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,第,39,讲无菌操作技术实践,第十一单元 生物技术实践,第1页,考纲要求,1.,微生物分离和培养。,2.,某种微生物数量测定。,3.,培养基对微生物选择作用。,第2页,考点一微生物分离和培养,考点二,分离特定微生物并测定其数量,矫正易错强记长句,重温高考 演练模拟,内容索引,课时作业,第3页,微生物分离和培养,考点一,第4页,1.,相关技能、技术和方法,(1),无菌操作技能,干热灭菌法是指将准备灭菌物品放在,内，在,下加热,h,以到达灭菌目标。,湿热灭菌法常采取,进行，其使用包含加水、,、,、,、出锅等步骤。,知识梳理,干热灭菌箱,1,2,160,170,高压蒸汽灭菌锅,装锅,加热排气,保温保压,第5页,(2),培养基配制,培养基概念：是为人工培养微生物而制备适合微生物,_,营养基质。,营养组成：普通都含有,、,(,提供碳元素物质,),、,(,提供氮元素物质,),和无机盐等最基本物质。另外，依据拟培养微生物不一样需要，有时还要加入,等特殊营养物质，并要调整培养基中,使之满足微生物生长需要。,种类：,培养基和,培养基，前者主要优点是,_,，缺点是营养成份,；后者优点是,，缺点是,。,生长、繁殖或积累,水,代谢产物,碳源,氮源,pH,天然,维生素,合成,取材便利、营养丰富、,配制简便,难以控制、试验结果重复性较差,化学成份及其含量明确，试验可重复性好,配制繁琐、成本较高,第6页,(3),微生物接种,接种：是指在,条件下将微生物接入,操作过程。,惯用工含有,等，在涂布平板接种时要用,，穿刺接种时要用接种针，在,或在固体培养基平板上进行,时要用接种环。,无菌,玻璃涂布器、接种针、接种环,培养基,玻璃涂布器,斜面接种,划线接种,第7页,2.,大肠杆菌接种与分离培养,(1),配制牛肉膏蛋白胨培养基,其操作步骤：配制培养基,调整,pH,分装,包扎,灭菌,搁置斜面。,(2),斜面接种和培养大肠杆菌,主要目标：,、,和,等。,主要步骤：准备接种,挑取少许菌种,在,中培养大肠杆菌,24 h,将增殖菌种放置在冰箱冷藏室中,(4,),保留。,菌种转移,保留纯净菌种,扩大培养,接种环灭菌,试管口灭菌,划线接种,37,恒温箱,第8页,(3),平板划线分离和培养大肠杆菌,平板制作方法及注意事项,a.,请用文字和箭头写出正确倒平板操作流程：,。,b.,甲、乙、丙中灭菌方法是,。,c.,丁中操作需要等候,后才能进行。,平板划线法是指用带有微生物,在平板培养基表面经过,_,而纯化分离微生物一个方法。,丙,乙,甲,丁,平板冷却凝固,灼烧灭菌,接种环,分区划线,第9页,消毒和灭菌,易混辨析,项目,条件,结果,惯用方法,应用范围,消毒,较为温和物理或化学方法,仅杀死物体表面或内部部分对人体有害微生物,煮沸消毒法,日惯用具,巴氏消毒法,不耐高温液体,化学药剂消毒法,用酒精擦拭双手，用氯气消毒水源,灭菌,强烈理化原因,杀死物体内外全部微生物，包含芽孢和孢子,灼烧灭菌法,接种工具,干热灭菌法,玻璃器皿、金属工具,高压蒸汽灭菌法,培养基及容器灭菌,第10页,(1),培养基普通都含有水、碳源、氮源和无机盐，有时还需要加入一些特殊物质,(,),(2),倒平板时，应将打开皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上,(,),(3),消毒标准是既杀死材料表面微生物，又降低消毒剂对细胞伤害,(,),(4),为了预防污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落,(,),(5),用涂布平板法纯化大肠杆菌时，只要稀释度足够高，就能在培养基表面形成单个菌落,(,),常考基础诊疗,第11页,教材热点拓展,如图是采取纯化微生物培养两种接种方法接种后培养效果图，请分析：,(1),取得图,A,效果和图,B,效果接种方法分别是什么？,提醒,取得效果,A,接种方法为涂布平板法，取得效果,B,接种方法为平板划线法。,提醒,第12页,(2),某同学在纯化土壤中细菌时，发觉培养基上菌落连成了一片，最可能原因是什么？应该怎样操作才可防止此种现象？,提醒,最可能原因是菌液浓度过高或划线时在划下一区域前未将接种环灼烧灭菌；采取办法是增大稀释倍数或每次划新区域前先将接种环灼烧灭菌。,(3),接种操作为何一定要在火焰附近进行？,提醒,火焰附近存在着无菌区域。