TIPE2过表达调控Wnt_β-catenin抑制胃癌细胞增殖、迁移和EMT.pdf

中国免疫学杂志2023 年第 39 卷TIPE2过表达调控Wnt/-catenin抑制胃癌细胞增殖、迁移和EMT王燕 张宝 王交莉（济南市中西医结合医院肿瘤科，济南 271100）中图分类号 R735.2 文献标志码 A 文章编号 1000-484X（2023）08-1700-06摘要 目的：探究肿瘤坏死因子-诱导蛋白8样因子2（TIPE2）是否通过抑制Wnt/-catenin信号通路影响胃癌（GC）细胞增殖、迁移和上皮-间质转化（EMT）。方法：qRT-PCR和Western blot检测不同细胞中TIPE2 mRNA和蛋白表达。体外培养MKN45 细胞，依次分为：Control 组（不做任何处理）、AD-EV 组（转染 AD-EV）、AD-TIPE2 组（转染 AD-TIPE2）、LiCl 组（Wnt/-catenin信号通路激活剂LiCl处理）、AD-TIPE2+LiCl组（转染AD-TIPE2后LiCl处理）。MTT和集落形成实验检测细胞增殖；Transwell检测细胞迁移；Western blot检测细胞TIPE2、E-cadherin、N-cadherin、Wnt2、-catenin和Twist蛋白表达；免疫荧光染色检测细胞TIPE2、E-cadherin及N-cadherin表达。结果：GC细胞株中TIPE2表达显著下调，且在MKN45细胞中表达最低。与AD-EV组相比，AD-TIPE2组MKN45细胞增殖活力、集落形成数、迁移细胞数及N-cadherin、TIPE2、Wnt2、-catenin、Twist、c-Myc和CyclinD1蛋白表达均显著降低，TIPE2和E-cadherin表达显著增高（P0.05）；与AD-TIPE2组相比，AD-TIPE2+LiCl组MKN45细胞增殖活力、集落形成数、迁移细胞数及N-cadherin、TIPE2、Wnt2、-catenin、Twist、c-Myc和CyclinD1蛋白表达均显著升高，TIPE2和E-cadherin表达显著降低（P0.05）；与LiCl组相比，AD-TIPE2+LiCl组MKN45细胞增殖活力、集落形成数、迁移细胞数及 N-cadherin、TIPE2、Wnt2、-catenin、Twist、c-Myc 和 CyclinD1 蛋白表达均显著降低，TIPE2 和 E-cadherin 表达显著升高（P0.05）。结论：上调TIPE2可通过抑制Wnt/-catenin信号通路抑制GC细胞增殖、迁移和EMT。关键词 肿瘤坏死因子-诱导蛋白8样因子2；胃癌细胞；Wnt/-catenin信号通路；增殖；迁移；上皮-间质转化TIPE2 overexpression regulates Wnt/-catenin to inhibit proliferation，migration and EMT of gastric cancer cellsWANG Yan，ZHANG Bao，WANG Jiaoli.Department of Oncology，Jinan Hospital of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine，Jinan 271100，ChinaAbstract Objective：To explore effects of tumor necrosis factor-induced protein-8 like-2（TIPE2）on proliferation，migration and epithelial-mesenchymal transition（EMT）of gastric cancer（GC）cells through Wnt/-catenin signaling pathway.Methods：qRT-PCR and Western blot were used to detect TIPE2 mRNA and protein expressions in different cell types.MKN45 cells were cultured in vitro and divided into：Control group（without any treatment），AD-EV group（transfected with AD-EV），AD-TIPE2 group（transfected with AD-TIPE2），LiCl group（treated with Wnt/-catenin signaling pathway activator，LiCl）and AD-TIPE2+LiCl group（treated with LiCl after transfection of AD-TIPE2）.MTT and colony formation test were used to detect cells proliferation，Transwell was used to detect cells migration；Western blot was used to detect expressions of TIPE2，E-cadherin，N-cadherin，Wnt2，-catenin and Twist proteins of cells；immunofluorescence staining was used to detect expressions of TIPE2，E-cadherin and N-cadherin of cells.Results：TIPE2 expression was significantly down-regulated in