任务二、人工授精-2.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,任务二、人工授精,第一节 概述,概念,人工授精是利用器械采集雄性动物的精液。经检查和处理后，再用器械将精液输入到发情雌性动物的生殖道内，以代替自然交配而繁殖后代的一种技术。,一、人工授精的发展概况,人工授精的发展经历下列三个阶段,：,1.,试验阶段：,1780,年，意大利生理学家,Spallanzani,，第一次成功地用狗进行了人工授精试验。,2.,实用阶段：上世纪,40-60,年代，人工授精的应用蓬勃发展成为繁殖改良家畜的重要手段。以乳牛的普及率最高，发展最快，技术水平较高。,3,冷冻精液阶段：,50,年代英国的,Smith,和,Polge,研究牛精液的冷冻保存方法，人工授精技术进入了一个新的发展阶段。,二、人工授精的优越性,1.,最大限度地提高优秀种公畜的利用率,2.,大幅度减少种公畜的头数，,降低了饲养管理费用,3.,控制疾病传播,4.,有利于提高母畜的受胎率,5.,能够使配种不受地域和时间的限制。,6.,克服公、母畜体型悬殊而出现的交配困难,7.,加速家畜品种改良，促进育种工作,三、人工授精的限制,1,、通过人工授精可能使不良的公畜影响范围更大,2,、必须投入一定资金，进行房舍建设和设备购置,3,、必须进行人员的技术培训，不良的操作会造成更严重的问题,一、采精前的准备,目录,（一）采精场地,采精要有一定的采精环境，以便雄性动物建立起巩固的条件反射，同时防止精液污染。采精场地应该宽敞、平坦、安静、清洁，场内设有采精架以保定台畜，或设立假台畜，供公畜爬跨进行采精，采精场应与人工授精操作室和公畜舍相连。室内采精场的面积一般为,1010,平方米，并附设喷洒消毒和紫外线照射杀菌设备。,目录,（二）台畜的准备,台畜有真假台畜之分,真台畜是指使用与公畜同种的母畜、阉畜或另一头种公畜作台畜。真台畜应健康、体壮、大小适中、性情温顺。选发情的母畜比较理想，经过训练的公、母畜也可作台畜。,假台畜即采精台，是模仿母畜体型高低大小，选用金属材料或木料做成的一个具有一定支撑力的支架。,目录,（三）调教种公畜爬跨假台畜,利用假台畜采精，要事先对种公畜进行调教，使其建立条件反射。调教的方法有如下几种：,1.,在假台畜的后躯涂抹发情母畜的阴道粘液或尿液，公畜则会受到剌激而引起性兴奋并爬跨假台畜，经过几次采精后即可调教成功；,2.,在假台畜旁边牵一发情母畜，诱使公畜进行爬跨，但不让交配而把其拉下，反复多次，待公畜性冲动达到高峰时，迅速牵走母畜，令其爬跨假台畜采精；,3.,将待调教的公畜拴系在假台畜附近，让其目睹另一头已调教好的公畜爬跨假台畜，然后再诱其爬跨；,目录,公畜调教时应注意的事项,1.,调教过程中，要反复进行训练，耐心诱导，切勿施用强迫、恐吓、抽打等不良剌激，以防止性抑制而给调教造成困难；,2.,调教时应注意公畜外生殖器的清洁卫生；,3.,最好选择在早上调教，早上精力充沛，性欲盛；,4.,调教时间、地点要固定，每次调教时间不宜长；,目录,(,三,),器械准备,采精所需要的器械要事先准备好，力求清洁无菌，在使用之前要严格消毒，每次使用后必须洗刷干净。,目录,(,四,),种公畜的准备,种公畜采精前的准备，包括体表的清洁消毒和诱情（性准备）两个方面。这和精液的质量和数量都有密切的关系。