质谱培训教材.ppt

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,Thermo Scientific China,-Demo Center-,LTQ,液质联用仪培训教材,质谱基本常识,第一章,“,The basis in MS(mass spectrometry)is the production of ions,that are subsequently separated or filtered according to their,mass-to-charge(m/z),ratio and detected.The resulting mass spectrum is a plot of the(relative)abundance of the produced ions as a function of the m/z ratio.”,（,质谱的基础是产生离子，这些离子随后按质荷比大小被分离过滤并被检测。得到的质谱图是产生离子质荷比的相对丰度图谱。）,Niessen,W.M.A.;Van der Greef,J.,Liquid ChromatographyMass Spectrometry:Principles and Applications,1992,Marcel Dekker,Inc.,New York,p.29.,什么是质谱？,怎样理解质谱,LC-MS&LC-MSn,Time,时间,Response,响应,Chromatogram,离子流图,m/z,m/z,MS,MS-MS,总离子流图,Mass Spectrometry“Simplified”(GMSD),G,enerate,Ion Production,Ion Optics,Linear Ion Trap,Electron Multiplier,M,ove,S,elect,D,etect,Generate,Ions,（产生离子）,Move,Ions,（离子传输）,Select,Ions,（选择离子）,Detect,Ions,（检测离子）,Sample In,(,样品引入,),Data Out,（数据输出）,Ion Optics System,离子透镜系统,质谱简化流程,Atmospheric Pressure Ionization,大气压下离子化,离子源类型,:,Electrospray Ionization(ESI),电喷雾电离,大多数情况下是液态过程,APCI(Atmospheric Pressure Chemical Ionization),大气压下化学电离,气相过程,APPI(Atmospheric Pressure Photo-Ionization),大气压下光离子化,-,气相过程,离子源作用,:,Desolvate sample flow for introduction into mass spectrometer.,去溶剂,Baffle the first vacuum region of the MS from atmospheric pressure in the source.,真空过渡,Ionize the analyte or transport ion in solution to the gas phase.,离子化,Pump away neutrals and opposite charged ions which would otherwise interfere with the analysis of the desired polarity.,去除干扰,离子产生,(API),Chemistry Considerations,化学考虑,ESI:,离子在液相产生,有益于热不稳定化合物的分析,有益于中等到高极性化合物分析,有益于大分子（蛋白,/,多肽）,APCI/APPI:,离子在气态产生,不利于热不稳定化合物的分析,有益于低极性到中等极性化合物分析,适合小分子,(steroids-,类固醇，甾体化合物,),适合含有发色基团的化合物,(APPI),Electrospray-Basic Layout,Ion Transfer Tube,金属毛细管,ESI Needle,+/-5 kV,Taylor Cone,泰勒锥,Solvent evaporation and,Ion desolvation,溶剂蒸发和去溶剂,电喷雾电离过程,Auxiliary Gas,辅助气,Sheath Gas,鞘气,喷雾束,5kV,ESI,喷嘴横截面,喷嘴,喷针,碱性分子,M+H,+,(-NH,2,),酸性分子,M-H,-,(-COOH,-OH),正负离子扫描选择,练习：请为这两个化合物选择合适的扫描方式,Atmospheric Pressure Chemical Ionization (APCI),大气压下化学电离,通过电晕放电达到气相电离,电离过程分以下三步,1.,高压电晕针作用于载气,(N,2,),和挥发的,HPLC,溶剂，产生初级离子。