流式细胞仪在临床检验中的应用.pptx

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2013 Mindray Confidential,#,1,3,4,2,流式细胞术基本原理,流式临床应用,迈瑞流式介绍,教授对迈瑞流式评价,目,录,Mindray Confidential,1,流式细胞仪在临床检验中的应用专家讲座,第1页,1,3,4,2,流式细胞术基本原理,流式临床应用,迈瑞流式介绍,教授对迈瑞流式评价,目,录,Mindray Confidential,2,流式细胞仪在临床检验中的应用专家讲座,第2页,流式细胞术定义,流式细胞术是以高能量激光照射高速流动状态下经,荧光标识,单细胞,（生物颗粒），经过检测产生,散射光,和荧光素,发射荧光,强度，从而对细胞进行定性或者定量检测，实现对目标细胞分析或分选技术。,Mindray Confidential,3,流式细胞仪在临床检验中的应用专家讲座,第3页,Mindray Confidential,传统流式检测流程图,Nat Rev Immunol.,;12(3):191200.,流式细胞仪在临床检验中的应用专家讲座,第4页,FL4,FL6,FL5,(PE-cy7),FL3,(PerCP),FL2,(PE),FL1,(FITC),SS,488/10,530/30,FS,488/10,585/40,670LP,785/60,491/LP,550LP,645LP,660/20,785/60,740LP,488/10,反光镜,t,v,FL6,(APC-cy7),FL4,(APC),反光镜,t,v,t,v,t,v,t,v,t,v,t,v,t,v,FSC,SSC,FL1,FL2,FL3,FL5,流式细胞仪工作原理模拟图,Mindray Confidential,流式细胞仪在临床检验中的应用专家讲座,第5页,流式细胞仪与惯用检验仪器比较,项目,流式细胞仪,血球仪,生化分析仪,免疫分析仪,测试对象,细胞，血清,细胞,(,测量设置全部固定化）,血清,血清,测试目标,物理或化学性质（如细胞大小、内部复杂程度、,DNA,含量）；,小分子物质（如抗原，抗体）,物理或化学性质（如细胞大小、内部复杂程度、,DNA,含量）,化学成份和一些小分子物质（如钾、钠、钙、酶）,小分子物质（如抗原、抗体、激素）,测试原理,流式细胞术,+,抗原抗体反应,流式细胞术,化学比色法,抗原抗体反应,计量,百分比或绝对计数,（如%、*个/uL）；,物质量或定性判定,（L、UI/L、阴性、阳pmol/m性）,百分比和绝对计数,（如,%,、,*,个,/L,）,物质量,（mol/L）,物质量或定性判定,（L、UI/L、阴性、阳pmol/m性）,宏观和微观,测量宏观对象（细胞）上微观物质（抗原、看不见、摸不到）,测定宏观对象（细胞）上宏观物质（物理、复杂度、含量，看得见、摸得到）,测量微观物质（可溶性成份和一些小分子物质，看不见、摸不到）,测量微观物质（小分子物质，看不见、摸不到）,输出,Mindray Confidential,流式细胞仪在临床检验中的应用专家讲座,第6页,生命科学领域应用,制药工业,药品筛选，疫苗研究,生物学研究,遗传，生殖，微生物，细胞生物，毒理，分子生物,环境研究,湖泊、海洋生态研究,临,床诊疗、研,究,血液，肿瘤，药理，免疫,农业畜牧业,选种，育种,食品工业,流式细胞仪在临床检验中的应用专家讲座,第7页,Mindray Confidential,8,flow cytometry+tumor,flow cytometry+Transplant,flow cytometry+Autoimmune diseases,flow cytometry+leukemia,flow cytometry,总结,能够预计未来流式细胞仪在临床上应用一定会有更大发展！,流式细胞仪在临床检验中的应用专家讲座,第8页,1,3,4,2,流式细胞术基本原理,流式临床应用,迈瑞流式介绍,教授对迈瑞流式评价,目,录,流式细胞仪在临床检验中的应用专家讲座,第9页,流式细胞术在临床检验中应用,Mindray Confidential,10,淋巴细胞,亚群,分析,HLA-B27,检测,白血病,免疫分,型和,MRD,急性白血病、,慢性,淋巴增生性疾病（,CLD,),淋巴,瘤,造血干细胞分析,造血干细胞,绝对,计数；,阵发性睡眠性血红蛋白尿症（,PNH,）,CD55/CD59/FLAER,检测,血小板,相关分析,血小板,计数、血小板免疫表型分析,细胞周期,与,DNA,倍体,分析,。