GC cell lines，and was the lowest in MKN45 cells.Compared with AD-EV group，MKN45 cell proliferation activity，number of colonies formed，number of migrating cells and expressions of N-cadherin，TIPE2，Wnt2，-catenin，Twist，c-Myc and CyclinD1 proteins in AD-TIPE2 group were significantly decreased，and expressions of TIPE2 and E-cadherin were significantly increased（P0.05）；compared with AD-TIPE2 group，MKN45 cell proliferation activity，number of colonies formed，number of migrating cells and expressions of N-cadherin，TIPE2，Wnt2，-catenin，Twist，c-Myc and CyclinD1 proteins in AD-TIPE2+LiCl group were significantly increased，and expressions of TIPE2 and E-cadherin were significantly decreased（P0.05）；compared with LiCl group，MKN45 cell proliferation activity，number of colonies formed，number of migrating cells and expressions of N-cadherin，TIPE2，Wnt2，-catenin，Twist，c-Myc and CyclinD1 proteins in AD-TIPE2+LiCl group were significantly decreased，and expressions of TIPE2 and E-cadherin were significantly increased（P0.05）.Conclusion：Up-regulation of TIPE2 can inhibit proliferation，migration and EMT of GC cells by inhibiting Wnt/-catenin signaling pathway.Key words Tumor necrosis factor-induced protein-8 like-2；Gastric cancer cells；Wnt/-catenin signaling pathway；Proli-feration；Migration；Epithelial-mesenchymal transitiondoi：10.3969/j.issn.1000-484X.2023.08.024通信作者，济南市中西医结合医院胸外两腺科，济南 271100，E-mail：。作者简介：王 燕，女，主治医师，主要从事肿瘤方面的研究，E-mail：。1700王燕等 TIPE2过表达调控Wnt/-catenin抑制胃癌细胞增殖、迁移和EMT 第 8 期胃癌（gastric cancer，GC）是全球第三大癌症相关死亡原因，也是中国最常见胃肠道恶性肿瘤1。尽管手术和辅助治疗已取得了很大进展，但转移引起的癌症复发导致GC患者五年生存率很差2。转移是一个极为复杂的过程，主要涉及肿瘤细胞上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition，EMT），癌细胞获得间充质特性后随血流入侵其他器官3。因此，需要了解EMT的分子机制确定GC的治疗新策略。人肿瘤坏死因子-诱导蛋白8样因子2（tumor necrosis factor-induced protein-8 like-2，TIPE2/TNFAIP8L2）位 于 染 色 体 1q21.21q21.3，与 鼠TIPE2有94%相同的氨基酸序列4。TIPE2是免疫和炎症稳态的重要负调节因子，与癌症发生发展密切相关5。近年研究表明，TIPE2在非小细胞肺癌、神经胶质瘤、前列腺癌中下调并充当肿瘤抑制因子6。Wnt/-catenin信号通路在 GC中参与调节肿瘤发生、EMT、侵袭等生物学过程7，尚不清楚TIPE2是否通过 Wnt/-catenin通路在 GC中调节增殖、迁移和EMT。本研究通过分析人GC细胞中TIPE2表达以及 TIPE2 与 GC 细胞增殖、迁移、EMT 和 Wnt/-catenin通路的关系，为GC诊治提供新的策略。1 材料与方法 1.1材料人胃黏膜上皮细胞GES-1及人GC高、中、低分化细胞株MKN28、SGC7901、MKN45均购于美 国 ATCC，货 号：FE415、FE884、FE783、FE807；DEME培养基（LM-P0523）购于上海LMAI Bio；胎牛血清（RY-F22）购于兰州Royacel；重组腺病毒AD-TIPE2及其阴性对照AD-EV均由广州锐博生物科技公司设计合成；Wnt/-catenin信号通路激活剂LiCl（L9650）购于美国 Merck；Lipofectamine2000转染试剂盒（11668019）购于美国 Invitrogen 公司；Trizol（R401-01）、逆转录酶（R302-01）、荧光定量 PCR 试剂盒（P612-01）购于南京Vazyme；TIPE2和-actin定量引物由上海生工生物工程科技有限公司合成；RIPA缓冲液（AKR-190）购于美国Cell