新辅助热化疗对乳腺癌微血管密度和血清VEGF的影响.doc

新辅助热化疗对乳腺癌微血管密度和血清
VEGF 的影响

作者：蒋金恒包国强何显力高德明马庆久

【摘要】目的:研究新辅助热化疗对乳腺癌患者肿瘤微血管密度

(MVD)、血清血管内皮细胞生长因子(VEGF)的影响.方法：应用免疫组

织化学技术及酶联免疫吸附测定法（ELISA） ，观察新辅助热化疗和新

辅助化疗后肿瘤 MVD 的变化,检测乳腺癌患者接受新辅助热化疗和新

辅助化疗前后血清 VEGF 含量.结果：新辅助化疗组与对照组相比，MVD

明显下降［(47.4±13.3)个/HPvs（81.7±17.6）个/HP，P<0.05］ ；

新辅助热化疗组与新辅助化疗组及对照组相比， MVD 下降更明显

［(26.8±5.9)个/HPvs(47.4±13.3)个/HP 及（81.7±17.6）个/HP，

P<0.05］.与对照组相比，新辅助化疗和新辅助热化疗后血清 VEGF

含量均明显降低［(315±154)ng/Lvs（156±53）ng/L，P<0.05；

（307±156）ng/Lvs（140±47）ng/L，P<0.05］ ；新辅助热化疗与

新辅助化疗后 VEGF 含量变化两组间差异无统计学意义(P>0.05).

结论： 新辅助热化疗和新辅助化疗后乳腺癌患者 MVD 及血清 VEGF 水平

均明显下降.新辅助热化疗组较新辅助化疗组 MVD 下降更为明显.

【关键词】乳腺肿瘤；化学疗法，辅助；肿瘤微血管密度；血管

内皮细胞生长因子

0 引言

肿瘤的生长、浸润、转移及复发与肿瘤血管形成密切相关［1］ ，

1

肿瘤微血管密度(microvesseldensity,MVD)是衡量肿瘤血管形成程度

的 标 志 . 而 血 管 内 皮 生 长 因 子

(vascuiarendotheliaicellgrowthfactor， VEGF)在肿瘤血管形成中起

重要作用［2］.新辅助热化疗对乳腺癌患者血清 VEGF 含量与 MVD 的影

响研究国内报道甚少.我们通过检测乳腺癌患者新辅助热化疗、 新辅助

化疗前后血清 VEGF 及肿瘤组织 MVD 的变化， 探讨新辅助热化疗对乳腺

癌血管生成的影响及在乳腺癌临床治疗中的意义.

1 材料和方法

1.1 材料选择 2004/2007 经我院病理检查证实为晚期乳腺癌女性

患者 60 例.人 VEGFELISA 试剂盒（森雄生物公司） CD34mAb，免疫组 ；

化染色试剂盒，DAB 染色剂（北京中杉金桥生物技术有限公司）.

1.2 方法

1.2.1 实验分组按术前治疗方案不同分为对照组，新辅助化疗组

和新辅助热化疗组，每组 20 例，三组患者临床病理资料无统计学差异

（表 1）.①新辅助化疗组：术前行新辅助化疗方案，采用多烯紫杉醇

+阿霉素+环磷酰胺方案，共完成 2 个周期治疗；②新辅助热化疗组：

术前行新辅助热化疗方案， 化疗方案同新辅助化疗组.热疗采用脉冲 其

聚焦微波加热治疗系统（南京启亚医疗设备有限公司，脉冲峰值功率

6000～32000W，工作频率 2.45GHz，波长 12cm，温度控制范围(42.5

±1.0)℃.热化疗于化疗药物开始输注后 0.5～1h 进行，每次热疗

60min.化疗 1 个周期共联合 2 次热疗，共完成 2 个周期治疗；化疗方

案及周期同第 1 组；③对照组术前不接受任何治疗.

2

1.2.2 标本制作术中切取新鲜乳腺癌组织，甲醇固定，乙醇逐级

脱水，石蜡包埋，然后制成组织切片.取外周静脉血 3mL（新辅助热化

疗和新辅助化疗患者血清标本于第 2 疗程化疗结束后 1d 抽取， 对照组

于术前 1d 抽取）.室温自然凝固后，2000r/min，离心 10min，分离血

清，采集血清样本，置-20℃保存.表 1 乳腺癌 3 组临床病理资料

1.2.3 组织 MVD 检测 MVD 采用免疫组化法检测，将所有待染石蜡

切片，脱腊至水，PBS 振洗 3min×3；30mL/LH2O2 去离子水封闭

30min.PBS 振洗 3min×3；3mol/L 尿素消化 30min，柠檬酸修复，PBS

振洗 3min×3；用滤纸将片子擦干后，置于湿盒内，37℃正常血清封

闭 30min；滴加一抗（3mg/L） 放入冰箱 4℃过夜；d2，取出片子，37℃ ，

复温 30min，PBS 振洗 3min×3；滴加二抗，37℃于湿盒内孵育 30min，

PBS 振洗 3min×3；滴加 ABC 复合物，37℃于湿盒内孵育 30min，PBS

振洗 3min×3；DAB 显色 20min，自来水充分冲洗，苏木素淡染，乙醇

逐级脱水，透明，封片.结果判定（微血管定量方法）参照 Weiderner

的方法，在 100 倍光镜下挑选微血管分布最密区域，200 倍视野下计

数 5 个不重复视野中被 CD34 染成棕色的血管数目， 其均值作为 MVD. 取

微血管的判定不以是否形成管腔或管腔内有无红细胞为记数单位，而

是以与邻近的微血管明显分离的染色阳性的单个内皮细胞簇均作为一

个血管计数，凡管腔大于 8 个红细胞，带较厚肌层的血管均不计数.

1.2.4 血清 VEGF 检测血清 VEGF 采用酶联免疫吸附测定法检测，

VEGF 含量的检测及结果计算按照 VEGFELISA 试剂盒说明书进行. 统计

学处理：应用 SPSS11.0 统计软件对数椐进行统计学分析，数据以 x±

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