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单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,选修,1,专题,1,、,2,生物技术实践,传统发酵技术应用、,微生物培养与应用,第1页,考纲内容,能力要求,命题分析,试验：,(1)利用发酵加工食品基本,方法,(2)测定食品加工中可能产生,有害物质,(3)微生物分离和培养,(4)某种微生物数量测定,(5)培养基对微生物选择作,用,(6)利用微生物发酵来生产特,定产物以及微生物在其它,方面应用,试验与探究能力,试验与探究能力,试验与探究能力,试验与探究能力,试验与探究能力,试验与探究能力,1.新课标卷以综合题形式,考查了传统发酵技术(泡,菜制作)、微生物分,离、计数和筛选等。在本,部分内容中，微生物培,养、分离及计数考查较多，,属于高频考点，考查,了微生物培养、分离及,发酵相关内容。,2.命题趋势：以生活实践,为背景，以综合题形式考,查发酵及微生物培养相,关知识。,考纲导读,第2页,项目,果酒,果醋,腐乳,泡菜,微生物,酵母菌,醋酸菌,毛霉,乳酸菌,制作,原理,在无氧条,件下，酵母,菌将葡萄糖,分解为酒精,等物质,在有氧条件下，,醋酸菌将葡萄汁中,糖分解成醋酸；,缺乏糖源时，醋酸,菌可将乙醇(酒精),变为乙醛，再将乙,醛变为醋酸,毛霉等微生物产,生蛋白酶和脂,肪酶将豆腐中,蛋白质和脂肪分,解为小分子物,质,在无氧条件,下，乳酸菌,将葡萄糖分,解成乳酸,气体,条件,_,有氧,_,无氧,温度,18,25,_,15,18,_,一、传统发酵技术应用,无氧,30,35 ,有氧,1.,果酒、果醋、腐乳和泡菜制作原理,常温,第3页,2.,酒精检测,重铬酸钾,灰绿,(1),方法：可用,_,检测酒精。,(2),原理：在酸性条件下，重铬酸钾与酒精反应展现,_,色。,对氨基苯磺酸,玫瑰红,标准显色液,3.,亚硝酸盐含量测定原理：在盐酸酸化条件下，亚硝酸,盐与,_,发生重氮化反应后，与,N,1,萘基乙二胺,盐酸盐结合，形成,_,色染料。将显色后样品与,_,进行目测比较，可大致估算出泡菜中亚硝酸,盐含量。,第4页,二、微生物培养与应用,1.,培养基,(1),培养基是人,们按照微生物对营养物质不一样要求，配制,出供其,_,营养,物质。,生长繁殖,(2),依据物理状态不一样分为半液体培养基、液体培养基和,_,培养基。,固体,选择,(3),依据培养基功效可分为基础培养基、,_,培养基,和判别培养基。,碳源,氮源,pH,(4),每种培养基普通都含有水、,_,、,_,、无机,盐。另外要满足微生物对,_,、特殊营养物质及氧气要,求。,第5页,2.,无菌技术,70,75,15,(1),巴 氏 消 毒 法 在,_,煮,30 min,或 者 在,80,煮,_min,，能够杀死牛奶中微生物，而且使牛奶营养,成份不被破坏。,灼烧,干热,芽孢和孢子,(2),接种环惯用,_,灭菌；需要干燥且,耐高温物品可,采取,_,灭菌，另外还能够用高压蒸汽灭菌。,(3),灭菌和消毒最主要区分是是否杀死,_,。,第6页,3.,微生物培养基本技术,接种环,涂布器,(1),配制培养基：计算称量溶化调,pH,分装包扎。,(2),灭菌：高压蒸汽灭菌锅加,水将培养基放入锅内密封,排冷气维持压力取出倒平板,(,或搁置斜面,),。,(3),接种,平板划线法,稀释涂布平板法,接种过程：洗净双手点燃酒精灯接种贴标签。,接种工具：包含,_,、,_,。,接种方法：,_,、,_,。,(4),培养：接种后培养皿放入恒温箱内培养,。,第7页,4.,土壤中分解尿素细菌分离与计数,(1),种菌筛选,尿素,稀释涂布平板法,培养基：选择培养基。