贵州地区临床分离近平滑念珠菌复合群分布及其生物膜形成相关基因研究.pdf

论著贵州地区临床分离近平滑念珠菌复合群分布及其生物膜形成相关基因研究王顺1 李红2 瞿玉洁1 李婷婷1 金婷婷2 胡方芳2 罗振华1,3,4(1.贵州大学医学院,贵阳 5 5 0 0 0 0;2.贵州省人民医检验科,贵阳 5 5 0 0 0 0;3.贵州省人民医院中心实验室,贵阳 5 5 0 0 0 0;4.贵州省人民医院国家卫生健康委员会肺脏免疫性疾病诊治重点实验室,贵阳 5 5 0 0 0 0)【摘要】目的 研究贵州地区近平滑念珠菌复合群临床分布和药敏特点,检测近平滑念珠菌生物膜形成能力及其C D C 2 8基因的表达水平。方法 收集贵州地区2所三级甲等医院送检标本中分离出的菌株,利用B A C T E CTM F X仪、P h o e n i x-1 0 0仪对菌种进行鉴定,通过基因测序对近平滑念珠菌复合群各分型菌株进行鉴定;采用A T B F UN GU S 3试剂盒检测菌株体外药物敏感情况;检测血源性近平滑念珠菌生物膜形成能力及利用q R T-P C R技术检测它们的C D C 2 8基因表达水平。结果 共分离鉴定出1 6 3株近平滑念珠菌复合群,其中近平滑念珠菌I型、I I型和I I I型分别占7 3.0%、6.1%和2 0.9%;尿液和血液是分离菌株最多的标本(均为5 0株);血液途径感染的菌株中,I型、I I型和 I I I型分别占5 4.0%、1 0.0%和3 6.0%;三种基因型菌株对常见抗真菌药物无明显耐药性;1 7株临床菌株中,1 6株(9 4.1%)具有生物膜形成能力,其中2株、4株和1 0株菌株生物膜形成能力强、一般、弱,C D C 2 8在2株生物膜形成能力强以及3株生物膜形成能力一般的菌株中表达上调。结论 分离的近平滑念珠菌复合群以I型感染为主,三种基因型菌株对抗真菌药物无明显耐药性;不同血源性近平滑念珠菌生物膜形成能力不同,C D C 2 8基因与近平滑念珠菌生物膜形成有关。【关键词】近平滑念珠菌感染;临床特征;药物敏感特征;生物膜形成;基因表达【中图分类号】R 3 7 9.4 【文献标志码】A 【文章编号】1 6 7 3-3 8 2 7(2 0 2 3)1 8-0 3 0 1-0 9A s t u d y o n t h e d i s t r i b u t i o n a n d t h e b i o f i l m f o r m a t i o n r e l a t e d g e n e s o f C a n d i d a p a r a p s i l o s i s c o m p l e x c l i n i-c a l l y i s o l a t e d i n G u i z h o u a r e aWANG S h u n1,L I H o n g2,QU Y u j i e1,L I T i n g t i n g1,J I N T i n g t i n g2,HU F a n g f a n g2,L UO Z h e n h u a1,3,4(1.S c h o o l o f M e d i c i n e,G u i z h o u U n i v e r s i t y,G u i y a n g 5 5 0 0 0 0,C h i n a;2.D e p a r t m e n t o f C l i n i c a l L a b o r a t o r y,G u i z h o u P r o v i n c i a l P e o p l es H o s p i t a l,G u i y a n g 5 5 0 0 0 0,C h i n a;3.D e p a r t m e n t o f C e n t r a l L a b o r a t o r y,G u i z h o u P r o v i n c i a l P e o-p l es H o s p i t a l,G u i y a n g 5 5 0 0 0 0,C h i n a;4.NHC K e y L a b o r a t o r y o f P u l m o n a r y I mm u n e-r e l a t e d D i s e a s e s,G u i z h o u P r o v i n c i a l P e