,采精前应擦拭公畜下腹部，用,0.1%,高锰酸钾溶液等洗净其包皮外并抹干，挤出包皮腔内积尿和其他残留物并抹干。,在采精前，需以不同诱情方法使公畜有充分的性兴奋和性欲，一般采取让公畜在台畜附近停留片刻，进行几次假爬跨。,目录,二、采精技术,目录,采精方法,目录,雄性动物的采精方法很多，主要有,假阴道法、手握法、按摩法、电剌激法等,。,假阴道法适用于各种家畜和部分小动物,手握法是当前公猪采精普遍应用的方法,按摩法主要用于禽类和犬类,电剌激法主要用于野生动物的采精。,（一）假阴道法,原理：它是模拟发情母畜阴道环境条件的人工阴道，诱导公畜射精而采集精液的方法。,1.,假阴道的结构,假阴道是一筒状结构，主要由外壳、内胎、集精杯及附件组成。外壳为一圆筒，由轻质铁皮或硬塑料制成，内胎为弹性强、薄而柔软无毒的橡胶筒，装在外壳内，构成假阴道内壁；集精杯由暗色玻璃或塑料制成，装在假阴道的一端。此外，还有固定内胎的胶圈，保定集精杯用的三角保定带，充气用的活塞和双联球等一些附件。各种家畜的假阴道结构基本相同，但形状和大小不一。,目录,2.,假阴道的准备假阴道应具备五个条件：,1),适宜温度：采精时假阴道内腔温度应保持在,38-40,，集精杯也应保持,34-35,。,2),适当压力：借助注入水和空气来调节假阴道的压力。,3),适当润滑度：涂抹润滑剂的部位是假阴道前段,1/3-1/2,处到外口周围，但涂布不可过长过多。,4),无菌：凡接触精液的部分均须经消毒。,5),无破损漏洞：假阴道不得漏水或漏气。,目录,牛羊假阴道安装充气后理想的状态,不太理想的状态（但可以用）,牛的假阴道法采精,(,二,),手握法,适用于猪的采精。是目前广泛使用的采集的一种方法。,操作时，采精员要戴上灭菌胶手套，蹲在假台畜左侧，待公猪爬跨台畜后，当阴茎从包皮内开始伸出时，立即紧握龟头，待其抽送片刻后，锁定公猪的龟头。,待阴茎充分勃起时，顺势牵引向前，就能导致公猪射精。另一只手持带有一次过滤网的的集精杯收集精子浓厚部分的精液，其它稀薄精液及颗粒状胶冻分泌物排出时可随时弃掉。,分段采精：弃掉含副性腺分泌物多、精子较少、精液清亮白色的第一段和精液较稀、清亮、精子少的第三段，只收集精液浓、精子多、呈乳白色的第二段。,目录,例：犬的采精：,第,1,阶段：,左膝单跪于公犬左侧，,右手隔公犬包皮套弄其阴茎,，,使球状海绵体暴露于包皮外,。一般公犬在球状海绵体完全勃起的情况下即射出第,1,阶段的精液。（,尿道球腺分泌的水样粘液，无精子,）,第,2,阶段：继续刺激暴露于包皮外的球状海绵体。,反复的握紧公犬球状海绵体,。持续,2,5 min,，公犬会射出第,2,阶段的精液。（来自睾丸，富含有精子，呈白色粘滑液体）,在第二段射精后，公犬表现为抬起一只后腿企图越过采精者的手臂。,第,3,阶段：采取与第,2,阶段相同的刺激手法。大约持续,35min,，公犬会射出第,3,阶段的精液。（前列腺分泌物，容量较多，含有少量精子,）,猪的拳握法采精,(,三,),电剌激法,本法是通过电流剌激公畜引起射精而采集精液的一种方法。适用于各种动物。,电剌激采精器由电子控制器和电极探棒两部分组成。,电剌激采精应将公畜以站立或侧卧姿势,保定,。保定后，,剪,去包皮及其周围的,被毛,，并用生理盐水冲洗拭干，然后将,电极探棒,经肛门缓慢,插入直肠,，达到靠近,输精管壶腹部,的直肠底壁，大家畜插入深度约,20-25,厘米，羊,10,厘米，,犬,10-15,厘米,，兔,5,厘米。