遗传病的诊断.pptx

,#,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,遗传病的诊断,遗传病的诊断,第1页,遗传病诊疗,指医生对某病是否为遗传性疾病作出诊疗,是开展遗传咨询和预防工作前提,遗传病的诊断,第2页,遗传病诊疗分类,依据遗传病诊疗时期不一样，可分为,:,产前诊疗,*,症状前诊疗,*,现症病人诊疗,遗传病诊疗标准,普遍性标准,特殊伎俩,遗传病的诊断,第3页,第一节 遗传病临床诊疗,一、病史、症状和体征,遗传病临床诊疗与普通疾病诊疗步骤基础相同，包含听取病人主诉、问询病史、查体等,遗传病的诊断,第4页,（一）病史,除应了解普通病史外，还应着重采集与遗传病家族聚集现象相关以下项目：,家族史：,整个家系患同种疾病病史，能充分反应患者父系和母系各家族组员发病情况,婚姻史：,结婚年纪、次数、配偶健康情况及是否为近亲婚配,生育史：,生育年纪、儿女数及其健康情况，有没有流产、死产、早产史、畸胎等,遗传病的诊断,第5页,（二）症状与体征,智力低下伴有眼间距宽、眼裂小、外眼角上斜、口半开、伸舌、流涎等,先天愚型特征,而性腺发育不全或生殖能力下降、继发性闭经、行为异常则可疑为,性染色体病,正常出生婴儿，发育到,3,4,个月，假如其尿液、汗液有一个特殊腐臭味，智力发育落后于同龄小孩，同时伴有毛发变黄、肤白而细腻、虹膜黄色、易激动、肌张力高、貌似猿猴，可疑为,苯丙酮尿症,遗传病的诊断,第6页,二、系谱分析,有利于区分,单基因病,和,多基因病,有利于区分一些表型相同遗传病以及因为遗传性而出现,不一样遗传方式,遗传病的诊断,第7页,系谱分析时应注意事项,要注意系谱系统性、准确性、完整性,碰到“隔代遗传”时，要注意区分是显性遗传病外显不全，还是隐性遗传所致,当系谱中除先证者外，找不到其它患者，呈散发觉象时，须认真分析是常染色体隐性遗传所致，还是新基因突变所致,显性与隐性相对性,遗传病的诊断,第8页,三、生物化学检测,基因突变引发单基因病往往表现在酶和蛋白质,质和量改变或缺如,酶和蛋白质定性定量分析,是诊疗单基因病或分子代谢病主要方法,遗传病的诊断,第9页,三、生物化学检测,代谢产物检测,酶缺点,造成一系列生化代谢紊乱，从而使代谢中间产物、底物、终产物旁路代谢产物发生改变,检测一些,代谢产物质和量,改变，可间接反应酶改变而作出诊疗,酶和蛋白质分析,基因突变引发单基因病主要是特定,酶和蛋白质,质和量,改变结果,对酶活性改变和蛋白质含量测定是确诊一些单基因病主要方法,遗传病的诊断,第10页,第二节 细胞遗传学检验,一、染色体检验：,染色体检验亦称,核型分析,是确诊染色体病主要方法,染色体检验标本起源：,主要取自外周血、绒毛、羊水中胎儿脱落细胞和脐血、皮肤等各种组织,遗传病的诊断,第11页,有显著智力发育不全、生长迟缓或伴有其它先天畸形者,夫妇之一有染色体异常,家族中已经有染色体或先天畸形个体,多发性流产妇女及其丈夫,原发性闭经和女性不育症,无精子症男子和男性不育症,染色体检验指征,遗传病的诊断,第12页,两性内外生殖畸形者,疑为先天愚型患儿及其父母,原因不明智力低下伴有大耳、大睾丸和（或）多动症者,35,岁以上高龄孕妇（产前诊疗）,遗传病的诊断,第13页,二、性染色质检验,优点：方法简单，主要用于疑为两性畸形或性染色体数目异常疾病诊疗或产前诊疗，有一定价值，但确认仍需依靠染色体检验,三、染色体原位杂交,遗传病的诊断,第14页,第三节 皮肤纹理分析,利用皮肤纹理分析作为一些染色体病一个辅助诊疗方法。皮肤纹理自胎儿,6,个月时形成，终生不变,一、人类正常皮纹,皮纹主要包含指纹、掌纹、掌褶纹和足底纹,1.,指纹：,手指端部皮肤纹理为指纹。主要分弓形纹、箕形纹和斗形纹,遗传病的诊断,第15页,指纹类型,特 点,分 类,弓形纹,由平行排列弓形嵴纹从一侧走向另一侧，中间隆起呈弓形；无三叉点,简弓 帐弓,箕形纹,嵴纹从一侧起始发出后，斜向上弯曲后又回到原侧，形似簸箕状；普通在箕头下侧有一个三叉点,正箕（尺箕）反箕（桡箕）,斗形纹,其纹理大多呈环形、螺形、囊形；普通有两个三叉点,环形斗 螺旋斗 双箕斗,遗传病的诊断,第16页,2.,掌纹：,是手掌中皮纹。掌纹 观察分析时普通应包含,5,个方面。大鱼际区，位于拇指下方。小鱼际区，位于小指下方。,指间区，从拇指到小指指根部间区域。