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食用菌污染原因分析.doc

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菌种生产杂菌污染的原因分析 1.灭菌不彻底 这一原因特点是导致的污染率高、发生早,出现污染的部位不规则——培养基上中下均可出现杂菌菌落。这类污染常在接种培养3~5天后发生。一般杂菌的菌丝体与孢子经过高压121~1270C保持1.5~2.5h均能杀死。消毒不彻底引起的污染往往是由于没达到规定的温度与时间,或者是高压灭菌时冷空气没放尽所致。另外,装锅时摆放太紧密,通气性不好,灭菌锅发生漏气,温度、压力达不到所需数值也可导致杂菌产生。 2.培养料问题 拌料时主料与辅料未充分拌匀;水分含量不足或培养料成团未散开,吃水不透造成灭菌死角;或者培养料不新鲜,本身带杂。 3.母种带杂 菌种本身不纯。无论是母种、原种还是栽培种,都要使用纯种接种培养。如果用于繁殖扩大的菌种本身不纯,那么制备的新菌种也必然受到污染。污染常常表现在接种菌块之中或周围,呈小批量的规模,如果此时不能及时发现,危害将进一步加大。有时生产的一批菌种中。集中在一起的菌种都出现污染,且都发生在接种块周围则说明菌种带杂。因此,在生产母种时,要经常检查,对污染物及时清理,防止扩大时进一步污染。 4.接种污染 这类污染的特点是杂菌菌落先从菌种块上长出.杂茵的种类一致,通常成批量发生,且出现早,接种3-5天内就可肉眼鉴别。接种室或操作台消毒不彻底.接种时操作不严格,将杂菌孢子带入瓶中,这种污染常分散出现于菌种表面。如一支被污染的母种会造成扩接后的4—6瓶原种全部污染:一瓶被污染的原种(有时肉眼难以发现)造成扩大后的30~50瓶栽培种的污染。这类污染要靠严格检查菌种质量来克服,不但使用前要认真检查.而且在培养全过程中要连续检查和观察.确保菌种纯度。 5.接种操作污染 这类污染一般发生在接种口处.较接种物带菌和灭菌不彻底造成的污染发生晚.一般接种后7d左右出现。其污染源主要是:接种室(箱)空气消毒不彻底;菌种瓶(袋)冷却时附在表面的杂菌;接种人员自身洁净度不良:违反接种操作规程等。操作不规范造成的菌种污染,杂菌不仅在接种块周围,还常出现在其他料面的表面,呈花花点点状,不一定集中一处,且无规律。这些操作技术包括灭菌操作、灭菌后无菌处理、接种过程无菌操作、接种后的培养条件控制等。需注意以下技术环节: 5.1不使棉塞打湿灭菌码放时.棉塞切勿贴触锅壁;灭菌结束后要自然冷却,不可强制冷却;当冷却至一定程度后微开锅门.让锅内的余热把棉塞上的水气蒸发;灭菌时,可同时灭菌一些棉塞,留接种时换下打湿的棉塞。 5.2洁净冷却灭菌后的菌种瓶(袋)不能直接放在有尘土的地面上冷却:冷却窒使用前可用紫外线灯和喷雾相结合进行空气消毒。 5.3严格消毒接种室(箱)使用前须严格消毒;接种操作人员须在缓冲间穿戴专用衣帽(定期洗涤); 接种前要消毒双手。 5.4科学操作接种前做好一切准备工作。一次接种不间断。一气呵成:接种过程要少搬动、少说话、小动作,以减少空气震动和流动;接菌室(箱)内绝对无菌的只有酒精灯火焰周围很小的范围.接种操作应尽量在这个小区内完成;拔棉塞时,不可用力直线上拔.