然后,调节控制器,，选择好频率，开通电源。调节电压时，由低开始，按一定时间通电及间歇，逐步增高剌激强度和电压，直至公畜伸出阴茎，勃起射精，将精液收集于附有保温装置的集精瓶内。,目录,三、采精频率,采精频率是指每周对雄性动物的采精次数。为了既能最大限度地采集精液，又能维持其健康体况和正常生殖机能，必须合理安排采精频率。,为保证精液品质，每周不超过两次为宜,目录,第三节 精液品质检查,目 录,一、目 的,二、项 目,三、方 法,一、检查的目的,1.,检查种公畜的配种能力,2.,公畜的繁殖问题,3.,确定精液可稀释的倍数,4.,检查精液的处理方法是否正确,5.,检查精液产品的质量,返回目录,二、检查的项目,（一）,直观项目,（二）,微观项目,返回目录,(,一,),直观检查项目,射精量,色泽,气味,云雾状,pH,值,液态,杂质,美兰退色试验,(,二,),微观检查项目,精子活力估测,精子活力计数,密度测定,:,计数板计数、比色计测定,畸形率：形态畸形率、顶体畸形率,返回目录,三、主要项目检查方法,（一）直观项目检查,（二）微观项目检查,（一）直观项目检查,1.,射精量,2.,色泽,3.,气味,4.,云雾状,5.,杂质,6.,液化,7.pH,(1),射精量的测定方法,(2),公畜的正常射精量,(3),采精量,不正常的原因,1.,射精量,返回（一）,(1),射精量的测定方法,概念,:,射精量是指每次射精的体积,测定,:,以连续,3,次以上正常采集到的精液的平均值代表,测定方法,:,可用体积测量容器如刻度试管或量筒,也可用电子秤称重近似代表体积,返回,1.,(2),公畜的正常射精量,影响射精量的因素,:,种类、睾丸大小质地、季节、健康状况,不同畜种的正常射精量：,畜种,奶牛,水牛,马,猪,绵羊,山羊,射精量,ml,5-10,3-6,30-100,200-300,0.8-1.2,0.5-1.5,柱形图,犬,2-15,不同畜种的射精量比较,原因,（,3,）射精量不正常的原因,现 象,原 因,过 少,采精过频、性机能衰退、睾丸炎、发育不良,过 多,副性腺发炎、假阴道漏水、尿潴留、采精操作不熟练,返回,1.,2.,色 泽,色泽：是指精液的颜色及其浓厚程度，它某种程度反应精液是否正常，精子的浓度高低。,正常的精液：,猪：浅灰白至白色,牛羊：乳白色或乳黄色,不正常精液原因分析,正常精液特征,依从浓到稀：乳黄,-,乳白,-,白色,-,灰白,淡红（鲜红）,生殖道下段出血或龟头出血,淡红（暗红）,副性腺或生殖道出血,绿,副性腺或尿生殖道化脓,褐、黄,混有尿液,3.,气 味,正常的精液：应没有很浓的气味，或略带动物特有的腥膻味,腥味：有脓液,臊味：有尿液或包皮液,4.,云雾状,是指新鲜精液在,33-35,温度下，精子成群运动所产生的上下翻卷的现象。,云雾状的明显程度代表高浓度的精液中精子活力的高低。,云雾状分级标准,+,翻卷明显而且较快,+,翻卷明显但较慢,+,仔细看才能看到精液的移动,-,无精液移动,（二）微观项目检查,1.,活力估测,2.,密度测定,3.,畸形率测定,1.,活力的估测,(1),概念,:37,下,精液中,前进运动精子占总精子数的百分率,(2),主要测定方法,:,估测法,活力测定时精液的稀释用品,例：牛精子活力检查的程序,载玻片预温,精液稀释,取样检查,镜检,活力估测,活力记录,将恒温加热板放在载物台上，打开电源并调整控制温度至,37,，然后放在载玻片,将生理盐水与精液等温后，按,1:10,稀释,取,10ul,放在预温后载玻片中间，盖上盖玻片,用,100,倍和,400,倍观察,判断视野中前进运动精子占的百分率,按,10,级制评分和记录,评定精子活力多采用“十级一分制”，如果精液中有,80,的精子作直线运动，精子活力计为,0.8,；如有,50,的精子作直线运动，活力计为,0.5,，以此类推。