高迁移率族蛋白1对脐静脉内皮细胞迁移及相关蛋白表达的影响.pdf

第5 4卷 第5期2 0 2 3年9月 太原理工大学学报J OUR NA L O F T A I YUAN UN I V E R S I T Y O F T E CHNO L OG Y V o l.5 4 N o.5 S e p.2 0 2 3 引文格式:杜苗苗,马海洋,侯添,等.高迁移率族蛋白1对脐静脉内皮细胞迁移及相关蛋白表达的影响J.太原理工大学学报,2 0 2 3,5 4(5):9 0 5-9 1 2.D U M i a o m i a o,MA H a i y a n g,HOU T i a n,e t a l.E f f e c t s o f h i g h m o b i l i t y g r o u p b o x 1 o n m i g r a t i o n a n d e x p r e s s i o n o f r e l a t e d p r o t e i n s i n u m b i l i c a l v e i n e n d o t h e l i a l c e l l sJ.J o u r n a l o f T a i y u a n U n i v e r s i t y o f T e c h n o l o g y,2 0 2 3,5 4(5):9 0 5-9 1 2.收稿日期:2 0 2 2-0 4-1 8;修回日期:2 0 2 2-0 5-1 2 基金项目:国家自然科学基金资助项目(3 1 8 7 0 9 3 4)第一作者:杜苗苗(1 9 9 5-),硕士研究生,(E-m a i l)d u m i a o m i a o 1 1 0 41 6 3.c o m 通信作者:安美文(1 9 6 6-),教授,博士生导师,主要从事组织工程及生物力学的研究,(E-m a i l):m e i w e n_a n 1 6 3.c o m高迁移率族蛋白1对脐静脉内皮细胞迁移及相关蛋白表达的影响杜苗苗1,马海洋1,侯 添1,郭继强1,2,安美文1(1.太原理工大学 生物医学工程学院,生物医学工程研究所,太原 0 3 0 0 2 4;2.山西白求恩医院,山西医科大学第三医院,太原 0 3 0 0 3 2)摘 要:【目的】组织工程中微循环的建立在生物材料植入中发挥重要作用,其中血管内皮细胞迁移是快速血管生成的主要影响因素。组织和器官损伤后常引发炎症反应,高迁移率族蛋白1(HMG B 1)是炎症反应的起始因子,但对内皮细胞迁移的影响尚不清楚。【方法】体外提取和培养人脐静脉内皮细胞(HUV E C s),并进行细胞表型鉴定;构建培养液中含有HMG B 1的浓度梯度,通过C C K-8、划痕实验和T r a n s w e l l小室实验检测HUV E C s的增殖能力和迁移能力,采用R T-q P C R和W e s t e r n B l o t检测细胞内细胞增殖因子和迁移因子基因和蛋白的表达情况。【结果】不同浓度HMG B 1对HUV E C s的增殖能力无显著影响,但对细胞迁移能力有浓度依赖性,随着HMG B 1浓度增加,细胞的迁移能力增强。F G F-2表达随HMG B 1浓度增加表达上调;高浓度HMG B 1处理HUV E C s后,V E G F A表达明显下降。【结论】HMG B 1可通过F G F-2促进HUV E C s迁移,为今后HMG B 1对内皮细胞迁移能力的影响研究提供依据。关键词:人脐静脉内皮细胞;高迁移率族蛋白1;迁移;血管内皮生长因子A;成纤维细胞生长因子-2中图分类号:Q 2 9 1 文献标识码:AD O I:1 0.1 6 3 5 5/j.t y u t.1 0 0 7-9 4 3 2.2 0 2 3.0 5.0 2 0 文章编号:1 0 0 7-9 4 3 2(2 0 2 3)0 5-0 9 0 5-0 8E f f e c t s o f H i g h M o b i l i t y G r o u p B o x 1 o n M i g r a t i o n a n d E x p r e s s i o n o f R e l a t e d P r o t e i n s i n U m b i l i c a l V e i n E n d o t h e l i a l C e l l sD U M i a o m i a o1,MA H a i y a n g1,H O U T i a n1,G U O J i q i a n g1,2,A N M e i w e n1(1.I n s t i t u t e o f B i o m e d i c a l E n g i n e e r i n g,C o l l e g e o f B i o m e d i c a l E n g i n e e r i n g,T a i y u a n U n i v e r s i t y o f T e c h n o l o g y,T a i y u a