,提醒,第13页,命题点一微生物培养和无菌技术分析,1.,下表为某培养基配方，以下叙述正确是,A.,从物理性质看该培养基属于液体培养基，从用途看该培养基属于选择培养基,B.,该培养基中属于碳源物质主要是葡萄糖，属于氮源物质是蛋白胨,C.,该培养基缺乏提供生长因子物质,D.,该培养基调整适当,pH,后就能够接种使用,命题探究,答案,解析,成份,蛋白胨,葡萄糖,K,2,HPO,4,伊红,美蓝,蒸馏水,含量,10 g,10 g,2 g,0.4 g,0.065 g,1 000 mL,第14页,解析,分析表中成份可知，该培养基中没有凝固剂，为液体培养基，该培养基营养成份齐全，但存在伊红、美蓝等判别物质，属于判别培养基，,A,项错误；,该培养基中蛋白胨既是唯一氮源，也是碳源，而葡萄糖是绝大多数微生物最常利用碳源，,B,项正确；,该培养基中存在无机盐和蛋白胨中一些物质能够看作是生长因子，,C,项错误；,培养基调整完,pH,还要进行灭菌等操作后才能使用，,D,项错误。,第15页,2.(,临川调研,),微生物培养过程中，要十分重视无菌操作。当代生物学试验中许多方面也要进行无菌操作，预防杂菌污染。请分析以下操作中错误是,煮沸消毒能够杀死微生物营养细胞和部分芽孢,接种操作要在酒精灯火焰附近进行,无菌繁殖脱毒苗时，植物外植体要进行消毒,家庭制作葡萄酒时要将容器和葡萄进行灭菌,培养基要进行高压蒸汽灭菌,加入培养基中指示剂和染料不需要灭菌,A.,B.,C.,D.,解析,答案,第16页,解析,无菌操作包含消毒和灭菌。需进行消毒处理有植物外植体及操作人员双手等，需进行灭菌有器皿、培养基、添加剂,(,指示剂或染色剂,),等。煮沸能够杀死微生物营养细胞和一部分芽孢，属于消毒；为预防空气中杂菌污染，接种操作要在酒精灯火焰附近进行；家庭制作葡萄酒时所利用微生物是葡萄表面酵母菌，故不能灭菌；培养基常进行高压蒸汽灭菌。故,操作错误。,第17页,3.,高温淀粉酶在大规模工业生产中有很大实用性。研究者从热泉中筛选出了能高效生产高温淀粉酶嗜热菌，其筛选过程以下列图所表示。请据图回答以下问题：,(1),号培养基从物理状态来看，属于固体培养基，配制时要加入,_,作为凝固剂，从用途来看属于选择培养基，应以,_,作为唯一碳源。,解析,答案,琼脂,淀粉,第18页,解析,固体培养基通常加入琼脂作为凝固剂。本试验目标是取得产生高温淀粉酶嗜热菌，故其选择培养基中应以淀粉作为唯一碳源。,第19页,(2),配制固体培养基基本步骤是,A.,计算、称量、倒平板、溶化、灭菌,B.,计算、称量、溶化、倒平板、灭菌,C.,计算、称量、溶化、灭菌、倒平板,D.,计算、称量、灭菌、溶化、倒平板,答案,解析,解析,配制固体培养基基本步骤是计算、称量、溶化、灭菌、倒平板。,第20页,(3),溶化时，烧杯中加入琼脂后要不停地,_,，预防琼脂糊底引发烧杯破裂。对培养基灭菌方法普通为,_,。,答案,解析,解析,配制培养基加热溶化时，要注意加入琼脂后要不停搅拌，预防琼脂糊底。对培养基灭菌普通采取高压蒸汽灭菌法。,搅拌,高压蒸汽灭菌,第21页,答案,解析,(4),过程是,_,，,过程所使用接种方法是,_,法。,稀释,涂布平板,解析,仔细观察题图可知过程，,是菌液稀释过程，,是采取涂布平板法接种。,第22页,(5),部分嗜热菌在,号培养基上生长时可释放,_,分解培养基中淀粉，在菌落周围形成透明圈，挑选对应菌落，接种到,号培养基深入分离纯化后，再对菌种进行,_,培养。,答案,淀粉酶,扩大,解析,解析,能产生淀粉酶部分细菌能分解利用淀粉，其菌落周围会出现透明圈，取这么菌落再分离纯化可取得对应菌种，以后能够对菌种进行扩大培养用于生产。,第23页,1.,培养基配制标准,(1),目标要明确：配制时应依据微生物种类、培养目标等确定配制培养基种类。,(2),营养要协调：注意各种营养物质浓度和百分比。,(3)pH,要适宜：细菌为,6.5,7.5,，放线菌为,7.5,8.5,，真菌为,5.0,6.0,，培养不一样微生物所需,pH,不一样。,归纳整合,第24页,2.,微生物对主要营养物质需求特点,(1),自养型微生物所需主要营养物质是无机盐，碳源可来自大气中,CO,2,，氮源可由含氮无机盐提供。,(2),异养型微生物所需营养物质主要是有机物，即碳源必须由含碳有机物提供，氮源也主要是由有机物提供，部分异养型微生物也能够利用无机氮源。,第25页,命题点二大肠杆菌纯化方法及过程分析,4.,下列图中甲是涂布平板法中部分操作，乙是平板划线法操作结果。