评定精子活力的准确度与经验有关，具有主观性，检查时要多看几个视野，取平均值。,2）其他检测精子活力方法,存活时间,及,存活指数,检查,存活时间：,指精子在体外的总生存时间。,将稀释液置于一定的温度下（,0,或,37,），间隔一定时间检查活率，直至无活动精子为止，所需的总小时数为存活时间。,存活指数：,指平均存活时间，表示精子的活率下降速度。,生存指数：,指相邻两次检查的,平均活率,与,间隔时间乘积的总和,。,精子存活时间越长，生存指数越大，说明精子生活力越强，品质越好。,2.,精子的密度检查,(1),密度的概念及表示方法,单位体积精液中所含的精子数,表示方法,:,个,/ml,或亿,/ml,(2),各种家畜精液的精子密度,畜种,牛,羊,猪,马,鸡,密度 亿,/ml,8-12,20-30,2-3,1.5-3,30-50,(3),各种家畜精子密度比较,（3）密度测定方法：,估测法,使用血球计数板测定法,精子密度检查（,估测法,）,取一小滴精液滴在清洁载玻片上，用另一载玻片轻推，使精液成一薄层，,400,镜下观察,密：视野中精子密度很大，彼此间隙很小，看不清楚各精子运动状况（约,10,亿,/ml,),中：精子间空隙明显，彼此间约有一个精子长度的空隙（约,2,亿,10,亿,/ml,),稀：精子间空隙超过,1,个精子长度（约,2,亿,/ml,）,使用血球计数板测定法,精子密度计数板,(,器,),简介,精液的稀释,精液注入计数室,精子计数,精子密度计算,精子密度计数板,(,器,),简介,精子计数室长宽各,1mm,面积,1mm,2,高度,0.1mm,体积,0.1mm,3,由双线或三线组成,25,个,(5,X5),中方格,每个中方格内有,16,个小方格,(4,X4),共计,400,个小方格,精子计数室及一个中方格,返回,密度测定之精液稀释,将精液注入计数室前必须对精液进行稀释,以便于计数,稀释的比例根据动物精液的密度范围确定,稀释方法,:,用,5-25ul,移液器和,100-1000,移液器,在小试管中进行组合不同的稀释,.,如牛精液稀释,100,倍,为,5ul,原精,+495ul,稀释液,稀释液,:3%,氯化钠溶液,用以杀死精子,便于计数,注入计数室前各种家畜精液建议稀释比例,畜种,牛,羊,猪,马,鸡,稀释倍数,100,200,40,40,400,3%,氯化钠,ul,原精液,ul,495,5,995,5,975-25,195-5,1995,5,返回,精液注入计数室,将洁净的计数板放在载物台上固定好,盖上干净的盖玻片,取,25ul,稀释后的精液,将吸咀放于盖玻片与计数板的接缝处,缓慢注入精液,使精液依靠毛细作用吸入计数室,注意：让稀释后的精液通过毛细作用自行吸入！,用吸管稀释后精液注入计数室,共有两个对称的计数室,用移液器注入精液,返回,精子计数,将计数板固定在显微镜的推进器内，用,100,倍放大找到计数室，再用,400,倍找到计数室的第一个中方格。