n 0 3 0 0 2 4,C h i n a;2.S h a n x i B e t h u n e H o s p i t a l,T h i r d H o s p i t a l o f S h a n x i M e d i c a l U n i v e r s i t y,T a i y u a n 0 3 0 0 3 2,C h i n a)A b s t r a c t:【P u r p o s e s】T h e e s t a b l i s h m e n t o f m i c r o c i r c u l a t i o n i n t i s s u e e n g i n e e r i n g p l a y s a n i m-p o r t a n t r o l e i n b i o m a t e r i a l s i m p l a n t a t i o n,i n w h i c h t h e m i g r a t i o n o f v a s c u l a r e n d o t h e l i a l c e l l s i s t h e m a i n f a c t o r a f f e c t i n g r a p i d a n g i o g e n e s i s.T i s s u e a n d o r g a n i n j u r y o f t e n l e a d s t o i n f l a mm a t i o n,a n d h i g h m o b i l i t y g r o u p b o x 1(HMG B 1)i s t h e i n i t i a t i n g f a c t o r o f i n f l a mm a t i o n,w h i l e i t s e f f e c t o n t h e m i g r a t i o n o f e n d o t h e l i a l c e l l s r e m a i n s u n c l e a r.【M e t h o d s】H u m a n u m b i l i c a l v e i n e n d o t h e l i-a l c e l l s(HUV E C s)w e r e e x t r a c t e d a n d c u l t u r e d i n v i t r o,a n d t h e i r p h e n o t y p e s w e r e i d e n t i f i e d.T h e c o n c e n t r a t i o n g r a d i e n t o f HMG B 1 i n c u l t u r e m e d i u m w a s c o n s t r u c t e d,a n d t h e p r o l i f e r a t i o n a n d m i g r a t i o n o f HUV E C s w e r e d e t e c t e d b y C C K-8,s c r a t c h t e s t,a n d T r a n s w e l l c h a m b e r t e s t.T h e e x p r e s s i o n o f g e n e s a n d p r o t e i n s o f c e l l p r o l i f e r a t i o n f a c t o r a n d m i g r a t i o n f a c t o r i n HUV E C s w a s d e t e c t e d b y R T-q P C R a n d W e s t e r n B l o t.【F i n d i n g s】D i f f e r e n t c o n c e n t r a t i o n s o f HMG B 1 h a d n o s i g n i f i c a n t e f f e c t o n p r o l i f e r a t i o n o f HUV E C s,b u t w a s c o n c e n t r a t i o n-d e p e n d e n t o n c e l l m i g r a-t i o n.W i t h t h e i n c r e a s e o f HMG B 1 c o n c e n t r a t i o n,t h e m i g r a t i o n a b i l i t y o f c e l l s w a s e n h a n c e d.T h e e x p r e s s i o n o f F G F-2 w a s u p-r e g u l a t e d w i t h t h e i n c r e a s e o f HMG B 1 c o n c e n t r a t i o n.T h e e x-p r e s s i o n o f V E G F A d e c r e a s e d s i g n i f i c a n t l y a f t e r HUV E C s w a s t r e a t e d w i t h h i g h HMG B 1 c o n-c e n t r a t i o n.