青霉素生产方案.pptx

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2022/1/11,#,青霉素生产方案,青霉素生产方案,第1页,目录,任务,3.1,青霉素培养基配制,任务,3.2,青霉素接种、菌种活化、扩充培养,任务,3.3,青霉菌发酵,任务,3.4,青霉菌发酵产物初步分离,任务,3.5,青霉菌发酵液效价初步测定,青霉素生产方案,第2页,任务,3.1,青霉素培养基配制,一，菌种：保藏在低温冷冻安瓿管中丝状青霉菌菌种,二，所用培养基：,LB,培养基,LB,培养基配方：牛肉膏,1g,蛋白胨,2g Nacl1g,琼脂,3g,葡糖糖,4g,配成,200ml,青霉素生产方案,第3页,任务,3.2,青霉素接种、菌种活化、扩充培养,一，接种（在超净台上完成）,1,，将灭好菌,LB,培养基放入超净台内,2,，将,LB,培养基倒入无菌试管内，试管摆斜面冷却凝固。,3,等培养基凝固后，用接种环从安瓿管中接取菌种，并在培养基上画,S,形曲线接种,二，菌种活化：,待接种好菌吸附在培养基上,置于,25,恒温箱中培养,5,天。,青霉素生产方案,第4页,三,，扩充培养,1,，液体试管培养,液体培养基配方：可溶性淀粉,9g,、蛋白胨,1.2g,、玉米浆,2ml,、葡萄糖,3g,、,K,2,HPO,4,0.15g,、,MgSO,4,7H,2,O,0.15g,、,NaCl0.15g,、蒸馏水,300ml,。,.,灭菌后，在超净工作台进行以下操作：将液体培养基倒入试管内，用接种环自斜面试管挑取一环斜面种子菌体，接入试管中。摇匀后，置培养箱培养。待培养成熟后，再接入三角瓶培养。,青霉素生产方案,第5页,2,三角瓶液体培养,制备液体培养基（同上）灭菌后，在超净台进行以下操作：,将液体培养基倒入三角瓶内，用接种环自液体培养试管挑取种子菌体，接入三角瓶（可接,2-3,次）。摇匀后，置摇床,培养。,青霉素生产方案,第6页,任务,3.3,青霉菌发酵,1,，发酵罐：生产罐。,2,，培养基配方：花生饼粉（高温），麸质粉、玉米浆、葡萄糖，尿素，硫酸铵，硫酸钠、硫代硫酸钠，磷酸二氢钠，苯乙酰胺及消泡剂，,CaCO,3,等。,3,，从三角瓶中接种，接种量为,12-15%,。,4,，青霉素发酵对溶氧要求极高，通气量偏大，通气比控制,0.7-1.8,；,150,200r/min,；要求高功率搅拌，,100 m3,发酵罐搅拌功率在,200-300 Kw,，罐压控制,0.04-0.05 MPa,，于,25-26,下培养，发酵周期在,200h,左右。前,60h,，,pH5.7-6.3,，后,6.3-6.6,；前,60h,为,26,，以后,24,。,青霉素生产方案,第7页,注意事项,一，发酵培养基,成份控制,:,a.,碳源,-,生产上普遍采取是淀粉水解糖、糖化液 进行流加；,b.,氮源,-,常选取玉米浆、精制棉籽饼粉、麸皮，并补加无机氮源；,c.,前体,-,可用苯乙酸、苯乙酰胺,一次加入量小于,0.1%,并采取屡次加入,以预防前体对青霉素毒害；,d.,无机盐包含硫、磷、钙、镁、钾等，用量要适度。,青霉素生产方案,第8页,二，发酵中灭菌,青霉素属于,-,内酰胺类抗生素，其,-,内酰胺环极易破坏而失效，所以不能够高压灭菌了，不然将造成完全失效,。,青霉素生产方案,第9页,三，发酵液质量控制,生产上按要求时间从发酵罐中取样,用显微镜观察菌丝形态改变来控制发酵。生产上惯称,“,镜检,”,依据,“,镜检,”,中菌丝形改变和代谢改变其它指标调整发酵温度,经过追加糖或补加前体等各种办法来延长发酵时间,以取得最多青霉素。,当菌丝中空泡扩充、增多及延伸,并出现个别自溶细胞,这表示菌丝趋向衰老,青霉素分泌逐步停顿,菌丝形态上即将进入自溶期,在此时期因为茵丝自溶,游离氨释放,pH,值上升,造成青霉素产量下降,使色素、溶解和胶状杂质增多,并使发酵液变蒙古稠,增加下一步提纯时过滤困难。所以,生产上依据“镜检”判断,在自溶期即未降临之际,快速停顿发酵,立刻放罐,将发酵液快速送往提炼工段。,青霉素生产方案,第10页,任务,3.4,青霉菌发酵产物初步分离,（,1,）预处理及过滤,发酵液放罐后需冷却至,10,后，经鼓式真空过滤机过滤。从鼓式真空过滤机得到青霉素滤液,pH,在,6.2,7.2,，蛋白质含量普通在,0.05%,0.2%,。这些蛋白质存在对后面提取有很大影响，必须加以除去。除去蛋白质通常采取,10%,硫酸调整,pH4.5,5.0,，加入,0.05%,（质量浓度）左右絮凝剂方法，同时再加入,0.7%,硅藻土作助滤剂，再经过板框过滤机过滤。经过第二次过滤滤液普通澄清透明，可进行萃取。,青霉素生产方案,第11页,（,2,）提取,结合青霉素在各种,pH,下额稳定性，普通从发酵液中萃取到醋酸丁酯时，,pH,选择在,1.8,2.2,范围内，而从丁酯相反萃取到水相时，,pH,选择在,6.8,7.4,范围内对提取有利。生产上普通将发酵滤液酸化至,pH,等于,2.0,，加,1/3,体积醋酸丁酯（简称,BA,）混合后以卧式离心机（,POD,）机分离一次,BA,萃取液，然后以,NAHCO,3,在,pH6.8,7.4,条件下将青霉素从,BA,中萃取到缓冲液中，再用,10%H,2,SO,4,调整,pH,等于,2.0,，将青霉素从缓冲液中再次转入,BA,中（方法同前面所述），得二次,BA,萃取液。,青霉素生产方案,第12页,（,3,）脱色,在二次,BA,萃取液中加入活性炭,150350g/10,亿单位，进行脱色，石棉过滤板过滤。,注意,：青霉素性质不稳定，在发酵液预处理、提取和精制过程中应注意条件温和、速度快，以预防青霉素破坏。预处理及过滤、提取过程是青霉素各产品共性个别，其工艺控制基础相同，只是精制过程有所差异。,青霉素生产方案,第13页,任务,3.5,青霉菌发酵液效价初步测定,牛津杯法，经过测定抑菌圈大小估算效价,（,1,）制作金黄色葡萄球菌平板,（,2,）采取牛津杯法加入青霉菌标准液和提取液。,（,3,）按金黄色葡萄球菌培养要求对平板进行培养。,（,4,）培养结束后测平板上抑菌圈大小。,（,5,）以标准品为对照，估算效价。,青霉素生产方案,第14页,