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单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,第,39,讲微生物培养及应用,备考,最新考纲,1.,微生物分离和培养。,2.,培养基对微生物选择作用。,第1页,考点一微生物试验室培养,自主梳理,1,.,培养基,(1),概念：人们按照微生物对,不一样需求,配制出供其,营养基质。,(2),营养组成：普通都含有,和无机盐。另外，还需要满足微生物生长对,、氧气以及,要求。,营养物质,生长繁殖,水、碳源、氮源,pH,特殊营养物质,固体,液体,第2页,2,.,无菌技术,(1),关键：预防,入侵。,(2),不一样对象无菌操作方法,连一连,外来杂菌,第3页,3,.,大肠杆菌纯化培养,(1),制备牛肉膏蛋白胨固体培养基,(2),纯化大肠杆菌方法,纯化培养原理：想方设法在培养基上得到,肉眼可见,，即可取得较纯菌种。,纯化大肠杆菌关键步骤：,。,惯用微生物接种方法有两种,a.,平板划线法：是经过,在琼脂固体培养基表面,操作，将聚集菌种逐步稀释分散到培养基,表面。,由一个细胞繁,殖而来,称量,灭菌,倒平板,菌落,接种,接种环,连续划线,第4页,b.,法：是将菌液进行一系列,，然后将,菌液分别涂布到琼脂固体培养基表面，进行培养。,(3),菌种保留方法,对于频繁使用菌种，能够采取,方法。,对于需要长久保留菌种，能够采取,方法。,稀释涂布平板,梯度稀释,不一样稀释度,暂时保藏,甘油管藏,第5页,跟进题组,1.,微生物培养过程中，要十分重视无菌操作，当代生物学试验中许多方面也要进行无菌操作，预防杂菌污染，请分析以下操作中错误是,(,),煮沸消毒能够杀死微生物营养细胞和部分芽孢,接种操作要在酒精灯火焰附近进行,无菌繁殖脱毒苗时，植物外植体要进行消毒,家庭制作葡萄酒时要将容器和葡萄进行灭菌,培养基要进行高压蒸汽灭菌,加入培养基中指示剂和染料不需要灭菌,A.,B.,C.,D.,第6页,解析,无菌操作包含消毒和灭菌。需进行消毒处理有植物外植体及操作人员双手等，需进行灭菌有器皿、培养基、添加剂,(,指示剂或染色剂,),等。煮沸能够杀死微生物营养细胞和一部分芽孢，属于消毒；为预防空气中杂菌污染，接种时要在酒精灯火焰附近进行；家庭制作葡萄酒时所利用微生物是葡萄表面酵母菌，故不能灭菌；培养基常进行高压蒸汽灭菌。故,操作错误。,答案,D,第7页,2.,下列图甲、乙是微生物接种惯用两种方法，请回答相关问题。,(1),图甲是利用,_,法进行微生物接种，图乙是利用,_,法进行微生物接种。这两种方法所用接种工具分别是,_,和,_,；对这两种接种工具进行灭菌和消毒方法依次是,_,和酒精消毒。,(2),接种操作为何一定要在火焰附近进行？,_,。,第8页,(3),下列图是采取上述接种方法接种后培养效果图解，其接种方法是,_(,填,“,图甲,”,或,“,图乙,”,),。,答案,(1),平板划线稀释涂布平板接种环涂布器灼烧灭菌,(2),火焰附近存在着无菌区域,(3),图乙,第9页,1.,试验室惯用消毒和灭菌方法,项目,概念,惯用方法,应用范围,消毒,使用较为温和物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分微生物,(不包含芽孢和孢子),煮沸消毒法：在,100,下煮沸,5,6 min,普通物品,巴氏消毒法：在,70,75,下煮,30 min,或在,80,下煮,15 min,一些不耐高温液体，如牛奶,化学药剂消毒法,如用酒精擦拭双手、用氯气消毒水源等,紫外线消毒法：紫外灯照射,30 min,接种室、操作台,第10页,灭菌,使用强烈理化原因杀死物体内外全部微生物(包含芽孢和孢子),灼烧灭菌：酒精灯火焰,接种工具灭菌和试管口灭菌,干热灭菌：在,160,170,下灭菌,1,2 h,玻璃器皿、金属工具灭菌,高压蒸汽灭菌：在压力为100 kPa，温度为121 条件下，灭菌1530 