而应旋转式缓劲拔出,避免外界空气突然进入而带入杂菌;接种室(箱)每次的接种量不宜过大;接种时.接种工具一旦触碰了非无菌物品,如种瓶外壁、操作台面等.不要再用来取种.须重新火焰灼烧灭菌。 6.设备设施简陋引起灭茵后无菌状态的改变 本来灭菌后的菌种瓶(袋)已达无菌状态.但灭菌后的冷却和接种环境达不到洁净无菌.生产设备和生产环节分散.又往往忽略场地的大环境卫生,导致了污染。冷却过程中.随着料温的降低,瓶(袋)内气压降低.杂菌孢子随其内外气压的动态平衡向瓶(袋)内移动、定植。瓶袋外附有较多的灰尘(附着杂菌孢子)。成为接种操作污染的污染源。这种类型接种后污染率较低.随着培养时间的延长.污染率逐渐增高。通常大量发生在接种10d以后.甚至培养基表面已长满菌丝后,才陆续出现污染。 7.培养室及周围环境差 培养室温度太高,培养室相对湿度太大,超过70%以上利于杂菌滋生;培养室通气不良,有利于某些厌氧菌发生;培养室本身不干净,消毒不严,空气中本身带杂。接种后污染率低,随着时间推移污染率逐渐增高,这就是由培养环境造成的污染。如培养环境过于潮湿、污染源严重污染培养室、菌瓶棉塞潮湿、苗袋破裂、虫鼠危害等。 综合控制措施 1.灭菌要彻底 高压灭菌上压前放尽冷空气,上压后保持规定的压力与时间,高压灭菌应在锅内温度上升到121℃后再保持1.5~2.5h。高压灭菌,锅内瓶放置时应留一定的空隙,利于空气流动。灭菌彻底高压灭菌以147.1千帕,保持2小时,常压灭菌要求4小时内温度达到100℃后,持续不低于16~18小时的灭菌时间,中间不降温。 2.灭菌容量和堆放方式 用蒸汽锅炉送入蒸汽的高压灭菌锅.要做到锅炉汽化量与锅体容积相匹配,自带蒸汽发生器的燃煤、燃油或电热的高压灭菌锅.以每次容量200~500瓶(750lllL)为宜.常压灭菌灶以每次容量不超过1000瓶(750mL)为宜。容量增大。灭菌时间要适当延长。锅内被灭菌物品的堆放形式对灭菌效果影响显著.特别是以塑料袋为容器时.这种影响更大。因为塑料袋受热后变软.如果装料不紧,叠压堆放,极易把升温前留有的间隙充满.不利于蒸汽的流通和升温,影响灭菌效果。塑料袋摆放时.应以叠放3~4层为度.不可过量叠压。锅大时要使用搁板。有条件的最好使用铁筐.装筐灭菌。 3.精制培养料 用于制作原种的培养料原料要新鲜,成团、结块的料要打碎,难吸水的培养料应先用足够的水拌湿,然后充分拌匀。培养料配制后要尽快装袋,间隔时间越长,越引起易引起杂菌污染。培养料中拌入0.1%-0.2%的多菌灵可湿性粉剂。可抑制木霉和青霉的生长。用高压灭菌,拌料后要及时装瓶(袋),上锅灭菌,搁置时间不宜超过10h。 4.培养基的保管 接完种的培养基要及时放入清洁的、温度合理的培养室中。培养室最好紧靠接种室。这样能尽量减少再污染的机会,使菌丝能迅速恢复生长。培养室的温度要因食用菌种类不同而不同,一般情况下,茶树菇和鸡腿菇的最适宜培养温度均为20℃-28℃、滑菇为18-2()℃、黑木耳为25-28℃。培养5-7天后,要及时检查,挑出已经感染的菌种,轻拿轻放到远离菌种厂的指定位置,以防止杂菌弹射孢子,污染培养室环境。 5.选择优良母种 严格挑选用于扩大生产的菌种,原料要求不霉烂变质。任何疑点都不可姑息.确保接种物的纯度。