,显微镜直接计数法,特点：,_,是唯一氮源。,(2),统计菌落数目标方法：,_,、,_,。,(3),设置对照主要目标：排除试验组中,_,对,试验结果影响。,非测试原因,第8页,5.,分解纤维素微生物分离,纤维素分解菌筛选,(1),试验原理,透明圈,纤维素酶催化原理,筛选纤维素分解菌原理,即可依据是否产生,_,来筛选纤维素分解菌。,第9页,(2),过程,土壤取样：选择富含纤维素环境中土壤。,选择培养：用选择培养基培养，以增加纤维素分解菌数,量。,梯度稀释,微生物,倒平板,第10页,挑选产生透明圈菌落,葡萄糖,第11页,判断正误,1.,在家庭中用鲜葡萄制作果酒时，应向发酵罐中连续通入,空气。,(,),2.,腐乳制作利用了毛霉等微生物产生蛋白酶和脂肪,酶。,(,),3.,用稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时，只要稀释度足够高，,普通就能在培养基表面形成单个菌落。,(,),答案：,1.,2.,3.,第12页,菌种,酵母菌,醋酸菌,毛霉,乳酸菌,生物分类,真核生物,原核生物,真核生物,原核生物,代谢类型,异养兼性厌氧,异养需氧,异养需氧,异养厌氧,繁殖方式,适宜条件下,出芽生殖,二分裂,孢子生殖,二分裂,生产应用,酿酒、发面,酿醋,制作腐乳,制作泡,菜、酸奶,发酵条件,前期需氧、,后期不需氧,一直需氧,一直需氧,一直无氧,考点一,微生物与发酵原理,考点梳理,1.,与传统发酵相关几个微生物比较,第13页,2.,果酒、果醋、腐乳、泡菜制作过程及注意事项,(1),果酒、果醋,制作过程：挑选葡萄冲洗榨汁酒精发酵果酒；,挑选葡萄冲洗榨汁酒精发酵醋酸发酵果醋。,注意事项,a.,材料选择与处理：选择新鲜葡萄，榨汁前，先将葡,萄洗洁净再去除枝梗。,b.,预防发酵液被污染：榨汁机要清洗洁净并晾干；发酵瓶,要清洗洁净，并用体积分数为,70%,酒精消毒，或用洗涤剂洗,涤；装入葡萄汁后，封闭充气口。,第14页,c.,控制好发酵条件：葡萄汁装入发酵瓶时，要留有,1/3,空间，其目标是先让酵母菌进行有氧呼吸快速繁殖，增加菌种，,耗尽氧气再进行酒精发酵；控制好温度：果酒制作时，温度控,制在,18,25,，果醋制作时，温度严格控制在,30,35,；注,意是否需要通气：果醋发酵时，需要适时经过充气口充气。,(2),腐乳,制作过程：让豆腐上长出毛霉加盐腌制加卤汤装瓶,密封腌制。,第15页,注意事项,a.,控制好材料中盐、酒用量：盐和酒精过少，不足以抑,制微生物生长；酒精含量过多，则会延长腐乳成熟时间。,b.,预防杂菌污染：用来腌制腐乳玻璃瓶要洗涮洁净并用,沸水消毒；装瓶时，操作要快速小心，封瓶时，最好将瓶口通,过,酒精灯火焰，预防瓶口被污染。,c.,注意发酵时温度。,第16页,(3),泡菜,制作过程：选择原料修整、洗涤、晾晒、切分成条状,或片状配制泡菜盐水把处理后原料、盐水等其它调味料,装入瓶中发酵成品。,注意事项,a.,泡菜坛选择：选取无裂纹、无砂眼、坛沿深、盖子吻,合好泡菜坛。,b.,材料选择及用量：蔬菜应新鲜，若放置时间过长，,蔬菜中硝酸盐易被还原成亚硝酸盐；清水与盐质量比是,41,，盐水要煮沸后冷却待用，煮沸盐水可到达杀菌和去除氧,气作用。,c.,氧气控制：坛盖边缘水槽中要注满水，发酵过程中，,要及时补充蒸发掉水分，以确保乳酸菌发酵无氧环境。