,O,2,+e,-,O,2,+.,+2e,-,N,2,+e,-,N,2,+.,+2e,-,2.,通过一系列复杂反应，初级离子和溶剂分子产生溶剂离子，如,H,3,O,+,，,OH,-,。,3.,溶剂离子和分析物反应产生正离子模式下的,(M+H),+,或负离子模式下的,(M-H),-,。,H,3,O,+,+Analyte,(Analyte+H),+,+H,2,O,OH,-,+Analyte,(Analyte H),-,+H,2,O,Atmospheric Pressure Chemical Ionization (APCI),大气压下化学电离,2004 Dr.Paul Gates,University of Bristol,Atmospheric Pressure Photo-Ionization (APPI),大气压下光离子化电离,利用,APCI,探针去溶剂,通过,UV,光源离子化,电离过程有以下两步,1.,分析物分子与,UV,光源作用（氪灯产生,10,和,10.6ev,光子）。如果分析物的电离势能低于光子能量,h,v,，,分析物分子,M,被电离成分子离子,M,+,。,M+h,v,M,+,+e,-,2.,分析物离子有可能从质子溶剂（如果存在）那得到质子形成离子,M+H,+,。,M,+,+S,M+H,+,+S-H,灵敏度,图谱质量,速度,“,3D”,“,3D”vs.“2D”,线性离子阱,LTQ,二维线性离子阱,60 m,3,/hr,300L/sec,400L/sec,15 L/sec,三端 口的分子涡轮泵,Probe,离子透镜,线性离子阱,Detector 1,Detector 2,可互换的离子源探针,(,图中所示是,ESI,探针,),离子源探针位置调节器,APPI,探针入口,Ion Max,源,Ion Max,离子源,离子传输毛细管离子传输毛细管入口电喷雾喷针,ESI,喷嘴,ESI,探针,电喷雾针,离子传输毛细管,ESI,喷嘴,ESI,探针,Ion Max,源设计,:ESI,探针,ESI,探针特征,：,固定的喷射角度（,60,度）,增加鞘液接口（精确质量测定和柱后修饰应用）,X,Y,Z,方向调节更加便于优化,液相 入口,鞘液入口,ESI,喷针,样品管外壁聚酰亚胺涂层会吸收某些溶剂而变长,样品管截面要平齐以保证好的喷雾状态,样品管缩进,ESI,喷针里,1mm,处得到最好喷雾效果,鞘气,ESI Needle,ESI Needle,样品,聚酰亚胺,聚酰亚胺,石英管,石英管,ESI,喷针,ESI Needle,ESI Needle,样品,聚酰亚胺,聚酰亚胺,石英管,石英管,ESI,喷针,ESI,喷针,鞘气,鞘气,鞘气,ESI,喷针,样品管延长,石英毛细管吸收溶剂溶胀图例,ESI,探头 切面图,喷嘴,ESI,喷针,熔融石英毛细管,喷嘴,ESI,喷针,金属针,1 mm,1 mm,很重要！,Metal Needle Kit,Stainless Steel Needle Size,Type,Solvent Flow Rate,(,m,L/min),Part No,34-Gauge,(30,M ID),Low flow,0.5-10,70111-62080,32-Gauge,(50,M ID),High flow,5-400,70111-62013,ESI,探头 切面图,喷嘴,ESI,喷针,熔融石英毛细管,喷嘴,ESI,喷针,金属针,1 mm,1 mm,很重要！,Spray Voltage:4 5 kV,“Ion Max”ESI,源操作条件,APCI,探针,Ion Max,离子源设计,:APCI,探针,离子传输毛细管,APCI,探针,电晕针,离子传输毛细管,离子源接口,Ion Max,离子源设计,:APCI,探头,APCI,探头特征,:,可移动喷雾器,新陶瓷加热器,自我清洁功能,内表面温度超过,1000C,外置热电偶,源室没有塑料材料,喷嘴组件易于更换,X,Y,Z,三维可调,液相入口,陶瓷气化器,气化器,电源接头,“,Ion Max”,APCI,源,操作条件,液体流速,(,m,L/min),离子传输管温度,.(,C)*,鞘气压力,(arb),辅助气,压力,(arb),蒸发室温度,(,C),电晕针放电,电流,(,m,A),200,250,25,5,350,+4(-10*),1000,250,45,5,450,+4(-10*),当你改变离子传输毛细管（或金属毛细管）的温度时一定要优化透镜电压,*,负离子模式,APCI,操作注意事项,确保,APCI,探针的蒸发温度足够大，喷雾区域没有液滴沉降,蒸发温度：,400-450C,（针对流速为,400-1000uL/min),可以适当降低金属毛细管的温度,仔细检查鞘气流速,辅助气流量可以先设到,0,进高浓度的样品可能会导致污染和记忆效应,定期加热离子源（自动清洗）,APCI Summary-,小结,分析物性质,:,*,低到中等极性,*,高质子亲和力,*,高气相酸度,*,1200 da,典型流速,:0.2-2.0 ml/min,比,ESI,更能容忍缓冲盐,仅产生单电荷离子！