,年全国三级医院检验科流式项目分布,流式细胞仪在临床检验中的应用专家讲座,第10页,流式细胞术分析淋巴细胞亚群原理,Mindray Confidential,11,流式细胞仪在临床检验中的应用专家讲座,第11页,TBNK,淋巴细胞检测及临床指导意义,诊疗与判别诊疗,疾病临床分期,治疗效果评定,指导临床用药,。,Mindray Confidential,12,淋巴细胞分类百分比和绝对计数,淋巴细胞种类,特异性分子标识,T,淋巴细胞,CD3,+,T,辅助,/,诱导淋巴细胞,CD3,+,CD4,+,T,抑制,/,细胞毒淋巴细胞,CD3,+,CD8,+,B,淋巴细胞,CD3,-,CD19,+,NK,淋巴细胞,CD3,-,CD16,+,CD56,+,流式细胞仪在临床检验中的应用专家讲座,第12页,TBNK,淋巴细胞检测在临床科室中应用,Mindray Confidential,13,流式在风湿免疫科应用,流式在肿瘤应用,流式在移植中心应用,流式在血液科应用,流式在感染科应用,流式在心血管内科应用,流式在其它科室应用,流式,在健康体检,应用,流式细胞仪在临床检验中的应用专家讲座,第13页,14,胃癌及其不一样临床分期淋巴细胞亚群改变,Mindray Confidential,流式细胞仪在临床检验中的应用专家讲座,第14页,15,肿瘤术后淋巴细胞亚群改变,Mindray Confidential,流式细胞仪在临床检验中的应用专家讲座,第15页,16,乙型肝炎患者体内淋巴细胞亚群改变,传染病信息,.,.24.206-210,Mindray Confidential,流式细胞仪在临床检验中的应用专家讲座,第16页,Mindray Confidential,17,（,World J Gastroenterol.,14:3710-8.,）,乙型肝炎患者体内淋巴细胞亚群改变,流式细胞仪在临床检验中的应用专家讲座,第17页,HIV/AIDS,病人诊疗与分期,Mindray Confidential,18,成人及15岁以上青少年HIV/AIDS临床分期及其分期标准,临床分期,CD4,细胞计数（个数,/mm,3,）,HIV,抗体检测,HIV,核酸检测,主要临床表现,普通连续时间,期,6,个月,12,个月,A,期,500,或一过性降低,或,急性,HIV,感染综合征或无症状,1,周,3,周,B,期,500,血清阳转或,无症状或,PGL,6,个月,12,个月,期,6,年,7.5,年,A,期,350,无症状或,A,组临床表现,B,期,200349,B,组临床表现,期,200,C,组临床表现,23,年,（,WS,293-,艾滋病和艾滋病病毒感染诊疗,标准）,流式细胞仪在临床检验中的应用专家讲座,第18页,肺部疾病判别诊疗,疾病类型,例数,BALF,淋巴细胞亚群（,%,）,CD3,+,CD4,+,CD8,+,CD4/CD8,结节病,14,91.85.62,70.6,11.2,14.5,8.4,6.9,3.12,IPF,16,94.5,3.91,14.7,3.12,78.4,7.92,0.2,0.04,肺结核,6,74.3,5.61,42.3,1.92,32.1,1.21,1.3,0.05,肺部肿瘤,7,67.5,10.4,24.3,5.24,35.1,9.62,0.7,0.13,Mindray Confidential,19,（中华检验医学杂志,.,23:214-216,）,流式细胞仪在临床检验中的应用专家讲座,第19页,利妥昔单抗治疗效果监测,Mindray Confidential,20,(Arthritis Research&Therapy,11,；,R131),利妥昔单抗,(,美罗华,),：,针对,B,细胞特异性抗原,CD20,人,-,鼠嵌合单克隆抗体,用于复发或耐药,CD20,阳性滤泡性淋巴瘤,是首个以,B,细胞为靶标治疗类风湿性关节炎药品,外周血,B,细胞百分比显著下降,而骨髓,B,细胞略下降,流式细胞仪在临床检验中的应用专家讲座,第20页,移植病人免疫抑制剂治疗指导,Mindray