,计数左上角至右下角五个中方格的总精子数，以精子的头部为准，依数上不数下，数左不数右的原则进行计数格线上的精子。,进行精子计数的中方格数可以是四角一中心共,5,个中方格,也可以是从左角到右下角五个中方格,以图示次序计数，精子的头部为准，依数上不数下，数左不数右的原则进行计数格线上的精子。白色精子不计数,返回,计算精子密度,精子密度,=,5,个中方格总精子数,5101000,稀释倍数,1ml,原精液中的精子总数,5,个中方格内精子数,5,（,25,个中方格）,10,（,1mm,3,内精子数）,1000,（,1ml=1000mm,3,）,稀释倍数,稀释的比例羊1:200，5个中方格的总精子数是95，则精子密度=,955101000200=9.5,亿,/ml,例：牛精子密度测定程序,放计数板,于载物台上,取样稀,释精液,精液注入,计数室,镜检,精子计数,密度计算,计数板和盖玻片一定要清洁,取,500ul 3%,氯化钠于小试管中,加入,5ul,原精液,混合均匀,取,25ul,小心地从计数板与盖玻片的接缝中加入,使其自行吸入计数室中,用,100,倍和,400,倍观察,计数五个中方格的总精子数,计数以头部为准,在格线上的数上不数下,数左不数右,精子密度,=5,个中方格总精子数,5101000 100,结束,3,、畸形率检查,1,）染色剂,0.5,克龙胆紫用,20ml,酒精助溶，加水至,100ml,，过滤至试剂瓶中备用。,美兰、纯兰或红墨水,2,）稀释,稀释液,0.9%NaCl,牛：,1:10,羊,:1:20,猪,:1:2,3,）抹片,左手食指和拇指向上捏住载玻片两端，使载玻片处于水平状态，取,10ul,稀释后的精液滴至载玻片右侧。右手拿一载玻片或盖玻片，使其与左手拿的载玻片呈向右的,45,度角，并使其接触面在精液滴的左侧。将载玻片向右拉至精液刚好进入两载（盖）玻片形成的角缝中，然后平稳地向左推至左边。抹片后，使其自然风干。,4,）固定,在抹片上滴,95%,的酒精数滴，固定,4,分钟，甩去多余的酒精,5,）染色,将载玻片放在用玻璃棒制的片架上，滴上,0.5%,的龙胆紫或其它染色剂,5-10,滴，,5,分钟后，用洗瓶或自来水轻轻冲去染色剂，甩去水分凉干。,6,）检查畸形率,将载玻片放在,400,或,640,倍的显微镜下进行观察，共记录若干个视野,100-200,个左右的精子。,7,）畸形率种类,精子畸形率：是指畸形精子占视野中总精子数的百分率。,精子畸形分为四类：,头部畸形：,头部巨大、瘦小、细长、缺损、双头、皱缩等。,颈部畸形：,颈部膨胀大、纤细、曲折、双颈等。,中段畸形：,膨大、纤细、带有原生质滴等。,主段畸形：,弯曲、曲折、回旋、双尾等。,精子畸形率猪不超过,18%,，羊不超过,14%,，马不超过,12%,。如果畸形率超过,20%,，则视为精液品质不良，不能用做输精。,畸形精子,视野中的畸形精子,双头和双尾精子,精子代谢能力测定,（一）精液果糖分解测定,（二）美蓝褪色试验,（三）精子耗氧量测定,（四）微生物检查,（一）精液果糖分解测定,果糖分解测定通常用,1,亿精子在,37,厌氧条件下每小时消耗果糖的毫克数表示,。,由于精子还可以利用果糖以外的其他简单糖类，因此用含葡萄糖等稀释液稀释过的精液不能进行测定。,（二）美蓝褪色试验,美蓝是一种氧化还原剂，氧化时呈蓝色，还原时无色。精子在美蓝溶液中呼吸时氧化脱氢，美蓝被还原而褪色。