o p l es H o s p i t a l,G u i y a n g 5 5 0 0 0 0,C h i n a)【A b s t r a c t】O b j e c t i v e T h e d i s t r i b u t i o n o f i n f e c t i o n a n d d r u g s u s c e p t i b i l i t y c h a r a c t e r i s t i c s o f C a n d i d a p a r a p s i l o s i s c o m p l e x s t r a i n s w e r e s t u d i e d i n G u i z h o u.D e t e c t i o n o f t h e b i o f i l m f o r m a t i o n c a p a c i t y o f s t r a i n s a n d t h e e x p r e s s i o n l e v e l o f i t s C D C 2 8 g e n e w e r e p e r f o r m e d.M e t h o d s T h e B A C T E CTM F X a n d P h o e n i x-1 0 0 i n s t r u m e n t w e r e u s e d t o i d e n t i f y t h e s t r a i n s i s o l a t e d i n t h e r e t e r t i a r y f i r s t c l a s s h o s p i t a l s i n G u i z h o u f r o m J a n u a r y 2 0 1 7 t o D e c e m b e r 2 0 1 9.T h e C a n d i d a p a r a p s i l o s i s c o m p l e x g r o u p w a s i d e n t i f i e d b y g e n e s e q u e n c i n g.A T B F UNGU S 3 k i t w a s u s e d t o d e t e c t d r u g s u s c e p t i b i l i t y o f s t r a i n s.T h e C a n d i-d a p a r a p s i l o s i s b i o f i l m s f o r m a t i o n c a p a c i t y w a s d e t e c t e d,a n d t h e e x p r e s s i o n l e v e l s o f t h e i r C D C 2 8 g e n e s w e r e d e t e c t e d u s i n g q R T-P C R.R e s u l t s A t o t a l o f 1 6 3 s t r a i n s o f C a n d i d a p a r a p s i l o s i s c o m p l e x w e r e i s o l a t e d a n d i d e n t i f i e d,o f w h i c h C a n d i d a p a r a p s i l o s i s t y p e I,I I a n d I I I a c c o u n t e d f o r 7 3.0%,6.1%a n d 2 0.9%r e s p e c t i v e l y.U r i n e a n d b l o o d s p e c i m e n s g o t t h e m o s t i s o l a t e d s t r a i n s(b o t h 5 0 s t r a i n s).Am o n g t h e i o s l a t e s f r o m i n f e c t e d b l o o d s t r e a m,t y p e I,I I a n d I I I a c c o u n t e d f o r 5 4.0%,1 0.0%a n d 3 6.0%r e s p