Confidential,21,A,移植前,1-2,天；,B,移植后,1-2,天；,C,移植后,4-5,天；,D,移植后,6-8,天；,E,移植后,12-16,天,69,例（,50,例没有排斥，,19,例发生排斥）,CD4,在移植后有一个迟缓下降过程,CD4,假如升高，预示发生排斥反应，需要调整免疫抑制药治疗方案,流式细胞仪在临床检验中的应用专家讲座,第21页,（,Neuroimmunomodulation.,214:206-12.,）,老年人身体情况评定,Mindray Confidential,22,流式细胞仪在临床检验中的应用专家讲座,第22页,（,Clinical and Applied Immunology,Reviews.,2:129139,.,）,慢性疲劳综合征与淋巴亚群分析,Mindray Confidential,23,流式细胞仪在临床检验中的应用专家讲座,第23页,（,Mechanisms,of Ageing and,De6elopment.1998,100:,121132.,）,体育锻炼对淋巴亚群影响,Mindray Confidential,24,流式细胞仪在临床检验中的应用专家讲座,第24页,临床需要监测免疫功效常见疾病,Mindray Confidential,25,疾病类别,内容,原发性免疫缺点,B细胞免疫缺点、T细胞免疫缺点、联合免疫缺点,继发性免疫缺点,感染（,HIV,、,CMV,）,免疫抑制剂使用,肿瘤,代谢性疾病、营养不良、衰老,本身免疫病,SLE,、,RA,血液肿瘤,白血病,/,淋巴瘤,其它,手术,（,Kuby,Immunology,7,th,）,流式细胞仪在临床检验中的应用专家讲座,第25页,TBNK,淋巴细胞亚群检测,Mindray Confidential,26,CD3-FITC/CD8-PE/CD45-PerCP/CD4-APC,CD3-FITC/CD16+56-PE/CD45-PerCP/CD19-APC,流式细胞仪在临床检验中的应用专家讲座,第26页,HLA-B27,检测与脊柱关节病,Mindray Confidential,27,脊柱关节病（,S,pondyloarthritis,SpA,）,疾病,HLA-B27,阳性率,(%),强直性脊椎炎,90,Reiters,综合症,7090,银屑病性关节炎,5060,急性前葡萄膜炎,4050,溃疡性结肠炎伴关节病,510,正常人群,27,流式细胞仪在临床检验中的应用专家讲座,第27页,Mindray Confidential,28,强直性脊柱炎,强直性脊柱炎（,AS,）定义：,一个慢性、进行性和炎性疾病，也是血清阴性脊柱关节病（,SpA,）中最具代表性疾病。主要累计骶髂关节、脊柱、脊柱软组织及四肢关节，表现为椎间盘纤维环和纤维环结缔组织骨化，椎间动关节和四肢关节滑膜炎症和增生，严重者可失去劳动能力。,试验室检验：,CRP,升高,血沉加紧,HLA-B27,阳性,类风湿因子阴性,流式细胞仪在临床检验中的应用专家讲座,第28页,HLA-B27,检测与,AS,辅助诊疗,Mindray Confidential,29,1984,年修订纽约标准；,1991,年欧洲脊柱关节病研究组（,ESSG,）标准；,年国际脊柱关节病评定工作组（,ASAS,）,SpA,诊疗标准,标准,增加,HLA-B27,作为主要诊疗指标,Rudwaleit M.,Curr Opin Rheumatol.,22:375-380,）,流式细胞仪在临床检验中的应用专家讲座,第29页,Mindray Confidential,30,HLA-B27,检测在,AS,中诊疗价值,临床意义：,1.,辅助疾病早期确诊,早期治疗,;,2.,判别诊疗症状相同疾病,;,3.,对高危人群进行预测,;,HLA-B27,+,HLA-B27,+,AS,HLA-B27,-,AS,约,5-10%,AS,患者为,HLA-B27,-,HLA-B27,阳性率在我国为,27%,，,AS,患病率为,0.1%,，,所以大部分,HLA-B27,+,并不患,AS,AS,患者中,HLA-B27,+,达,9095%,流式细胞仪在临床检验中的应用专家讲座,第30页,不一样,HLA-B27,检测方法比较,Mindray Confidential,31,方法,检测伎俩,优点,缺点,MLCT,显微镜人工观察,经济，无需昂贵设备,操作步骤繁琐、费时，且易受血清、补体、单抗品质以及操作者主观原因影响，常出现误判漏判。灵敏度、特异性和重复性均较差。当前，仅少数试验室使用。,ELISA,酶标仪测定吸光度,敏感性较高，设备简单，可进行高通量检测,操作步骤较多，洗涤步骤复杂、要求严格，易污染造成假阳性，重复性普通。