,以下叙述中错误是,A.,甲中涂布前要将涂布器灼烧，冷却后才能取菌液,B.,对于浓度较高菌液，如甲中稀释倍数仅为,10,2,，则所得菌落不一定是,由单一细胞或孢子繁殖而成,C.,乙培养皿中所得菌落都符合要求,D.,乙中连续划线起点是上一次划线末端,答案,解析,第26页,解析,灼烧后涂布器假如没有冷却就接触菌种，会将菌体杀死，,A,项正确；,稀释倍数过低会造成多个菌体聚集在一起繁殖成菌落，,B,项正确；,平板划线法中最终一次划线末端处形成菌落才是由单一细胞或孢子繁殖而成，这种菌落才符合要求，,C,项错误；,连续划线中，除了第一次划线外，每一次划线起点是上一次划线末端，目标是使菌体密度越来越小，确保最终划线末端处菌落是由单一细胞或孢子繁殖而成，,D,项正确。,第27页,5.,牛奶是微生物培养良好培养基，牛奶在饮用前都要经过巴氏消毒，以杀死有害微生物，为检测消毒前后牛奶中细菌含量改变情况，做如图,1,所表示操作。用无菌吸管从锥形瓶中吸收,1 mL,生牛奶稀释液至盛有,9 mL,无菌水试管中，混合均匀，如此再重复,2,次。请回答以下相关问题：,(1),巴氏消毒方法是,_,，使用这种方法对生鲜牛奶进行消毒好处是,_,。,解析,答案,在,70,75,煮,30 min(,或在,80,煮,15 min),牛奶营养成份不被破坏,第28页,解析,巴氏消毒方法是在,70,75,煮,30 min,或在,80,煮,15 min,，能够杀死牛奶中微生物，而且使牛奶营养成份不被破坏。,第29页,(2),取最终牛奶稀释液,0.1 mL,滴在培养基上进行涂布，应选择涂布工具是图,2,中,_,。,解析,解析,涂布使用工具是涂布器，图,B,正确。,答案,B,第30页,(3),图,1,中所表示方法为涂布平板法，理想情况下，培养一段时间后可在培养基表面形成菌落。若用该方法培养设置了,3,个培养皿，菌落数分别为,35,个、,33,个、,34,个，则能够推测生牛奶中每毫升含细菌数为,_,个，利用这种方法统计结果往往较实际值,_(,填,“,偏大,”,或,“,偏小,”,),，原因是,_,。,解析,答案,3.4,10,6,偏小,个别菌落可能是由,2,个或多个细菌形成,第31页,解析,菌落平均数是,34,个，生牛奶中每毫升含细菌数菌落平均数,/,涂布量,稀释倍数,34,个,/,0.1 mL,10,4,3.4,10,6,个,/mL,。在统计菌落时，当两个或多个菌落连在一起时，平板上观察到只是单个菌落，所以利用这种方法统计结果往往比实际值偏小。,第32页,(4),消毒后牛奶中绝大部分细菌被杀死，若继续用该方法检测消毒后牛奶中细菌数量，则在操作步骤上应做什么改动？,_,。,解析,解析,因为消毒后牛奶中绝大部分细菌被杀死，所以可降低稀释次数。,答案,降低稀释次数,(5),从生牛奶取样培养得到菌落中混有各种杂菌，从中检测出大肠杆菌方法是在培养基中加入,_,，菌落含有,_,特征能够认定为大肠杆菌。,解析,大肠杆菌代谢产物会使伊红美蓝判别培养基出现金属光泽紫黑色。,伊红美蓝,(,金属光泽紫,),黑色,第33页,分离特定微生物并测定其数量,考点二,第34页,知识梳理,1.,区分涂布平板法和混合平板法,(1),过程如图,涂布,混合,第35页,(2),结果不一样,涂布平板法：细菌菌落通常仅在平板,生长。,混合平板法：细菌菌落出现在,。,(3),目标相同：分离各种目标微生物。,表面,平板表面及内部,第36页,2.,选择培养分离,(1),方法：针对某种微生物特征，设计一个特定环境，使之尤其适合这种微生物生长，而抑制其它微生物生长。,(2),原理：不一样微生物有不一样,或对,有不一样敏感性。,(3),用途：从众多微生物中分离出特定微生物。,营养需求,某种化学物质,第37页,3.,菌落,(1),概念：,微生物在适宜固体培养基,生长、繁殖到一定程度，形成肉眼可见、有一定形态结构,。,(2),特征：不一样微生物在特定培养基上生长形成菌落普通都含有稳定特征，如菌落,、形状、边缘特征、隆起程度、颜色等，这些能够作为对微生物进行分类、判定主要依据。,单个,表面或内部,子细胞生长群体,大小,第38页,4.,土壤中分解尿素细菌分离与计数,(1),分离原理：土壤中细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成,，这种物质在把尿素分解成无机物过程中起到,作用。,脲酶,催化,第39页,(2),统计菌落数目普通用,法。,涂布平板,第40页,统计菌落数目时，培养基表面生长,1,个菌落，起源于样品稀释液中,个活菌。为了确保结果准确，普通选择菌落数在,平板进行计数。,从平板上菌落数推测出每克样品中菌落数计算方法是,_,。,利用涂布平板法成功统计菌落数目标关键是恰当,。,(3),试验流程：土壤取样,微生物培养与观察,细菌计数。