e c t i v e l y.T h r e e g e n o t y p e s t r a i n s w e r e n o t s i g n i f i c a n t l y r e s i s t a n t t o a n t i f u n g a l d r u g s.Am o n g 基金项目:贵州省科技计划项目(2 0 1 9)2 8 2 7;国家自然科学基金地区科学基金项目(8 2 2 6 0 4 0 6);贵州省卫生健康委科学技术基金(g z w k j 2 0 2 1-3 5 7)作者简介:王顺,男(汉族),硕士,初级技师.E-m a i l:1 4 3 7 2 0 0 6 3 0q q.c o m通信作者:罗振华,E-m a i l:l u o 8 3 0 0s i n a.c o m103 中国真菌学杂志 2 0 2 3年8月 第1 8卷 第4期 C h i n J M y c o l,A u g u s t 2 0 2 3,V o l 1 8,N o.4 t h e 1 7 c l i n i c a l s t r a i n s,1 6(9 4.1%)h a d b i o f i l m f o r m a t i o n a b i l i t y,o f w h i c h 2,4 a n d 1 0 s t r a i n s h a d s t r o n g,g e n e r a l a n d w e a k b i o f i l m f o r m a t i o n c a p a c i t y.C D C 2 8 e x p r e s s e d u p r e g u l a t i o n i n 2 s t r a i n s w i t h s t r o n g a n d 3 s t r a i n s w i t h g e n e r a l a b i l i t y.C o n c l u-s i o n T h e i s o l a t e d C a n d i d a p a r a p s i l o s i s c o m p l e x w a s d o m i n a t e d b y t y p e I,a n d t h e t h r e e g e n o t y p e s t r a i n s w e r e n o t o b v i o u s-l y r e s i s t a n t t o a n t i f u n g a l d r u g s.D i f f e r e n t C a n d i d a p a r a p s i l o s i s s h o w e d d i f f e r e n t b i o f i l m f o r m a t i o n c a p a c i t y,a n d t h e C D C 2 8 g e n e m i g h t b e a s s o c i a t e d w i t h b i o f i l m f o r m a t i o n.【K e y w o r d s】C a n d i d a p a r a p s i l o s i s i n f e c t i o n;c l i n i c a l c h a r a c t e r i s t i c s;d r u g s u s c e p t i b i l i t y c h a r a c t e r i s t i c s;b i o f i l m f o r m a t i o n;g e n e e x p r e s s i o nC h i n J M y c o l,2 0 2 3,1 8(4):3 0 1-3 0 9 近年来近平滑念珠菌(C a n d i d a p a r a p s i l o s i s)成为临床分离最常见病原真菌之一1-2。其最先于1 9 2 8年分离得到。在2 0 0 5年,通过多位点序列分型发现近平滑念珠菌代表一种物种复合群,由近平滑念珠菌I型(C a n d i d a p a r a p s i l o s i s s e n s u s t r i c-t o),近平滑念珠菌I I型(C a n d i d a o r t h o p s i l o s i s)和近平滑念珠菌I I I型(C a n d i d a m e t a p s i l o s i s)所组成3。