,第17页,高考探究,考向,微生物与发酵原理,典例,1,(,年江苏卷,),以下关于“腐乳制作”试验叙,述，正确是,(,),A.,控制发酵温度主要目标是腐乳调味,B.,腐乳制作后期加入香辛料和料酒有防腐作用,C.,毛霉主要作用是分解脂肪和淀粉,D.,成品腐乳表面黏性物质主要由细菌产生,第18页,解析,温度通,过影响酶活性影响腐乳发酵，控制发酵,温度主要有利于毛霉等微生物生长和腐乳发酵，,A,错误；香,辛料和料酒都能抑制微生物生长，含有防腐作用，,B,正确；,毛霉主要作用是产生蛋白酶和脂肪酶，将蛋白质和脂,肪分解,成小分子化合物，,C,错误；成品腐乳表面黏性物质主要是毛,霉产生，毛霉属于真菌，,D,错误。,答案,B,第19页,考向预测,1.(,年新课标,卷,),豆豉是大豆经过发酵制成一个食,品。为了研究影响豆豉发酵效果原因，某小组将等量甲、,乙两菌种分别接入等量,A,、,B,两桶煮熟大豆中并混匀，再将,二者置于适宜条件下进行发酵，并在,32 h,内定时取样观察发酵,效果。回答以下问题：,(1),该试验自变量是,_,、,_,。,(2),假如发觉发酵容器内上层大豆发酵效,果比底层好，,说明该发酵菌是,_,。,第20页,(3),假如在试验后，发觉,32 h,内发酵效果越来越好，且随,发酵时间呈直线上升关系，则无法确定发酵最正确时间；若要,确定最正确发酵时间，还需要做事情是,_,_,。,(4),从大豆到豆豉，大豆中成份会发生一定改变，其中，,蛋 白 质 转 变 为,_,，脂 肪 转 变 为,_,。,第21页,解析：,(1),该试验自变量是菌种、发酵时间。,(2),假如发觉,发酵容器内上层大豆发酵效果比底层,好，说明该发酵菌是,好氧菌。,(3),假如在试验后，发觉,32 h,内发酵效果越来越好，,且随发酵时间呈直线上升关系，则无法确定发酵最正确时间；,若要确定最正确发酵时间,，还需要做事情是延长发酵时间，观,测发酵效果，最好发酵效果所对应时间即为最正确发酵时间。,(4),从大豆到豆豉，大豆中成份会发生一定改变，其中，蛋,白质转变为氨基酸和多肽，脂肪转变为脂肪酸和甘油。,答案：,(1),菌种,发酵时间,(2),好氧菌,(3),延长发酵时间，观察发酵效果，最好发酵效果所对应,时间即为最正确发酵时间,(4),氨基酸和多肽,脂肪酸和甘油,第22页,2.,乙醇等“绿色能源”开发备受世界关注，利用玉米秸,秆生产燃料酒精大致流程为：,(1),玉米秸秆预处理后，应该选取,_,酶和,_,酶,形成纤维二糖，再使用,_,酶使之转化为发酵所需葡,萄糖。,(2),从以下哪些微生物中能够提取上述酶？,_(,多项选择,),。,A.,酿制果醋醋酸菌,B.,生长在腐木上霉菌,C.,制作酸奶乳酸菌,D.,反刍动物瘤胃中生存一些微生物,第23页,(3),若从土壤中分离产生这种酶微生物，所需要培养基,为,_(,按功效分,),，培养基中碳源为,_,，微,生物在纯化培养时惯用方法是,_,和,_,。,(4),发酵阶段需要菌种是,_,，生产酒精时要控制,必要条件是,_,。,答案：,(1)C,1,C,X,葡萄糖苷,(2)BD,(3),选择培养基,纤维素,平板划线法,稀释涂布平板法,(4),酵母菌,无氧,(,密封或密闭,),第24页,3.,下列图是泡菜制作及测定亚硝酸盐含量试验流程示意,图，请据图分析，回答以下问题：,(1),制作泡菜宜选取新鲜蔬菜或其它原料，原因是,_,_,。,第25页,(2),制备泡菜盐水中，清水与盐质量比为,_,，盐,水煮沸目标是为了杀灭杂菌，冷却,后再使用目标是为了保,证,_,等微生物生命活动不受影响。,(3),泡菜制作方法不妥，很轻易造成泡菜变,质，甚至发霉,变味，发霉主要与,_,相关。,(4),测定亚硝酸盐含量方法是,_,。,(2)41,乳酸菌,答案：,(1),亚硝酸,盐含量低,(3),霉菌,(4),比色法,第26页,考点二,微生物试验室培养,考点梳理,1.,微生物营养物质及功效：微生物营养物质主要有碳,源、氮源、无机盐和水这四大类。