,1,30,300,(,平均菌落数,涂布稀释液体积,),稀释倍数,稀释度,样品稀释,第41页,5.,分解纤维素微生物分离,(1),土壤中能分解纤维素微生物种类很多，有细菌、,等，它们能分泌,，将纤维素分解成小分子糖类物质以满足本身生命活动需要，同时也能改进土壤结构，提升土壤肥力。,真菌,纤维素酶,第42页,筛选方法：,染色法，即经过是否产生,来筛选纤维素分解菌。,培养基：以,为唯一碳源选择培养基。,红色消失，出现,_,刚果红,纤维素,(2),纤维素分解菌筛选,原理,纤维素分解菌,红色复合物,透明圈,刚果红,透明圈,纤维素,第43页,试验流程,土壤取样：富含,环境,选择培养：用,培养，以增加纤维素分解菌浓度,：制备系列稀释液,涂布平板：将样品涂布到判别纤维素分解菌培养基上,挑选产生,菌落,纤维素,选择培养基,梯度稀释,透明圈,第44页,6.,显微镜直接计数法,(1),原理：利用,，在显微镜下计算一定容积样品中微生物数量。,(2),缺点：不能区分死菌还是活菌。,血球计数板,第45页,(3)1 mL,培养液中菌体总数换算公式为：,16,25,型血球计数板：,1 mL,悬液中待测标本,(,菌体,),数,。,25,16,型血球计数板：,1 mL,悬液中待测标本,(,菌体,),数,。,40010,4,稀释倍数,40010,4,稀释倍数,第46页,(1),选择培养基能够判定某种微生物种类,(,),(2),对细菌进行计数只能采取涂布平板法，而不能用平板划线法,(,),(3),筛选能分解尿素细菌所利用培养基中，尿素是唯一氮源,(,),(4),分解尿素细菌在分解尿素时，能够将尿素转化为氨，使得培养基酸碱度降低,(,),(5),刚果红能够与纤维素形成透明复合物，所以能够经过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌,(,),常考基础诊疗,第47页,研究人员在刚果红培养基平板上，筛选到了几株有透明降解圈菌落如图,1,所表示，将筛选到纤维素酶高产菌株,J,1,和,J,4,在不一样温度和,pH,条件下进行发酵，测得发酵液中酶活性结果如图,2,，请分析：,教材热点拓展,第48页,(1),透明圈是怎样形成？,提醒,刚果红能够与纤维素形成红色复合物，但并不与纤维素降解产物发生这种反应。细菌分泌纤维素酶能将培养基中纤维素降解，形成透明圈。,提醒,第49页,(2),图中透明圈大小代表什么？降解纤维素能力最强菌株是哪种？,提醒,透明圈大小与纤维素酶量和活性相关，降解纤维素能力最强是菌株,。,提醒,第50页,(3),结合图,2,推测哪种菌株更适适用于人工瘤胃发酵？,提醒,J,4,菌株在较高温度和酸性环境下酶活性更高，更适适用于人工瘤胃发酵。,提醒,第51页,命题点一选择培养基成份及配制方法分析,1.,选择培养基是依据某一个或某一类微生物特殊营养要求或对一些物理、化学抗性而设计培养基。利用这种培养基能够将所需要微生物从混杂微生物中分离出来。为选择酵母菌和硝化细菌，应选取培养基分别为,A.,伊红美蓝培养基、含青霉素培养基,B.,含青霉素培养基、含氨无机培养基,C.,含氨无机培养基、含青霉素培养基,D.,含青霉素培养基、伊红美蓝培养基,命题探究,答案,解析,第52页,解析,酵母菌是真菌，通常能够用含青霉素培养基进行选择培养，因为青霉素抑制细菌生长，但不能抑制真菌生长。硝化细菌为自养型生物，能够利用氨转变为亚硝酸和硝酸过程所释放能量，把无机物转变为有机物以维持本身生命活动，利用含氨无机培养基可进行硝化细菌选择培养。,第53页,(1),中培养目标菌株选择培养基中应加入,_,作为碳源，,中不一样浓度碳源培养基,_(,填,“,影响,”,或,“,不影响,”,),细菌数量，假如要测定,中活细菌数量，常采取,_,法。,2.,苯酚是工业生产排放有毒污染物质，自然界中存在着降解苯酚微生物。某工厂产生废水中含有苯酚，为了降解废水中苯酚，研究人员从土壤中筛选取得了只能降解利用苯酚细菌菌株，筛选主要步骤如图所表示，,为土壤样品。请据图回答以下问题：,苯酚,答案,解析,影响,涂布平板菌落计数,第54页,解析,选择降解利用苯酚细菌培养基是以苯酚为唯一碳源培养基；苯酚是唯一碳源，当苯酚消耗尽时，菌株因缺乏碳源而不能继续繁殖，所以,中不一样浓度碳源会影响细菌数量；普通采取涂布平板菌落计数法来测定,中活菌数目。,第55页,(2),为对照，微生物在,中不生长，在,中生长，,与,培养基主要区分在于,_,_,_,；使用,_,法能够在,上取得单菌落。采取固体平板培养细菌时进行倒置培养原因是,_ _,。