【C o n c l u s i o n s】HMG B 1 c a n p r o m o t e t h e m i g r a t i o n o f HUV E C s t h r o u g h F G F-2,w h i c h p r o v i d e s a b a s i s f o r t h e s t u d y o f t h e e f f e c t o f HMG B 1 o n t h e m i g r a t i o n a b i l i t y o f e n d o t h e l i-a l c e l l s i n t h e f u t u r e.K e y w o r d s:h u m a n u m b i l i c a l v e i n e n d o t h e l i a l c e l l s;h i g h m o b i l i t y g r o u p b o x 1;m i g r a t i o n;v a s c u l a r e n d o t h e l i a l g r o w t h f a c t o r A;f i b r o b l a s t g r o w t h f a c t o r-2 组织工程材料在人体病变或损伤组织的修复与重建中显示出巨大的潜力1。由于微循环受损,缺乏营养供应,生物性材料受到缺氧和营养供应不足的影响,很难发挥功能2。因此,微循环的建立是生物材料在临床应用中发挥治疗作用需要解决的最大挑战之一3。微血管网络是由内皮细胞组成的单层细胞动态结构,在受损组织的修复中起关键作用,也决定了生物性材料在体内的功能4。诱导血管生成对组织工程支架的应用具有重要意义1。高迁移率族蛋白1(h i g h m o b i l i t y g r o u p b o x 1,HMG B 1)是一种非常保守的核蛋白,主动或被动分泌到细胞外并发挥作用,通过诱导促炎细胞因子的释放参与炎症反应5。植入物引起的外科创伤可导致HMG B 1的释放6。另外有报道称在细胞损伤后的亚急性期,细胞外的HMG B 1水平升高7。越来越多的证据表明,HMG B 1可能是一种促血管生成因子,通过刺激血管内皮 细胞的萌 发和迁 移 来 促 进 血 管 生成8。研究表明HMG B 1固定组织工程支架可以募集并诱导间充质干细胞向成骨通路分化,促进成骨和血管化9。种植体中HMG B 1的增加可能对内皮细胞的迁移和微循环的形成有一定的影响。血管内皮细胞的迁移是血管生成过程中的重要环节,并且在体内稳态和血管生成中起着重要作用1 0。成熟血管网络的形成需要大量血管生成因子的精确时空调控,内皮细胞的增殖和迁移受各种刺激因子的影响,包括血管内皮生长因子A(v a s c u-l a r e n d o t h e l i a l g r o w t h f a c t o r A,V E G F A)和成纤维细胞生长因子-2(f i b r o b l a s t g r o w t h f a c t o r-2,F G F-2)1 1.V E G F是血管生成中最重要的调节因子,是特异性的促进内皮细胞增殖的细胞因子,其水平与血管形成密切相关1 2-1 3。V E G F A是V E G F家族中最具特征的成员,参与血管通透性以及内皮细胞的募集,是血管生成过程最有力的刺激因子,在多种体 内 模 型 中 诱 导 了 强 效 的 血 管 生 成 反 应1 1,1 4。F G F由肝素结合多肽组成,对血管生成等生物学活性具有促进作用1 5-1 6。F G F-2是F G F的一种亚型,是内皮细胞生长和迁移的有力刺激因子1 6-1 7。研究表明F G F-2能促进内皮细胞的血管生成,其传递能在体内加速血管生成1 8-1 9。基于以上研究进展,本研究将分析不同浓度HMG B 1对HUV E C s增殖、迁移以及V E G F A和F G F-2表达的影响。1 实验1.1 主要试剂实验所用的人体脐带组织取自山西白求恩医院。胎牛血清(G i b c o);内皮生长因子(S c i e n C e l l);GA P DH抗体(碧云天);HMG B 1蛋白、C D 3 1抗体、山羊抗小鼠I g G H&L、V E G F A抗体、F G F-2抗体、山羊抗兔I g G H&L-HR P、山羊抗小鼠I g G H&L-HR P(A b c a m);M a t r i g e l凝胶(B D);C C K-8试剂盒(普利莱);C o s t a r T r a n s w e l l小室(C o r n i n g);E a s t-s t e p S u p e r总R NA提取试剂盒(P r o m e g a);P r i m e-S c r i p tTMR T w i t h g D NA E r a s e r试剂盒、T B G r e e n P r e m i x E x T a q I I(T a k a r a);P C R引物由上海生工公司合成。