另外还要满足不一样微生物生,长对,pH,、特殊营养物质以及氧气需求。,第27页,营养物质,定义,作用,主要起源,碳源,能提供所需碳元素物质,组成生物体细胞物质和一些代谢产物，有些是异养生物能源物质,无机化合物,(CO,2,、,NaHCO,3,),，有机化合物,(,糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油等,),氮源,能提供所需氮元素物质,合成蛋白质、核酸以及含氮代谢产物,无机化合物,(N,2,、,NH,3,、铵盐、硝酸盐,),，有机化合物,(,尿素、牛肉膏、蛋白胨等,),第28页,(1),微生物最常利用碳源是糖类，尤其是葡萄糖；最常利,用氮源是铵盐、硝酸盐。,(2),对异养微生物来说，含,C,、,H,、,O,、,N,化合物既是碳源,又是氮源、能源。,(3),有些培养基不需要添加特殊营养物质，生物自己能合,成，如大肠杆菌能合成一些维生素作为特殊营养物质。,第29页,划分,标准,培养基,种类,特点和用途,化学,成份,天然培,养基,利用动、植物或微生物体(包含用其提取物),制成培养基。优点是营养丰富、种类多样、,配制方便、价格低廉，缺点是化学成份不清,楚、不稳定。主要用于微生物学试验培养或,发酵工业,合成培,养基,按微生物营养要求准确设计，用各种高纯,化学试剂配制成培养基。优点是成份及量,确切可知，缺点是价格较贵、配制复杂，且,微生物生长比较普通。主要用于微生物分,类和判定,2.,培养基种类,第30页,划分,标准,培养基,种类,特点和用途,化学,成份,半合成,培养基,主要以化学试剂配制，同时还加有某种或某,些天然成份培养基。特点是配制方便，成,本低，微生物生长良好。主要用于工业生产,物理,状态,液体培,养基,呈液体状态培养基，用于微生物学试验和,生产,固体培,养基,呈固体状态培养基，用于菌种分离、判定、,菌落计数、检测杂菌、育种、菌种保藏等,半固体,培养基,在液体培养基中加入少许凝固剂(如 0.2%,0.5%琼脂)而制成半固体状态培养基。,可用于观察细菌运动能力，进行厌氧菌,培养及菌种保藏等,(,续表,),第31页,划分,标准,培养基,种类,特点和用途,功效,选择性,培养基,依据某微生物特殊营养要求或其对一些物,理、化学原因抗性而设计培养基，含有,使混合菌样中劣势菌变成优势菌功效。,可用于菌种筛选,判别培,养基,一类加有能与目标菌无色代谢产物发生显,色反应指示剂，从而抵达只需用肉眼区分,颜色就能方便地从近似菌落中找到目标菌菌,落培养基。可用于菌种判别、计数,(,续表,),第32页,(1),加入培养基中凝固剂,(,如琼脂,),，普通不能被微生物利,用，只起到凝固作用。,(2),选择培养基普通只生长含有特定目标微生物，判别培,养基中能够存在其它微生物，而且能判别特定微生物。,第33页,项目,概念,惯用方法,应用范围,消毒,使用较为温和物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害微生物(不包含芽孢或孢子),煮沸消毒法：在,100,煮沸,5,6 min,普通物品,巴氏消毒法：,70,75,煮,30 min,或在,80,煮,15 min,一些不耐高温液体，如牛奶,化学药剂消毒法,如用酒精擦拭双手，用氯气消毒水源等,紫外线消毒法：,30 W,紫外灯照射,30 min,接种室,3.,消毒与灭菌,第34页,项目,概念,惯用方法,应用范围,灭菌,使用强烈理化原因杀死物体内外全部微生物(包含芽孢和孢子),灼烧灭菌，用酒精灯火焰充分燃烧层灼烧,接种工具灭菌,干热灭菌：,160,170,下灭菌,1,2 h,玻璃器皿、金属工具灭菌,高压蒸汽灭菌：,121,条件下，灭菌,15,30 min,培养基及容器灭菌,(,续表,),注：消毒与灭菌最大区分是芽孢和孢子是否存活。