,答案,培养基中没有加入苯酚作为碳源，,培养基中加入了苯酚作为碳源,涂布平板法或平板划线,预防冷凝后形成水珠滴落在培养基上污染培养基,解析,第56页,解析,与,培养基主要区分在于,培养基中没有加入苯酚作为碳源，,培养基中加入了苯酚作为碳源；使用布平板法或平板划线法能够在,上取得单菌落。采取固体平板培养细菌时要倒置培养，以预防冷凝后形成水珠滴落在培养基上污染培养基。,第57页,(3),试验过程中怎样预防其它微生物污染？,_ _,。,答案,培养基灭菌，接种环境灭菌，接种过程进行无菌操作,解析,解析,从制备培养基到接种与培养等全部试验过程要无菌操作：无菌操作泛指在培养微生物操作中，全部预防杂菌污染方法。取得纯净培养物关键是预防外来杂菌入侵：,a.,试验操作空间、操作者衣着和手进行清洁和消毒；,b.,将用于微生物培养器皿、接种用具和培养基等进行灭菌；,c.,为防止周围环境中微生物污染，试验操作应在酒精灯火焰附近进行；,d.,试验操作时应防止已经灭菌处理材料用具与周围物品相接触。,第58页,选择培养基制作方法,(1),在培养基全部营养成份具备前提下，加入物质：依据一些微生物对一些物质抗性，在培养基中加入一些物质，以抑制不需要微生物生长，促进所需要微生物生长，如培养基中加入高浓度食盐时可抑制各种细菌生长，但不影响金黄色葡萄球菌生长，从而可将该菌分离出来；而在培养基中加入青霉素时可抑制细菌、放线菌生长，从而分离得到酵母菌和霉菌。,规律方法,第59页,(2),经过改变培养基营养成份到达分离微生物目标：培养基中缺乏氮源时，可分离自生固氮微生物，非自生固氮微生物因缺乏氮源而无法生存；培养基中若缺乏有机碳源则异养微生物无法生存，而自养微生物可利用空气中,CO,2,制造有机物生存。,(3),利用培养基特定化学成份分离特定微生物：如当石油是唯一碳源时，可抑制不能利用石油微生物生长，使能够利用石油微生物生长，从而分离出能消除石油污染微生物。,(4),经过一些特殊环境分离微生物：如在高盐环境中可分离耐盐菌，其它菌在盐浓度高时易失水而不能生存；在高温环境中可分离得到耐高温微生物，其它微生物在高温环境中因酶失活而无法生存。,第60页,命题点二微生物分离与计数,3.,植物秸秆中纤维素可被一些微生物分解。回答以下问题：,(1),分解秸秆中纤维素微生物种类很多，有,_,等。它们能分泌纤维素酶，将纤维素分解成小分子糖类物质以满足本身生命活动需要，同时也能改进土壤结构，提升土壤肥力。,答案,细菌、真菌,解析,解析,土壤中能分解纤维素微生物种类很多，有细菌、真菌等。,第61页,(2),在含纤维素培养基中加入刚果红,(CR),时，,CR,可与纤维素形成,_,色复合物。用含有,CR,该种培养基培养纤维素分解菌时，培养基上会出现以该菌菌落为中心,_,。,答案,红,解析,解析,刚果红是一个染料，能够与培养基中纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素酶分解后，红色复合物就无法形成，培养基中就会出现以纤维素分解菌为中心透明圈，我们能够经过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。,透明圈,第62页,(3),为从富含纤维素土壤中分离取得纤维素分解菌单菌落，某同学设计了甲、乙两种培养基,(,成份见下表,),：,酵母膏,无机盐,淀粉,纤维素粉,琼脂,CR,溶液,水,培养基甲,培养基乙,注：,“,”,表示有，,“,”,表示无。,第63页,据表判断，培养基甲,_(,填,“,能,”,或,“,不能,”,),用于分离和判别纤维素分解菌，原因是,_,；培养基乙,_(,填,“,能,”,或,“,不能,”,),用于分离和判别纤维素分解菌，原因是,_ _,。,答案,不能,液体培养基不能用于分离单菌落,不能,培养基中没有纤维素，不会形成,CR-,纤维素红色复合物，即使出现单菌落也不能确定其为纤维素分解菌,解析,解析,纤维素分解菌选择培养基为液体培养基，而用于分离和判别纤维素分解菌培养基为固体培养基，而且培养基中需含有纤维素，才能与,CR,形成红色复合物，有纤维素分解菌时才能形成以纤维素分解菌为中心透明圈。,第64页,4.,为了调查某河流水质情况，某研究小组测定了该河流水样中细菌含量，并进行了细菌分离等工作。回答以下问题：,(1),该小组采取涂布平板法检测水样中细菌含量。在涂布接种前，随机取若干灭菌后空白平板先行培养了一段时间，这么做目标是,_ _,；,答案,检测培养基平板灭菌是否合格,解析,解析,在涂布接种前，随机选取若干灭菌后空白平板先行培养一段时间，目标是检测培养基平板灭菌是否合格。