高危人乳头瘤病毒基因分型聚合酶链式反应检测在宫颈病变筛查中的价值.pdf

基层医学论坛 2023 年 10 月第 27 卷第 29 期高危人乳头瘤病毒基因分型聚合酶链式反应检测在宫颈病变筛查中的价值万英净 朱纯刚（瑞昌市人民医院，江西 瑞昌 332200）作者简介：万英净，女，本科，主管检验师。【摘要】目的分析高危人乳头瘤病毒（HR-HPV）基因分型（DNA）聚合酶链式反应（PCR）检测宫颈病变的临床价值。方法对瑞昌市人民医院 2018 年 1 月2020 年 12 月8?600 份妇女宫颈脱落细胞样本进行 HR-HPV?DNA?PCR、超薄液基细胞学检查（TCT），以组织病理检查结果为金标准，对比 2 种检测方法的诊断效能、不同病变检出率，并分析HR-HPV 各基因型与宫颈病变相关性。结果组织病理检查结果显示，8?600 份妇女宫颈脱落细胞样本中，阳性 1?462 份、阳性率为 17.00%，阴性 7?138 份、阴性率为 83.00%；TCT 检测结果显示，真阳性 1?298 份、假阳性 412 份、真阴性 6?726 份、假阴性 164 份；HR-HPV?DNA?PCR 检测结果显示，真阳性 1?401 份、假阳性243份、真阴性 6?895 份、假阴性 61 份。HR-HPV?DNA?PCR 检测方法诊断准确度、敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值显著高于 TCT 检测，差异有统计学意义（P0.05）；TCT、HR-HPV?DNA?PCR?2 种检测方法相比，差异无统计学意义（P0.05）；与 TCT 检测方法相比，HR-HPV?DNA?PCR 检测方法对不同病变检出率更接近于病理检查，诊断价值更高。经 Logistic 回归分析，HPV16、18、31、33、52、58 亚型与宫颈病变的发生均呈正相关（P0.05）。结论HR-HPV 感染与宫颈病变具有密切的相关性，HR-HPV?DNA?PCR 在宫颈病变的检测中具有较高检出率，诊断效能显著。【关键词】人乳头瘤病毒；基因分析；宫颈病变；超薄液基细胞学中图分类号：R739.34?文献标识码：A?文章编号：1672-1721（2023）29-0114-03DOI：10.19435/j.1672-1721.2023.29.038目前，大量研究已证实，HR-HPV 感染后所引起的原癌基因、抑癌基因表达改变可促进细胞的增殖与恶性轻化，HR-HPV 的持续感染为导致宫颈癌发生的首要病因。因此，寻求有效的检测方法及时筛查该病具有必要性1。既往多采用 TCT、巴氏涂片法等，但此类检测方法易受主观因素影响，检测特异度、灵敏度仍具较大上升空间2。多种 HPV 亚型病毒感染均可导致宫颈发生癌前病变，不同基因型之间也具有明显的差异，但目前临床关于此观点尚未达成完全一致。本研究选择瑞昌市人民医院 8?600 份妇女宫颈脱落细胞样本，进一步探讨 HR-HPV?DNA?PCR 的诊断效能。1?资料与方法1.1?临床资料对瑞昌市人民医院 2018 年 1月2020 年 12 月 8?600 份妇女宫颈脱落细胞样本进行HR-HPV?DNA?PCR、TCT。诊断标准：符合文献中关于宫颈病变的判定标准3。纳入标准：符合诊断标准者；具有阴道内分泌物增多、下腹疼痛、腰部疼痛等症状；患者均知情此研究且签署同意书。排除标准：子宫切除患者；具有宫颈手术史者；合并严重的心、脑、血管等疾病者；肝、肾功能不全者；合并其他妇科恶性肿瘤疾病者；处于妊娠期或哺乳期者；检查前 24?h 有性生活者；临床资料不全、依从性不佳者。1.2?方法3 种检查方法具体操作如下。1.2.1?组织病理检查方法对患者进行阴道镜下宫颈组织病理学检查，并将其检查结果作为本次研究的金标准。于电子阴道镜（江苏新玛医疗器械有限公司）下，定位宫颈内可疑病灶，取出部分宫颈组织行病理检查。若于阴道镜下未发现病灶，则于宫颈管口搔刮进行多点取材后，将其送检。由瑞昌市人民医院2 名经验丰富、资历较深的病理师对病理检查结果进行诊断，若意见不一致，进行商讨后达成一致。宫颈肿瘤组织分类主要可分为正常或炎症、宫颈上皮内瘤变（CIN、级）、鳞状细胞癌（SCC）5 种类型，其中CIN级及以上为阳性4。