,第35页,接种,方法,操作过程,注意事项,平板划,线法,接种环灭,菌取菌,液在培,养液上划,线培养,皿倒置培,养,(1)接种环灼烧：第一次灼烧：防止接种环上,可能存在微生物污染培养物；每次划线之前,灼烧：杀死上次划线结束后残留在接种环上,菌种，使每次划线菌种均来自上次划线末端；,划线结束灼烧：杀死接种环上残留菌种，,防止污染环境和感染操作人员,(2)灼烧接种环之后，要冷却后才能伸入菌液，以,免温度太高而杀死菌种,(3)划线时最终一区域不要与第一区域相连,(4)划线用力大小要适当，预防用力过大将培养基,划破,4.,惯用微生物接种方法,(1),接种方法比较,第36页,接种,方法,操作过程,注意事项,稀释涂,布平板,法,稀释菌液,取菌液,于培养基,表面涂,布器灭菌,均匀涂,布菌液,培养皿倒,置培养,稀释操作：每支试管及其中 9 mL 水、移液管均,需灭菌；操作时，试管口和移液管应在离酒精灯,火焰 12 cm 处,涂布器灭菌：涂布器用体积分数为 70%酒,精消毒，取出时多出酒精在烧杯中滴尽，沾有少,量酒精涂布器在火焰上引燃后冷却；不要将,过热涂布器放在盛放酒精烧杯中，以免引燃,其中酒精,(,续表,),第37页,(2),倒平板注意事项,培养基灭菌后，需冷却至,50,左右，才能用来倒平板。,整个操作过程需在酒精灯火焰旁进行，防止杂菌污染。,平板冷凝后要倒置原因：预防皿盖上冷凝水珠落入,培养基，造成污染。,第38页,高考探究,考向,微生物培养,典例,2,(,年四川卷,),有机农药苯磺隆是一个除草剂,，长,期使用会污染环境。研究发觉，苯磺隆能被土壤中一些微生物,降解。分离降解苯磺隆菌株和探索其降解机制试验过程如,下列图甲、乙所表示：,甲,乙,第39页,(1),微生物生长繁殖所需主要营养物质有碳源、水、,_,四类，该试验所用选择培养基只能以苯磺,隆作为唯一碳源,，其原因是,_,。,(2),与微生物培养基相比，植物组织培养培养基常需添加,生长素和,_,，这些植物激素普通需要事先单独配,置成,_,保留备用。,(3),纯化菌株时，通常使用划线工具是,_,。划线,某个平板培养后，第一划线区,域划线上都不间断地长满了菌，,第二划线区域第一条线上无菌落，其它划线上有菌落。造成,划线无菌落可能操作失误有,_,_,。,第40页,(4),为探究苯磺隆降解机制，将该菌种培养液过滤离,心，取上清液做图乙所表示试验。该试验假设是,_,_,，该试验设计是否合,理？为何？,_,。,解析,(1),微生物生,长所需要主要营养物质包含碳源、氮,源、水和无机盐。使用选择培养基是因为其允许特定微生物,生长，同时又能抑制或阻止其它微生物生长。,(2),植物组织培,养常需要添加植物激素有生长素和细胞分裂素。,MS,培养基,成份普通先分别配制成母液备用。,(3),平板划线法接种时通常,第41页,用接种环划线。第二区域只有第一条线无菌落，而其它划线,都有菌落，很可能是因为接种环在灼烧后未冷却，第一次划线,时将菌种烫死，而后接种环冷却，能正常划线，也可能是第一,次划线时划线未从第一区域末端开始，使接种环上无菌种。,(4),题中试验为取得菌种培养液过滤离心后取上清液，加入蛋白,酶处理后，测得其对苯磺隆降解率。由此可判定试验假设是,目标菌株经过分泌某种蛋白质来降解苯磺隆。但因为缺乏空白,对照，不能比较蛋白酶处理是否降低苯磺隆降解率，该试验,不能得出对应结论。