,第65页,(2),该小组采取平板划线法分离水样中细菌。操作时，接种环需经过,_,灭菌，在第二次及以后划线时，总是从上一次划线末端开始划线，这么做目标是,_,。,答案,灼烧,解析,解析,用平板划线法分离水样中细菌，操作时，接种环需经过灼烧灭菌，在第二次及以后划线时，应从上一次划线末端开始划线，目标是将聚集菌体逐步稀释方便取得单个菌落。,将聚集菌体逐步稀释方便取得单个菌落,第66页,(3),示意图,A,和,B,中，,_,表示是用涂布平板法接种培养后得到结果。,答案,B,解析,解析,涂布平板法接种培养后得到结果应为图,B,。,第67页,(4),该小组将得到菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养。结果发觉：振荡培养细菌比静置培养细菌生长速度快。分析其原因是：振荡培养能提升培养液中,_,含量，同时可使菌体与培养液充分接触，提升,_,利用率。,答案,溶解氧,解析,解析,振荡能够使细菌分散，更有利于细菌利用培养液中营养物质，而且能够使培养液中溶解氧增多。,营养物质,第68页,两种纯化细菌方法辨析,归纳总结,比较项目,平板划线法,涂布平板法,关键操作,接种环在固体平板培养基表面连续划线,一系列梯度稀释涂布平板法操作,注意事项,每次划线前后均需灼烧接种环,稀释度要足够高，为确保试验成功能够增加稀释度范围,菌体获取,在含有显著菌落特征区域菌落中挑取菌体,从适宜稀释度平板上菌落中挑取菌体,优点,能够依据菌落特点取得某种微生物单细胞菌落,既能够取得单细胞菌落，又能对微生物进行计数,缺点,不能对微生物计数,操作复杂，需要涂布多个平板,第69页,矫正易错强记长句,第70页,1.,灼烧接种环，待其冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。,2.,划线时最终一区不要与第一区相连。,3.,划线用力大小要适当，预防用力过大将培养基划破。,4.,用涂布平板菌落计数法统计菌落数往往比活菌实际数目低,，这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到只是一个菌落。,5.,尿素分解菌和纤维素分解菌分离都利用了选择培养基，前者所用培养基中尿素是唯一氮源，后者所用培养基中纤维素是唯一碳源。,易错警示突破选择题,第71页,下列图甲、乙是微生物接种惯用两种方法，请回答相关问题：,1.,图甲是利用,平板划线,法进行微生物接种，图乙是利用,涂布平板,法进行微生物接种。对这两种接种工具进行灭菌和消毒方法依次是,灼烧,灭菌和,酒精,消毒。,2.,接种操作要在火焰附近进行原因是,火焰附近存在着无菌区域,。,3.,接种后，在固体培养基上培养细菌时进行倒置培养目标是,预防冷凝后形成水珠滴落在培养基上污染培养基。,长句应答突破简答题,第72页,重温高考 演练模拟,第73页,1,2,3,1.(,全国,，,37),一些土壤细菌可将尿素分解成,CO,2,和,NH,3,，供植物吸收和利用。回答以下问题：,(1),有些细菌能分解尿素，有些细菌则不能，原因是前者能产生,_,。能分解尿素细菌不能以尿素分解产物,CO,2,作为碳源，原因是,_ _,，但可用葡萄糖作为碳源，进入细菌体内葡萄糖主要作用是,_,_(,答出两点即可,),。,答案,脲酶,解析,解析,细菌分解尿素是因为细菌体内能合成脲酶，尿素是有机物，分解尿素细菌是分解者，属于异养型生物，所以不能利用,CO,2,作为碳源合成有机物。葡萄糖通常既作为碳源，也作为能源。,分解尿素细菌是异养型生物，不能利用,CO,2,来合成有机物,为细胞生命活动提供能量，为其它有机物合成提供原料,第74页,1,2,3,(2),为了筛选可分解尿素细菌，在配制培养基时，应选择,_(,填,“,尿素,”“,NH,4,NO,3,”,或,“,尿素,NH,4,NO,3,”,),作为氮源，不选择其它两组原因是,_ _,。,答案,尿素,解析,解析,筛选分解尿素细菌，通常只能用尿素作为唯一氮源，,“,NH,4,NO,3,”,或,“,尿素,NH,4,NO,3,”,均含有没有机氮源,NH,4,NO,3,，能分解尿素细菌和不能分解尿素细菌都能利用,NH,4,NO,3,，不能起到筛选作用。,其它两组都含有,NH,4,NO,3,，能分解尿素细菌和不能分解尿素细菌都能利用,NH,4,NO,3,，不能起到筛选作用,第75页,1,2,3,(3),用来筛选分解尿素细菌培养基含有,KH,2,PO,4,和,Na,2,HPO,4,，其作用有,_,(,答出两点即可,),。