近平滑念珠菌复合群通常是血源性念珠菌感染中的第2常见念珠菌2,4-5。血源性念珠菌感染是医院相关血液感染的第3常见原因6。研究发现,血源性近平滑念珠菌感染与留置导管有关,因为它们能够在血管内器械表面形成生物膜4。生物膜是近平滑念珠菌的毒力因子,不同菌株生物膜形成能力也不同。临床采用常规抗真菌药物治疗念珠菌感染时,逐渐产生耐药性,尤其对唑类药物7。因此新型抗真菌药物研发对解决真菌感染治疗难题具有重要意义。MA F-1 A是本课题组前期分离得到的新型抗真菌肽,它对常见致病性念珠菌包括耐药菌株具有抗菌活性8。前期我们采用转录组测序研究MA F-1 A对近平滑念珠菌的干预作用,发 现 作 用 早 期 出 现2 1 8 7个 差 异 表 达 基因9。通过筛选与生物膜形成相关的差异表达基因发现C P A R 2_2 0 5 0 6 0(C D C 2 8)在近平滑念珠菌生长代谢过程中参与多个连锁反应,并发现该基因可能与念珠菌细胞周期及菌丝生长有关1 0-1 1。本研究以2 0 1 72 0 1 9年贵州地区分离的深部感染近平滑念珠菌复合群为对象,研究其临床分布和药敏特征,初步探讨近平滑念珠菌致病机制,为医院近平滑念珠菌复合群感染防治及抗菌药物研发奠定基础。1 材料与方法1.1 菌种来源 收集2 0 1 7年1月2 0 1 9年1 2月贵州地区两家综合医院门诊及住院患者送检标本中真菌感染菌种共1 9 1 7株,并收集感染念珠菌患者临床信息,包括性别、年龄、病房和样本类型。病房的分布包括外科、内科、I C U、急诊、儿科等,样本类型包括尿液、血液、伤口分泌物、粪便等。1.2 主要仪器及试剂B A C T E CTM F X血液培养仪、P h o e n i x-1 0 0微生物鉴定仪购自美国 B D 公司,基因扩增仪购自德国耶拿分析仪器公司,S y n e r g y H 1微孔板检测仪、C F X 9 6 实时荧光定量 P C R 仪购自美国 B i o T e k、B I O-R A D 公司,AT B F u n g u s 3药敏试剂盒购自法国生物梅里埃公司,酵母 D NA 提取试剂盒购自北京天根公司,T i r o l、P r i m e S c r i p tTM R T r e a g e n t K i t w i t h g D NA E r a s e r(p e r f e c t R e a l T i m e)、T B G r e e nTM P r e m i x E x T a q TM I I(T l i R N a s e H P l u s)试剂盒购自日本 T a k a r a 公司。1.3 菌种鉴定按照 全国临床检验操作规程 进行鉴定,将培养呈阳性的菌株革兰染色,镜下观察具有真菌孢子的菌株转移至沙堡弱培养基和科玛嘉显色平板培养,肉眼观察菌落颜色及形态。采用 B A C T E CTM F X 仪器鉴定血液标本感染菌种,P h o e n i x-1 0 0 仪器鉴定其他标本感染菌种。为了确定近平滑念珠菌复合群分型,提取菌种 D NA,扩增I T S区、2 6 S r R NA基因的D 1/D 2区域(引物见表1)。利用 B L A S T 程序将扩增序列与 G e n B a n k 序列库进行比对,比对结果中序列相似度达到9 8%以上时即可鉴定分型。1.4 药物敏感实验按照AT B F UNGU S 3说明书进行药敏实验及结果判读。抗真菌药物包括5-氟胞嘧啶、两性霉素B、氟康唑、伊曲康唑和伏立康唑,采用近平滑念珠菌标准菌株 AT C C 2 2 0 1 9作为质控菌株。203 中国真菌学杂志 2 0 2 3年8月 第1 8卷 第4期 C h i n J M y c o l,A u g u s t 2 0 2 3,V o l 1 8,N o.4 1.5 近平滑念珠菌生物膜形成能力检测 参照T a v a n t i等1 2的研究方法检测体外部分血源性近平滑念珠菌临床菌株生物膜形成能力。挑取培养2 4 h 的标准菌株 AT C C 2 2 0 1 9 和1 7株临床菌株于1/4沙堡弱液体培养基中混匀,调整菌液浓度为 21 06 C F U/m L。无菌9 6 孔板每孔取上述菌液1 0 0 L,每个菌设置 3 个重复。放置 3 7 培养 2 4 h。