,PCR,DNA,扩增后，电泳紫外分析,敏感性,、特异性高,试验室惯用方法，耗时长，需要提取DNA、PCR扩增后还需要电泳分析；轻易污染，假阳性率高：空气中DNA气溶胶极易污染扩增产物，对环境要求高。,FCM,计算机数据,分析,操作步骤简单、快捷，敏感性和特异性高,试验室惯用方法，需配置流式细胞仪；注意抗原/抗体交叉反应。,流式细胞仪在临床检验中的应用专家讲座,第31页,HLA-B27,检测敏感性和特异性,Mindray Confidential,32,（,Rudwaleit M,Sieper J.Nat Rev Rheumatol.,8:262-268,）,与其它指标相比，,HLA-B27,在,SpA,判别和诊疗上具更高敏感性、特异性,Parameter,Sensitivity%,Specificity,Inflammatory back pain,38-95,76-100,Heel pain(enthesitis),16-52,89-96,Peripheral arthritis,26-62,91-100,Dactylitis,12-27,96-99,Anterior uveitis,10-22,97-100,Psoriasis,1-17,96,IBD,2-7,99,Positive family history for AS,reactive arthritis,IBD,psoriasis,anterior uveitis,7-36,93-100,Response to NSAIDs,64-77,75-85,Elevated acute phase reactants(CRP),38-69,67-100,HLA-B27,83-96,91-96,MRI of sacroiliac joints,54-93,83-100,流式细胞仪在临床检验中的应用专家讲座,第32页,HLA-B27,检测配套试剂,Mindray Confidential,33,健康人（左）和,强直性脊柱炎患者,（右）,HLA-B27,检测结果,（上：同型对照，下：测试样本）,FITC-HLA-B27/PE-HLA-B7,双色,流式细胞仪在临床检验中的应用专家讲座,第33页,1,3,4,2,流式细胞术基本原理,流式临床应用,迈瑞流式介绍,教授对迈瑞流式评价,目,录,Mindray Confidential,34,流式细胞仪在临床检验中的应用专家讲座,第34页,迈瑞流式细胞仪及配套试剂,Mindray Confidential,35,BriCyte E6,流式细胞仪及配套试剂,流式细胞仪在临床检验中的应用专家讲座,第35页,人性化设计,降低临床操作难度,临床常规项目全自动软件,双向,LIS,连接,全汉字操作界面,Mindray Confidential,36,流式细胞仪在临床检验中的应用专家讲座,第36页,1.,选择检测项目,2.,自动进样,3.,汇报,智能化自动设计,自动分析软件,流式细胞仪在临床检验中的应用专家讲座,第37页,智能化自动检测设计,Mindray Confidential,38,自动调整,-,准确、可靠,临床软件,TBNK,淋巴细胞分析,HLA-B27,检测,电压,赔偿,质控,流式细胞仪在临床检验中的应用专家讲座,第38页,自动电压调整,Mindray Confidential,39,流式细胞仪在临床检验中的应用专家讲座,第39页,自动赔偿调整,Mindray Confidential,40,8.00,流式细胞仪在临床检验中的应用专家讲座,第40页,单平台绝对计数无需内标微球,内置高精度流量传感器，准确测定样本流体积，直接计算绝对计数；,采取陶瓷泵负压吸样形成有效“双闭环”，稳定控制样本流；,Mindray Confidential,41,流式细胞仪在临床检验中的应用专家讲座,第41页,智能温度控制,15,到,32,无需调整光路,全封闭防尘设计,简练稳定,-,光学系统,流式细胞仪在临床检验中的应用专家讲座,第42页,1275 mm,试管,1275 mm,试管,1.5mL,、,2mL,微量离心管,方便快捷,-,各种进样方式,手动上样系统,自动进样系统,Mindray Confidential,43,流式细胞仪在临床检验中的应用专家讲座,第43页,机型,BriCyte E6,FC500,Canto