实验八血糖的测定.doc

实验　血糖的测定（葡萄糖氧化酶法）
【目的】
1. 了解葡萄糖氧化酶法测定血糖的原理，能进行血糖测定的操作。
2. 掌握血糖测定的临床意义。
【原理】
葡萄糖氧化酶 (GOD) 能将葡萄糖氧化为葡萄糖酸和过氧化氢。后者在过氧化物酶 (POD)作用下，分解为水和氧的同时将无色的4-氨基安替比林与酚氧化缩合生成红色的醌类化合物，其颜色的深浅在一定范围内与葡萄糖浓度成正比，在500nm波长处测定吸光度，与标准管比较可计算出血糖的浓度。反应式如下：

【器材】
试管、吸管、试管架、恒温水浴箱、分光光度计
【试剂】
1. 0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.0）　称取无水磷酸氢二钠8.67g及无水磷酸二氢钾5.3g溶于800ml蒸馏水中，用1mol/L氢氧化钠（或1mol/L盐酸）调节pH至7.0，然后用蒸馏水稀释至1L。
2. 酶试剂　称取过氧化物酶1200U，葡萄糖氧化酶1200U，4-氨基安替比林10mg，叠氮钠100mg，溶于上述磷酸盐缓冲液80ml中，用1mol/L NaOH调pH至7.0，加磷酸缓冲液至100ml。置冰箱保存，4℃可稳定3个月。
3. 酚溶液　称取重蒸馏酚100mg溶于100ml蒸馏水中（酚在空气中易氧化成红色，可先配成500g/L的溶液，贮存于棕色瓶中，用时稀释），用棕色瓶贮存。
4. 酶酚混合试剂　取上述酶试剂与酚溶液等量混合，4℃可以存放一个月。
5. 12mmol/L苯甲酸溶液　溶解苯甲酸1.4g于蒸馏水约800ml中，加温助溶，冷却后加蒸馏水至1L。
6．葡萄糖标准贮存液（100mmol/L） 称取已干燥恒重的无水葡萄糖1.802g，溶于12mmol/L苯甲酸溶液约70ml中，并移入100ml容量瓶内，再以12mmol/L苯甲酸溶液加至100ml。
7.葡萄糖标准应用液（5mmol/L） 吸取葡萄糖标准贮存液5.0ml 于100ml 容量瓶中，加12mmol/L 苯甲酸溶液至刻度。
【操作】
取3 支试管,编号，按下表操作。
表 血糖测定操作步骤
加入物 (ml)
空白管
标准管
测定管
血清
－
－
0. 2
葡萄糖标准液
－
0. 2
－
蒸馏水
0. 2
－
－
酶酚混合液
2.0
2.0
2.0

混匀，置 37 ℃水浴中保温 15分钟，在波长 505nm 处比色，以空白管调零，读取标准管及测定管吸光度。　
【计算】血清葡萄糖(mmol/L) =( 测定管吸光度/标准管吸光度) × 5.55
【正常参考范围】
　　3.9～6.1mmol/L
【临床意义】
1. 生理性高血糖 可见于摄入高糖饮食或注射葡萄糖后，或精神紧张、交感神经兴奋，肾上腺分泌增加时。
2. 病理性高血糖
　　⑴糖尿病：病理性高血糖常见于胰岛素绝对或相对不足的糖尿病患者。
　　⑵对抗胰岛素的激素分泌过多：如甲状腺功能亢进、肾上腺皮质功能及髓质功能亢进、腺垂体功能亢进、胰岛α-细胞瘤等。
　　⑶颅内压增高：颅内压增高（如颅外伤、颅内出血、脑膜炎等）刺激血糖中枢，出现高血糖。
　　⑷脱水引起的高血糖：如呕吐、腹泻和高热等也可使血糖轻度增高。
3. 生理性低血糖 饥饿或剧烈运动、注射胰岛素或口服降血糖药过量。
4. 病理性低血糖
　　⑴胰岛素分泌过多：由胰岛β细胞增生或胰岛β细胞瘤等引起。
　　⑵对抗胰岛素的激素分泌不足：如腺垂体功能减退、肾上腺皮质功能减退和甲状腺功能减退等。
　　⑶严重肝病患者：肝贮存糖原及糖异生功能低下，不能有效调节血糖。
【结果及分析】

【思考题】
　　1. 血糖有哪些来源和去路，机体是如何调节血糖浓度恒定的？