取出后弃培养基,无菌 P B S 缓冲液洗3 遍,于 S y n e r g y H 1检测O D 4 5 0 n m值。参照T a v a n t i等1 2的判定标准来判定菌株生物膜形成能力:O D 4 5 0 n m0.0 3,无生物膜形成能力;0.0 3O D 4 5 0 n m0.0 8,形 成 能 力 弱;0.0 8O D 4 5 0 n m0.0 5)(见表3)。血源性菌株中分别有4.0%和6.0%的菌株对氟康唑和伊曲康唑产生中介反应,非血源性菌株中分别有6.6%和8.8%的菌株对氟康唑和伊曲康唑产生中介反应,其余均敏感。抗菌药物对近平滑念珠菌复合群的活性在血源性与非血源性菌株的药敏结果中差异无统计学意义(P0.0 5)(见表4)。表3 3种分型菌株体外对五种抗真菌药物药敏情况T a b.3 T h e s u s c e p t i b i l i t y o f t h r e e s u b t y p e s t o f i v e a n t i f u n g a l d r u g s i n v i t r o抗菌药物菌种(n=1 4 1)近平滑念珠菌I型(n=1 0 7)近平滑念珠菌I I型(n=7)近平滑念珠菌I I I型(n=2 7)?2P5-氟胞嘧啶-敏感 中介 耐药1 0 7(1 0 0%)007(1 0 0%)002 7(1 0 0%)00403 中国真菌学杂志 2 0 2 3年8月 第1 8卷 第4期 C h i n J M y c o l,A u g u s t 2 0 2 3,V o l 1 8,N o.4(续表)抗菌药物菌种(n=1 4 1)近平滑念珠菌I型(n=1 0 7)近平滑念珠菌I I型(n=7)近平滑念珠菌I I I型(n=2 7)?2P两性霉素B-敏感 中介 耐药1 0 7(1 0 0%)007(1 0 0%)002 7(1 0 0%)00氟康唑1.1 6 70.5 5 8 敏感 中介 耐药1 0 1(9 4.4%)6(5.6%)06(8 5.7%)1(1 4.3%)02 6(9 6.3%)1(3.7%)0伊曲康唑1.0 4 40.5 9 3 敏感 中介 耐药9 9(9 2.5%)8(7.5%)06(8 5.7%)1(1 4.3%)02 6(9 6.3%)1(3.7%)0伏立康唑-敏感 中介 耐药1 0 7(1 0 0%)007(1 0 0%)002 7(1 0 0%)00表4 血源性和非血源性菌株体外抗真菌药物敏感结果比较T a b.4 C o m p a r i s o n o f i n v i t r o a n t i f u n g a l s u s c e p t i b i l i t y r e s u l t s f o r b l o o d s t r e a m a n d n o n-b l o o d s t r e a m s t r a i n s近平滑念珠菌分型抗菌药物敏感/%血源性菌株(n=5 0)非血源性菌株(n=9 1)总计?2P近平滑念珠I型(n=1 0 7)5-氟胞嘧啶两性霉素B氟康唑伊曲康唑伏立康唑2 7(1 0 0)2 7(1 0 0)2 6(9 6.3)2 6(9 6.3)2 7(1 0 0)8 0(1 0 0)8 0(1 0 0)7 5(9 3.8)7 3(9 1.3)8 0(1 0 0)1 0 7(1 0 0)1 0 7(1 0 0)1 0 1(9 4.4)9 9(9 2.5)1 0 7(1 0 0)-0.0 2 80.1 3 6-0.9 8 60.9 3 4-近平滑念珠I I型(n=7)5-氟胞嘧啶两性霉素B氟康唑伊曲康唑伏立康唑5(1 0 0)5(1 0 0)4(8 0.0)4(8 0.0)5(1 0 0)2(1 0 0)2(1 0 0)2(1 0 0)2(1 0 0)2(1 0 0)7(1 0 0)7(1 0 0)6(8 5.7)6(8 5.7)7(1 0 0)-2.3 7 62.3 7 6-0.3 0 50.3 0 5-近平滑念珠I I I型(n=2 7)5-氟胞嘧啶两性霉素B氟康唑伊曲康唑伏立康唑1 8(1 0 0)1 8(1 0 0)1 8(1 0 0)1 7(9 4.4)1 8(1 0 0)9(1 0 0)9(1 0 0)8(8 8.9)8(8 8.9)9(1 0 0)2 7(1 0 0)2 7(1 0 0)2 6(9 6.3)2 6(9 6.3)2 7(1 