依次分为四个小区,(,1,、,2,、,3,、,4,),。指基三叉点（,a,、,b,、,c,、,d,），分别位于第,2,、,3,、,4,、,5,指基部。四条根本（,A,、,B,、,C,、,D,），分别由指基三叉点向手心端引出线。,遗传病的诊断,第17页,轴三叉点（,t,）：在大小鱼际交联底端，掌面基部正中，大约在无名指直下。对于成年人而言，,t,三叉点距离腕线约,1.4cm,处。,atd,角，指基三叉点,a,、,d,与,t,三叉点连线所成夹角，可用量角器测定。我国正常人群,atd,角均值为,41,。,atd,角大小也能够反应,t,三叉点位置，,atd,角越大，则轴三叉点位置越高、越远离腕线，向掌心方向移动。若,atd,角小于,45,，轴三叉点以,t,表示；,atd,角在,45,56,之间，轴三叉点以,t,表示，多见于先天愚型患者；若,atd,角大于,56,，轴三叉点以,t,表示，多见于,13,三体综合征患者。,遗传病的诊断,第18页,3.,褶纹：,是手指和手掌关节弯曲活动处显著可见褶线。指褶纹：正常人除拇指有一条指褶纹外，其余各指都有两条指褶纹。先天愚型患者和,18,三体综合征患者第五指可只有一条指褶纹。掌褶纹：普通人手掌中普通有三条大褶纹：远侧横褶纹、近侧横褶纹和大鱼际纵褶纹。远侧横褶纹和近侧横褶纹不相连接。,遗传病的诊断,第19页,四种变异类型,遗传病的诊断,第20页,4.,足底纹：,在脚趾、脚掌皮纹中，研究得最多且有临床意义主要是拇趾球部纹理，其中基础纹理型也分为弓、箕、斗三种，并按皮纹胫侧、腓侧、近远侧走向分为七个类型以及复合纹理，其中胫弓型多见于先天愚型患者中,遗传病的诊断,第21页,二、遗传病患者皮肤改变,染色体病病人皮肤纹理含有值得注意特征性改变，在遗传病诊疗中含有一定诊疗价值,皮纹分析时要注意取样方法，以取得准确、清楚资料,正常人也可出现“异常”皮纹，故皮纹分析仅可作为一些遗传病诊疗初筛伎俩,遗传病的诊断,第22页,常见染色体病患者皮纹特征,病例,指纹,掌纹,拇趾球部纹理,5p-,斗形纹百分比大 TFRC高,t,双侧或单侧通贯手,正常,13,三体,弓形纹较多,TFRC,低,t 2/3,通贯手,42,腓弓,18,三体,弓形纹百分比极高 TFRC极低甚至为0,25,为,t40,第,5,指,1,条指褶,正常,21,三体,尺侧百分比高60 TFRC低第4或第5指桡箕,t50,通贯手 第,5,指,1,条指褶,胫弓,45,，,X,大箕或小斗,TFRC,高,t,异常大斗 或箕形纹,47,，,XXY,弓形纹较多,正常,正常,遗传病的诊断,第23页,概念：,应用分子生物学方法检测受检者遗传物质结构,(DNA),或表示水平,(mRNA,、蛋白质,),改变而作出或辅助临床诊疗技术,特点,针对性强,特异性强、灵敏度高,应用范围广,无组织和发育特异性,第四节 基因诊疗,遗传病的诊断,第24页,基因诊疗策略,基因诊疗可依据,致病基因,及,突变性质,是否已知来制订其对应策略,基因诊疗策略,直接基因诊疗,间接基因诊疗,遗传病的诊断,第25页,直接基因诊疗,概念：,直接检测致病基因本身结构性改变,（如单个碱基缺失、插入、置换；片段缺失、易位、重复以及动态突变等）,适用范围：,致病基因,序列已知,且基因,结构异常已知,遗传病诊疗,特点：,1,、,无须搜集家系标本、方法简单、可靠,（首选方法）,；,2,、,因为,遗传异质性,以及多数遗传病基因异常尚属未知，故当前能直接诊疗病种虽日益增多，但依然比较有限,遗传病的诊断,第26页,间接基因诊疗,概念：,经过对受检者及其家系进行,连锁分析,，以推断受检者是否取得了带有致病基因染色体，称为间接基因诊疗,适用范围：,致病基因尚属,未知、或致病基因已知但异常未知,遗传病诊疗,特点：,不需了解致病基因结构，适合用于大多数由未知基因缺点或致病基因已知但异常未知遗传病诊疗,家系搜集繁琐、常因为家系不够完整、标识与致病基因重组、标识杂合度有限而难以完成,遗传病的诊断,第27页,常见基因诊疗技术,核酸分子杂交,Southern blot,Northern