min,培养基及容器灭菌,第11页,2.,两种纯化细菌方法比较,项目,优点,缺点,适用范围,平板划线法,能够观察菌落特征，对混合菌进行分离,不能计数,适适用于好氧菌,稀释涂布平板法,能够计数，能够观察菌落特征,吸收量较少，较麻烦，平板不干燥效果不好，轻易蔓延,适适用于厌氧菌和兼性厌氧菌,第12页,3.,平板划线操作,3,个易错点,(1),灼烧接种环之后，要冷却后再进行取种，以免温度太高杀死菌种,(2),划线时最终一区域不要与第一区域相连,(3),划线用力要大小适当，预防用力过大将培养基划破,第13页,考点二微生物筛选和计数,自主梳理,1,.,土壤中分解尿素细菌分离与计数,项目,详细内容,试验,原理,(1)能合成 细菌才能分解尿素,(2)配制以 为唯一氮源培养基，能够生长细菌就是能分解尿素细菌,数量,统计,(1),法,(,显微镜下用特定细菌计数板或血细胞计数板,),(2),间接计数法：,试验,流程,土壤取样,配制土壤溶液和制备培养基,涂布平板与培养,菌落,脲酶,尿素,直接计数,稀释涂布平板法,系列稀释,计数,第14页,2.,分解纤维素微生物分离,(1),纤维素酶,组成：纤维素酶是一个,，普通认为它最少包含三种组分，即,。,作用,复合酶,C,1,酶、,Cx,酶和葡萄糖苷酶,纤维二糖,葡萄糖,(2),纤维素分解菌筛选,原理,红色复合物,透明圈,第15页,筛选方法：,染色法，即经过是否产生,来筛选纤维素分解菌。,培养基：以,为唯一碳源选择培养基。,试验流程,土壤取样：富含,环境,选择培养：用,培养，以增加纤维素分解菌浓度,：制备系列稀释液,涂布平板：将样品涂布到,培养基上,挑选产生,菌落,刚果红,透明圈,纤维素,纤维素,选择培养基,梯度稀释,判别纤维素分解菌,透明圈,第16页,3,.,判断正误,(1),选择培养基能够判定某种微生物种类,(,),(2),从物理性状角度看，选择培养基多属于固体培养基,(,),(3),对细菌进行计数只能采取稀释涂布平板法，而不能用平板划线法,(,),(4),筛选能分解尿素细菌所利用培养基中，尿素是唯一氮源,(,),(5),分解尿素细菌在分解尿素时，能够将尿素转化为氨，使得培养基酸碱度降低,(,),(6),纤维素是组成植物细胞壁主要成份在纤维素酶作用下，纤维素能够水解成葡萄糖,(,),答案,(1),(2),(3),(4),(5),(6),第17页,跟进题组,1.,苯酚是工业生产排放有毒污染物质，自然界中存在着降解苯酚微生物。某工厂产生废水中含有苯酚，为了降解废水中苯酚，研究人员从土壤中筛选取得了只能降解利用苯酚细菌菌株，筛选主要步骤如图所表示，,为土壤样品。请回答以下问题：,第18页,(1),中培养目标菌株选择培养基中应加入,_,作为碳源，,中不一样浓度碳源培养基,_(A.,影响；,B.,不影响,),细菌数量，假如要测定,中活细菌数量，常采取,_,法。,(2),为对照，微生物在,中不生长，在,中生长，,与,培养基主要区分在于,_,；,使用,_,法能够在,上取得单菌落。采取固体平板培养细菌时进行倒置培养原因是,_,_,。,(3),试验过程中怎样预防其它微生物污染？,_,。,第19页,答案,(1),苯酚,A,稀释涂布平板,(2),培养基没有加入苯酚作为碳源，,培养基加入苯酚作为碳源稀释涂布平板法或平板划线预防冷凝后形成水珠滴落在培养基上污染培养基,(3),培养基灭菌，接种环境灭菌，接种过程无菌操作,第20页,2.(,新课标全国卷,),植物秸秆中纤维素可被一些微生物分解。回答以下问题。,(1),分解秸秆中纤维素微生物能分泌纤维素酶，该酶是由,3,种组分组成复合酶，其中葡萄糖苷酶可将,_,分解成,_,。,(2),在含纤维素培养基中加入刚果红,(CR),时，,CR,可与纤维素形成,_,色复合物。用含有,CR,该种培养基培养纤维素分解菌时，培养基上会出现以该菌菌落为中心,_,。,第21页,(3),为从富含纤维素土壤中分离取得纤维素分解菌单菌落，某同学设计了甲、乙两种培养基,(,成份见下表,),：,酵母膏,无机盐,淀粉,纤维素粉,琼脂,CR,溶液,水,培养基甲,培养基乙,注：,“,”,表示有，,“,”,表示无。,据表判断，培养基甲,_(,填,“,能,”,或,“,不能,”,),用于分离和判别纤维素分解菌，原因是,_,；培养基乙,_(,填,“,能,”,或,“,不能,”,),用于分离和判别纤维素分解菌，原因是,_,。