,软电离技术,典型应用：药物，农药，类固醇及含氮染料,Comparison of ESI and APCI,二者比较,Comparison of ESI and APCI,二者比较,PAHs APPI,质谱图,金属毛细管正常位置,取出金属毛细管,真空锁定小球,真空锁定,Ion Max,离子源室设计,改进排出口设计，便于大气压电离废气排出,电晕放电鞘,陶瓷和不锈钢,;,垂直置于壁 上气化溶剂冷却后不被凝结,所改进的不锈钢的废液,排出部件,探针垂直安装液滴直接进入废液排出口，即使氮气用完，,也不会在腔室内累积溶剂。,非塑料外壳,便于观看的两个视角,钛制成的新型,Skimmers:,直径较大，提高灵敏度,钛材料更有利于保持,skimmer,的热平衡，,不锈钢材料会逐渐冷却所以可作为加热器,Ion Max,源,:Skimmer,离子吹扫口,离子传输管,无需工具装配,/,拆卸,Tube Lens-,管路透镜,钛制,skimmer,L0,Q00,Sweep Gas,吹扫气接口,Q0,API Stack,装配示意图,LC-MS,条件优化,第二章,Sample concentration,样品浓度,Choice of column and solvents,柱子型号和溶剂,Flow rates and their effects,流速及影响,LC/MS,条件优化,样品信息 你需要得到尽可能多的样品信息！,目标分析物的信息包括以下,分子式,结构,(,官能团,),分子量,溶解性,pKa,稳定性,储存,是否有标准品,浓度水平和范围,基质信息,:,类型,状态,(,液体,固体,),溶解性,不同成份,样品预处理,提高灵敏度,去除基质干扰,离子抑制,建立去除基质干扰的方法,(SPE,萃取,过滤等,),进样浓度,与进样量和柱内径有关,ESI:,1,L/min-1mL/min,最佳使用流速,:200 L/min,一般来说,高流速需要高的毛细管温度和气体流速。,APCI:,200,L/min-2mL/min,Optimal Flow Rate:500,L,/min,一般来说，高流速需要更高的鞘气和辅助气流量，但不需要提高毛细管温度,LC,建议流速,液相柱,(,标准装柱填料直径,5.0,m,m),最适合的流速,(,线性速度,),流速,柱子直径,1.0 mL/min 4.6 mm,0.5 mL/min 3.0 mm,0.2 mL/min 2.1 mm,50,m,L/min 1.0 mm,10,m,L/min,毛细管,柱内径,mm,1.0,1000,500,200,50,1,5,20,2.0,3.0,4.6,2.0,流速,m,L/min,分离效果,使用窄内径的柱子可以提高分离效果,LC,添加剂,酸,不要使用无机酸,(,可能会导致腐蚀,),推荐使用醋酸和甲酸,碱,不要使用碱金属碱,(,可能会导致腐蚀,),推荐使用氢氧化铵和氨水,表面活性剂,清洁剂和其他表面活性剂会产生离子抑制,三氟醋酸,(,TFA,),可以提高液相的分离度，但是在质谱正负离子模式下会产生离子抑制作用,三乙胺,/,三甲胺,(,TEA/TMA,),有助于形成负离子,增加,TFA,用量,(,乙腈,:,水,=50:50),对质谱信号强度的影响,本结果是两次实验的平均值,.*,注,:,不加,TFA,的结果是不确定的，因为在溶液无法肽段质子化。对照样品是,50/50/0.1,甲醇,/,水,/,甲酸,(N=6,平均信号强度,=1.10 x10,6,counts.,*,S.Baldwin,K.Stoney,K.Wheeler,I.Mychreest.“Low pH Solvent Alternatives to TFA Solvents and Their Effect on,HPLC/ESI-MS of Peptides”,Poster Paper Presented at ASMS 96.,液质联用中缓冲盐使用的注意事项,(pH),当使用非挥发性的盐时,一定要使用吹扫挡锥（,sweep cone,）。,尽量避免使用如下的非挥发性盐,碱金属磷酸盐,硼酸盐,柠檬酸盐,经常使用缓冲盐需要定期清洗金属毛细管,质子给体,质子受体,提高色谱分离,形成负离子时提高色谱分离,缓冲液,乙酸,甲酸,氢氧化铵,氨水溶液,三氯乙酸,(0.02%v/v),三氟乙酸,(0.02%v/v),三乙胺,(0.02%v/v),三甲铵,(Mass Lists,；,2.,添加,Reject masses,；输入,Reject masses(,用一级全扫描模式采集一个空白数据，在,Qual Browser,里查看该数据得到,),Building Double Play:Scan Event Two,选择,Scan Event Activation,2.,设定,Activation Type,，,Default Charge State,，,Isolation Width,和,Normalized Collision Energy,Building Double Play:Scan Event Two,选择,Scan Event Current Scan Event,设定,Minimum signal