CART的治疗进展和发展趋势-B.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,CAR-T,治疗进展和发展趋势,2012,中国肿瘤登记年报,恶性肿瘤已成为严重威胁生命安全和身体健康的重要杀手。,全国每,6,分钟就有一人被确诊为癌症，每天有,8550,人成为癌症患者，每七到八人中就有一人死于癌症。,未来,10,年，中国的癌症发病率与死亡率仍将继续攀升。预计到,2020,年，中国每年的癌症死亡总数将达,300,万左右，患病总数将达,660,万。,WHO,：,2014,年中国癌症现状,细胞免疫治疗,生物治疗是继手术、放疗、化疗之后又一新的肿瘤治疗技术，掀起了肿瘤治疗的绿色革命，有着广阔的发展前景,。美国,科学,杂志公布年度十大科学突破，其中癌症免疫疗法居于首位。,免疫细胞治疗是采集患者外周静脉血，在,GMP,实验室内分离外周血单个核细胞，在多种细胞 因子诱导下，大量扩增出具有高效抗瘤活性的免疫效应细胞，再通过静脉、皮内注射、介入等回输到患者体，达到增强患者免疫功能和杀伤肿瘤细胞的目的。,免疫细胞治疗的种类,第一代：细胞因子激活的杀伤细胞（,LAK,），肿瘤侵润淋巴细胞（,TIL,）。,第二代：细胞因子诱导的杀伤细胞（,CIK,）。,第三代：树突状抗原呈递细胞,(DC),刺激细胞因子诱导的杀伤细胞（,DC-CIK,）。,第四代：利用肿瘤靶向抗体（,TCR,），或者嵌合抗原受体,(CAR),。,CAR-T,免疫细胞治疗是当前科技当中唯一有可能彻底清除癌细胞的方法。,1989,年首次提出和设计通过将识别肿瘤相关抗原,(tumor associated antigen,TAA),的,scFv,和胞内信号域“免疫受体酪氨酸活化基序,(immunoreceptor tyrosine-based activation motifs,ITAM,通常为,CD3,或,FcRI)”,在体外进行基因重组,生成重组质粒,再在体外通过转染技术转染到患者的,T,细胞,使患者,T,细胞表达肿瘤抗原受体,转染后经过纯化和大规模扩增后的,T,细胞,称之为嵌合抗原受体,T,细胞,(CAR-T,细胞,),。,CART19,CAR-T,技术原理,CAR,是将识别,肿瘤相关抗原,(TAA),的单链抗体,(scFv),和,T,细胞的,活化序列,在体外进行基因重组，形成重组质粒，在体外通过转染技术，转染经纯化与大规模扩增后的,T,细胞，称之为,CAR-T,细胞。,CART,技术应用范围广泛，针对某种或数种肿瘤相关抗原阳性的,肺癌、乳腺癌、大肠癌、前列腺癌、宫颈癌、卵巢癌、鼻咽癌、食道癌、肾癌、膀胱癌、胃癌、黑色素瘤、淋巴瘤,等恶性肿瘤均可治疗。,CAR-T,技术发展历程,CAR-T,细胞杀伤模式,免疫治疗：基因测序后的下一个万亿市场,诺华开发的,CART,-19,，已完成,临床,2,期试验。研报认为,CART,-19,产品理论市场规模能够达到,80-100,亿,美元。这仅仅是一家公司的产品所达到的市场规模，并不是整个行业的市场估值。,国际上,诺华、罗氏、安进、默克、,GSK,等公司已进军细胞治疗行业。,国内,香雪制药，姚记扑克，冠昊生物,等公司纷纷投资。,积极参与激烈竞争,美国小药企收购解放军总医院,CAR-T,疗法，中国金蛋为何砸到了美国？,2015,年,2,月,9,日，美国生物制药公司,Cellular Biomedicine(CBMG),收购了中国解放军总医院,(301,医院,),的,CART,细胞疗法，这项收购包括,CD19,、,CD20,、,CD30,、以及人表皮生长因子受体,(EGFR),重组表达载体等免疫技术，已有的临床,I/II,期结果、相关专利的所有权、以及生产技术。,CAR-T,细胞治疗的优势,降低排异反应风险,。,使用患者自体细胞。,治疗更精准,。由于,CAR-T,细胞是应用基因修饰病人自体的,T,细胞，利用抗 原抗体结合的机制，能克服肿瘤细胞通过下调,MHC,分子表达以及降低抗原递呈等免疫逃逸，让肿瘤细胞无所逃遁。