卷第期 年 月泉州师范学院学报J o u r n a l o fQ u a n z h o uN o r m a lU n i v e r s i t yV o l N o O c t 红树林沉积物产酶微生物的分离和鉴定杜雅萍(自然资源部第三海洋研究所,海洋生物遗传资源重点实验室,福建 厦门 )摘要:从红树林沉积物中富集筛选具有产木聚糖酶、酸性果胶酶和纤维素酶活性的菌株,通过稀释、涂布、平板分离的方法筛选可培养微生物,然后提取各菌株基因组D NA,扩增其 Sr R NA和 Sr R NA基因并测序,最后比对分析确定其分类地位共筛选到 株细菌和株真菌木聚糖酶产生菌共 株,株为细菌(株属于 变形菌纲,株属于放线菌纲),株真菌(株丝状真菌属于盘菌亚门,株属于酵母亚门)筛选到酸性果胶酶产生菌株(株为 变形菌纲细菌、株为酵母亚门酵母、株为毛霉亚门的丝状真菌),均为潜在新种纤维素酶产生菌共获得 株(株为 变形菌纲,株为拟杆菌纲,株为放线菌纲)分离获得的细菌菌株中株为潜在细菌新种(Sr R NA基因的相似度低于 ),株可能为真菌潜在新种(Sr R NA基因的相似度低于)关键词:红树林沉积物;木聚糖酶;酸性果胶酶;纤维素酶收稿日期:作者简介:杜雅萍(),女,福建厦门人,工程师,主要从事海洋环境微生物研究基金项目:海洋菌种资源分库运行与服务(NMR C );深海极地生物种质和遗传资源库建设(海三科 )中图分类号:P 文献标识码:A文章编号:()红树林生长之地处于陆地与海洋的交汇,常年经受潮汐浸淹厦门市集美区红树林以秋茄为主,根植于沿海滩涂一带,主要保护海岸带不受风浪侵蚀,也是厦门一道亮丽的风景线红树林生态系统是异养微生物、营养物质、树和海洋生物紧密结合的有机体红树林根的渗出液为很多细菌的生长和繁殖提供营养,细菌参与了红树林沉积物绝大部分的碳循环因此,可以利用红树林环境的特殊性,从其沉积物中筛选具有产酶活性的菌株木聚糖来源比较广泛,是植物细胞壁半纤维素的主要成分,包括植物组织、细菌、真菌和原生动物等木聚糖酶在食品、饲料、工业等均有广泛应用 酸性果胶酶指内聚半乳糖醛酸酶,可无规则地水解果胶酸分子中的,糖苷键,目前已广泛应用于果蔬汁生产和果酒澄清领域此外,在木质防腐、生物制浆、环境保护、污物软化处理等行业中也有着重要作用,是四大酶制剂之一纤维素在自然界中分布广,占植物干重的 ,是产量最多的碳水化合物资源 纤维素酶能把纤维素分子降解成葡萄糖,可有效避免浪费和污染,且适应温度和酸碱度范围较广,可应用于生物、食品、能源、纺织等领域本研究试图从红树林生境中获取新颖的具有产酶活性的可培养微生物,获得的菌株用于酶制剂的开发利用材料与方法材料样品来源沉积物样品份,来自于福建省厦门市集美区红树康桥公交站旁海边红树林根际土壤(经度:、纬度:),采集时间为 年月培养基本研究采用种酶筛选培养基,底物分别为木聚糖、纤维素和果胶木聚糖富集培养基:木聚糖 g/L,(NH)S O g/L,KHP O g/L,N a C l g/L,p H值为羟甲基纤维素富集培养基:(NH)S Og/L,KH P Og/L,M g S O HOg/L,N a C l g/L,CMC N a g/L,p H值为果胶富集培养基:果胶 g/L,N aH P O g/L,蛋白胨 g/L,N a C l g/L,p H值为木聚糖分离培养基:木聚糖 g/L,(N H)S O g/L,K HP O g/L,N a C l g/L,琼脂粉 g/L,p H值为羟甲基纤维素刚果红分离培养基:KH P Og/L,M g S O g/L,CMC g/L,刚果红g/L,明胶g/L,N a C l g/L,琼脂 g/L,p H值为果胶分离培养基:果胶g/L,N aH P Og/L,N a C l g/L,琼脂 g/L,p H值为纯化培养基为青岛海博 E琼脂培养基酶活验证培养基为 E底物配制琼脂培养基主要试剂和仪器细菌基因组提取试剂盒(上海赛百盛),真菌基因组提取试剂盒(M a g e n),P C R相关试剂(北京全式金生物),其他试剂购自国药集团I S R D S 低温叠加式恒温振荡器(美国精骐有限公司),B i o m e t r a P C R仪(德国耶拿分析仪器有限公司),P I C O 微量高速离心机(美国T h e r m oS c i e n t i f i c),D YY C型电泳仪(北京市六一仪器厂),T a n o n 凝胶成像分析仪(上海天能科技有限公司)红树林沉积物可培养菌株的分离、鉴定、系统进化分析细菌富集和分离各取样品g,分别接种至装有 m L木聚糖富集培养基、m L果胶富集培养基和 m L纤维素富集培养基的三角瓶中,置于摇床,r/m i n富集培养培养d后,分别取 L菌液,相应地转接到 m L三角瓶的种富集培养基中,置于摇床,r/m i n进行第二次富集;待培养d后,再分别取 L菌液置于已装有 L无菌海水的离心管中,震荡混匀后,梯度稀释,最后选取 和 等个稀释度涂布平板,进行细菌的第一次分离培养d后进行第二次梯度稀释,取、个稀释度涂布平板采用 