0 0)-0.6 5 30.2 8 0-0.7 2 20.8 4 0-所有菌株(n=1 4 1)5-氟胞嘧啶两性霉素B氟康唑伊曲康唑伏立康唑5 0(1 0 0)5 0(1 0 0)4 8(9 6.0)4 7(9 4.0)5 0(1 0 0)9 1(1 0 0)9 1(1 0 0)8 5(9 3.4)8 3(9 1.2)9 1(1 0 0)1 4 1(1 0 0)1 4 1(1 0 0)1 3 3(9 4.3)1 3 0(9 2.2)1 4 1(1 0 0)-0.0 4 90.0 5 1-0.9 7 60.9 7 5-503 中国真菌学杂志 2 0 2 3年8月 第1 8卷 第4期 C h i n J M y c o l,A u g u s t 2 0 2 3,V o l 1 8,N o.4 2.3 近平滑念珠菌生物膜形成能力检测 在1 7株临床菌株中,有1 6株(9 4.1%)具有生物膜形成能力,其中2、4、1 0株菌株生物膜形成能力强、一般、弱(见表5)。镜下发现,生物膜形成能力强的菌株菌体大量聚集形成致密网状结构;形成能力一般的菌株菌体较多,有菌丝生长且菌体聚集较明显;形成能力弱的菌株菌体少量,有部分聚集现象;无形成能力菌株菌体极少,无聚集(见图1)。2.4 不同生物膜形成能力近平滑念珠菌C D C 2 8基因表达情况与标准菌株AT C C 2 2 0 1 9对比,2株生物膜形成能力强的菌株表达上调显著(P0.0 1),3株形成能力一般的菌株表达上调较显著(P0.0 5),其他菌株无明显表达。将生物膜形成能力弱的菌株表5 近平滑念珠菌体外生物膜形成能力检测T a b.5 D e t e c t i o n o f i n v i t r o b i o f i l m f o r m a t i o n c a p a c i t y o f C a n d i d a p a r a p s i l o s i s编号菌株O D 4 5 0O D 4 5 0均值标准差生物膜形成能力1F 9 4 20.2 1 80.2 1 10.2 1 50.2 1 40.0 0 3强2F 2 1 0 90.1 6 30.1 6 10.1 9 10.1 7 10.0 1 7强3F 1 0 4 70.1 5 60.1 5 30.1 8 00.1 6 30.0 1 4一般4F 9 0 10.1 3 20.1 3 20.1 4 30.1 3 60.0 0 6一般5F 1 0 4 10.1 3 00.1 1 90.1 4 30.1 3 00.0 1 2一般6F 9 2 10.1 1 40.1 2 90.1 1 30.1 1 80.0 0 8一般7F 2 0 5 70.0 6 70.0 7 70.0 8 50.0 7 60.0 1 1弱8F 9 0 40.0 6 90.0 6 40.0 8 80.0 7 40.0 1 3弱9F 8 6 00.0 6 80.0 5 90.0 70.0 6 60.0 0 6弱1 0F 8 5 90.5 60.0 7 80.0 60.0 6 50.0 1 1弱1 1F 1 3 9 20.0 5 70.0 5 70.0 5 20.0 5 50.0 0 2弱1 2F 9 3 30.0 3 00.0 4 40.0 7 90.0 5 10.0 2 5弱1 3F 1 3 7 60.0 7 50.0 4 10.0 3 40.0 5 00.0 2 1弱1 4F 1 5 9 70.0 4 90.0 5 80.0 4 40.0 5 00.0 0 7弱1 5F 1 1 7 50.0 5 50.0 4 60.0 4 90.0 5 00.0 0 4弱1 6F 1 2 2 20.0 4 20.0 4 90.0 4 60.0 4 60.0 0 4弱1 7A T C C 2 2 0 1 90.0 3 80.0 2 30.0 3 70.0 3 20.0 0 8弱1 8F 3 1 90.0 0 50.0 0 30.0 0 80.0 0 50.0 0 3无图1 近平滑念珠菌体外生物膜形成情况观察(4 0 0)。