母种应尽量采用生活力强、菌龄适宜、抗逆性强的优良菌株。绝对不能用病虫害侵入的菌种。菌种纯化菌种从母种到原种,再到栽培种的繁殖过程,都要严格执行无菌操作规程;认真检查质量,菌种纯度要求100%,方可使用。 6.接种时严格操作规程 提高从业人员技术素质,规范操作:生产场地要定期清洁、消毒.保持大环境的整洁状态。接种操作前,用75%的酒精棉球擦手.接种工具也要严格消毒,在火焰上操作要熟练、敏捷。 7.无菌操作 严格操作接种室、接种帐、接种工具、接种人员的手臂等都要严格消毒。接种动作要快,达到快解 袋、快接种、快扎口。一批菌袋未接完,人员不要进出接种室。每个操作环节都要严格按无菌操作规程进行,进入接种室后要少走动、少说话。接种环境清洁,接种室(箱)要密封和严格消毒。接种用具保持清洁,用前消毒处理。接种室消毒应严格,并加装紫外线杀菌灯。科学管理发菌室干净清洁,做好消毒杀虫。 8.降低培养室的空气湿度 空气湿度和杂菌的发生有密切的关系。空气湿度大,杂菌感染率高;湿度低,感染率也低。当其他条件相同时,培养室空气湿度80%左右时,杂菌感染率为5%,当空气湿度增加到90%H~,感染率就上升到15%。它们之间有相互关联又相互制约的关系。第一,空气湿度高,空气中的各种杂菌孢子就容易萌发生长,不断繁殖,传播。而菌种生产上用的无棉盖,在空气湿度较高的条件下,可以迅速通过无棉盖向瓶内伸展造成感染。第二,环境中杂菌孢子增加后,接种时杂菌感染的机会也随之增多。为此,生产上应十分重视降低室内空气湿度。最适宜的空气湿度是65%。降低湿度的方法,每天通风换气,但当天气多雨潮湿,更要加大通风,一定做到温度、湿度、空气三者的相互关系。2.4.2 注意环境卫生降低杂菌孢子密度,培养室及工作场所周围必须保持清洁,保持地面平整,干燥。室内一旦发现感染杂菌的瓶子应及时清除,定期进行喷药灭菌,以降低杂菌密度。尤其是高温多雨的季节更需注意。喷药次数一般是一周喷1-2次,可以喷来苏尔,或甲醛,或石炭酸。最好是交替使用。 9.环境清洁干燥 净化环境严格按照无公害环境条件卫生消毒处理;培养室、冷却室,应与原料仓库、菇房、配料场保持一定距离;周围环境应尽量清除污染源。如畜舍禽棚、化粪池、污水坑、垃圾场、废料堆等;并做好日常的卫生清洁和定期消毒。 工作结束后,立即将台面收拾干净,不留残物。培养室要通风干燥,启用前清扫、消毒。培养菌种期间,每天要适当通风。当空气湿度大于70%H寸,要用吸湿机、空调机或用生130石灰、木炭等降低室内湿度。定期用杀虫或杀菌药剂消毒,同时也应注意防鼠。 10.药剂防治 菌床培养料上或菌袋两端发生少量绿霉时,用0.1%甲基托布津、0.1%~0.2%代森锌、0.1%~0.2%多菌灵或浓石灰水上清液涂抹或喷洒被害部位,可防止分生孢子扩散蔓延。若菌床或菌袋出现绿霉已深入到料内,应及时用0.2%多菌灵液浸纱布盖住,然后轻轻挖掉已污染的料块,在挖除后的料面喷0.2%多菌灵或其他杀菌剂,也可涂抹浓石灰乳,再用新鲜料或菌种填平,可控制其发展。对于污染严重的菌袋可深埋处理。 11.定期检查 严格按照菌种生产的工艺技术流程进行选料、配料、分装、灭菌、冷却、接种、培养和质量检测。接种后5-7d检查1次。