倍梯度稀释涂布平板法,进行细菌的第二次分离获得单菌落后,采用四区划线法分离纯化,获得纯培养物菌株鉴定菌株D NA参照上海赛百盛试剂盒说明书,按步骤提取对于较难抽提的真菌菌株,用液氮冷冻研磨后再用真菌试剂盒提取 Sr R NA基因采用细菌通用引物 F和 R进行P C R扩增,Sr R NA基因采用真菌通用引物I T S F和L R R进行P C R扩增,P C R产物送厦门铂瑞生物科技有限公司测序菌株多样性分析所测基因序列经过多序列比对、去重复,提交E z B i o C l o u d、N C B I等权威数据库比对,确定其分类地位红树林沉积物可培养菌株的产酶活性筛选和验证运用改进的平板法,分别以可溶性淀粉、脱脂牛奶、三丁酸甘油酯、果胶、木聚糖、羧甲基纤维素钠为底物,在 E培养基上分析红树林沉积物细菌产胞外淀粉酶、蛋白酶、脂酶(三丁酸甘油酯)、果胶酶、木聚糖酶和纤维素酶的活性 实验结果与分析红树林沉积物可培养菌株的分离鉴定从红树林沉积物样品中,共获得 株菌,通过 Sr R NA和 Sr R NA基因测序剔除重复,菌株可分为 株细菌、株酵母和株丝状真菌,其活性及分类地位如表所示,所有菌种保藏于中国海洋微生物菌种保藏管理中心(MC C C)红树林沉积物中筛选可培养菌株的多样性分析红树林沉积物菌株的多样性分析表明:株细菌分别属于变形菌纲(株,),放线菌纲(高GC革兰氏阳性菌)(株,),拟杆菌纲(株,)大类群 株细菌可分为 个属的 个种(表),具有较高多样性菌株数量较多的个属为变形菌纲中的O c e a n i m o n a s(株)、V i b r i o(株)、P s e u d o m o n a s(株)、C e l e r i n a t a n t i m o n a s(株)、P s e u d o a l t e r o m o n a s(株)、M a n g r o v i b a c t e r(株)、K l e b s i e l l a(株)、P a n t o e a(株);株放线菌纲分别属于C u r t o b a c t e r i u m(株)、I s o p t e r i c o l a(株)、G o r d o n i a(株)、L e i f s o n i a(株)个属;拟杆菌纲为个属A l g o r i p h a g u s(株)第期杜雅萍:红树林沉积物产酶微生物的分离和鉴定泉州师范学院学报 年 月这 株细菌与近缘模式菌株一起构建N e i g h b o u r J o i n i n g系统进化树见图株真菌包含株酵母,株丝状真菌,株毛霉菌门(M u c o r o m y c o t a)毛霉亚门(M u c o r o m y c o t i n a)菌株其中,株酵母属于酵母亚门(S a c c h a r o m y c o t i n a),株丝状真菌属于盘菌亚门(P e z i z o m y c o t i n a)这株真菌与标准数据库菌株一起构建系统发育树见图同时,分离得到的 株细菌包含株潜在新种(Sr R NA基因的相似度低于 ),株真菌包含株潜在新种(Sr R NA基因的相似度低于)结果表明:本实验分离到的红树林沉积物菌株多样性十分丰富,且潜在新种的基因新颖有较高的研究价值图可培养细菌单菌与模式菌 Sr R NA基因系统进化树F i g P h y l o g e n e t i c t r e eb a s e do nf u l l l e n g t h Sr R NAg e n e so fb a c t e r i aa n dt h er e l a t e dt y p es t r a i n s第期杜雅萍:红树林沉积物产酶微生物的分离和鉴定图采用N e i g h b o u r J o i n i n g法构建的株真菌及对应相近菌株的系统进化树F i g N e i g h b o u r J o i n i n gp h y l o g e n e t i c t r e es h o wp o s i t i o n so f f u n g a l s t r a i n s红树林沉积物中产酶菌株的筛选验证采用种筛选培养基对同一个红树林沉积物样品进行了筛选,结果表明,种培养基上获得的菌株数量不同随后将这 株红树林菌株都采用平板改良法测试了淀粉酶、蛋白酶、脂酶(三丁酸甘油酯)、果胶酶、木聚糖酶和纤维素酶的活性统计结果表明,这些菌株中,木聚糖酶阳性株;纤维素酶阳性株;果胶酶阳性株,弱阳性株;淀粉酶弱阳性株;蛋白酶阳性株,弱阳性株;酯酶(三丁酸甘油酯)阳性株,弱阳性株其中,菌株同时具有两种以上酶活力的有株酶活水解圈直径与菌落直径比值范围分别是:果胶酶,蛋白酶,脂酶(三丁酸甘油酯)实验结果与讨论红树林可培养菌株多样性红树林生态系统不仅是鸟类、鱼虾贝类、微生物的聚集地,还蕴含着丰富、独特的微生物资源红树林来源的微生物可产蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、果胶酶、琼脂糖酶等多种用途广泛的酶类此外,红树林微生物还可代谢产生化学结构丰富的次级代谢产物,如生物碱类、环肽类、大环内酯类、多糖类、不饱和脂肪酸类等这些代谢产物大多具备生物活性,例如抗菌、杀虫、细胞毒性、抗氧化、抑制剂等因此,从红树林环境筛选新的产木聚糖酶、酸性果胶酶和纤维素酶菌株的概率较大本研究对红树林沉积物产木聚糖酶、酸性果胶酶和纤维素酶进行富集筛选,经过 