threshold(counts,，绝对强度,),；用一级全扫描模式采集一个空白数据，在,Qual Browser,里查看该数据得到；,确定两处均设为,1,；,实验总结,常用,Data Dependent LCQ Experiments,设定,Big 3:,步骤,:,一级全扫描,对最强的离子，第二强的离子以及第三强的离子做数据相关,Data Dependent(dd)MS,2,优点,/,缺点,:,MS2,花费时间很长,能采到峰顶点位置的信号,Double Play with Dynamic Exclusion:,步骤,:,一级全扫描,启用,Dynamic Exclusion,，对最强的离子做数据相关,Data Dependent(dd)MS2,优点,/,缺点,:,为分析共流出物提供可能,可能丢失出峰的顶点位置,Dynamic Exclusion,共流出物的,MS&MS2,Dynamic Exclusion,1.,选择,Global Dynamic Exclusion,2.,设定,Repeat count,Repeat duration,Exclusion list size,Exclusion duration,和,Exclusion mass width,*,以上设置导致,0.2,分钟内采集了三次,MS/MS,图谱，,0.3,分钟后该排除离子获得释放,*,Exclusion Mass Width,中,Low,和,High,的设置可以是不对称的，,High,的设定较宽，可以包含同位素峰,Divert Valve,操作,方法总结,Data Dependent Triggers,数据相关采集系列,Data Dependent MS/MS,Full scan MS followed by MS/MS of the most intense ion fragment,Nth Order Double Play,Perform MS/MS on the top“N”most intense ions(up to 199),Dynamic Exclusion,Prevent an ion from triggering a subsequent data dependent scan for a pre-selected length of time,Data Dependent Triple Play,Full scan MS followed by Zoom scan and MS/MS of the most intense ion.,Nth Order Triple Play,Perform Triple Play experiment on the top“N”most intense ions,Data Dependent Neutral Loss MS,3,Trigger MS,3,scan on only the MS/MS product ions with the pre-defined neutral loss,Data Dependent Ion Tree,Perform MS,n,on up to 25 species to any level between MS,2,and MS,10,Ion Mapping,Automatically generate a 3-D MS/MS map of the fragmentation pathway,Data Dependent Zoom Map,Perform MS/MS on the precursor ions with intensities above the threshold in an MS ZoomScan,Isotopic Data Dependent Scan,Trigger a scan if isotope mass difference and intensity ratio criteria are satisfied,Charge State Screening,Specify the charge state of the ion of interest for the data dependent scan,第九章,Xcalibur,-,Sequence Setup,Xcalibur Home Page Sequence Setup,打开,Sequence Setup,点击,View Sequence Setup View,也可点击,Sequence Setup,创建序列,1.,双击添加,Instrument Method,2.,如果此路径下没有该文件夹,你可以输入文件夹名，该文件夹将会创建,3.,设定,File Name(,无空格,),Position,和,Inj Vol,如果你的样品数比较少，从,Sequence Setup,主页建序列更方便,运行序列需要提供的基本信息,:,File Name,Path,Inst Meth,Position,Inj Vol,创建序列,热键,F2,，可以编辑该文本,右击并选择,Open File,可以打开,Instrument File,用新序列模板创建序列,如果你需要运行大量的样品,使用,New Sequence Template,创建序列会比较方便,1.,点击,New,新序列模板,1.,选择,Base File Name,Path,&Instrument Method,3.,选择起始的,Vial Position,2.,输入,unknown,样品的个数,4.,如果你已经有,Processing Method,在上面指定好，你可以添加,Standards,Blanks,以及,QCs,。