因此，根据,美蓝褪色时间的快慢,即可估测出精子的密度和活力。,（三）精子耗氧量测定,通常以,1,亿个,精子在,37,条件下,每小时,内所,消耗氧气的微升（,ul,）数,表示。,一般家畜精液的耗氧量为,5,22ul,。,（四）微生物检查,我国牛冷冻精液国家标准规定，解冻后的精液应无病原微生物，,每毫升中细菌菌落数不超过,1000,个,。,我国评定牛精液中细菌数通常采用平板培养法进行，求出每毫升原精液内的细菌数。,第四节 精液的稀释,（一）营养物质,卵黄、蔗糖、葡萄糖等,（二）保护性物质,缓冲物质,（柠檬酸钠、磷酸盐、,Tris,、,EDTA,）,抗冻物质,（甘油、乙二醇、二甲基亚砜（,DMSO,）,抗菌物质,（青霉素、链霉素）,（三）其他添加剂,酶类,激素类,维生素类,二、稀释液的种类和配制,（一）稀释液的种类,1.,现配现用稀释液,2.,常温保存稀释液,3.,低温保存稀释液,4.,冷冻保存稀释液,（二）稀释液的配制,1.,使用的一切用具，必须严格洗净消毒,2.,稀释液应现用现配,3.,用蒸馏水或去离子水，要求新鲜,4.,使用奶类要求新鲜，或脱脂奶粉为宜,5.,抗生素、酶类、激素类、维生素等添加剂,在使用前添加。,三、精液稀释方法和稀释倍数,稀释方法：,原则：,同温,，稀释液加入精液，,缓慢温和,稀释倍数,公牛：保证,500,万有效精子数,/ml,公猪：,0.5,亿,/ml,为原则，稀释,2,4,倍,马、驴：稀释倍数一般为,2,3,倍,第五节 精液的保存,精液的保存,液态精液保存,精液冷冻保存,常温保存,15,25,低温保存,0,5,干冰（,-79,）和液氮（,-196,）,一、常温保存,1.,保存温度,15,25,2.,原理主要利用一定范围的,酸性环境来阻止精子运动,，或用,冻胶环境来阻止精子运动以减少能量消耗,，来保持其受精能力。,3.,方法：,向稀释液中充二氧化碳气体,精子在代谢过程中自己产生的,CO,2,稀释液中加有机酸类物质和充氮气,二、低温保存,1.,保存温度,0,5,比长温保存时间长，但猪的不如常温保存效果好。,2.,保存原理,主要利用低温抑制精子活动,3.,保存方法,采用缓慢降温，低温保存,三、冷冻保存,1.,冷源,干冰（,-79,）和液氮（,-196,）,2.,原理：在,0,-60,细胞内,水分子会形成冰晶。对细胞结构产生损伤作用。,在加入抗冻剂的情况下，,快速降温，越过上述有,害温区，在,-60,-250,温区内形成玻璃化。,液氮的特性,1,）液氮是空气中的,氮气经压缩,、分离形成的一种,无色、无味、无毒,的液体，沸点温度为,-195.8,。,2,）在常温下，液氮沸腾，吸收空气中的水气形成白色烟雾。,3,）液氮具有很强的挥发性，当温度升至,18,时，其体积可膨胀,680,倍。,4,）此外，液氮是一种不活泼的液体，渗透性差，无杀菌能力，但是,-196,的超低温可使多数细菌、病毒停止繁殖,。,液氮罐,精液冷冻操作规范,（一）采精及精液品质检查 精液冷冻效果与精液品质密切相关。因此，用作冷冻的公畜精液，品质应比较优良，活率高，密度大。,一般原精活力在,0.8,级以上,，,密度中等以上效果最好,。,（二）精液的稀释,1.,一次稀释法,：将含有甘油、卵黄等的稀释液按一定比例加入精液中，,适合于低倍稀释,。,2.,二次稀释法,：为,避免甘油与精子接触时间过长而造成的危害,，采用两次稀释法较为合理。