Sr R NA基因和 Sr R NA基因测序、剔除重复后,共获得 株菌木聚糖筛选获得株细菌,分属于C u r t o b a c t e r i u m(株)、L e i f s o n i a(株)、M a n g r o v i b a c t e r(株)、K l e b s i e l l a(株),以及P a n t o e a(株)等个属,其中M a n g r o v i b a c t e r、K l e b s i e l l a、P a n t o e a属于 变形菌纲,C u r t o b a c t e r i u m、L e i f s o n i a属于放线菌纲;株丝状真菌分属于T r i c h o d e r m a(泉州师范学院学报 年 月株)、A u r e o b a s i d i u m(株)、F u s a r i u m(株)、A s p e r g i l l u s(株);株酵母菌G e o t r i c h u m(株)和K l u y v e r o m y c e s(株)木聚糖酶产生菌中,以真菌和细菌为主,真菌占,这与其他木聚糖酶产生菌的筛选报道结论基本吻合酸性果胶筛选获得了株菌分别属于 变形菌纲、酵母亚门、毛霉亚门的C e l e r i n a t a n t i m o n a s、C a n d i d a和M u c o r个属酸性果胶的相关研究较少,主要产酶菌株是真菌纤维素筛选获得了 株细菌,分别属于O c e a n i m o n a s(株)、V i b r i o(株)、P s e u d o m o n a s(株)、A l g o r i p h a g u s(株)、P s e u d o a l t e r o m o n a s(株)、I s o p t e r i c o l a(株)、G o r d o n i a(株)个属,其中O c e a n i m o n a s、V i b r i o、P s e u d o m o n a s、P s e u d o a l t e r o m o n a s a属于 变形菌纲,A l g o r i p h a g u s属于拟杆菌纲,I s o p t e r i c o l a、G o r d o n i a属于放线菌纲已报道的纤维素酶产生微生物主要有真菌、放线菌和部分酵母菌,关于细菌产纤维素酶方面的研究报道较少本研究针对种不同酶筛培养基获得的菌株进行比较分析,结果显示在不同的培养条件下获得了不同的菌株所有获得的菌株,真菌占比,放线菌占比,细菌占比 其中,细菌中 变形菌纲占比,拟杆菌纲占比这说明有针对性的设置培养方式,能有效减少细菌资源的遗漏孙超等 在红树林沉积物中,利用不同天然有机多聚物富集分离到的优势可培养细菌为变形菌门、拟杆菌门真菌和放线菌是红树林环境中的常见类群,分离的菌株一般有很好的耐盐耐碱性质,具有潜在的研究和工业应用价值这与本实验获得菌株类型一致红树林可培养菌株产酶活性鉴定通过底物特异性筛选表明:木聚糖酶活阳性菌株仅有株戈登氏菌(G o r d o n i a),且为弱阳性纤维素酶活阳性株分别是弧菌(V i b r i o)株和大洋单胞菌(O c e a n i m o n a s)株果胶酶活阳性株,分别是弧菌(V i b r i o)株、短小杆菌(C u r t o b a c t e r i u m)株、雷夫松氏细菌(L e i f s o n i a)株、克鲁维酵母(K l u y v e r o m y c e s)株、暂无(C e l e r i n a t a n t i m o n a s)株、出芽短梗霉(A u r e o b a s i d i u m)株、红树林小杆菌(M a n g r o v i b a c t e r)株;蛋白酶活阳性株,分别是短小杆菌(C u r t o b a c t e r i u m)株、弧菌(V i b r i o)株、假交替单胞菌(P s e u d o a l t e r o m o n a s a)株、噬冷菌(A l g o r i p h a g u s)株、出芽短梗霉(A u r e o b a s i d i u m)株,弱阳性株为弧菌(V i b r i o)株和克鲁维酵母(K l u y v e r o m y c e s)株酯酶(三丁酸甘油酯)酶活阳性株弧菌(V i b r i o)株和假交替单胞菌(P s e u d o a l t e r o m o n a s a)株;弱阳性株,分别是噬冷菌(A l g o r i p h a g u s)株、假丝酵母(C a n d i d