,答案,为细菌生长提供无机营养；作为缓冲剂保持细胞生长过程中,pH,稳定,解析,解析,KH,2,PO,4,和,Na,2,HPO,4,可为微生物提供,P,元素和无机盐离子如钾离子和钠离子，还可作为缓冲剂保持细胞生长过程中,pH,稳定。,第76页,2.(,全国,，,39),空气中微生物在重力等作用下，能够一定程度地沉降。某研究小组欲用平板搜集教室空气中微生物，以了解教室内不一样高度空气中微生物分布情况。试验步骤以下：,配制培养基,(,成份：牛肉膏、蛋白胨、,NaCl,、,X,、,H,2,O),；,制作无菌平板；,设置空白对照组和若干试验组，进行相关操作；,将各组平板置于,37,恒温箱中培养一段时间，统计各组平板上菌落平均数。,1,2,3,第77页,回答以下问题：,(1),该培养基中微生物所需氮起源于,_,。若要完成步骤,，该培养基中成份,X,通常是,_,。,1,2,3,答案,解析,解析,牛肉膏和蛋白胨都含有蛋白质水解产物，都能够作为氮源；平板为固体培养基，故需要加入凝固剂琼脂。,牛肉膏、蛋白胨,琼脂,第78页,(2),步骤,中，试验组操作是,_ _,。,1,2,3,答案,解析,解析,试验探究是教室内,“,不一样高度空气,”,中微生物分布，其中变量为不一样高度，故需在不一样高度下放置开盖平板。同时，为了确保单一变量，需要确保开盖放置时间一致。为了确保试验可靠性，需要设置多个平行组。,将各试验组平板分别放置在教室不一样高度位置上，开盖暴露一段时间,第79页,(3),若在某次调查中，某一试验组平板上菌落平均数为,36,个,/,平板，而空白对照组一个平板上出现了,6,个菌落，这种结果说明在此次调查中出现了,_,现象。若将,30(,即,36,6),个,/,平板作为本组菌落数平均值，该做法,_(,填,“,正确,”,或,“,不正确,”,),。,1,2,3,答案,解析,解析,在完全正确操作情况下，空白对照组中不应出现菌落。若出现菌落，表明操作过程中存在杂菌污染，属于试验失误，全部试验数据均不应采取。,污染,不正确,第80页,(1),图中选择培养基应以,_,为唯一氮源；判别培养基还需添加,_,作指示剂，产脲酶细菌在该培养基上生长一段时间后，其菌落周围指示剂将变成,_,色。,3.(,四川，,10),图甲是从土壤中筛选产脲酶细菌过程，图乙是脲酶基因转录,mRNA,部分序列。,1,2,3,答案,解析,尿素,酚红,红,第81页,1,2,3,解析,脲酶能够催化尿素分解为氨，故图中选择培养基应以尿素作为唯一氮源。因为尿素被分解成了氨，氨会使培养基碱性增强，,pH,升高，使酚红指示剂变成红色。,第82页,(2),在,5,个细菌培养基平板上，均接种稀释倍数为,10,5,土壤样品液,0.1 mL,，培养一段时间后，平板上长出细菌菌落数分别为,13,、,156,、,462,、,178,和,191,。该过程采取接种方法是,_,，每克土壤样品中细菌数量为,_,10,8,个；与血球计数板计数法相比，此计数方法测得细菌数较,_,。,1,2,3,答案,解析,解析,用于计数细菌菌落数接种方法是涂布平板法，统计菌落数应介于,30,300,之间，故选择细菌菌落数为,156,、,178,和,191,平板计数，每克土壤样品中细菌数为,(156,178,191)30.1,10,5,1.75,10,8,个。因为两个或多个细菌连接在一起时，往往统计是一个菌落，故用此方法测得细菌数偏少。,涂布平板法,1.75,少,第83页,(3),现有一菌株脲酶因为基因突变而失活，突变后基因转录,mRNA,在图乙箭头所表示位置增加了,70,个核苷酸，使图乙序列中出现终止密码,(,终止密码有,UAG,、,UGA,和,UAA),。突变基因转录,mRNA,中，终止密码为,_,，突变基因表示蛋白质含,_,个氨基酸。,1,2,3,答案,解析,UGA,115,第84页,1,2,3,解析,密码子由三个相邻碱基组成，,271,个碱基和后面,2,个碱基一起共组成,91,个密码子，箭头处插入,70,个核苷酸和后面,2,个碱基一起共组成,24,个密码子，紧随其后是,UGA,，为终止密码子，所以表示蛋白质含,115,个氨基酸。,第85页,课时作业,第86页,1,2,3,4,5,答案,1.