,首先用,不含甘油,的稀释液（第一液）对精子进行最后稀释倍数的,半倍稀释,，然后把该精液连同第二液一起,降温至,0-5,(,全程,1h,左右,),，并在此温下作第二次稀释。,（三）平衡,采用一次稀释法时，由于稀释温度为30，需经1-2h缓慢降温至0-5，以防冷休克的发生。,平衡是降温后，把稀释后的精液放置在0-5的环境中停留2-4h，使甘油充分渗入精于内部，起到膜内保护剂作用的过程。,4,、精液的分装,现行冻精常采用,塑料细管、颗粒、玻璃安瓿、,塑料薄膜,(,袋,),、载片及胶囊等,分装方法。,（,1,）塑料细管冻精,把平衡后的精液,分装到塑料细管中,，细管的,一端塞有细线或棉花,，其间放置少量聚乙烯醇粉,(,吸水后形成活塞,),，,另一端封口,，冷冻后保存。,细管的长度约,13cm,，容量有,0.25,、,0.5,或,1.0ml,。现生产中牛的冻精多用,0.25ml,剂型。,细管冻精具有不受污染、容易标记、易贮存、适于机械化生产等特点，是最理想的剂型。,4,、精液的分装,（,2,）颗粒冻精,将,精液滴冻在,经液氮致冷的,金属网或塑料板,上，冷冻后制成,0.1ml,左右的颗粒。,颗粒冻精曾在,牛中广泛应用,，现多用于马、绵羊及野生动物的冻精剂型，,具有成本低、制作方便等优点，但不易标记，解冻麻烦，易受污染。,（,3,）玻璃安瓿冻精：,最早采用是从,50,年代开始，是用,硅酸盐硬质玻璃,制成的安瓿盛装精液，剂量多为,1.0ml,，也有,0.5ml,的。,其优点是：剂量标准；标记明显，密封而不受污染；不必再用解冻液解冻，使用方便；精子苏复率较高。其缺点是：制作工艺（特别是封口）繁杂，生产成本较高；破裂及封口不严的安瓿，解冻时易破碎；解冻后还需吸入输精器内使用；体积大，占用贮精罐空间大。故目前已很少采用。,(3),袋装冻精,马和猪输精量大，可用塑料袋分装，但目前冷冻效果不理想。,（四）精液的冷冻,颗粒冻精,：在广口液氮桶上安装铜纱网，调至距液氮面,1-3cm,，预冷几分钟后，使纱网附近温度达,-80 -100C,，将精液均匀地滴压在铜纱网上，,2-4min,后，待精液颗粒充分冻结、颜色变浅发亮时，用小铲轻轻铲下颗粒冻精，每,50-100,粒装入纱布袋中，沉入液氮保存。,塑料细管冻精,：除按上述方法对细管进行熏蒸冷冻外，也可采用液氮浸泡法。把分装好的精液细管平铺于特制的细管架上，放人盛装液氮液氮柜中浸泡，盖好，,5min,后取出保存。这种方法启动温度低，冷冻效果好。,精液解冻,低温冰水解冻,05,温水解冻,3040,高温解冻,5070,1.,母犬的准备：适龄、空怀、发情、保定、清洗外阴消毒,2.,器械的准备：,消毒,3.,精液的准备：常温或低温精液,升温到,35,，,活力,0.6,以上,，,冻精活力,0.3,以上,4.,输精人员的准备：,指甲剪短磨光，清洗消毒,。,一、输精前的准备,二、发情鉴定,输精时间,1,犬阴门流血后,9,天,2,母犬接受爬跨,3,阴道粘膜上皮细胞角质化率达,80,输精枪,开膣器,细管冻精,犬的人工输精,输精枪,STEP 1:,Procedure,STEP 2:,Be sure to use plenty of lubrication.You Can Never Use To Much Lube!,STEP 3&4:,精液被注入到子宫后，会与卵子结合受精，妊娠,STEP 5:,