高相色谱法测定有机化合物中甲苯的含量_陕西师范大学_11页.ppt

,高相色谱法测定有机化合物,中甲苯的含量,实验目的,了解高效液相色谱仪的基本结构及基本操作。,了解反相色谱法的基本原理。,掌握利用内标法进行色谱定量分析的实验方法。,流动相的极性大于固定相的化学键合相色谱称为反相色谱。,由于各种物质的极性不同，因而在反相色谱体系中的分配能力不同，因此保留时间不同，在色谱图上呈现不同位置的色谱峰。,反相色谱,大部分以,C,18,或,C,8,为色谱柱，以甲醇或乙氰的水溶液为流动相。,采用内标法定量时，首先将一定量的待测物标准品溶液与内标物标准品溶液混合，进行色谱分离，测得峰面积分别为,A,i,和,A,s,，,求出相对校正因子,f,。,样品分析时，将一定量的内标物加入待测样品中，进行色谱分析，测得峰面积，计算样品中待测物的量,。,实验原理,高效液相色谱仪流程示意图,1.,分析速度快。,2.,分离效率高。,3.,灵敏度高、易于实现操作自动化。,高效液相色谱法的特点,了解高效液相色谱仪的基本结构及操作步骤。,掌握利用内标法分析混合物中甲苯含量的方法。,实验预习,1.,色谱仪,:Agilent 1100,2.,色谱柱：,C18,柱，,250 mm4.6 mm,3.,流动相,:,甲醇,:,水,(70:30),，流速,:1.0,mL,/min,4.,检测器,:,紫外检测器,254 nm,仪器与试剂,基本操作,1.打开电脑主机，再打开高效液相色谱的模块，启动工作站并初始化仪器。,2.仪器初始化完毕后，在工作界面上选择测量项目，设置适当的仪器参数：流动相组成=,甲醇:水(70:30),，,流速=1.0,mL,/min,，,柱压=200,kPa,。,3.,运行程序，清洗色谱柱，直至基线平稳，然后进样，进行测定。,4.测定结束后，依次用纯水、100%甲醇洗涤20分钟，退出主程序，关闭计算机。,1.,确定实验条件,（流动相、流速、检测波长等）,2.,溶液的配制,：,（1）内标物溶液的配制：准确称取一定量苯酚纯品，加甲醇溶解后制成0.400,mg/,mL,的标准溶液,（2）甲苯标准溶液的制备：准确量取一定量甲苯的标准品，加甲醇溶解后制成0.500,mg/,mL,的标准溶液,（3）样品溶液的制备：准确称取适量样品，加甲醇超声溶解，定容于100,mL,容量瓶中，过滤备用。,实验步骤,3.,相对校正因子的测定,：,取1.00,mL,甲苯标准溶液和1.00,mL,苯酚标准溶液混合，待仪器稳定后，注入10,L,混合溶液，记录色谱图，平行测定三次。,4.,样品分析,：,取1.00,mL,内标标准溶液和1.00,mL,样品溶液混合，待仪器稳定后，注入10,L,混合溶液，记录色谱图，平行测定三次。,数据处理,相对校正因子,未知液中甲苯的含量,1.,检查流动相是否充足。,2.,待仪器稳定后，再进样。,3.,进样器要充分洗涤。,注意事项和问题,