II,外形,尺寸,*,(mm,，宽,高,深,),500,500,550,610,978,889,910,630,610,重量,*,(Kg),55,85,146,自动进样器重量,(Kg),15,-,22,气源,不需要,需要,需要,稳压电源,不需要,需要,需要,简练稳定,流式细胞仪在临床检验中的应用专家讲座,第44页,仪器性能：高分辨率,Mindray Confidential,45,BriCyte E6,检测,305A,八峰粒子,PE50 MESF,BD FACSCanto II,检测,305A,八峰粒子,PE50 MESF,流式细胞仪在临床检验中的应用专家讲座,第45页,淋巴细胞亚群分析临床评定,Mindray Confidential,46,北京协和医院,北医三院,四川省人民医院,临床评定病人；,42,例,对照仪器：,BCI FC500,临床评定病人；,30,例,对照仪器：,BD FACSCanto II,临床评定病人；,34,例,对照仪器：,BCI FC500,流式细胞仪在临床检验中的应用专家讲座,第46页,Mindray Confidential,47,HLA-B27,检测临床评定,试验仪器,对照仪器,累计,阴性,阳性,阴性,23,0,23,阳性,0,7,7,小计,23,7,30,结果,判读标准,结论,阳性符合率,100.00%,95%,Pass,阴性符合率,100.00%,95%,Pass,总体符合率,100.00%,95%,Pass,Kappa,1,0.8,Pass,试验仪器,对照仪器,累计,阴性,阳性,阴性,16,0,16,阳性,0,17,17,小计,16,17,33,结果,判读标准,结论,阳性符合率,100.00%,95%,Pass,阴性符合率,100.00%,95%,Pass,总体符合率,100.00%,95%,Pass,Kappa,1,0.8,Pass,北医三院,四川省人民医院,临床评定病人：,30,例,对照仪器：,BD FACSCanto II,临床评定病人；,33,例,对照仪器：,BCI FC500,流式细胞仪在临床检验中的应用专家讲座,第47页,Mindray Confidential,48,项目,BriCyte E6,传统流式细胞仪,软件界面,全汉字操作软件，模块化设计，可见即所得，两小时掌握仪器操作,英文界面，菜单式设计，需要长时间熟悉菜单功效位置,仪器开,关,机,1.,开机,（,10,分钟以内）；,2.,关机（,7,分钟以内）,1.开机（15分钟）；,2.关机（最少15分钟）；,仪器,质控,1.,无,2.,无,3.,无,3.,质控结果,自动,输入到,LIS,中,1.手动调整电压,2.手动设门,3.手动调整阈值,3.质控结果手工输入到LIS中,LIS,连接,1.自动获取病人信息,2.自动传输试验数据,1.,手工,输入,病人,信息,2,.,人工,转移数据实现单向连接,进样系统,灵活进样系统，负压吸样兼容各种上样管，宝贵标本直接上机检测,单一进样模式，正压吸样只支持标准流式管,绝对计数,内置高精度流量传感器，,无需内标微球,直接计算绝对计数,必需额外内标微球间接换算绝对计数,仪器,关机,1.,将,清洗液和纯水放入指定位置，,仪器自动完成关机,过程,2.,无,1.,将,清洗液和纯水放入指定位置，仪器进行清洗,2.,再,进行真空管路清洗后关机,常规检测,配套试剂支持全自动软件，一键取得结果,1.无全自动软件支持；,2.有全自动软件支持，但需人工参加数据分析；,流式细胞仪在临床检验中的应用专家讲座,第48页,1,3,4,2,流式细胞术基本原理,流式临床应用,迈瑞流式介绍,教授对迈瑞流式评价,目,录,Mindray Confidential,49,流式细胞仪在临床检验中的应用专家讲座,第49页,易学医用,自动化程度高,适用临床检验科使用,-,半天熟悉流式软件,体积小，噪音小,绝对计数精度高,-,性能参数可媲美国外品牌,价格优势显著,临床服务好,激光器温控范围宽,体积小，运行平静,临床软件非常实用,沈立松,崔巍,张剑波,王小林,教授精彩点评,-,北京协和医院检验科副主任,美国临床化学委员会（,AACC,）会员,中华医学会检验分会委员兼副秘书长,上海新华医院检验科主任,-,中华医学会检验分会委员,-,上海医学会检验医学分会副主委,-,北医三院检验科副主任,四川省人民医院,中心试验室主任,流式细胞仪在临床检验中的应用专家讲座,第50页,THANKS,！,51,Mindray Confidential,流式细胞仪在临床检验中的应用专家讲座,第51页,