,第42页,答案,(1),氮源和无,机盐,确保只有能利用苯磺隆微生物,能正常生长和繁殖,(2),细胞分裂素,母液,接种环灼烧后未冷却；划线未从第一区域,(3),接种环,末端开始,不合理，缺乏空,(4),目标菌株能分泌降解苯磺隆蛋白质,白对照,第43页,(1),每次划线前和划线后，接种环都要进行灼烧灭菌，所以,需要灼烧接种环,6,次。其中第一次灼烧是为了预防杂菌污染；,每次划线前灼烧是为了杀死残,留菌种，确保每次划线菌种来自,上次划线末端；最终一次灼烧是为了预防接种微生物扩散，,造成新污染。,(2),下一次划线菌种起源是上一次划线最末端，所以前,几次划线都是上一次尾和下一次首相连，不过第五次划,线不与第一次划线相连。,(3),在第五次划线上菌落往往是由一个细菌繁殖形成。,(4),实际上菌落数都要小于细菌数，因为有菌落是两个或,多个细菌形成。,第44页,成份,蛋白胨,乳糖,蔗糖,K,2,HPO,4,指示剂,琼脂,含量,/g,10.0,5.0,5.0,2.0,0.2,12.0,将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到,1000 mL,考向预测,4.(,年江西赣中南五校联考,),下表是某企业研发一个,培养大肠杆菌,菌群培养基配方，请依据表格和所学知识回答,以下相关问题：,(1),从生态系统成份上看，大肠杆菌属于,_,。,(2),若依据用途划分，该培养基属于,_(,填“选择”或,“判别”,),培养基。若要用上述培养,基来筛选出土壤中尿素分,解菌，培养基营养成份必需怎样更改？,_,，并用,_,作为指示剂。,第45页,(3),在微生物培养过程中，为预防杂菌污染，需要对培养,基和培养皿进行,_,；操作者双手需要进行清洗和,_,。,(4),图,1,和图,2,是培养某细菌结果图,，其对应接种方法,分别是,_,和,_,，这两种方法接,种后培养基上都能够得到由单个细胞繁殖所形成,_,。,图,1,所用接种方法可用来对活菌进行计数。另外，测定微,生,物数目标另一个方法是,_,。,第46页,图,1,图,2,(5),以下过程中所利用主要微生物细胞结构与大肠杆,菌较相同有,_,。,A.,制作果酒,C.,制作泡菜,B.,由果酒制作果醋,D.,制作腐乳,第47页,解析：,(1),大肠杆,菌只能从环境中摄取有机物，不能自己合,成有机物，属于分解者。,(2),该培养基中含有指示剂，属于判别,培养基。尿素分解菌能够分解尿素，而其它微生物不能，所以,可将培养基中蛋白胨改为尿素用于筛选土壤中尿素分解,菌，并用酚红作为指示剂，尿素分解菌分解尿素产生,NH,3,可,使酚红变红。,(3),培养微生物时，培养基和培养皿需要灭菌，操,作者双手需要进行消毒。,(4),图,1,采取是稀释涂布平板法，图,2,采取是平板划线法。单个微生物细胞繁殖所形成细胞群,叫菌落。,(5)A,、,B,、,C,、,D,中所用到主要微生物分别是酵母菌、,醋酸菌、乳酸菌、毛霉，醋酸菌、大肠杆菌和乳酸,菌都是原核,细胞，结构相同。,答案：,(1),分解者,(2),判别 将蛋白胨改成尿素,酚红,(3),灭菌,消毒,(4),稀释涂布平板法,平板划线法,菌落,显微镜直接计数法,(,或“血球计数板计数法”,)(5)BC,第48页,5.,无菌操作是微生物接种技术关键。传统发酵技术和微,生物分离、纯化、应用过程及植物组织培养和动物细胞培养过,程中，均要无菌操作。回答以下相关问题：,(1),消毒和灭菌是两个不一样概念，灭菌是指彻底杀灭微生,物使其永远丧失生长繁殖能力。消毒指仅杀死一部分对人体,有害病原菌而对被消毒物体基本无害。以下哪,些事物适用,于消毒处理？,_,。,皮肤,饮用水,牛奶,注射器,培养皿,接种环,培养基,果汁,酱油,手术刀,A.,C.,B.,D.,以上全部,第49页,(2),配制培养基时各种成份在溶化后分装前必须进行,_,_,，接种前要进行,_,，在整个微生,物分离和培养中，一定注意要在无菌条件下进行。