A.F 3 1 9无生物膜形成能力;B.F 8 5 9生物膜形成能力弱;C.F 9 0 1生物膜形成能力一般;D.F 9 4 2生物膜形成能力强F i g.1 O b s e r v a t i o n o f i n v i t r o b i o f i l m f o r m a t i o n o f C a n d i d a p a r a p s i l o s i s(4 0 0).A.F 3 1 9 h a s n o b i o f i l m f o r m i n g a b i l i t y;B.F 8 5 9 b i o f i l m f o r m a t i o n a b i l i t y i s w e a k;C.F 9 0 1 b i o f i l m f o r m a t i o n a b i l i t y i s a v e r a g e;D.F 9 4 2 h a s s t r o n g b i o f i l m f o r m a t i o n a b i l i t y603 中国真菌学杂志 2 0 2 3年8月 第1 8卷 第4期 C h i n J M y c o l,A u g u s t 2 0 2 3,V o l 1 8,N o.4 与形成能力强菌株F 9 4 2相比,发现它们的C D C 2 8表达水平均低于F 9 4 2菌株,且具有统计学意义(P0.0 1)(见图 2)。图2 菌株C D C 2 8基因表达情况。与标准菌株AT C C 2 2 0 1 9对比:*:P0.0 5,*:P0.0 1;与菌株F 9 4 2对比,#:P0.0 5,#:P0.0 1F i g.2 E x p r e s s i o n o f C D C 2 8 g e n e i n s t r a i n s.C o m p a r e d w i t h s t a n d a r d s t r a i n AT C C 2 2 0 1 9,*:P0.0 5,*:P0.0 1;C o m p a r e d w i t h s t r a i n F 9 4 2,#:P0.0 5 a n d#:P0.0 13 讨 论现如今近平滑念珠菌复合群感染日渐增加,世界多地区念珠菌血症研究报道其为最常见菌种,给人类生命安全带来威胁1 3-1 4。国内最早有研究将近平滑念珠菌复合群分为3种基因型,分别为 I、I I 和 I I I 型1 5。有研究报道I 型最易引起感染,I I 型较少见,I I I 型较为罕见1 6-1 7。本研究发现I 型菌株占比最高(7 3.0%),I I I 型(2 0.9%)和 型(6.1%)较低,这可能与地区差异性有关。虽然 I I、I I I 型为近平滑念珠菌复合群的罕见感染菌种,但长期监测贵州地区 I I、I I I 型菌种发病率和易感性仍具有重要临床意义。不同年龄组和病房的近平滑念珠菌复合群感染分布存在差异,本研究中6 1岁的患者占比最高(4 2.9%),提示老年人为易感人群,与国内外研究报道相似1 6,1 8-1 9。我们发现外科是感染最多的病房,达3 7.4%,且老年患者占据外科的5 0%,这可能是由于术后患者身体免疫力较低,在接受导尿管、其他静脉注射设备和不同免疫抑制治疗时,容易造成念珠菌过度生长,引发感染2 0。本研究尿液和血液在菌种标本来源中并列第1(3 0.7%),与国内外研究一致2 1。尿液和血液易感染可能是患者在接受治疗时,导尿管与中心静脉导管植入并长期滞留,更易使菌种定植。提示我们要加强对本地区老年患者尤其是外科病房老年患者进行近平滑念珠菌感染监测,对导管植入术后患者进行定期导管护理,控制念珠菌感染源头。随着唑类、多烯类等抗菌药物大量使用,近平滑念珠菌对药物耐药性增加。有研究报道近平滑念珠菌对唑类药物产生明显耐药性,且强于其他念珠菌1 6,2 2-2 3。本研究3种分型菌株对5-氟胞嘧啶和两性霉素B均敏感,与研究报道一致1,2 4-2 5。血源性近平滑念珠菌对唑类有明显耐药性,耐药率达9 0%左右2 6-2 7。本研究血源性近平滑念珠菌药敏结果显示,3种分型中各有1株对唑类产生中介反应,其余均敏感。国内有研究报道3种分型对唑类敏感性大于9 5.0%1。印度1篇研究报道 I 型对氟康唑和伏立康唑敏感性为8 1.8%,I I、I I I 型对这两种药物敏感性为1 0 0%2 4。本研究非血源性3种分型中大部分对唑类具有敏感性,仅少部分菌株对氟康唑和伊曲康唑产生中介反应,未出现明显耐药性。提示贵州地区分离的近平滑念珠菌复合群对唑类未产生明显耐药性,但有少部分产生中介反应,因此治疗近平滑念珠菌感染时应依据药敏结果谨慎使用唑类,防止耐药性产生。生物膜形成是近平滑念珠菌易定植、产生耐药性的主要原因。