1.2.2?TCT 检测方法指导患者取膀胱截石位，取样前，应用棉拭子将宫颈口分泌物去除，应用特制毛刷取宫颈脱落细胞，将其保存在 Thinprep 保存液中，对其进行漂洗，之后测定细胞密度，离心沉降液体，应用 Prep2000 制片系统固片机（孝感奥华医疗科技有限公司），将其制成薄层细胞涂片（直径大小为2?cm），选择质量分数为 95%的酒精作为固定液进行湿固定。巴氏染色细胞后，于显微镜下（奥林巴斯公司，型号 CX21）对其进行镜检。将其镜检结果分为正常或炎症、不典型鳞状细胞（ASCH）、高度鳞状上皮内病变（HSIL）、低度鳞状上皮内病变（LSIL）、鳞状细胞医技与临床114基层医学论坛 2023 年 10 月第 27 卷第 29 期癌（SCC）5 种类型，其中 LSIL、HSIL 判定为阴性，SCC判定为阳性5。1.2.3?PCR 定量检测方法指导患者保持膀胱截石位，取样前应用棉拭子去除宫颈口分泌物，之后将采样刷深入到患者宫颈内 12?cm 处，按照顺时针的方向旋转 58 周，停留 5?s 取出，将采样刷置于一次性使用宫颈脱落细胞保存液中，置于 48?的环境中保存，以待检测。应用人乳头瘤病毒核酸分型检测试剂盒（荧光 PCR 法）（HPV21 分型）（江苏硕世生物科技股份有限公司），按照试剂盒说明书操作步骤进行HPV 检测。高危 HPV 基因型包括 16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、82 等亚型。PCR扩增条件为 50?5?min?UNG 酶处理、95?预变性10?min、95?10?s、58?40?s、38?5?s，共 45 个循环，其中 HPV 亚型扩增曲线呈典型 S 曲线且 CT 值小于参考值判定为阳性。1.3?观察指标分析检测结果，对比 2 种检测方法的诊断效能、不同病变检出率，分析 HR-HPV 各基因型与宫颈病变相关性。1.4?统计学方法采用 SPSS?22.0 统计学软件分析数据，计量资料以 xs 表示，采用 t 检验，计数资料以百分比表示，采用 2检验，采用 Logistic 回归分析法分析高危 HPV 基因分型与宫颈病变的关系，P0.05 为差异有统计学意义。2?结果2.1?检测结果组织病理检查结果：8?600 份妇女宫颈脱落细胞样本中，阳性 1?462 份、阳性率为17.00%，阴性 7?138 份、阴性率为 83.00%。TCT 检测结果：真阳性 1?298 份、假阳性 412 份、真阴性 6?726 份、假阴性 164 份。HR-HPV?DNA?PCR 检测结果：真阳性1?401 份、假阳性 243 份、真阴性 6?895 份、假阴性61 份，见表 1。2.2?诊断效能HR-HPV?DNA?PCR 检测方法诊断准确度、灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值显著高于 TCT 检测，差异有统计学意义（P0.05）；TCT、HR-HPV?DNA?PCR?2 种检测方法相比，差异无统计学意义（P0.05）；与 TCT 检测方法相比，HR-HPV?DNA?PCR 检测方法对不同病变检出率更接近于病理检查，诊断价值更高，见表3。2.4?Logistic 回归分析经 Logistic 回归分析，HPV16、18、31、33、52、58 亚型与宫颈病变的发生均呈正相关（P0.05），见表 4。表 3?分析 2 种检测方法对不同病变检出率例（%）检测方法标本数量（份）正常或炎症CIN级CIN级CIN级SCC组织病理检测1?462767（52.46）512（35.02）120（8.21）43（2.94）20（1.37）TCT 检测1?298698（53.78）431（33.20）110（8.47）40（3.08）19（1.46）HR-HPV?DNA?PCR 检测1?401743（53.03）502（35.83）115（8.21）40（2.86）20（1.43）2TCT 与病理组织值0.4751.0070.0630.0460.045PTCT 与病理组织值0.4900.3150.8000.8290.8312HR-HPV?DNA?PCR 