a)株、短小杆菌(C u r t o b a c t e r i u m)株、白蚁菌(I s o p t e r i c o l a)株、克鲁维酵母(K l u y v e r o m y c e s)株、雷夫松氏细菌(L e i f s o n i a)株、红树林小杆菌(M a n g r o v i b a c t e r)株、毛霉(M u c o r)株淀粉酶活弱阳性株,为白蚁菌(I s o p t e r i c o l a)实验表明产酶活力最好的菌株:酸性果胶酶菌株为MC C C A (V i b r i o),蛋白酶、酯酶菌株为MC C C A (P s e u d o a l t e r o m o n a s a),纤维素酶菌株为MC C C A (V i b r i o)、MC C C A (V i b r i o)、MC C C A (O c e a n i m o n a s),木聚糖酶菌株为MC C C A (G o r d o n i a),可为接下来应用提供参考价值据报道,T r i c h o d e r m a 菌株具有产木聚糖酶能力,A s p e r g i l l u s 菌株具有产木聚糖酶、酸性果胶酶能力虽然个别菌株用酶活平板法验证木聚糖酶活性时没有检测到透明圈,但定量分析却检测到其具有酶活性,这可能是因为活性比较弱造成的在产纤维素酶的细菌和羧甲基纤维素钠的研究中,A v e l l a n e d a t o r r e s等 从哥伦比亚内瓦多斯国家自然公园筛选到了 株细菌,产纤维素酶菌群主要为假单胞菌高兆明 从厦门红树林泥样中分离到株具有活性纤维素酶基因的新种V i b r i o(G ),并对其纤维素酶基因进行了克隆和重组表达在本实验中V i b r i o也同样有纤维素酶活性红树林可培养菌株潜在新种资源本研究从红树林沉积物中分离鉴定到 株可培养菌株其中潜在新种资源株,分别是细菌MC C C A (C e l e r i n a t a n t i m o n a s)和MC C C A (I s o p t e r i c o l a),酵母菌MC C C A (C a n d i d a)和丝状真菌MC C C A (M u c o r),获得的新种资源为微生物系统进化提供实际依第期杜雅萍:红树林沉积物产酶微生物的分离和鉴定据,目前已开展对MC C C A (C e l e r i n a t a n t i m o n a s)的系统分类学鉴定结论本研究通过对红树林沉积物进行富集培养、分离、纯化、酶活性测定、鉴定等过程,获得了 株具有产木聚糖酶、酸性果胶酶和纤维素酶能力的菌株.这 株菌中,株为细菌、株为酵母、株为丝状真菌木聚糖酶、酸性果胶酶和纤维素酶在食品、饲料、工业、能源、纺织等领域具有重要的应用价值因此,这些产酶菌株的获得不仅丰富了产酶微生物资源,同时为酶类微生态制剂的开发应用提供了可能参考文献:B A R B A R AGA,YOAVB,HE R NAN D E Z S AAV E D R ANY,e t a l S e a s o n a l s e a w a t e r t e m p e r a t u r e a s t h em a j o rd e t e r m i n a n t f o rp o p u l a t i o n so f c u l t u r a b l eb a c t e r i a i n t h e s e d i m e n t so f a n i n t a c tm a n g r o v e i na na r i dr e g i o nJF e m sM i c r o b i o l o g yE c o l o g y,():KO R KMA Z M N,O Z D EM I RSC,U Z E L A X y l a n a s ep r o d u c t i o nf r o m m a r i n ed e r i v e dT r i c h o d e r m ap l e u r o t i c o l a K s t r a i n i s o l a t e df r o m M e d i t e r r a n e a nc o a s t a l s e d i m e n t sJJ o u r n a l o fB a s i cM i c r o b i o l o g y,:徐友林,刘敏,黄惠琴,等八门湾红树林土壤可培养真菌的多样性分析J热带作物学报,():I VANOVAEP,S AWA B ET,A L E X E E VA Y V,e ta l P s e u d o a l t e r o m o n a s i s s a c h e n k o n i is p n o v,ab a c t e r i u mt h a td e g r a d e s t h e t h a l l u so f t h eb r o w na l g aF u c