,杀瘤范围更广,。鉴于很多肿瘤细胞表达相同的肿瘤抗原，针对某一种肿瘤抗原的,CAR,基因构建一旦完成，便可以被广泛利用。,多靶向更精准,。,CAR-T,既可以利用肿瘤蛋白质抗原，又可利用,糖脂类非蛋白质,抗原，扩大了肿瘤抗原靶点范围，,CAR-T,细胞作用过程不受,MHC,的限制。,杀瘤效果更持久。,新一代,CAR,结构中加入了促进,T,细胞增殖与活化的基因序列，能保证,T,细胞进入体内后可以增殖，,CAR-T,细胞具有免疫记忆功能，可以长期在体内存活。,低剂量,。少量的细胞（,1.510,5,个,/,公斤体重）的,CAR-T,可以是病情完全缓解。,CAR-T,细胞治疗流程,载体的选择,质粒；,转座子（睡美人系统）；,mRNA；,病毒（腺病毒，腺相关病毒，逆转录病毒，慢病毒等）,睡美人系统,睡美人转座子,CAR-T,技术比病毒载体具有简便性,价廉性和安全性。,和,DNase,高敏感位点。,睡美人转座子CAR-T 技术比病毒载体具有简便性,价廉性和安全性，且高水平CAR基因表达。,慢病毒载体,慢病毒载体,（,Lentiviral vector,LVs,）是在,HIV-1,病毒基础上改造而成的病毒载体系统，它能高效的将目的基因导入动物和人的原代细胞或细胞系。,慢病毒载体能有效感染并整合到,分裂和非分裂细胞,中,感染效率高。,慢病毒载体不表达任何,HIV-1,蛋白，免疫原性低，在注射部位无细胞免疫反应，体液免疫反应也较低，不影响病毒载体的第,2,次注射。,CAR-T,治疗抗原的选择,血液系统恶性肿瘤中可选择的抗原,实体瘤中可选择的抗原,近期报道的,CAR-T,临床试验结果,2014,年，报道携有,CD137,共刺激信号的,CAR-T,治疗,30,例急淋,患者，完全缓解率,90%,（,27,人）；,2014,年，报道携有,CD28,共刺激信号的,CAR-T,治疗,20,例急淋,患者，完全缓解率,60%,（,12,人）；,2015,年，报道携有,CD137,共刺激信号的,CAR-T,治疗,14,例慢淋,患者，反应率,57%,（,8,人）,2015,年，报道携有,CD137,共刺激信号的,CAR-T,治疗,1,例,CD19,阴性,Multiple Myeloma,患者，反应率,100%,（,1,人）,N Engl J Med 371(16):1507-1517.,Lancet 385(9967):517-528.,Sci Transl Med 7(303):303ra139.,N Engl J Med 2015;373:1040-1047,Clinical,Trials,China:,EGFR,，,HER2,，,Mesothelin,，,GPC3,，,CEA,，,MUC1,Worldwide:,EGFRvIII,EGFR,HER2,FRa,Mesothelin,NY-ESO-1,GD2,VEGFR-2,China,is,the second largest,country which has,24,on-going clinical trials at present.Clinical trials have been ongoing in China since 2013 according to clinicaltrials.gov.search results.,本人构建用于,301,医院的,CAR,载体,CAR-CD20,（淋巴瘤）,ClinicalTrials.gov Identifier:NCT01828008,CAR-CD19,两种（白血病，淋巴瘤）,ClinicalTrials.gov Identifier:NCT01864889,CAR-CD33,（甲状腺癌，白血病,）,ClinicalTrials.gov Identifier:,NCT01864902,CAR-CD138,两种（骨髓瘤）,ClinicalTrials.gov Identifier:,NCT01886976,CAR-HER1(,肺癌，胆管癌，胰腺癌等）,ClinicalTrials.gov Identifier:NCT01869166,CAR-HER2,（乳腺癌，胃癌等）,ClinicalTrials.gov Identifier:NCT01935843,专利情况,一种工程化,CD20,，,CD19,（,2,个），,CD33,，,CD138,（,2,个），,HER1,，,HER2,靶向性的,NKT,细胞制备及应用。