609太 原 理 工 大 学 学 报 第5 4卷 1.2 内皮细胞的提取及鉴定采用脐带输注0.1%胶原酶法提取单层内皮细胞,将细胞悬浮于含有1 0%胎牛血清、1%内皮生长因子和1%青链霉素的DMEM培养液中。细胞在3 7、5%C O2细胞培养箱中培养。孵育2 4 h后,吸除血细胞,每天更换培养液并拍照观察。将细胞与含2 0 g/m L乙酰化低密度脂蛋白(D i l-a c-L D L)的培养液在3 7 条件下孵育4 h,P B S缓冲液洗涤,4%多聚甲醛溶 液固定细胞2 0 m i n,室温避光1 0 m i n复染D A P I,荧光倒置显微镜下观察细胞。C D 3 1抗体以13 0 0稀释为一抗,山羊抗小鼠I g G H&L以11 0 0 0稀释为二抗进行免疫荧光染色,室温避光1 0 m i n复染D A P I,荧光显微镜下观察。将细胞接种于涂有M a t r i g e l凝胶的培养板上,8 h后显微镜下观察细胞成环情况。1.3 C C K-8检测细胞增殖能力细胞接种于9 6孔板(31 03细胞/孔),在细胞培养箱中培养。细胞贴壁后,更换含0、1 0 0、2 0 0、4 0 0、8 0 0 n g/m L HMG B 1的培养液,分别于1 2、2 4、4 8 h加入含体积分数1 0%C C K-8的DMEM培养液,每组6个复孔,再将细胞在培养箱中培养2 h.用微孔板分光光度计(M u l t i s k a n GO,美国T h e r m o F i s h e r)检测4 5 0 n m处的光密度值(O D4 5 0).1.4 划痕以及T r a n s w e l l小室实验检测细胞迁移能力 划痕实验将细胞接种于2 4孔培养板中,生长至融合。用无血清培养液饥饿培养2 4 h,2 0 0 L移液管尖沿直线形成划痕,P B S洗涤细胞3次,换成含0、1 0 0、2 0 0、4 0 0、8 0 0 n g/m L HMG B 1的无血清培养液。在细胞成像多功能检测系统(C y t a t i o n 1,美国B i o T e k)上培养4 8 h,每1 2 h对同一划痕区域的细胞进行单层成像,实验重复5次。用I m a g e J软件测量划痕区域,确定伤口愈合率。创面愈合率公式如下:创面愈合率=0 h划伤面积-n h划伤面积0 h划伤面积1 0 0%.使用T r a n s w e l l小室在2 4孔板上评估细胞迁移。在无血清DMEM培养液中,上室分别接种密度为41 05细胞/m L的细胞悬液2 0 0 L,下室分别加入含0、1 0 0、2 0 0、4 0 0、8 0 0 n g/m L HMG B 1的无血清培养液,培养1 2 h.4%多聚甲醛溶液固定细胞2 0 m i n,0.1%结晶紫染液染色,将小室膜上表面细胞用棉签擦除。在显微镜下观察迁移细胞,并使用I m a g e J软件从5个随机区域中计数,实验重复3次。1.5 R e a l-t i m e q P C R检测基因表达将HUV E C s接种于6孔培养板中,生长至融合。更换无血清培养液2 4 h,换成含0、1 0 0、2 0 0、4 0 0、8 0 0 n g/m L HMG B 1的无血清培养液。培养1 2、2 4、4 8 h后使用E a s t s t e p S u p e r总R NA提取试剂盒提取总R NA.使用带有去除g D NA的P r i m e-S c r i p tTMR T试剂盒去除基因组D NA并合成c D-NA。采用T B G r e e n P r e m i x E x T a q I I在实时荧光定 量P C R系 统(S t e p O n e P l u sTM,美 国T h e r m o F i s h e r)中进行实时荧光定量聚合酶链反应(R T-q P C R)扩增细胞R NA。采用2-C T方法对结果进行分析,实验重复3次。P C R引物序列:V E G F A正向为AT C GAG T A C AT C T T C AAG C C AT,反向为G T GAG G T T T GAT C C G C AT AAT C;F G F 2正 向为C AT C AAG C T A C AA C T T C AAG C A,反 向 为C C G T AA C A C AT T T AGAAG C C AG;GA P DH正向为C AAG G G C AT C C T G G G C T A C A C T,反 向 为C T C T C T C T T C C T C T T G T G C T C T T G C.1.6 W e s t e r n B l o t检测蛋白表达将HUV E C s接种于6孔培养板中,生长至融合。