hplc测定蛋白质含量方法验证.pptx

单击此处编辑母版标题样式,第五级,下午9时58分,#,单击此处编辑母版标题样式,第五级,下午9时58分,#,单击此处编辑母版标题样式,第五级,hplc测定蛋白质含量方法验证,hplc测定蛋白质含量方法验证,第1页,方法确认,（,HPLC,法）,目标：,证实,HPLC,方法适合于重组人粒细胞,刺激因子蛋白质含量检测要求,依据：,中国药典,年版,hplc测定蛋白质含量方法验证,第2页,洗脱梯度,（,年版中国药典）,按下表进行梯度洗脱,编号,时间,/,分,A/%,B/%,1,0,60,40,2,40,20,80,3,45,0,100,4,50,60,40,5,60,60,40,A,：,0.1%,三氟乙酸水溶液,B,：,0.1%,三氟乙酸乙腈溶液,hplc测定蛋白质含量方法验证,第3页,含量计算公式,供试品蛋白质含量（,ug/ml)=,C,R,A,X,n,X,A,R,n,R,式中,C,R,为复溶所得标准品溶液蛋白质含量，,ug/ml,；,A,R,为标准品溶液平均峰面积；,A,X,为供试品溶液平均峰面积；,n,R,为标准品溶液稀释倍数；,n,X,为供试品溶液倍数；,hplc测定蛋白质含量方法验证,第4页,方法比较,（,lowry,与,HPLC,）,Folin-,酚（,lowry,）,HPLC,要求人为准确控制操作时间,设备控制时间，降低人为误差,操作复杂，干扰原因较多,操作简便，干扰原因较少,重复性、精密度较差,重复性、精密度很好,只适适用于检测原液蛋白质含量,适适用于原液及成品蛋白质含量,/,中国药典首次要求检测方法,hplc测定蛋白质含量方法验证,第5页,方法比较,（,lowry,与,HPLC,）,批序号,lowry,法（,ug/ml),HPLC,法,(ug/ml),原液批,1,1477,1417,原液批,2,1393,1358,原液批,3,1432,1379,原液批,4,1466,1413,原液批,5,1389,1327,原液批,6,1456,1415,原液批,7,1395,1352,原液批,8,1428,1386,结论：,lowry,法与,HPLC,法所测得浓度存在一定差异！,hplc测定蛋白质含量方法验证,第6页,色谱图比较,工作标准品色谱图例,供试品色谱图例,25.757,25.688,hplc测定蛋白质含量方法验证,第7页,重复性试验,（出峰时间）,批序号,类别,规格（,ug/ml,）,平均峰出峰时间,RSD,值,(%),/,标准品,75,25.546,0.057,/,标准品,150,25.537,0.038,/,标准品,300,25.535,0.023,原液批,1,供试品,300,25.541,0.050,成品批,1,供试品,75,25.544,0.048,成品批,2,供试品,150,25.506,0.033,成品批,3,供试品,300,25.594,0.040,试验结论：,RSD,值,1%,，符合,年版,中国药典,要求,hplc测定蛋白质含量方法验证,第8页,重复性试验,（峰面积）,试验结论：,RSD,值,1%,，符合,年版,中国药典,要求,批序号,类别,规格,平均峰面积,RSD,值,/,标准品,75ug/ml,4406.24,0.08%,/,标准品,150ug/ml,4610.70,0.13%,/,标准品,300ug/ml,4722.04,0.53%,原液批,1,供试品,300ug/ml,4749.36,0.52%,成品批,1,供试品,75ug/ml,4559.72,0.58%,成品批,2,供试品,150ug/ml,5063.89,0.23%,成品批,3,供试品,300ug/ml,5372.14,0.40%,hplc测定蛋白质含量方法验证,第9页,精密度试验,（出峰时间）,批序号,类别,规格（,ug/ml),平均峰面积,RSD,值（,%,）,分析员,A,分析员,B,分析员,A,分析员,B,/,标准品,75,25.511,25.534,0.032,0.056,/,标准品,150,25.537,25.567,0.077,0.061,/,标准品,300,25.561,25.581,0.062,0.033,原液批,2,供试品,300,25.554,25.544,0.035,0.047,成品批,3,供试品,300,25.538,25.536,0.035,0.048,成品批,4,供试品,150,25.579,25.667,0.064,0.073,成品批,5,供试品,75,25.564,25.818,0.059,0.043,试验结论：,RSD,值,2%,，符合,年版,中国药典,要求,hplc测定蛋白质含量方法验证,第10页,精密度试验,（峰面积）,批序号,类别,规格（,ug/ml),平均峰面积,RSD,值（,%,）,分析员,A,分析员,B,分析员,A,分析员,B,/,标准品,75,3660.26,3677.38,1.30,1.11,/,标准品,150,3715.15,3722.89,1.27,0.97,/,标准品,300,3478.19,3500.13,0.93,1.59,原液批,2,供试品,300,3424.81,3434.33,1.84,1.06,成品批,4,供试品,300,4513.68,4538.38,1.28,0.99,成品批,5,供试品,150,4273.84,4333.33,1.26,1.01,成品批,6,供试品,75,3832.75,3839.97,1.10,1.66,试验结论：,RSD,值,2%,，符合,年版,中国药典,要求,hplc测定蛋白质含量方法验证,第11页,1,、经过对峰面积及出峰时间计算对比，重复性试验,RSD,值均低于,1%,，精密度试验,RSD,值均低于,2%,，说明使用以上方法对赛格力成品及原液进行蛋白质含量测定数据结果具备重复性、精密度,2,、符合,年版高效液相色谱法验证要求,3,、经过对大量赛格力原液和成品检测，说明该方法适合用于我企业产品检测，且该方法含有一定稳定性及可靠性,试验结论,hplc测定蛋白质含量方法验证,第12页,hplc测定蛋白质含量方法验证,第13页,