会自动生成包括,processing method,相关信息的序列,新序列模板,一旦你在,New Sequence Template,界面点击,OK,文件名会自动根据,Base File Name,自动往下递增,新序列模板,If you want to type a new File Name:,2.,选择,Edit,点击,Fill Down,1.,输入,File name,改变序列中,Column Arrangement,1.,选择,Change,点击,Column Arrangement,2.,从左边的,Available Columns,选择需要的内容,4.,点击,Move Up,或者,Down,改变显示次序,3.,点击,Add,改变用户标签,1.,选择,Change,并点击,User Labels,2.,改变,labels,改变,Tray,当前配置的自动进样器能够使用的所有进样架列表,1.,选择,Change,点击,Tray Name,2.,选择使用的,Tray,型号,将序列输出到,Excel,1.,选择,File,，点击,Export Sequence,将序列输出到,Excel,1.,选择需要输出的内容并点击,Browse,2.,命名该文件,3.,序列文件将输出为,.csv,格式,输出序列示例,确保重新将该序列导入,Xcalibur,第一行必须包含文本,Bracket Type=n,where n=1-4.,每个数字代表特定的,bracket,类型,:,1=Overlapped,2=None,3=Non-overlapped,4=Open,从,Excel,中导入序列,2.,选择你需要输入的内容，点击,Browse,找到输入文件,1.,选择,File,并点击,Import Sequence,运行序列,1.,可以选择,Run One Sample,或,Run Sequence,运行序列,显示在,Instrument Configuration,界面配置的所有仪器,允许自动处理样品数据,如果没选,序列将不会运行，除非你点击,Actions Start Analysis,确认这些行是待运行的,可以优先运行提交的序列,选择在序列运行前或后仪器的运行方法,信息条,Acquisition Queue-Sequence Progress,Status,通过点击,View and unchecking Info View,打开或关闭,Info View,Status,键显示所有配置仪器的状态,提交序列后,就会出现在,Acquisition Queue,。点击,Sample,旁边的方框，框内打勾，键盘上再点击,Delete,键即可删除该样品,实时图谱查看,1.,选择,View,，点击,Real Time Plot View,如果你更改了该页面的一些设定,点击解锁键，重新监测实时数据采集,第十章,Qual Browser,定性浏览器,打开,Qual Browser,你可以在,Xcalibur Homepage,右击,Qual Browser,打开原始数据或序列,打开,Qual Browser,Qual Browser,主界面,Info Bar,放大按钮，可以放大色谱图或质谱中某段区域,主要工具,最多每个窗口一次可以显示,16,个,cells,，每个,cell,最多包含,8,个,plots,右上角有,Cell,的标志,在,Qual Browser,界面打开文件,2.,选择,replace(,当前,window,cell,或,plot),add a new window or plot(,默认是增加一个新窗口,),选择输出的,Layout,1.,点击,File,选择,Open(,也可以打开序列或结果文件,),The Info Bar,The Cell Info,页面提供对应,Cell,中每个,Plot,信息,如果你打开的是序列或结果文件，将分别出现在,Info Bar,的第二页和第三页,当你对色谱峰进行积分时，会出现,Integration,页面。