有研究发现具有生物膜形成能力的 近 平 滑 念 珠 菌 对 感 染 患 者 致 死 率 高 达7 1.4%2 8。E s z t e r等2 9研究发现患者感染的血源性 近 平 滑 念 珠 菌 均 有 生 物 膜 形 成 能 力,且6 5.2%菌 株 生 物 膜 形 成 明 显,对 患 者 致 死 率 达3 0.0%。本研 究1 7株血 源性近 平 滑 念 珠 菌 中,9 4.1%的菌株具有生物膜形成能力。提示引起血源性感染的近平滑念珠菌大多数具有生物膜形成能力,给感染患者带来威胁,因此抑制生物膜形成将成为近平滑念珠菌感染防治的重要靶点。多研究发现抗菌肽可针对生物膜形成起到较好干预作用3 0-3 1。课题组前期发现抗菌肽MA F-1 A对近平滑念珠菌生物膜形成起到抑制作用,并基于转录组学研究发现MA F-1 A在作用近平滑念珠菌早期时出现2 1 8 7个差异表达基因9,3 2。采用生物信息学技术分析发现C D C 2 8基因在近平滑念珠菌生长代谢过程中参与多个连锁反应。有研究报道C D C 2 8对白念珠菌细胞周期的G 1/S期和703 中国真菌学杂志 2 0 2 3年8月 第1 8卷 第4期 C h i n J M y c o l,A u g u s t 2 0 2 3,V o l 1 8,N o.4 G 2/M期转化具有关键作用3 3。Am y等1 1发现C d c 2 8不仅能调控白念珠菌细胞周期,且促进白念珠菌菌丝形成。新加坡1篇研究发现白念珠菌C D C 2 8、C B K1基因通过调控F k h 2转录因子磷酸化,促进白念珠菌菌丝形成,增强生物膜形成3 4。然而,目前未曾有研究报道C D C 2 8对近平滑念珠菌生长的相关作用。本研究通过检测不同生物膜形成能力近平滑念珠菌C D C 2 8基因表达水平,发现大部分生物膜形成能力强、形成能力一般的菌株,该基因表达上调,且表达差异具有统计学意义;形成能力弱的菌株表达不明显,提示C D C 2 8基因的表达在近平滑念珠菌生物膜形成过程中具有一定作用,下一步我们将从分子学角度展开对近平滑念珠菌生物膜形成的干预作用研究,为日后近平滑念珠菌感染防治、耐药性控制以及新型抗菌药物研发奠定理论基础。参 考 文 献1 GUO J,Z HAN G M,Q I AO D,e t a l.P r e v a l e n c e a n d a n t i-f u n g a l s u s c e p t i b i l i t y o f C a n d i d a p a r a p s i l o s i s s p e c i e s c o m-p l e x i n e a s t e r n C h i n a:A 1 5-y e a r r e t r o s p e c t i v e s t u d y b y E C I-F I G J.F r o n t M i c r o b i o l,2 0 2 1,1 2:6 4 4 0 0 0.D O I:1 0.3 3 8 9/f m i c b.2 0 2 1.6 4 4 0 0 0.2 MA R C O S-A R I A S C,MA T E O E,J UR A D O-MA R T I N I,e t a l.U t i l i t y o f t w o P C R-R F L P-b a s e d t e c h n i q u e s f o r i d e n t i-f i c a t i o n o f C a n d i d a p a r a p s i l o s i s c o m p l e x b l o o d i s o l a t e sJ.M y c o s e s,2 0 2 0,6 3(5):4 6 1-4 7 0.3 T AVAN T I A,D AV I D S ON A D,GOW N A,e t a l.C a n d i-d a o r t h o p s i l o s i s a n d C a n d i d a m e t a p s i l o s i s s p p.n o v.t o r e-p l a c e C a n d i d a p a r a p s i l o s i s g r o u p s I I a n d I I I J.J C l i n M i-c r o b i o l,2 0 0 5,4 3