银耳多糖的制备与分析.doc

银耳多糖的制备与分析
一、实验目的
1、了解银耳多糖制备的基本原理。
2、掌握糖类物质提取的基本操作技术。
二、实验原理
银耳是真菌的一种，是我国传统的珍贵药材之一，具有滋阴润肺、益胃生津等功效。常用于治疗虚劳咳嗽、阴伤燥咳、虚热口渴等症。
银耳多糖是银耳的主要药效成分，银耳中含有的多糖类物质则具有明显提高机体免疫功能，抗炎症和抗放射等作用。
1、制备（提取）原理：银耳多糖易溶于水，但不溶于乙醇。因此本实验采用沸水抽提、氯仿-正丁醇法除蛋白和乙醇沉淀分离制得银耳多糖粗品。然后再进行定性分析。
2、分析（鉴定）原理：
Molish反应
多糖在浓硫酸或浓盐酸的作用下，脱水形成糠醛及其衍生物，其与α-萘酚反应，作用生成紫色的化合物。
原理是羰基与酚类进行了缩合，这样，糖与浓酸作用后，再与α-萘酚反应，就能生成紫色的化合物。
因此，阴性反应证明没有糖类物质的存在；而阳性反应，则说明有糖存在的可能性，需要进一步通过其他糖的定性试验才能确定有无糖的存在。
斐林试剂
质量浓度为0.1g/mL的氢氧化钠溶液和质量浓度为0.05g/mL的硫酸铜溶液配制而成，二者混合后，立即生成淡蓝色的氢氧化铜沉淀。氢氧化铜与加入的葡萄糖在加热的条件下，能够生成砖红色的氧化亚铜沉淀，而葡萄糖本身则氧化成葡萄糖酸。
用斐林试剂鉴定还原糖时，溶液的颜色变化为：浅蓝色棕色砖红色（沉淀）。
三、实验试剂和器材
1、银耳子实体
2、乙醇
3、乙醚
4、丙酮
5、Ssvag试剂： 氯仿：正丁醇=
6、Molish试剂：取5g α-萘酚用95%乙醇溶解至100mL，临用前配置，棕色瓶保存。
7、斐林试剂：甲液质量浓度为0.1g/mL的氢氧化钠溶液
乙液质量浓度为0.05g/mL的硫酸铜溶液
临用时临时配置，将4～5滴乙液滴入2mL甲液中，配完后立即使用。
仪器和器材
烧杯 试管 分液漏斗 容量瓶 电炉 石棉网 纱布 离心机 真空干燥箱 电子天平

四、实验步骤
（一）制备步骤
1、 取银耳子实体10g加水300mL，直火提取1h，提取过程中不断用玻棒搅拌。双层纱布过滤，提取液浓缩至100mL左右。
2、 浓缩液加入等体积的Sevag试剂去蛋白，3000rpm离心10min。
3、 上清液加入3倍95%乙醇，搅拌均匀后，3000rpm离心10min（或静止1h）。
4、 沉淀用无水乙醇洗涤2次，乙醚洗涤1次，真空干燥，得因而多糖粗品。
（二）分析步骤
1、称取银耳多糖粗品20mg，加水溶解并定容至100mL，作为样品制备溶液供试。
2、Molish反应
取试管，加入多糖溶液1mL，然后加入两滴Molish试剂，摇匀。倾斜试管，沿管壁小心加入约1mL浓硫酸，切勿摇动，小心竖直后仔细观察两层液面交界处的颜色变化。用水代替糖溶液，重复一遍，观察结果。
3、 斐林试剂
取试管，将4～5滴乙液滴入2mL甲液中。摇匀后，分别加入4滴待测糖溶液，置于沸水浴中加热2～3min，取出冷却，观察沉淀和颜色变化。