u se v a n e s c e n sJI n t e r n a t i o n a l J o u r n a l o fS y s t e m a t i c&E v o l u t i o n a r yM i c r o b i o l o g y,(P t):李伟,吴槟产酸性果胶酶的研究应用及展望J生物技术世界,():Z HAN GYP,H I MME L M E,M I E L E N ZJR O u t l o o kf o rc e l l u l a s e i m p r o v e m e n t:s c r e e n i n ga n ds e l e c t i o ns t r a t e g i e sJB i o t e c h n o l o g yA d v a n c e s:A nI n t e r n a t i o n a lR e v i e wJ o u r n a l,:KU B I C E KCP,ME S S N E RR,G R U B E RF,e t a l T h eT r i c h o d e r m ac e l l u l a s er e g u l a t o r yp u z z l e:f r o mt h e i n t e r i o r l i f eo f as e c r e t o r yf u n g u sJE n z y m ea n dm i c r o b i a l t e c h n o l o g y,():孙倩,洪葵海洋细菌生物活性物质多样性C/海南省科学技术协会,海南省生物工程协会,海南省热带农业资源开发利用研究所 热带亚热带微生物资源的遗传多样性与基因发掘利用研讨会论文集 出版者不详,:周志伟,黄河毛霉目真菌D NA的提取及其G C含量的测定J微生物学通报,():杜雅萍,李贵珍,赖其良,等南大西洋热液区沉积物可培养细菌的多样性分析和产酶活性鉴定J应用海洋学学报,():YANGSJ,KA T A E VAI,HAM I L T ON B R EHMSD,e ta l E f f i c i e n td e g r a d a t i o no f l i g n o c e l l u l o s i cp l a n tb i o m a s s,w i t h o u tp r e t r e a t m e n t,b yt h e t h e r m o p h i l i ca n a e r o b eA n a e r o c e l l u mt h e r m o p h i l u mD S M J A p p l i e da n dE n v i r o n m e n t a lM i c r o b i o l o g y,():孙超,曾湘,李光玉,等红树林沉积物中天然多聚有机物厌氧降解菌多样性与细菌新类群分离J微生物学报,():C O L L I N ST,G E R D AYC,F E L L E R G X y l a n a s e s,x y l a n a s ef a m i l i e sa n de x t r e m o p h i l i cx y l a n a s e sJ W i l e y,():E L B ON D K L Y A M o l e c u l a r i d e n t i f i c a t i o nu s i n gI T Ss e q u e n c e sa n dg e n o m es h u f f l i n gt oi m p r o v e d e o x y g l u c o s et o l e r a n c e a n dx y l a n a s e a c t i v i t yo fm a r i n e d e r i v e d f u n g u s,A s p e r g i l l u s s pN R C F J A p p l i e dB i o c h e m i s t r y&B i o t e c h n o l o g y,():AV E L L AN E D A TO R R E SL M,P U L I D OC,R O J A SET A s s e s s m e n to fc e l l u l o l y t i cm i c r o o r g a n i s m s i ns o i l so fN e v a d o sP a r k,C o l o m b i aJB r a z i l i a nJ o u r n a l o fM i c r o b i o l o g y,():高兆明红树林纤维素降解菌和菌群及其相关酶关的研究D济南:山东大学,(下转第 页)泉州师范学院学报 年 月王佳仿人智能控制算法研究D南京:南京理工大学,王祎晨增量式P I D和位置式P I D算法的整定比较与研究J工业控制计算机,():T h eD e s i