你可以改变积分参数获得合理的积分,The Info Bar Elemental Composition,2.,设定分子式的限定条件,3.,改变使用的元素,右击选择,Add Isotopes,，直接从元素周期表界面进行选择,1.,输入质量数或在质谱图某个质量数上右击，选择,Generate Formula from Mass,4.,点击,Calculate,，表格中即出现分子式信息,Info Bar,之,Elemental Composition,帮助你计算最符合某个质量数（来自于质谱图）的化学分子式,Isotope Simulator,同位素拟合,同位素拟合页面允许用户建立一个化学分子式同位素分布质谱图,定性浏览器信息栏,Isotope Simulator,同位素拟合,allows you to create a simulated spectrum for a chemical formula entered,The Info Bar Isotope Simulator,2.,设定参数,输入化学分子式,3.,点击,new,4.,出现该化学分子式的精确质量数，拟合的图谱出现在新的窗口,Info Bar MS,n,Browser,页面显示并帮助你分析,MS,n,实验数据,The Info Bar MS,n,Browser,2.,点击显示隐藏信息,1.,如果,MSn browser,页面不显示任何数据，激活质谱图,3.,可以双击得到平均（,Average,）或复合的质谱图,(Composite Spectrum),4.,也可以右键选择,Include individual scans,Qual Browser Layouts,2.,保存,Layout,或将该,Layout,设置为默认格式,1.,根据需要设定好,cells,plots,integration,等等。,3.,选择,Layout,格式打开后续文件,放大,1.,激活,cell,2.,平行,X,轴或,Y,轴拖动鼠标或在目标区域拖动成方框,将色谱图中某个峰取平均质谱图,1.,激活质谱图,2.,鼠标拖过对应色谱峰,得到平均质谱图,3.AV,告诉你几次扫描的平均,(,如：,AV:7=,七次扫描的平均质谱图,),从色谱图中提取某个离子,1.,激活色谱图,2.,也可以直接鼠标拖过质谱峰得到鼠标拖动质量范围的,EIC,或者鼠标点击质谱峰得到该质量数的提取离子流图。窗口大小根据,chromatogram,里,Ranges,中,Mass Tolerance,的设定自动调整,右击,Chromatogram-Peak Detection,1.,右击,chromatogram,选择,Peak Detection,2.,选择,Toggle Detection in This Plot,或,in All Plots,3.Info Bar,显示积分参数,右击,Chromatogram-AutoFilter,AutoFilter,可以自动显示,scan filters(,目标物分析有用,),，第一张图,(,上,),没有任何,Scan Filter,。其他图对应在方法里设定的,scan filters(,最多同时显示,8,张图,),右击,Chromatogram-Chromatogram Ranges,1.,右击,chromatogram,选择,Ranges,右击,Chromatogram-Chromatogram Ranges,点击添加,plots(,最多,8,个,),点击选择文件,改变检测器,积分算法和延迟时间,Chromatogram Ranges Scan Filter,点击向下箭头选择任何更加特定的,Scan Filter,可以在此输入,Scan Filter(,如，,Full ms,Full ms2,Full ms3,等。,依次逐个显示所有,MS,MS,2,和,MS,3,扫描,),。,layout,可以保存为默认格式，这样即使,scan ranges,改变,也没有必要改变,Scan Filter,。如果,Scan Filter,处是空白,将显示采集的所有扫描，不管是,MS,，还是,MS,n,),Chromatogram Ranges Plot Types,1.,点击更换,Plot type,TIC,每次,Scan,所有离子叠加的色谱图,Base Peak,每次,Scan,最强离子提取的色谱图,Base Peak,色谱图会使,Full ms,数据通常看起来更好一些，因为大量的噪音被去除,Chromatogram Ranges Extracted Ion Chromatogram,1.Scan filter,选为,Full ms,或者删除,Scan filter,查看所有,Scan,3.,在,Range(s),框输入质量数或质量数范围。