污染杂菌的,要及时拣出处理,应ib,L,放在盘内,盖严拿出室外深埋或烧掉,并且分析原因,加以控制;搬动培养瓶(袋)要小心轻放;预防老鼠、蟑螂等为害带入杂菌。及时处理一旦发现杂菌污染,及时搬离培养室,受污染的菌种,无论污染面大小,一律淘汰,不得保留。总之,食用菌原种污染是食用菌生产中的一项严重灾害,它将直接影响食用菌的产量和质量,造成严重的经济损失。因此,在原种生产过程中首先选好母种,其次保证原料无霉变,再次是严把操作关保证严格灭菌,最后环境要清洁无污染源。只有如此。才能生产出优良的食用菌原种。 食用菌生产中的注意事项 一、菌种制作 食用菌的菌种一般分为母种、原种和栽培种三级。在各级菌种的制作中,防止杂菌污染都是绝对不能忽视的,因为如果杂菌污染了菌种,就一定会带来生产栽培中的大面积污染。因此在制作菌种时,一定要严格按照无菌操作程序进行。基本步骤是:(1)先将接种室清理干净,再将接种中要用到的所有物品放入其中,按每立方米用甲醛10毫升和高锰酸钾7克的用量,将二者混合熏蒸灭菌。(2)接种人要身穿清洁衣服,最好戴上灭菌的套袖,并将手用消毒酒精棉球擦干净。(3)接种时要注意无菌操作。(4)接种后的材料要放在清洁的地方或保温箱中培养。当然,制作菌种的材料必须事先彻底灭菌。如果注意了这些环节,一般可以防止菌种污染。 最容易产生污染的菌种是栽培种,究其原因主要是操作者思想上不重视,往往认为是最后一级菌种了,用不着太严格,因此操作时比较马虎,或者用生料制作菌种。生料制作菌种,有时看起来是可行的,但存在着潜在污染危险,因为生料中有大量杂菌,即便是用了化学药品杀菌,也不大可能将杂菌全部杀灭。残存的杂菌伴随着菌种一起生长,虽然暂时显现不出来,但当播种之后,杂菌就可能大量发生,从而造成栽培料上杂菌滋生甚至蔓延。因此,为防患于未然,最好不要用生料制作菌种,而且要严格按无菌操作进行。 一旦发现菌种污染了杂菌,就不要再进行扩种或栽培,要立即将其销毁,以免混在好的菌种中被误用。如果除其之外再也没有菌种了,那就要将其纯化之后再用。 菌种污染杂菌的情况,除了操作不严格外,有时发生在接种箱的制作上。有人在制作接种箱时只注意了密封,而没有注意通气。当接种量大时,酒精灯火焰将箱内氧气消耗尽而熄灭,不能保证无菌操作顺利进行,万一箱内灭菌不彻底,或操作过程中带进杂菌,或甚至有人为了让空气进入箱内而打开箱门,都有可能造成菌种污染。因此,在制作接种箱时,既要考虑密封,也要考虑留下必要的、能防止杂菌进入的通气孔。  通气孔一般设在离操作者较远的箱侧下部,直径5~10厘米,口上固定4层纱布,口外设推拉门,箱内灭菌时将门关上,操作时将推拉门打开,即能使箱内进入空气,又依靠纱布过滤空气中的杂菌。如果箱体较大,可在不同位置增加通气孔。 二、播种栽培 食用菌生产中的播种与一般农作物的播种不同,也必须象菌种制作那样遵循无菌操作的原则,其第一步就是要将栽培料灭菌。灭菌方法大致有以下几种类型。 (1)化学灭菌法 这是一种将能杀灭杂菌的化学药品拌入栽培料的方法。常用的化学药品有灭菌灵、高锰酸钾、甲隆等,常用量在1%左右,这要根据培养料的性质和药品的纯度确定,用量太低起不到杀菌作用,用量太高则残毒太重,将可能影响食用菌的生长。用化学药品杀菌时须注意药品的有效期,过期药品药效降低或消失,应废弃不用。 (2)生物灭菌法 这主要指用发酵法杀灭培养料中的杂菌。