更换无血清培养液2 4 h,换成含0、1 0 0、2 0 0、4 0 0、8 0 0 n g/m L HMG B 1的无血清培养液。培养1 2、2 4、4 8 h后用含蛋白酶和磷酸酶抑制剂的R I P A裂解液冰上裂解细胞,4 下1 2 0 0 0 g离心5 m i n,取上清,B C A法测定上清总蛋白含量。加入5倍的S D S-P AG E蛋白上样缓冲液9 5 加热5 m i n,S D S-P AG E分离蛋白,P V D F转膜,含5%B S A的T B S T(T r i s缓冲盐水,0.1%吐温-2 0)封闭膜,4 一抗孵育过夜,V E G F A抗体、F G F-2抗体和GA P DH抗体均以12 0 0 0稀释,T B S T洗膜。二抗室温孵育1 h,山羊抗兔I g G H&L-HR P和山羊抗小鼠I g G H&L-HR P均以11 0 0 0 0稀释,T B S T洗膜。条带用E C L超敏发光液在自动化学发光图像分析系统(T a n o n 6 4 0 0,上海天能)检测。I m a g e J软件对蛋白条带进行量化,以GA P DH归一化,实验重复3次。1.7 统计学处理应用S P S S 1 9.0统计学软件进行数据分析。数据以平均值标准差形式表示。数据采用单因素方差分析。对于事后比较,采用F i s h e rs l e a s t s i g n i f i-c a n t d i f f e r e n c e(L S D)检验。P0.0 5)。表明HMG B 1在此浓度以及时间范围内对HU-V E C s的增殖和细胞活力无影响。1.51.00.50OD450?nm122448时间/?h0?ng/mL100?ng/mL200?ng/mL400?ng/mL800?ng/mL图2 不同浓度HMG B 1对HUV E C s增殖能力的影响F i g.2 E f f e c t s o f d i f f e r e n t c o n c e n t r a t i o n s o f HMG B 1 o n p r o l i f e r a t i o n o f HUV E C s2.3 HMG B 1对HUV E C s迁移能力的影响划痕实验如图3(a)所示,创面愈合率如图4所示。结果表明:1)不同浓度HMG B 1作用后,HU-V E C s在不同作用时间后各组的创面愈合率随培养时间的增加而增高。2)各浓度HMG B 1作用1 2 h,只有8 0 0 n g/m L组与对照组间比较差异有统计学意义(P0.0 5).3)各浓度HMG B 1作用2 4、3 6、4 8 h,除1 0 0 n g/m L组外各浓度组与对照组间比较差异 均 有 统 计 学 意 义(P0.0 5).4)各 浓 度HMG B 1作用2 4 h,2 0 0 n g/m L或4 0 0 n g/m L组与1 0 0 n g/m L与其他浓度实验组间比较差异均有统计学意义,8 0 0 n g/m L与其他浓度实验组间比较差异均有统计学意义(P0.0 5).5)各浓度HMG B 1作用3 6 h,1 0 0 n g/m L或8 0 0 n g/m L组与其他各浓度组分别比较差异均有统计学意义(P0.0 5).6)各浓度HMG B 1作用4 8 h,1 0 0 n g/m L组与其他各浓度组比较差异均有统计学意义(P0.0 5),2 0 0 n g/m L组与8 0 0 n g/m L组比较差异均有统计学意义(P0.0 5).T r a n s w e l l实验如图3(b)所示,迁移细胞数如809太 原 理 工 大 学 学 报 第5 4卷 图5所示。结果表明,除1 0 0 n g/m L组外不同浓度组与对照组比较差异均有统计学意义(P0.0 5),各浓度组间比较差异均有统计学意义(P0.0 5).2)各浓度HMG B 1作用4 8 h,4 0 0 n g/m L或8 0 0 n g/m L组与对照组V E G F A基因表达比较差异有统计学意义(P0.0 5).3)不同浓度HMG B 1作用1 2或2 4 h,各浓度组与对照组F G F-2基因表达比较差异均有统计学意义(P0.0 5).4)不同浓度HMG B 1作用1 2 h,1 0 0 n g/m L和8 0 0 n g/m L组F G F-2基因表达比较差异有统计学意义(P0.0 5).5)不同浓度HMG B 1作用2 4 h,1 0 0 n g/m L组与各浓度组间F G F-2基因表达比较差异均有统计学意义(P0.0 5).结果表明,长时间高浓度HMG B 1作用会抑制HUV E C s中V E G F A基 因 的 表 达,低 浓 度HMG B 1作用则可促进HUV E C s中F G F-2基因的表达,长时间HMG B 1作用对HUV E C s中F G F-2基因表达无促进作用。100806040200创面愈合率/?