g no fS I CH a l fB r i d g eH I DD r i v eS i g n a lS y s t e mB a s e do nP I DC o n t r o lYAOG u a n g p i n g,WAN GZ h e n h u i,HEY a z h e n,L I AOY u c h a o,Z HANGQ i a n g l o n g,P ANY u z h u o(S c h o o l o fP h y s i c sa n dI n f o r m a t i o nE n g i n e e r i n g,Q u a n z h o uN o r m a lU n i v e r s i t y,Q u a n z h o uF u j i a n ,C h i n a)A b s t r a c t:PWMd i g i t a lo u t p u ta n ds i g n a lp r o c e s s i n gs y s t e m w i t ht h ec o r ew a sc o n s t r u c t e d,a n dc o m b i n e dw i t hp o s i t i o n a lP I Dc o n t r o la l g o r i t h m,t h ePWMs i g n a ld u t yc y c l ew a sa d j u s t e dt oc o n t r o lt h ep o w e ro f t h eh a l f b r i d g ed r i v e c i r c u i t;m u l t i p l eo p e r a t i n gm o d e sw e r e a v a i l a b l e t oa c h i e v ed i f f e r e n t o p e r a t i n gp o w e ro u t p u t s C o m p a r e dt ot r a d i t i o n a la n a l o gc o n t r o lt e c h n o l o g y,t h ep r o b l e mo fh a l fb r i d g ed e a dt i m ec o n t r o lw a ss o l v e db yp r o g r a mm i n g A ni s o l a t e ds i l i c o nc a r b i d eh i g h f r e q u e n c yh a l f b r i d g ed r i v e rc i r c u i tw a sd e s i g n e d I tc a ns o l v eS i C MO S F E Td r i v e rc r o s s t a l ks u p p r e s s i o n,o p t i m i z es w i t c h i n gs p e e d,a n dr e d u c ei n t e r f e r e n c eo fp o w e rc i r c u i t sw i t hs m a l ls i g n a lp r o c e s s i n g T h ee x p e r i m e n tr e s u l t ss h o w e dt h a t t h ed i g i t a l s i g n a l d r i v i n gs y s t e mc a nc o n t r o l t h eH I Do u t p u to p e r a t i n gp o w e r i nas t a b l e,f l e x i b l e,a n dr e l i a b l em a n n e r,w h i c hb r i n g sc o n v e n i e n c ea n de f f i c i e n c yt ot h ec o n t r o lo fp u b l i cl i g h t i n gc i r c u i t s K e y w o r d s:h i g h i n t e n s i t yd i s c h a r g e(H I D);p o s i t i o nP I D;h a l fb r i d g ed r i v ec i r c u i t;S i C MO S F E T;d i g i t a lc o n t r o l(责任编辑杨珠)(上接第 页)I s o l a t i o na n dI d e n t i f i c a t i o no fE n z y m e P r o d u c i n gM i c r o o r g a n i s m s f r o m M a n g r o v eS e d i m e n t sDUY a p i n g(K e