,第50页,(3),在微生物试验室培养中，取得纯净培养物关键是,_,。上图是利用,_,法进行大肠,杆菌接种，把聚集菌种逐步稀释分散到培养基表面。为达,到这一目标，操作上应注意：,每次划线前要,_,。,冷却后,从上一区划线末端开始划。,首尾区,_,。,(4),培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污,染。对固体培养基应采取检测方法是,_,_,，观察培养基上是否有,菌落产生。,第51页,(5),利用培养基不但能够分离培养大肠杆菌，也能够进行植,物组织培养。与大肠杆菌培养显著不一样是，用于组织培养,培养基中还需要加入,_,。,(6),有位同学在家制作泡菜时，为防止杂菌污染而向泡菜坛,中加入了青霉素，结果发酵失败，原因可能是,_,_,。,第52页,解析：,(1),应采取消毒，应采取灭菌，,故选,A,。,(2),配制培养基时各种成份在溶化后分装前必须调整,pH,，培养基接种前要进行高压蒸汽灭菌，再进行倒平板。,(3),微生物试验室培养关键在于预防杂菌污染，采取平板划,线,法接种，需要注意是连续划线时，每次划线前要灼烧接种环，,同时划线结束首尾区不能相连。,(4),检测培养基是否被污染，对,固体培养基应采取检测方法是将未接种,(,或接种等量无菌水,),培养基在适宜温度下放置适当初间，观察培养基上是否有,菌,落产生。,(5),植物组织培养,MS,培养基中需要加入植物激素,(,生长素和细胞分裂素,),。,(6),制作泡菜时，为防止杂菌污染而向,泡菜坛中加入了青霉,素，结果发酵失败，原因可能是青霉素杀,死了乳酸菌。,第53页,答案：,(1)A (2),调整,pH,高压蒸汽灭菌,(3),预防外来杂菌入侵,平板划线,灼烧接种环,不连接,(,不重合,),(4),将未接种,(,或接种等量无菌水,),培养基在适宜温度下,放置适当初间,(5),植物激素,(,或生长素和细胞分裂素,),(6),青霉素杀死了乳酸菌,第54页,项目,分离分解尿素细菌,分离分解纤维素微生物,原理,提供有利于目标菌株,生长条件(如营养、,温度、pH 等)，同时,抑制其它微生物生,长，惯用选择培养基,筛选,刚果红能够与纤维素形成红色,复合物，当纤维素被纤维素酶分,解后，红色复合物无法形成，出,现以纤维素分解菌为中心透,明圈，能够经过是否产生透明圈,来筛选纤维素分解菌,考点三,微生物分离与计数,考点梳理,1.,分离土壤中分解尿素细菌与分离分解纤维素微生物,比较,第55页,项目,分离分解尿素细菌,分离分解纤维素微生物,过程,土壤取样样品稀释,培养与观察,土壤取样选择培养梯度稀,释将样品涂布于含刚果红,(CR)判别纤维素分解菌培,养基上挑选产生透明圈菌,落发酵培养,判定,酚红指示剂,(,变红,),刚果红,(,产生透明圈,),选择,培养基,固体培养基，尿素为,唯一氮源,液体培养基，纤维素为唯一碳源,判别,培养基,液体,固体,(,续表,),第56页,2.,统计菌落数目标方法,(1),稀释涂布平板法,原理：当样品稀释浓度足够高时，培养基表面生长,一个菌落起源于样品稀释液中一个活菌。经过统计平板上,菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。,操作,a.,设置重复组，增强试验说服力与准确性。,b.,为了确保结果准确，普通选择菌落数在,30,300,平板,进行计数。,第57页,计算公式：每克样品中菌株数,(,C,/,V,),M,，其中,C,代,表某一稀释度下平板上生长平均菌落数，,V,代表涂布平板时,所用稀释液体积,(mL),，,M,代表稀释倍数。