,第22页,答案,(1),纤维二糖葡萄糖,(2),红透明圈,(3),不能,液体培养基不能用于分离单菌落不能培养基中没有纤维素，不会形成,CR,纤维素红色复合物，即使出现单菌落也不能确定其为纤维素分解菌,第23页,1.,选择培养基与判别培养基比较,种类,制备方法,原理,用途,举例,选择培养基,培养基中加入一些化学物质,依据一些微生物对一些物质或环境条件癖好、抗性而设计,从众多微生物中分离所需微生物,加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌,判别培养基,培养基中加入某种指示剂或化学药品,依据微生物产生某种代谢产物与培养基中特定试剂或化学药品反应，产生显著特征改变而设计,判别不一样种类微生物,伊红-美蓝培养基能够判别大肠杆菌,第24页,2.,选择培养基四种常见制备方法或实例,第25页,3.,分离纤维素分解菌所用两种培养基比较,分离纤维素分解菌试验中先用选择培养基，再用判别培养基。,(1),选择培养基为液体培养基，以纤维素作为碳源和能源微生物能够正常生长，而其它绝大多数微生物不能正常生长；因培养基中无凝固剂，为液体培养基，利用液体培养基能使营养成份被充分消耗，以增加纤维素分解菌浓度。,(2),判别培养基含琼脂，为固体培养基，细菌可在培养基上形成肉眼可见菌落。刚果红染色法应用就是判别培养基。,第26页,易错易混防范清零,易错清零,易错点,1,误认为全部微生物培养基中均需加入,“,生长因子,”,点拨,碳源、氮源、水分、无机盐、生长因子是微生物生长必需五大营养成份，但大多数培养基中都含碳源、氮源水分、无机盐四类物质，可能不需额外添加,“,生长因子,(,如维生素,),”,，这是因为许多微生物可自行合成这些生长因子，而对那些合成能力有限或不能合成生长因子微生物,(,如乳酸菌,),，则需在培养基中添加诸如维生素等生长因子,第27页,易错点,2,混同两种,“,对照组,”,与,“,重复组,”,点拨,(1),两种对照组作用比较,判断培养基中,“,是否有杂菌污染,”,，需将未接种培养基同时进行培养。,判断选择培养基,“,是否含有筛选作用,”,，需设置牛肉膏蛋白胨培养基进行接种后培养，观察两种培养基上菌落数目，进行对比得出结论。,(2),重复组设置及作用,为排除偶然原因对试验结果干扰，在每一稀释度下宜设置,3,个平板作重复组，选择菌落数均在,30,300,且数目相差不大三个平板，用,“,平均值,”,代入计数公式给予计算菌落数,第28页,易错点,3,不明确每次划线操作中,“,灼烧接种环,”,目标或误认为划线结束后,“,无须灼烧接种环,”,点拨,平板划线法纯化大肠杆菌时不一样阶段灼烧接种环目标不一样,第一次操作：杀死接种环上原有微生物。,每次划线之前：杀死上次划线后接种环上残留菌种，使下次划线菌种直接起源于上次划线末端。,划线结束后：杀死接种环上残余菌种，防止细菌污染环境和感染操作者。,第29页,易错点,4,不知道菌落计数比实际值,“,偏高,”,还是,“,偏低,”,点拨,稀释涂布平板法统计样品中菌落数目往往比实际数目,“,低,”,。这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到只是一个菌落。而显微计数法中因为不能区分死菌与活菌，故所得数值可能,“,偏高,”,。,第30页,规范答题,多环芳烃是含有致癌、致畸、致突变作用全球性污染物，是煤、石油、有机高分子化合物等有机物不完全燃烧时产生挥发性碳氢化合物，包含萘、蒽、菲、芘等,150,余种化合物。某研究小组从一污水处理厂污泥中筛选到一株可降解萘、蒽细菌，命名为,BDP01,。,第31页,(3),下面图,1,和图,2,为该研究小组进行其中两个试验试验结果图，菌株生长量以分光光度计于,600 nm,处测定光吸收值,(OD,600,),表示。,第32页,第33页,1,.,找错,纠错,错答序号：,_,正答：,错答序号：,_,正答：,错答序号：,_,正答：,_,错答序号：,_,正答：,错答序号：,_,正答：,_,选择培养基,上次划线末端,需要,增加溶液中溶氧量,小,第34页,2,.,错因分析,序号,错将按,“,功效,”,划分视作按,“,物理性质,”,划分,序号,误认为每次划线均需从第一次末端，实际应为从每次末端划线，以起到,“,稀释,”,作用,序号,误认为最终划线结束无须灭菌，为预防污染，划线结束，仍需灭菌,序号,考虑不周全，未想到振荡可增加溶氧量,序号,未了解,OD,600,值与生长量关系,第35页,
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