,专利申请号：,201410062069.7,，,201410425934.X,，,20140426383.9,，,201410425490.X,，,201410424674.4,，,201410426057.8,，,201410426060.X,，,201410426077.5,。,CAR-T细胞的制备,CAR-T,基因的表达,M 阳参 NKT CAR-T H2O,750bp,100bp,2000bp,250bp,-actin,293T-GFP-V5,293T-CART-V5,29kd,53kd,免疫荧光,CART-V5,Feb.2013-Nov.2015,：,119 cases were treated in 301 hospital,CART20,I,期,7,例化疗抵抗甚至无反应的进展期,DLBCL,弥漫大,B,细胞性淋巴瘤（从诊断到入组无,CR,，且入组时疾病进展）,1,例,CR,3,例,PR,1,例,SD,2,例无效死亡,Ib,期,11,例高危淋巴瘤患者,评价中,CART20,1,例,CD20,阳性进展的多发性骨髓瘤（,MM,）,PR,CART19,I,期,9,例不能耐受化疗，无移植条件，或移植后复发,B,细胞急性淋巴细胞白血病（,B-ALL,）,1,例,allo-CART19+microtransplanation,1,例,B-ALL,1,例,NHL,6,例产生临床反应性,其中,2,例获得分子缓解,3,例无反应,CART138,5,例复发难治性,MM,SD,，其中,1,例浆细胞白血病缓解,CART33,1,例复发难治性急性髓细胞系白血病（,AML-M2,）,2,例,allo-CART33+microtransplanation,PR,（,9 w,）,PD,，死亡,CART-HER1,11,例多发转移肺癌（,Ia,），,6,例,NSCLC,，,11,例胰腺癌，,15,例胆管癌，,1,例肾癌,Ia,：,60%,获得,SD,CART-HER2,4,例胆管癌,1,例胰腺癌,CART-CD30,21,例,HL,，,1,例皮肤,ALCL,Ia,（,7,例）：,2,例,PR,，,3,例,SD,（可评估的,7,例分析）,CART-133,4,例晚期肝癌,SD,伴有腹水减少，白蛋白升高,CART-Mesolin,完成实验室的研究，待申报,Objective clinical response,：,6/9(66.7%),First report from China:CART 19 in B-ALL,First report:CART-20 in DLBCL,本研究结果首次报道了利用,CART20,治疗进展期,DLBCL,国际上首次公开报道,采用,CART-33,治疗难治性,AML,CART138,有效解决浆细胞白血病的问题,国际上首次公开报道采用,CART-138,治疗难治性,MM,存在的问题,过继性细胞治疗在显示出临床有效性的同时，也表现出一些临床副作用，如何控制这些不良反应，也是过继性细胞治疗所面临的挑战。,细胞因子风暴,。这是,CAR-T,技术在临床应用中一个最主要的不良反应，由于,T,细胞的大量增殖引起的细胞因子释放，引起机体出现发热或发烧，肌痛，低血压，呼吸衰竭等症状。而针对,CAR-T,细胞回输引起的细胞因子风暴，临床上利用,IL-6,受体拮抗药物,tocilizumab,能够缓解。同时有研究小组也观察到细胞因子风暴也与疾病进展程度或者 肿瘤负荷有相关性，在高疾病负荷的患者体内，有较高的细胞因子释放。