blot,斑点杂交,原位杂交,PCR,技术*,DNA,测序,基因芯片技术,遗传病的诊断,第28页,常见基因诊疗技术,其它常见技术,PCR-,限制性片段长度多态性分析（,PCR-RFLP,）,扩增片段长度多态性分析（,Amp-FLP,）,等位基因特异性寡核苷酸杂交（,ASO,、,PCR-ASO,）,单链构象多态性（,PCR-SSCP,）,变性高效液相色谱（,DHPLC,）,检测未知突变,遗传病的诊断,第29页,三、基因诊疗应用,（一）突变型遗传病,直接,基因诊疗,镰形细胞贫血基因诊疗,1,、,Southern blot,珠蛋白链基因第,6,位密码子发生突变,G,A,GG,T,G,谷氨酸,缬氨酸,遗传病的诊断,第30页,已知限制酶,Mst 1,识别序列（,CCTNAGG,）,CCTG,A,GG,CCTG,T,GG,突变后不能识别，,酶切位点消失，限制酶切片段长度发生改变,遗传病的诊断,第31页,2.ASO,探针诊疗,已知突变基因部位和性质，合成两条,32,P,标识寡核苷酸探针，进行斑点杂交,探针,1,：,能与正常,稳定杂交,探针,2,：,能与异常,S,稳定杂交,遗传病的诊断,第32页,等位基因特异性寡核苷酸探针,（,Allele-specific-oligonucleotide,；,ASO,）,遗传病的诊断,第33页,斑点杂交结果,/,/,/,正常探针,突变探针,遗传病的诊断,第34页,（二）缺失,型遗传病,直接,基因诊疗,地中海贫血基因诊疗,BamHI,BamHI,2,1,2,14 kb,10 kb,probe,基因,不一样程,度缺,失可引,起不一样,类型,地中,海贫血,遗传病的诊断,第35页,Southern blot,检测结果,/-/-/-/-,14kb,10kb,正常 缺,1,缺,2,缺,3,缺,4,遗传病的诊断,第36页,杜氏,/,贝氏进行性肌营养不良缺失诊疗,exon bp N P,Pro 535,3 410,43 357,50 271,13 238,6 202,47 181,60 139,52 113,遗传病的诊断,第37页,间接基因诊疗实例,1 2,？,1 2 3 4 5,kb,5.7 ,3.4,2.4 ,成年型多囊肾病,遗传病的诊断,第38页,思索题,1,什么是症状前诊疗？怎样进行症状前诊疗？,2,什么是产前诊疗？怎样进行产前诊疗？产前诊疗适应征有哪些？,3,基因诊疗基础方法有哪些？各方法基础原理是什么？,4,染色体检验适应征有哪些？,5,举例说明怎样对点突变型单基因病进行基因诊疗？,遗传病的诊断,第39页,基因诊疗是第四代试验室诊疗技术，直接以,病理基因,为对象，属病因学诊疗,前三代分别为,细胞学,、,生化指标,、,免疫学,。,共同点：,以疾病表型改变为诊疗依据。因为表型改变通常在病程中晚期才出现（且很多情况下不是特异），故不能处理早诊、早治需求,遗传病的诊断,第40页,基因诊疗采取核酸分子杂交、,PCR,扩增、,DNA,测序等,灵敏度高,、,特异性强,分子生物学技术，可从人类庞大基因组中检测到,单拷贝基因,，甚至,单个碱基,改变,遗传病的诊断,第41页,遗传病,基因及异常已知,基因已知但异常未知,基因未知遗传病,产前诊疗、症状前诊疗、现症病人诊疗,肿瘤,感染性疾病：,定性和定量检测病原菌或病毒,法医学判定：,亲子判定、,DNA,指纹,遗传病的诊断,第42页,基因诊疗针正确是被检测致病基因；基因是否处于表示状态并不主要。所以，,取材可不局限于病变组织细胞,遗传病的诊断,第43页,Southern,印迹杂交,遗传病的诊断,第44页,基础过程类似于上述,Southern,法,提取,RNA,样本,RNA,变性琼脂糖凝胶电泳分离转移至膜探针（标识,DNA,或,RNA,）与之杂交显影或显色检测信号,Northern法可用于检测组织细胞中,总,RNA,或,mRNA,Northern,印迹杂交,遗传病的诊断,第45页,点样,Probe-,32,P,检测,A,B,1 2 3 4,斑点杂交,遗传病的诊断,第46页,荧光原位杂交,遗传病的诊断,第47页,聚合酶链反应（,PCR,）,遗传病的诊断,第48页,遗传病的诊断,第49页,多重,PCR,在一个,PCR,体系中加入数对,PCR,引物，覆盖区域不重合用于检测同一基因多个外显子缺失,RT-PCR,以,mRNA,为模板，经逆转录酶合成,cDNA,使微量,mRNA,快速扩增，提升,mRNA,检出灵敏度,用于研究基因表示,遗传病的诊断,第50页,DNA,序列分析,即基因测序，,最确切、最直接,基因诊疗方法,常见方法,:,1,、化学裂解法,2,、双脱氧末端终止法,遗传病的诊断,第51页,