小鼠精子畸形试验.pptx

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,试验四 小鼠精子畸形试验,小鼠精子畸形试验,第1页,目标,精子畸形试验是检测受试化学毒物能否破坏哺乳动物精子正常形态试验方法。经过该试验，学习和掌握小鼠精子畸形试验原理和步骤。,小鼠精子畸形试验,第2页,原理,小鼠精子畸形受基因控制，含有高度遗传性，许多常染色体及X、Y性染色体基因直接或间接地决定精子形态。,精子畸形主要是指形态异常，是决定精子形成基因发生突变结果。所以形态改变提醒相关基因及其蛋白质产物改变。,小鼠精子畸形试验,第3页,器材和试剂,器材：,眼科剪、眼科镊、小平皿、显微镜、擦镜纸、带橡皮头吸管、载玻片、玻璃染缸,试剂 生理盐水、甲醇（分析纯）、环磷酰胺,小鼠精子畸形试验,第4页,操作步骤,动物 雄性,小鼠68 周龄，体重2030g,药品 环磷酰胺,剂量,环磷酰胺40mg/kg腹腔注射，天天,1次，连续5天,小鼠精子畸形试验,第5页,制 片,在第1次染毒后第45周，小鼠脱颈椎处死，剪开腹腔，分离并摘取双侧附睾，将附睾放入有约1mL生理盐水小平皿中。,小鼠精子畸形试验,第6页,制 片,用眼科剪将附睾纵向剪12刀，用吸管将悬浮液轻轻吹打5-6次，静置3-5min；,用4层擦镜纸过滤除组织碎片，,用胶头滴管,吸收精子悬液，,滴一滴于清洁,载玻片上，均匀推片；,待玻片晾干后用甲醇固定5分钟，干燥。,小鼠精子畸形试验,第7页,先用低倍镜粗检，找到背景清楚、精子重合较少部位，用高倍镜检验精子形态。每只小鼠检验精子1000条。,精子畸形：主要在头部，其次为尾部。畸形类型可分为无钩、香蕉形、双头、胖头、无定形、尾折叠、双尾等。,分别统计异常类型和数量，方便统计精子畸形率及精子畸形类型组成比。,镜 检,小鼠精子畸形试验,第8页,注意事项,判断双头、双尾畸形时，要注意与两条精子部分重合相判别，判断无定形时要与人为剪碎及折叠相判别。,使用小鼠要健康，以免感染、体温增高等可能造成精子畸形率增高，造成假阳性结果。,小鼠精子畸形试验,第9页,结果分析与评价,计算精子畸形发生率，与阴性对照组,比较，畸形率最少为阴性对照组2倍或2倍以上；或经统计有显著性差异（P,0.01），并有剂量反应关系,。,普通阴性对照组精子异常率为0.83.4,。,小鼠精子畸形试验,第10页,正常和畸形精子形状,小鼠精子畸形试验,第11页,40 x,小鼠精子畸形试验,第12页,小鼠精子畸形试验,第13页,