(,广州质检,),高中生物学试验中，在接种时不进行严格无菌操作对试验结果影响最大一项是,A.,将少许干酵母加入到新鲜葡萄汁中,B.,将毛霉菌液接种在切成小块鲜豆腐上,C.,将转基因植物叶片接种到无菌培养基上,D.,将土壤浸出液涂布在无菌选择培养基上,6,7,8,解析,第87页,1,2,3,4,5,6,7,8,解析,在酿制葡萄酒过程中，假如灭菌不彻底会影响葡萄酒品质，但影响不大；,在制作腐乳过程中，发酵过程有各种微生物参加，所以该过程不进行严格无菌操作对结果影响不大；,在植物组织培养过程中，假如灭菌不彻底，杂菌产生物质会影响外植体生长，甚至杀死外植体，造成培养失败，对结果影响最大；,土壤浸出液本身就含有大量杂菌，另外在选择培养基上只能生存我们所要筛选细菌，所以无菌操作不严格，对结果影响也不会太大。,第88页,答案,2.(,张家口检测,),以下相关微生物培养与应用说法，正确是,A.,天然培养基是指直接取自自然界不需加工培养基,B.,接种前需对培养基、培养皿、接种环、试验操作者双手等进行严格,灭菌处理,C.,大肠杆菌纯化培养过程包含培养基配制和纯化大肠杆菌两个阶段,D.,分离分解尿素细菌时，尿素是培养基中唯一氮源和碳源,解析,1,2,3,4,5,6,7,8,第89页,解析,天然培养基是指用天然物质制成培养基，但也需要加工，,A,项错误；,试验操作者双手应消毒，不是灭菌，,B,项错误；,分离分解尿素细菌时，尿素是培养基中唯一氮源，不是碳源，需加入不含氮元素有机物,(,如葡萄糖,),作为碳源，,D,项错误。,1,2,3,4,5,6,7,8,第90页,答案,3.,下面是微生物平板划线示意图。划线次序为,1,、,2,、,3,、,4,、,5,。以下叙述正确是,A.,在五个区域中划线前后都要对接种环和培养基进行灭菌,B.,划线操作时完全打开皿盖，划完马上盖上,C.,接种时不能划破培养基，不然难以到达分离单菌落目标,D.,第,1,区和第,5,区划线最终要连接起来，方便比较前后菌落数,解析,1,2,3,4,5,6,7,8,第91页,解析,在每次划线前后都要对接种环进行灭菌，但不能对培养基进行灭菌；,进行划线操作时，左手将培养皿皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种接种环快速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖；,注意接种时不能划破培养基，不然难以到达分离单菌落目标；,第,1,区和第,5,区划线不能相连。,1,2,3,4,5,6,7,8,第92页,答案,解析,4.,下面关于土壤中分解尿素细菌分离与计数叙述中，正确是,A.,只有能合成脲酶微生物才能分解尿素,B.,筛选分解尿素细菌时，应以尿素作为培养基中唯一营养物质,C.,统计样品中活菌数目普通用平板划线法,D.,在以尿素为唯一氮源培养基中加入酚红指示剂，若指示剂变蓝，则,表明筛选到了分解尿素细菌,1,2,3,4,5,6,7,8,第93页,解析,只有能合成脲酶微生物才能分解尿素，,A,项正确；,筛选分解尿素细菌试验中，采取是以尿素为唯一氮源培养基，,B,项错误；,统计样品中活菌数目普通用涂布平板法，,C,项错误；,在以尿素为唯一氮源培养基中加入酚红指示剂，培养某种细菌后，假如,pH,升高，指示剂变红，这么就能初步判定该种细菌能够分解尿素，,D,项错误。,1,2,3,4,5,6,7,8,第94页,答案,解析,5.,某研究小组从有机废水中分离微生物用于废水处理。以下叙述正确是,A.,培养基分装到培养皿后进行灭菌,B.,转换划线角度后需灼烧接种环再进行划线,C.,接种后培养皿须放在光照培养箱中培养,D.,培养过程中每隔一周观察一次,1,2,3,4,5,6,7,8,第95页,解析,培养基灭菌后再分装到培养皿中，,A,项错误；,转换划线角度后要灼烧接种环，冷却后再从上次划线末端开始进行划线，,B,项正确；,接种后培养皿必须放在恒温箱中进行培养，,C,项错误；,培养过程中普通每隔,12 h,或,24 h,观察一次，,D,项错误。,1,2,3,4,5,6,7,8,第96页,6.,大肠杆菌是与我们日常生活联络非常亲密细菌，请回答相关检测饮用水中大肠杆菌问题：,(1),检测饮用水中大肠杆菌含量时，通常将样品进行一系列梯度稀释，将不一样稀释度水样用涂布器分别涂布到琼脂固体培养基表面进行培养，然后统计菌落数，这种方法称为,_,。,判断下面所表示,4,个菌落分布图中，不可能是用该方法得到是,_,。,答案,涂布平板法,解析,D,1,2,3,4,5,6,7,8,第97页,解析,D,中菌落分布情况为平板划线法所得。为判断培养基是否被杂菌污染,(,灭菌是否合格,),，本试验需要设置对照组。可将未接种培养基在适宜温度条件下放置一段时间，观察培养基上是否有菌落产生，若发觉有菌落说明培养基已被污染
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