具体操作是:将培养料各成分拌匀,含水量50%至60%,堆成圆堆形,为操作方便,每堆50千克左右,间隔打孔,外覆薄膜。堆温达60℃后翻堆。如此重复两次后,即可铺开播种。这主要是利用培养料中天然存在的微生物生长,发酵产热,造成高温,杀死其中的大部分不耐热的微生物和害虫及其卵,或者抑制某些有害菌,以创造有利于食用菌生长的环境条件。 以上两种灭菌方法都是生料栽培时所用,可以杀死部分杂菌而不大可能灭菌彻底,因此残存的杂菌可能伴随食用菌一起生长,在近期表现不出来,而当食用菌长势弱时可能显示出来。因此用生料栽培时一定要创造适合食用菌生长的条件,用食用菌的生长优势抑制杂菌生长。 要取得彻底杀灭培养料中杂菌的效果,最好采用熟料栽培,用足够的温度灭菌,即高温灭菌。高温灭菌又分为常压灭菌法和高压灭菌法。 (3)常压灭菌法 即在常压下保持100℃杀灭杂菌,具体方法可有很多,基本形式是用油桶改造或用砖砌成大的锅体,内设支架或筐架装料,用保温材料做锅盖,锅体下置铁锅盛水,加热后使锅内温度上升至100℃,持续8小时,并停火后闷一夜。如果锅体建造牢固,密封性好,加热排除冷空气后,可使锅内压力有所上升,以至使锅内温度高于100℃,从而可使加热时间缩短。 (4)高压灭菌法 是用特制的、能耐高压的锅体进行的,锅内水蒸汽的温度随压力升高而上升,温度可达125℃。高压灭菌锅一般有两种:一种是手提式高压蒸汽灭菌锅,可灭菌少量培养料,可用电加热,也可用炉火加热;一种是卧式高压锅,容量较大,用电加热。灭菌少量培养料时,125℃维持30~40分钟即可;灭菌大量培养料时,须适当延长灭菌时间,一般用1.5~2小时。这种灭菌方法与常压灭菌法相比,可以大大缩短灭菌时间,但一次性投资比较高,而且容积有限,不可能象某些自造的常压灭菌锅那样,一次可以灭菌很多培养料,因此,高压灭菌法虽很方便,但也有一定的局限性。 在高温灭菌法中,如果操作不当也可能造成污染。污染主要来自以下几方面: ①灭菌锅内物品堆积过于拥挤,致使锅内热蒸汽流动不畅,留下灭菌死角。 ②灭菌温度虽然达到了,但是灭菌时间不够长。 ③高压锅在扣加压力阀之前没有充分放出冷空气。 ④灭菌完毕后取出物品时,没有注意检查包装是否完好。如果发现破损,要及时用灭过菌的包装材料在锅内就地包装;如果不能再包装,则暂时不用,待下次灭菌时另行包装灭菌。 三、生产管理 食用菌栽培后的管理从一开始就需注意防污染。栽培场地要清洁,最好经过灭菌处理。既要注意保温保湿,又要注意通风换气。特别是在高温季节,需采取降温措施,加强通风。如果高温高湿又通风不足,极易造成杂菌滋生蔓延。清除杂菌时,一定要注意彻底;二是注意不使之污染其它地方,包括栽培场地的周围环境。有些种菇户栽培场地内非常清洁,但场地外的环境却非常肮脏,尤其是清理出的杂菌袋或杂菌块随地乱扔,造成环境的严重污染。有的种菇户反映,种菇头一年收成好,第二年较差,第三年更差,三年以后污染严重,不能再种,即使把菇房多次消毒也不行。这种情况很可能是因为环境中杂菌太多造成的。因此,在生产管理中,一方面要管好菌袋、菌块、菇床、菇房,另一方面也要同时管好周围的环境。
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