%122448时间/?h0?ng/mL100?ng/mL200?ng/mL400?ng/mL800?ng/mL*P0.0 5,HMG B 1处理组v.s.对照组;#P0.0 5).2)不同浓度HMG B 1作用2 4 h,只有8 0 0 n g/m L组与对照组间V E G F A蛋白表达比较差异有统计学意义(P0.0 5),1 0 0 n g/m L组与其他各浓度组V E G F A蛋白表达比较差异均有统计学意义(P0.0 5),2 0 0 n g/m L组和8 0 0 n g/m L组V E G-F A蛋白表达比较差异均有统计学意义(P0.0 5).3)不同浓度HMG B 1作用4 8 h,4 0 0 n g/m L或8 0 0 n g/m L组与对照组间V E G F A蛋白表达比较差异有统计学意义(P0.0 5),1 0 0 n g/m L或2 0 0 n g/m L组与8 0 0 n g/m L组V E G F A蛋白表达比较差异均有统计学意义(P0.0 5).4)不同浓度HMG B 1作用1 2、2 4、4 8 h,各浓度组与对照组F G F-2蛋白表达比较差异均有统计学意义(P0.0 5).5)各浓度HMG B 1作用1 2 h,1 0 0或2 0 0 n g/m L组与4 0 0或8 0 0 n g/m L组F G F-2蛋白表达分别比较差异均有统计学意义(P0.0 5).6)各浓度HMG B 1作用4 8 h,4 0 0 n g/m L组与1 0 0或8 0 0 n g/m L组F G F-2蛋白表达比较差异均有统计学意义(P0.0 5).结果表明长时间高浓度HMG B 1作用会抑制HUV E C s中V E G F A蛋白的表达,低浓度HMG B 1作用可促进HUV E C s中F G F-2蛋白的表达。2.01.51.00.50VEGFA?mRNA 相对表达122448时间/?h0?ng/mL100?ng/mL200?ng/mL400?ng/mL800?ng/mL（a）543210FGF-2?mRNA 相对表达122448时间/?h0?ng/mL100?ng/mL200?ng/mL400?ng/mL800?ng/mL（b）图6 不同浓度HMG B 1对HUV E C s中V E G F A以及F G F-2基因表达的影响F i g.6 E f f e c t s o f HMG B 1 c o n c e n t r a t i o n o n V E G F A a n d F G F-2 g e n e e x p r e s s i o n i n HUV E C s3 讨论内皮细胞的迁移是血管重塑以及血管再生的重要过程,例如血管成形术以及旁路手术后的血管生成、血管生成以及再内皮化,在组织工程材料的细胞植入中发挥着关键作用2 0-2 1。细胞外HMG B 1可以参与 多 种 细 胞 的 迁 移、炎 症 和 修 复 反 应2 2-2 4。019太 原 理 工 大 学 学 报 第5 4卷 HMG B 1可以促进内皮细胞的通透性,诱导细胞的出芽和迁移,且具有剂量依赖性2 5-2 6。本研究结果表明不同浓度HMG B 1对HUV E C s的增殖无影响,但可促进HUV E C s的迁移。V E G F A是最重要的内皮细胞激活剂,可以激活血管生成以及血管通透性2 7。低浓度的HMG B 1(1 2.52 0 0 n g/m L)干 预 间 充 质 干 细 胞,可 使V E G F的分泌显著增加;而高浓度的HMG B 1(4 0 0 n g/m L或8 0 0 n g/m L)则使V E G F分泌显著减少2 8。与本研究结果一致,HMG B 1对HUV E C s的V E G-F A表达具有双向调节作用,进而影响内皮细胞的增殖和迁移,调节血管生成。2.01.51.00.50VEGFA 蛋白相对表达122448时间/?h0?ng/mL100?ng/mL200?ng/mL400?ng/mL800?ng/mL（d）VEGFA43210FGF-2 蛋白相对表达122448时间/?h0?ng/mL100?ng/mL200?ng/mL400?ng/mL800?ng/mL（e）FGF-2VEGFAFGF-2GAPDH40?ku18?ku36?ku12?h（a）12?h1000200 400800HMGB1?/?（ng mL-1）VEGFAFGF-2GAPDH40?ku18?ku36?ku24?h（b）24?h1000200 400800HMGB1?/?（ng mL-1）VEGFAFGF-2GAPDH40?ku18?ku36?ku48?h（c）48?h1000200 400800HMGB1?/?（ng mL-1）图7 不同浓度HMG B 1对HUV E C s中V E G F A和F G F-2蛋白表达的影响F i g.7 E f f e c t s o f HMG B 1 c o n c e n t r a t i o n o n V E G F A a n d F G F-2 p r o t e i n e x p r e s s i o n i n HUV E C s F G F-2是刺激内皮细胞迁移和增殖的最有效的天然趋化剂之一。