抗体专业知识.pptx

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,#,抗体专业知识,抗体专业知识,第1页,第一节 免疫球蛋白分子结构,一、免疫球蛋白基础结构,二、免疫球蛋白结构域,三、免疫球蛋白水解片段,抗体专业知识,第2页,一、免疫球蛋白基础结构,四肽链对称结构,重链（,heavy chain),简,称,H,链,由,440,个氨基酸组成，分子量约,55-75,KD。,H,链含有少许糖类，所以,Ig,属于糖蛋白。,依据,H,链抗原性不一样，可将免疫球蛋白（,Ig),分为五类。,轻链（,light chain）,简,称,L,链,由,214,个氨基酸组成，分子量约,25,KD,依据,L,链抗原性不一样，把,L,链分成二型：,型，,型,抗体专业知识,第3页,轻链,重链,免疫球蛋白基础结构,四条链对称结构,8,10,抗体专业知识,第4页,抗体专业知识,第5页,可变区,可变区（,variable region,）简称,V,区,，,位于,L,链靠近,N,端,1/2,和,H,链,1/4,，这个区段氨基酸组成及排列次序是能够改变。,高变区（,hypervariable region,）简称,HVR,，,是,V,区中氨基酸组成和排列次序改变频率更高区域，也是抗体与抗原决定簇结合部位，又称为,决定簇互补区（,CDR,）,，,又是,Ig,分子独,特型决定簇,主要存在部位。,骨架区,（,framework region,Fr,）：,V,区以外部位，稳定,HVR,结构。,抗体专业知识,第6页,抗体专业知识,第7页,恒定区（,Constant region,）简称,C,区,，,位于,L,链靠近,C,端,1/2,和,H,链靠近,C,端,3/4,区域，,这一区域氨基酸组成和排列次序比较稳定，,所以叫恒定区，,H,链和,L,链,恒定区分别称为,CH,和,CL,。,二、免疫球蛋白结构域,抗体专业知识,第8页,功效区,Ig,分子,H,链和,L,链可经过链内二硫键折叠成若干个球形结构，每一个球形结构由,110,个氨基酸组成，含有一定生理功效，称为功效区。,L,链,功效区：,VL,、,CL,H,链,功效区：,VH,、,CH1,、,CH2,、,CH3,抗体专业知识,第9页,免疫球蛋白功效区,抗体专业知识,第10页,功效区作用,V,H,和,V,L,共同组成抗原结合部位。,C,L,和,C,H,1,为同种异型遗传标志所在部位。,IgG,C,H,2,和,IgM,C,H,3,区,是补体结合点所在部位，参加活化补体。,IgG,C,H,3,和,IgE,C,H,2,、,C,H,3,区能与组织细胞表面,Fc,受体结合。,抗体专业知识,第11页,铰链区,位于,C,H,1,和,C,H,2,之间,含有较多脯氨酸，含有弹性，能够自由展开,180,度,抗体分子变构特征可使,V,区合拢或张开，适合与抗原结合；暴露补体结合点，为补体活化创造条件。,对蛋白酶敏感，经蛋白酶处理，多在此区被切断。,抗体专业知识,第12页,抗体专业知识,第13页,抗体专业知识,第14页,（一）、连接链（,joining chain),简称,J,链，由浆细胞合成，连接,5,个单体,IgM,成五聚体，,2,个,IgA,成双聚体，故,J,链起稳定多聚体作用。,（二）、分泌片（,secretory piece,),简称,SP,由上皮细胞合成，和分泌型,IgA,连接，,使之不受环境中酶破坏,。,免疫球蛋白其它结构,抗体专业知识,第15页,三、免疫球蛋白水解片段,1.,经木瓜蛋白酶水解,IgG,得到,3,个片段，,2,个相同,Fab,段和1个,Fc,段,Fab,段抗原结合片段（,fragment antigen binding),每个,Fab,段由一条完整,L,链和一条约1/2,H,链组成，含有抗体活性，能和一个抗,原结合表现为单价。,Fc,段 可结晶片段（,fragment crystallizable,）由二,条羧基端1/2,H,链组成，不能和抗原结合，,但有,Ig,其它活性。,2,.,经胃蛋白酶水解,IgG,，得到,2,个片段，,F(ab,),2,含有双价抗体活性片段,pFc,小分子多肽碎片，无任何生物活性,抗体专业知识,第16页,抗体专业知识,第17页,第三节 各类免疫球蛋白特征与 功效,：,IgG,H,链：,链（,gamma),IgA,H,链：,链,(alpha),IgM,H,链：,链,(mu),IgD,H,链：,链,(delta),IgE,H,链：,链,(epsilon),抗体专业知识,第18页,一,、,IgG,1.,普通特征,单体分子；血清中含量最高,(75%Ig),；半衰期最长,(21,23,天,),；,3,5,岁达成人水平,(8.0-17mg/ml),；,可与,SPA,结合。