Biolabs公司；一 抗：TIPE2（ab110389）、E-cadherin（ab40772）、N-cadherin（ab76011）、Wnt2（ab178418）、-catenin（ab32572）、Twist（ab66031）、c-Myc（ab32072）、CyclinD1（ab16663）及-actin（ab8227）、FITC荧光偶联试剂盒（ab102884）均购自英国Abcam；MTT细胞增殖检测试剂盒（M1020）购于上海Solarbio；Transwell小室（3413）购于美国Corning；细胞爬片（HZ-48-XD）购于上海 AMEKO；DAPI 染液（PH0524）购于福州Phygene；WJ-80A-型二氧化碳细胞培养箱购于上海新苗；CFX96 Touch型荧光定量RCR仪购于美国Bio-Rad；IAS-500555凝胶成像分析系统购于北京晨曦勇创；Multiskan FC酶标仪购于美国Thermo；IX53型显微镜、BX43型荧光显微镜购于日本Olympus。1.2方法1.2.1细胞培养与分组GES-1、MKN28、SGC7901 及MKN45细胞均在DEME培养基中于37、5%CO2 培养，使细胞始终保持良好状态。取对数生长期MKN45细胞以1103个/孔接种于6孔板，分为：Control 组、AD-EV 组、AD-TIPE2 组、LiCl 组 及 AD-TIPE2+LiCl组。Control组不做任何处理，正常培养48 h；AD-EV 组转染 AD-EV 后正常培养 48 h；AD-TIPE2组转染AD-TIPE2后正常培养48 h；LiCl组使用 含 10 mmol/L LiCl 的 培 养 基 培 养 48 h8；AD-TIPE2+LiCl 组转染 AD-TIPE2 后培养 6 h，更换含 10 mmol/L LiCl的培养基培养48 h。1.2.2qRT-PCR 检测细胞 TIPE2 mRNA 表达使用Trizol提取GES-1、MKN28、SGC7901及MKN45细胞及不同处理的 MKN45细胞总 RNA，逆转录酶将RNA 反转录为 cDNA，荧光定量 PCR 试剂盒检测TIPE2 mRNA表达，以-actin为内参。反应体系及反 应 条 件 参 照 试 剂 盒 说 明 书，2Ct计 算 TIPE2 mRNA表达。TIPE2正向引物：5-ACTGAGTAAGTGGCGGGTCG-3；反向引物：5-TTCTGGCGAAAGCGGGTAG-3；-actin正向引物：5-AAATCGTGCGTGACATCAAAGA-3；反向引物：5-GGCCATCTCCTGCTCGAA-3。1.2.3Western blot 检测细胞 TIPE2、E-cadherin、N-cadherin、Wnt2、-catenin和Twist蛋白水平使用含蛋白酶抑制剂混合物的RIPA缓冲液提取细胞总蛋白，蛋白测定试剂盒定量，10%SDS-PAGE电泳分离等量蛋白并转至PVDF膜，5%脱脂牛奶室温封闭1 h，添加一抗（TIPE2、E-cadherin、N-cadherin、Wnt2、-catenin和 Twist）4 过夜，使用辣根过氧化物酶偶联的山羊抗兔二抗室温反应1 h，ECL显影混合液使蛋白可视化，凝胶成像仪拍照记录蛋白印迹，Image J软件量化。1.2.4MTT检测MKN45细胞增殖活力将1.2.1中各组 MKN45 细胞接种于 96 孔板（1104个/孔），20 l/孔添加5 mg/ml MTT溶液培养4 h，弃培养基，加入 150 l二甲基亚砜溶解每孔中形成的甲臜沉淀，酶标仪检测490 nm处光密度（OD）。1701中国免疫学杂志2023 年第 39 卷1.2.5集落形成实验检测 MKN45 细胞集落形成将1.2.1中各组MKN45细胞以1103个/孔接种于6孔板，置于培养箱中培养23周，隔天更换1次培养基至出现肉眼可见克隆时终止培养，预冷PBS冲洗 细 胞，500 l/孔 添 加 甲 醇 溶 液，20 孵 育 20 min，400 l/孔添加 1%结晶紫染色 15 min，PBS冲洗3次，显微镜拍照，计算集落形成率。集落形成率（%）=集落数/接种细胞数100%。1.2.6Transwell检测MKN45细胞迁移将1.2.1中各组细胞使用无血清培养基悬浮，形成5104个/ml 细胞悬浮液，吸取 200 l 添加到 Transwell 小室上室，下室添加正常培养基500 l，培养48 h后取出小室，PBS冲洗，甲醇固定30 min，结晶紫染色20 min，显微镜下随机选择6个视野计数（200倍）。1.2.7免疫荧光染色检测 MKN45 细胞 TIPE2、E-cadherin 和 N-cadherin 表达收集 1.2.1 中各组细胞使用培养基调整密度后添加到预先放置细胞爬片的24孔板，待细胞贴壁后使用PBS清洗3次，依次添加4%多聚甲醛室温固定2 h，0.5%Triton X-100室温通透20 min，10%山羊血清室温封闭30 min，加TIPE2、E-cadherin和N-cadherin一抗4 过夜孵育，隔天加入FITC荧光二抗避光孵育1 h，添加DAPI染液避光孵育5 min，荧光显微镜下观察并采集图像。1.3统计学分析采用SPSS25.0软件进行统计学分析，数据以x s表示，多组间比较采用单因素方差分析，P0.05为差异有统计学意义。2 结果 2.1GC 细胞中 TIPE2 表达qRT-PCR 和 Western blot结果显示，与胃黏膜上皮GES-1细胞相比，GC细胞株中TIPE2表达均显著降低，低分化的MKN45细胞中表达最低（P0.05），故后续选择 MKN45 细胞作为研究对象（图1、表1）。