如果需要输入多个质量数，范围将根据,Automatic processing,里,mass tolerance,的设定来决定,2.,可以选择,Mass Range(TIC),或,Base Peak,在,Chromatogram Ranges,界面有多种方式可以提取离子,Chromatogram Ranges Neutral Fragment,1.,删除,Scan filter,2.,选择,Neutral Fragment,3.,输入,Neutral Fragment,质量数,Neutral Fragment Plot type,将显示所有符合你设定中性丢失的碎片离子,(,从,MS,到,MS,2,),Chromatogram Ranges Automatic Processing,1.,对色谱图,施加平滑参数,平滑点数必须是奇数,右击,Chromatogram-Display,选项,1.,右击,chromatogram,并选择,Display Options,Display,选项可以修改色谱图显示外观,(,如,Style,Color,Labels,Axis&Normalization),Xcalibur,当前设定的显示结果,右击,Spectrum-Spectrum List,（质谱图列表）,Spectrum List,包括质谱图中每个离子的,m/z,绝对强度和相对强度,右击,Spectrum-Scan Header,Scan Header,允许查看信息如,scan mode,ion injection time,scan time,等，和色谱上的每一次,Scan,相关联,（使用主工具栏上的箭头浏览每次,Scan,的信息）,右击,Spectrum-Tune and Instrument Methods,Tune,和,Instrument,方法包含在,Raw File,中。当选择,Instrument Method,，首先显示的是质谱方法，点击键盘上的向下键或主工具栏 键浏览液相泵和自动进样器的方法,右击,Spectrum-Spectral Subtraction,1.,对目标峰取平均质谱图,2.,右击,spectrum,选择,Subtract Spectra-2 Ranges,3.,在该峰前后拖动鼠标选择被扣除的区域,右击,Spectrum-Spectrum Ranges,1.,右击,spectrum,选择,Ranges,右击,Spectrum-Spectrum Ranges,这里同样可以设定,Subtract Spectrum,在图谱中添加备注,1.,添加文本,点击,Display,，选择,Annotate,2.,输入备注文本框,3.,点击激活的,Cell,添加该文本框,Chromatogram,拷贝,1.,到,Edit Copy Cell,拷贝当前激活的,Cell,2.Cell,可以贴到其他的,Office,程序,(Microsoft Word,Powerpoint,Excel,etc.),第十一章,定量处理流程,定量数据处理,Quantitative Processing,1.,数据处理方法建立,Processing Setup,输入已知化合物用来识别,设定峰检测,/,积分参数,选择校准,/,质量控制类型，水平，重量,选择先前色谱峰处理,2.,样品序列处理,/,重新处理,Sample Processing/Reprocessing,输入新的序列方法参数,确定校准文件和定标类型,处理,/,重新处理数据,3.,定量浏览器,Quan Browser,查看定量结果,评价标准曲线，质量控制和标识,使用不同参数重新计算峰面积,分析详细定量信息,定量处理建立,Xcalibur Homepage,点击,Processing Setup,按钮开始设置定量处理方法,定量选项,1.,点击,Options,3.,选择,LC,4.,选择,Calibration Options,5.,选择实验是内标法还是外标法,2.,点击,Chromatography By,打开一个原始数据帮助建立定量处理方法,1.,点击,File,2.,点击,Open Raw File,定量处理,Identification,1.,选择,并输入组分名,2.,选择,Detector type,和,Peak Detection algorithm,积分算法,3.,选择,scan filter,和,trace type,4.,点击,OK,更新,chromatogram,Chromatogram,根据,scan filter,和,trace type,更新,定量处理,Identification,1.,输入,Expected RT(min),Window(sec)=,组分洗脱允许的,RT,窗口范围,如果有内标，你可以把内标作为,RT Reference,*注,:,如果你使用的内标法,ISTD,必须首先设定，因为其他目标组分要参考该内标。,对于其他的组分,你可以选择,Adjust using,并 选择,ISTD,名称,.,2.,点击,OK,更新色谱图,定量处理,Detection,1.,点击,Detection,2.,改变积分参数得到,满意的积分效果,3.,点击,OK,更新色谱图,定量处理,-Calibration,内标建立,1.,点击,Calibration,2.,选择,ISTD,3.,输入内标数量和单位，也可忽略不设此项,定量处理,-Calibration,目标物建立,1.,选择,Target compound,如果使用,ISTD,在此选择内标,2.,选择校正曲线的权重,3.,对于校正曲线原点的处理,定量处理,Levels,1.,点击,Levels,2.,输入每个校正,Level,的名称,3.,输入每个校正,Level,的具体量,4.,输入每个质控,QC level,的名称,name,，