,2.,生物学活性,经过胎盘（新生儿抗感染）；激活补体（裂解细胞）；,调理作用,（,促进吞噬,）；介导,ADCC,（细胞毒作用）。,3.,实际意义,抗感染；本身抗体,本身免疫病；介导变态反应,(,、,型,),；封闭抗体,肿瘤细胞逸；,亲合层析法,IgG,纯化；免疫学检测。,抗体专业知识,第19页,二,、,IgM,1.,五聚体，分子量最大,(900,kd,),，又称巨球蛋白；,2.,人类发育过程中最早合成,Ig,；,3.,体液免疫应答最先产生,Ig,感染早期免疫；,4.,占血清,Ig,含量,5,10%,；,5.,半衰期,5,天,血清中特异性,IgM,水平增高提醒,有近期感染；,6.,激活补体；,7.,IgM,不能经过胎盘,脐带血或新生儿血清中,IgM,水平升高表明胎儿有宫内感染；,8.,B,细胞膜,IgM(mIgM),体液免疫应答；,9.,本身抗体,本身免疫病,抗体专业知识,第20页,三、,IgA,1.,两种类型,2.,半衰期,6,天；,3.,占血清,Ig,含量,5,15%,；,4.,粘膜局部抗感染免疫；,5.,聚合,IgA,激活补体替换路径。,血清型：,IgA1,，单体；,分泌型：,IgA2,，二聚体,粘膜局部浆细胞合成；,分泌片由粘膜上皮细胞合成；,抗体专业知识,第21页,四、,IgD,1.,单体分子,2.,存在形式 分泌性,血清中，功效不清；,膜结合性,B,细胞表面,3.,意义,（,1,）是,B,细胞成熟主要标志；,（,2,）抗原受体；,4.,占血清,Ig,含量,1%,；,5.,半衰期,3,天。,抗体专业知识,第22页,五,、,IgE,1.,单体分子；,2.,血清中含量最低,(,占,Ig,0.002%),；,3.,半衰期,3,天；,4.,呼吸道和胃肠道浆细胞产生；,5.,介导,型超敏反应；,6.,过敏性疾病和一些寄生虫感染患者血清中特异,性,IgE,水平增高。,抗体专业知识,第23页,第四节 抗体生物学活性,一、特异性结合抗原,二、活化补体,三、与组织细胞表面,Fc,受体结合,1.,介导,I,型变态反应,2.,调理吞噬作用,3.,发挥抗体依赖细胞介导细胞毒作用,(antibody dependent cell mediated cytotoxicity),简称,ADCC,作用,四、经过胎盘,抗体专业知识,第24页,一、,V,区功效,识别并特异性结合抗原,单体（,IgG,IgE,),2,价,二聚体,(,分泌型,IgA,),4,价,五聚体,(,IgM,),10,价（,5,价）,中和效应,中和毒素和病毒,与,Ag,结合,促吞噬细胞吞噬,1.,抗体结合价,2.,实际意义,抗体专业知识,第25页,二,、,C,区功效,1.,激活补体系统,Ab(,IgM,、,IgG)+Ag,C1q,补体经典路径,IgG4,、,IgA,和,IgE,凝聚物,补体旁路路径,2.,介导免疫细胞活性,(1),调理作用（,opsonization,）,：,IgG,+,抗原,(,颗粒性,),Fc,R,（单核、巨噬细胞及中性粒细胞）,促吞噬细胞吞噬；,(2),ADCC,：,IgG,+,抗原,(,靶细胞,),Fc,R,（,NK,细胞）,杀伤,靶细胞；,(3),介导超敏反应,：,型,、,型,和,型超敏反应。,3.,穿越胎盘和粘膜,抗体专业知识,第26页,抗体专业知识,第27页,抗体专业知识,第28页,抗体专业知识,第29页,抗体专业知识,第30页,第五节 抗体制备,一、多克隆抗体（,Polyclonal antibody),用传统抗体制备方法,将抗原物质注入动物体内取得免疫血清,是机体多个,B,细胞克隆针反抗原分子上不一样抗原决定簇产生混合抗体,这种用体内免疫法制备免疫血清称为多克隆抗体,.,抗体专业知识,第31页,二、单克隆抗体（,monoclonal Ab,McAb),概念：,由,B,细胞杂交瘤细胞株针对一个抗原决定簇产生纯抗体称单克隆抗体。,特点：,纯度高、特异性强、效价高、极少有交叉反应。已广泛用于生命科学各个领域。,如：作为诊疗试剂用于许多血清学检测，用于治疗肿瘤，本身免疫性疾病，抑制同种异体移植排斥反应。,抗体专业知识,第32页,抗体专业知识,第33页,三,、,基因工程抗体,(,genetic engineering,antibody,),1.,定义 在,DNA,水平对,Ig,基因进行切割、拼接或修,饰，导入受体细胞表示抗体。,2.,举例,人,-,鼠嵌合抗体,(,chimeric antibody,),改型抗体,(,reshaped humanized antibody,),小分子抗体,双特异性抗体,(,bispecific antibody,),抗体专业知识,第34页,抗体专业知识,第35页,抗体专业知识,第36页,抗体专业知识,第37页,抗体专业知识,第38页,抗体专业知识,第39页,