,(2),显微镜直接计数法：,原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜,下计算一定容积样品中微生物数量。,方法：用计数板计数。,缺点：不能区分死菌与活菌。,第58页,高考探究,考向,微生物分离与纯化,典例,3,(,年新课标,卷,),某同学用新鲜泡菜滤液为实,验材料纯化乳酸菌。分离纯化所用固体培养基中因含有碳酸钙,而不透明，乳酸菌产生乳酸能溶解培养基中碳酸钙。回答,以下问题：,(1),分离纯化乳酸菌时，首先需要用,_,对泡,菜滤液进行梯度稀释，进行梯度稀释理由是,_,_,。,第59页,(2),推测在分离纯化所用培养基中加入碳酸钙作用有,_,和,_,。分离纯化时应挑选出,_,菌落作为候选菌。,(3),乳酸菌在,20,长久保留时，菌,液中常需要加入一定量,_(,填“蒸馏水”“甘油”或“碳酸钙”,),。,解析,(1),分离纯化乳酸菌时，首先需要用无菌水对泡菜滤,液进行梯度稀释；进行梯度稀释理由是在稀释,度足够高菌,液里，聚集在一起乳酸菌将被分散成单个细胞，从而能在培,养基表面形成单个菌落。,(2),在分离纯化所用培养基中加入,碳酸钙作用有中和乳酸菌代谢过程中产生乳酸和利于乳酸,菌识别和分离；分离纯化时应挑选出在平板上有透明圈菌,落作为候选菌。,(3),乳酸菌在,20,长久保留时，菌液中常需要,加入一定量甘油。,第60页,泡菜滤液中菌浓度高，直接培养极难,答案,(1),无菌水,分离到单个菌落,(2),中和乳酸菌代谢过程中产生乳酸,利于乳酸菌识,别和分离,含有透明圈,(3),甘油,第61页,考向预测,6.(,年新课标,卷,),植物秸秆中纤维素可被一些微,生,物分解。回答以下问题：,(1),分解秸秆中纤维素微生物能分泌纤维素酶，该酶是由,3,种组分组成复合酶，其中葡萄糖苷酶可将,_,分解成,_,。,(2),在含纤维素培养基中加入刚果红,(CR),时，,CR,可与纤,维素形成,_,色复合物。用含有,CR,该种培养基培,养纤维素分解菌时，培养基上会出现以该菌菌落,为中心,_,。,第62页,培养基,酵母膏,无机盐,淀粉,纤维素粉,琼脂,CR,溶液,水,甲,乙,(3),为从富含纤维素土壤中分离取得纤维素分解菌单,菌落，某同学设计了甲、乙两种培养基,(,成份见下表,),：,注：,“,”,表示有，,“”表示无。,据表判断，培养基甲,_(,填“能”或“不能”,),用于,分离和判别纤维素分解菌，原因是,_,_,；培养基乙,_(,填“能”或“不,能”,),用于分离和判别纤维素分解菌，原因是,_,。,第63页,解析：,(1),纤维素,是一个以葡萄糖为单体形成高分子化合,物。纤维素能被土壤中一些微生物分泌纤维素酶分解，以下,图：,(2),刚果红与纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素酶,分解后，红色复合物无法形成，出现以纤维素分解菌为中心,透明圈，我们能够经过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。,(3),纤维素分解菌选择培养基属于液体培养基，纤维素分解菌鉴,别培养基属于固体培养基，要分离和判别纤维素分解菌，需,要以纤维素为唯一碳源培养基，培养基乙不含有选择作,用。,第64页,答案：,(1),纤维二,糖,葡萄糖,(2),红,透明圈,(3),不能,纤维素分解菌选择培养基属于液体培养基，不能,用于分离单菌落,不能,培养基中没有纤维素粉,第65页,
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