yL a b o r a t o r yo fM a r i n eB i o g e n e t i cR e s o u r c e s,T h i r dI n s t i t u t eo fO c e a n o g r a p h y,M i n i s t r yo fN a t u r a lR e s o u r c e s,X i a m e nF u j i a n ,C h i n a)A b s t r a c t:I nt h es t u d y,m i c r o o r g a n i s m sw i t hx y l a n a s e,a c i dp e c t i n a s ea n dc e l l u l o s ea c t i v i t i e sw e r ee n r i c h e da n ds c r e e n e df r o m m a n g r o v es e d i m e n t s C u l t u r a b l em i c r o o r g a n i s m sw e r es c r e e n e db yd i l u t i o n,c o a t i n ga n dp l a t e s e p a r a t i o nm e t h o d s T h e n,g e n o m i cD NAo f e a c hs t r a i nw a s e x t r a c t e d,i t s Sr R NAo r Sr R NAg e n ew a sa m p l i f i e da n ds e q u e n c e d,a n dt h e i r t a x o n o m i cs t a t u sw e r ed e t e r m i n e db yc o m p a r a t i v ea n a l y s i s At o t a l o f b a c t e r i a l s t r a i n s a n df u n g a l s t r a i n sw e r e s c r e e n e d i nt h i s s t u d y T h e r ew e r e x y l a n a s e p r o d u c i n gb a c t e r i a,i n c l u d i n gb a c t e r i a(w e r eg a mm a P r o t e o b a c t e r i a,w e r eA c t i n o m y c e t e s),a n d f u n g i(w e r eF i l a m e n t o u s f u n g i,w e r ey e a s t)T h r e e s t r a i n so f a c i dp e c t i n a s ep r o d u c i n gb a c t e r i a(s t r a i no f P r o t e o b a c t e r i a,s t r a i no fy e a s ts u b p h y l u m,s t r a i no fM u c o r s u b p h y l u mf i l a m e n t o u s f u n g i)w e r e s c r e e n e d,a l l o fw h i c hw e r ep o t e n t i a l n o v e l s p e c i e s At o t a l o f c e l l u l a s ep r o d u c i n gb a c t e r i aw e r eo b t a i n e d(f r o mg a mm a P r o t e o b a c t e r i a,f r o mB a c t e r o i d e a ea n d f r o mA c t i n o m y c e t e s)Am o n gt h ei s o l a t e s,s t r a i n sm a yb ep o t e n t i a ln o v e lb a c t e r i a ls p e c i e s(t h e Sr R NAg e n es i m i l a r i t yi sl e s st h a n ),a n ds t r a i n sm a yb ep o t e n t i a ln o v e lf u n g a ls p e c i e s(t h e Sr R NAg e n es i m i l a r i t y i s l e s s t h a n)K e y w o r d s:m a n g r o v e f o r e s t;x y l a n a s e;a c i dp e c t i n a s e;c e l l u l o s