与病理组织值0.0930.2052.2630.0180.018PHR-HPV?DNA?PCR 与病理组织值0.7590.6500.9990.8900.8922TCT 与 HR-HPV?DNA?PCR值0.1482.0550.0620.1200.006PTCT 与 HR-HPV?DNA?PCR值0.6990.1510.8020.7280.937表 1?TCT 和 HR-HPV?DNA?PCR 检查结果与宫颈组织病理检查结果比较单位：份金标准TCT 检测HR-HPV?DNA?PCR 检测合计阳性阴性阳性阴性阳性1?2981641?401611?462阴性4126?7262436?8957?138合计1?7106?8901?6446?9568?600表 2?分析 2 种检测方法的诊断效能检测方法灵敏度TCT 检测88.78%（1?298/1?462）HR-HPV?DNA?PCR 检测95.83%（1?401/1?462）2值51.081P 值0.05?标本数量（份）准确度8?60093.30%（8?024/8?600）8?60096.47%（8?296/8?600）88.6060.05?特异度阳性预测值阴性预测值94.23%（6?726/7?138）75.91%（1?298/1?710）97.62%（6?726/6?890）96.60%（6?895/7?138）85.22%（1?401/1?644）99.12%（6?895/6?956）45.70146.25448.9340.05?0.05?0.05?医技与临床115基层医学论坛 2023 年 10 月第 27 卷第 29 期3?讨论宫颈癌在临床上非常常见，此病的发生主要是量变到质变的过程，发展周期高达 38 年。据相关统计资料显示，宫颈癌疾病的发病率在女性恶性肿瘤中的占比高达 25%，且近些年来此病患者逐渐年轻化，对广大女性身体健康造成极为不利的影响6-8。因此，早期对宫颈病变进行正确筛查，对于防治宫颈癌具有重要意义。既往临床多采用宫颈细胞学检查、阴道镜检查、组织病理学检查等方法，TCT 检测较为常见，主要应用宫颈刷对宫颈鳞柱交界处细胞进行收集，并在相应处理后进行巴氏染色，之后根据国际癌症协会推荐标准对检测结果进行诊断9-11。此种检测技术可在一定程度上提高细胞数量、质量，可更加科学客观地描述病情，但此检测方法的诊断结果与操作人员制片经验具有一定关系，且细胞消化不充分、固定液的时间过长等因素，均可导致 TCT 检测结果不准确，影响诊断结果12-13。本研究发现，HR-HPV?DNA?PCR 检测方法诊断准确度、敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值显著高于 TCT 检测，差异有统计学意义（P0.05）；与 TCT 检测方法相比，HR-HPV?DNA?PCR 检测方法对不同病变检出率更接近于病理检查结果，诊断价值更高。研究数据进一步证实，HR-HPV?DNA?PCR检测方法对宫颈病变的诊断效能更显著。近些年来，多数研究学者认为 HPV 持续感染极易导致上皮细胞的无限增殖，是引起宫颈癌疾病的主要分子机制14-15。本研究还发现，经 Logistic 回归分析，HPV16、18、31、33、52、58 亚型与宫颈病变的发生均呈正相关；数据提示高危 HPV 基因分型与宫颈病变的发生具有直接关系。分析其原因，病毒进入患者机体后，主要通过将自身 DNA 整合入宿主细胞中，从而有效抑制宿主的抑癌基因，其中最常见的感染类型为HPV?16、18 亚型，而 HPV31、33、35、39 等其他基因分型次之。再次证实 HPV 感染为导致宫颈癌疾病发生的高危因子，并且不同基因分型对于宫颈癌的致病力也有所不同。由此可见，HPV 基因分型 PCR 检测对于宫颈病变的诊断具有显著价值。综上所述，高危 HPV 基因分型与宫颈病变的发生具有紧密的相关性，高危 HPV 基因分型 PCR 检测在宫颈病变筛查中具有较高的诊断准确度、灵敏度，对宫颈不同病变检出率较高，临床应用价值显著，可继续推广。参考文献1赵芬，杨建华.HPV?E6/E7?mRNA 检测对医院人群中宫颈病变筛查价值的评估J.中国妇产科临床杂志，2017，18（5）：439-440.2罗媛华.