临床表现就是病人超高烧不退，如果不控制好，很有可能就救不过来了。这就是为什么说,CAR-T,的最后一步是严密监护病人，这其实非常关键。,靶向细胞毒性,。由于,CAR-T,抗原的靶向性非常强，无法区分表达相应抗原的肿瘤细胞和正常细胞，因此针对表达相应抗原的肿瘤细胞和正常细胞，都具有攻击 性。如针对,CD19,的,CAR-T,细胞治疗，导致,B,细胞发育不良，靶向,Her-2,的,CAR-T,细胞治疗以及靶向,MAGE-A3,的,TCR-T,，都能导致肿瘤部位以外的其他组织或器官遭受攻击，如心肺系统毒性。因此选择合适的肿瘤特异性抗原合成的,CAR-T,，在攻击肿瘤细胞的同时，能够区分正常细胞免受攻击。,神经系统毒性,。几个研究组在用,CAR-T,治疗白血病的过程中，观察到少部分患者出现神经错乱，语言障碍，癫痫等神经系统不良反应。,其他细胞毒性,。如有引起机体自免疫性疾病的风险。,未来工作重点：,CAR-T,的实体瘤治疗,CAR-T,细胞疗法对白血病等血液肿瘤取得了巨大的突破，但是从针对实体瘤的临床试验结果看，,CAR-T,细胞对实体瘤的疗效并不显著。,浸润能力不强，需增强,CAR-T,细胞归巢实体瘤的能力。,需克服实体瘤内部微环境对免疫细胞功能的抑制。,肿瘤干细胞。,可能是癌症患者预后差和难以治愈的关键。,安全性。,防止脱靶效应。,通用性。,肿瘤的免疫逃逸,EF1a,scFv,Hinge,TM,CD3,CD28,CD137,CD27,EF1a,scFv,Hinge,TM,CD3,CD28,CD137,EF1a,scFv,Hinge,TM,CD3,CD28,EF1a,scFv,Hinge,TM,CD3,EF1a,scFv,Hinge,TM,CD3,CD28,CD137,CD27,EF1a,scFv,Hinge,TM,CD3,CD28,CD137,2A,Caspase9,2A,Caspase9,新,CAR,慢病毒载体的构建,EF1a,scFv,Hinge,TM,CD3,CD28,CD137,CD27,EF1a,scFv,Hinge,TM,CD3,CD28,CD137,2A,Caspase9,2A,Caspase9,IL-12,IL-12,PD-1,CTLA-4,TGF,临床前研究,一期,二期,三期,上市,项目启动,CD20,CD19,ROR-1,CD133,CD123,CD44V6,HER2,HER1,CAR-T,截至,2015,年,12,月,工作整体进度,临床前研究,一期,二期,三期,上市,项目启动,CD30,MESO,Lewis Y,NY-ESO-1,CEA,EpCAM,MUC-1,EGFRV,CAR-T,截至,2015,年,12,月,工作整体进度,TK-GCV,自杀基因,其机制是干扰DNA合成，所以杀死细胞需要数天时间并且不完全，TK来源于病毒，有潜在的免疫原性。,iCasp9,安全开关,防止脱靶效应,通用性,如何生产出通用型的,CAR-T,细胞以减少生产成本是极大的挑战。一个可能的方法是从捐献者身上获得,T,细胞后将细胞的,HLA,基因敲除,并表达非经典,HLA,分子,以阻止自然杀伤细胞介导的细胞识别和细胞溶解，从而生产出通用的,T,细胞产品。,11,月,6,日，,Cellectis,公司在,GMP,条件下，完成了通用性,CAR-T,疗法的,3,个生产批。该新闻直接导致巴黎交易所的,Cellectis,股票上涨,20%,。这充分强调工业化生产在接下来的肿瘤免疫竞争中发挥着重要作用。,以往的细胞疗法都属于自体移植范畴，而基于,Talen,的基因编辑方法,(,转录激活因子样效应物核酸酶，是基因组编辑核酸酶三大类之一,),，使得细胞疗法的适用性得以扩展到一个人群，而不仅仅局限于单个个体，从而能够实现工业化大规模生产。,“,生产实现工业化使,Cellectis,公司有信心获得,90%,的毛利润。,虽然异体,CAR-T,疗法的安全性和有效性还不太确定，但代表了未来细胞免疫治疗的发展方向。,谢谢！,