体外损伤模型表明受损的内皮细胞可以释放F G F-22 9.损伤的内皮细胞会刺激内源性F G F水平升高,并促进内皮细胞迁移3 0。在大鼠颈动脉的损伤模型中发现,迁移的内皮细胞中持续表达F G F-23 1.本研究发现高浓度HMG B 1显著促进HUV E C s中F G F-2的表达,进而促进内皮细胞的迁移。临床患者在组织工程支架植入以及受到血管损伤后,会引发局部炎症反应,较轻的炎症反应会促进血管的修复,而损伤较严重,炎症因子分泌较多,会抑制血管内皮细胞的增殖,从而影响血管的修复与重建。从研究结果分析说明,炎症反应会引发内皮细胞的迁移,且随着HMG B 1的浓度升高,对细胞迁移的增强作用增加,进而促进血管的形成。综上所述,HMG B 1可通过F G F-2促进内皮细胞的迁移,且具有浓度依赖性,进而促进血管形成。下一步将研究HMG B 1在组织工程支架中对内皮细胞迁移的影响,以期在支架材料中为HMG B 1对血管形成的作用提供依据。参考文献:1 T R ONO L ON E J J,J A I N A.E n g i n e e r i n g n e w m i c r o v a s c u l a r n e t w o r k s o n-c h i p:i n g r e d i e n t s,a s s e m b l y,a n d b e s t p r a c t i c e sJ.A d v a n c e d F u n c t i o n a l M a t e r i a l s,2 0 2 1,3 1(1 4):2 0 0 7 1 9 9.2 R OUWK EMA J,R I V R ON N C,VAN B L I T T E R S W I J K C A.V a s c u l a r i z a t i o n i n t i s s u e e n g i n e e r i n gJ.T r e n d s i n B i o t e c h n o l-o g y,2 0 0 8,2 6(8):4 3 4-4 4 1.3 YAN G G,MAHA D I K B,C HO I J Y,e t a l.V a s c u l a r i z a t i o n i n t i s s u e e n g i n e e r i n g:f u n d a m e n t a l s a n d s t a t e-o f-a r tJ.P r o g r e s s i n B i o m e d i c a l E n g i n e e r i n g,2 0 2 0,2(1):0 1 2 0 0 2.4 C A RME L I E T P,J A I N R K.A n g i o g e n e s i s i n c a n c e r a n d o t h e r d i s e a s e sJ.N a t u r e,2 0 0 0,4 0 7(6 8 0 1):2 4 9-2 5 7.5 F E N G Y,HU S,L I U L,e t a l.HMG B 1 c o n t r i b u t e s t o o s t e o a r t h r i t i s o f t e m p o r o m a n d i b u l a r j o i n t b y i n d u c i n g s y n o v i a l a n g i o-g e n e s i sJ.J o u r n a l o f O r a l R e h a b i l i t a t i o n,2 0 2 1,4 8(5):5 5 1-5 5 9.119 第5期 杜苗苗,等:高迁移率族蛋白1对脐静脉内皮细胞迁移及相关蛋白表达的影响6 R ANA THUN GA D T S,A R T E A GA A,B I GU E T T I C C,e t a l.M o l e c u l a r-l e v e l u n d e r s t a n d i n g o f t h e i n f l u e n c e o f i o n s a n d w a-t e r o n HMG B 1 a d s o r p t i o n i n d u c e d b y s u r f a c e h y d r o x y l a t i o n o f T i t a n i u m i m p l a n t sJ.L a n g m u i r,2 0 2 1,3 7(3 3):1 0 1 0 0-1 0 1 1 4.7 H I R A T A Y,KUR O B E H,H I GA S H I D A M,e t a l.HMG B 1 p l a y s a c r i t i c a l r o l e i n v