基于 TCT、HPV 基因分型与 DNA 定量检测的宫颈癌及癌前病变筛查方法J.解放军预防医学杂志，2020，38（3）：84-87.3中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会.宫颈癌及癌前病变规范化诊疗指南（试行）J/CD.中国医学前沿杂志（电子版），2013，5（8）：37-46.4JENKINST?M，HOJAEIH?S，SONG?S?J，et?al.Role?of?ancillary?techniques?in?cervical?biopsy?and?endocervical?curettage?specimens?as?follow-up?to?papanicolaou?test?results?indicating?a?diagnosis?of?atypical?squamous?cells，cannot?exclude?high-grade?squamous?intraepithelial?lesion，or?high-grade?squamous?intra-epithelial?lesionJ.Acta?Cytol，2020，64（1/2）：155-165.5GUPTA?R，SODHANI?P，MEHROTRA?R，et?al.Cervical?high-grade?squamous?intraepithelial?lesion?on?conventional?cytology：cytological?patterns，pitfalls，and?diagnostic?cluesJ.Diagn?Cy-topathol，2019，47（12）：1267-1276.6FUKUI?S，NAGASAKA?K，IIMURA?N，et?al.Detection?of?HPV?RNA?molecules?in?stratified?mucin-producing?intraepithelial?lesion（SMILE）with?concurrent?cervical?intraepithelial?lesion：a?case?reportJ.Virol?J，2019，16（1）：76-76.7张韶凯，罗喜平，李志芳，等.人乳头瘤病毒分型检测在宫颈癌前病变和宫颈癌筛查中的应用价值J.中华肿瘤杂志，2020，42（3）：187-191.8朱琳.TCT、HPV-DNA 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周均能自行恢复，但经 B 超引导下微通道经皮肾镜取石术对患者肾功能影响更小，这可能与该术式可明确结石部位、手术精准性高等有关。相关研究表明11，手术创伤会在一定程度上增加患者的应激反应，而 ACTH、NE、Cor 指标是临床常用来反应机体应激反应的指标。本次研究结果显示，研究组较对照组术后 12?h 及 24?h 应激指标水平与并发症发生率更低，结石清除率更高（P0.05），提示经 B 超引导下微通道经皮肾镜取石术治疗肾结石患者的效果优于标准通道经皮肾镜碎石术。标准通道经皮肾镜手术需要扩张工作通道至 F24-30，虽具有通道大、时间短等优势，但结石清除率相对较低。而经 B 超引导下微通道经皮肾镜取石术的穿刺定位精准，穿刺目标直观，确保穿刺深度合理，还可有效绕开肾周围血管，减少出血、感染等不良状况，且于 B 超引导下可直观清晰地确定结石情况，进一步提升结石清除精准性，减少手术操作对机体产生的创伤，减轻肾功能损伤及应激反应，安全可靠12。综上所述，经 B 超引导下微通道经皮肾镜取石术治疗肾结石患者的效果显著，可改善患者肾功能及应激反应，还可提升结石清除率与减少并发症。参考文献1邱瑾.肾结石发病机制的研究进展J.国际泌尿系统杂志，2020，40（4）：750-753.2郝磊，吴锋.B 超引导下微创经皮肾镜取石术对肾结石患者术后恢复及结石清除率的影响J.中外医学研究，2020，18（33）：119-121.3何强，李浪，姚史武，等.无管化微通道经皮肾镜取石术对肾结石患者的疗效及对 CRP、IL-6、PCT 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