2.2各组 MKN45 细胞增殖情况与 AD-EV 组相比，AD-TIPE2组MKN45细胞增殖活力和集落形成数均显著降低（P0.05）；与AD-TIPE2组相比，AD-TIPE2+LiCl组MKN45细胞增殖活力和集落形成数均显著升高（P0.05）；与 LiCl 组相比，AD-TIPE2+LiCl组MKN45细胞增殖活力和集落形成数均显著降低（P0.05，图2、表2）。2.3各组 MKN45 细胞迁移情况与 AD-EV 组相比，AD-TIPE2组迁移细胞数明显减少（P0.05）；与AD-TIPE2组相比，AD-TIPE2+LiCl组迁移细胞数明显增多（P0.05）；与LiCl组相比，AD-TIPE2+LiCl组迁 移 细 胞 数 明 显 减 少（P0.05，图3、表3）。2.4各组 MKN45 细胞 TIPE2 表达及 EMT 情况Western blot结果显示，与AD-EV组相比，AD-TIPE2组 MKN45 细胞 TIPE2、E-cadherin 表达显著增加，图1Western blot分析不同细胞中TIPE2蛋白表达Fig.1Western blot analysis of TIPE2 expression in diffe-rent cells表2各组MKN45细胞增殖情况（x s）Tab.2Proliferation of MKN45 cells treated in each group（x s）GroupsControlAD-EVAD-TIPE2LiClAD-TIPE2+LiClCell viability/OD0.810.070.790.060.360.051）2）0.990.081）2）3）0.640.051）2）3）4）Number of cell colonies formed105.396.81110.276.5345.932.861）2）160.878.071）2）3）81.344.731）2）3）4）Note：Compared with control group，1）P0.05；compared with AD-EV group，2）P0.05；compared with AD-TIPE2 group，3）P0.05；compared with LiCl group，4）P0.05.图2集落形成实验检测各组MKN45细胞集落形成数Fig.2Colony formation experiment detects number of colonies formed by MKN45 cells in each group表1qRT-PCR 和 Western blot 检测不同细胞中 TIPE2 表达（x s）Tab.1qRT-PCR and Western blot to detect expression of TIPE2 in different cells（x s）Cell typesGES-1MKN28SGC7901MKN45TIPE2 mRNA1.000.040.540.061）0.390.031）0.220.011）TIPE2 protein1.240.080.750.071）0.560.081）0.340.051）Note：Compared with GES-1 cells，1）P0.05.1702王燕等 TIPE2过表达调控Wnt/-catenin抑制胃癌细胞增殖、迁移和EMT 第 8 期N-cadherin表达显著降低（P0.05）；与AD-TIPE2组相比，AD-TIPE2+LiCl 组 MKN45 细胞 TIPE2、E-cadherin 表达显著降低，N-cadherin 表达显著增加（P0.05）；与LiCl组相比，AD-TIPE2+LiCl组MKN45细胞TIPE2、E-cadherin表达显著增加，N-cadherin表达显著降低（P0.05，图4、表4）。免疫荧光分析验证了以上结果，与Western blot结论一致（图5）。2.5各组MKN45细胞Wnt/-catenin信号通路蛋白表达与AD-EV组相比，AD-TIPE2组MKN45细胞Wnt2、-catenin、Twist、c-Myc 和 CyclinD1 表达显著降低（P0.05）；与 AD-TIPE2 组相比，AD-TIPE2+LiCl组MKN45细胞Wnt2、-catenin、Twist、c-Myc和CyclinD1 表达显著增加（P0.05）；与 LiCl 组相比，AD-TIPE2+LiCl 组 MKN45 细 胞 Wnt2、-catenin、Twist、c-Myc 和 CyclinD1 表达显著降低（P0.05，表5、图6）。图4Western blot 检测各组 MKN45 细胞 TIPE2、E-cadherin和N-cadherin蛋白表达Fig.4Western blot detection of TIPE2，E-cadherin and N-cadherin protein expressions of MKN45 cells in each group表3各组MKN45细胞迁移数（x s）Tab.3MKN45 cell migration number treated in each group（x s）GroupsControlAD-EVAD-TIPE2LiClAD-TIPE2+LiClNumber of migrating cells184.396.83180.727.0993.544.251）2）259.338.091）2）3）138.722.961）2）3）4）Note：Compared with control group，1）P0.05；compared with AD-EV group，2）P0.05；compared with AD-TIPE2 group，3）P0.05；compared with LiCl group，4）P0.05.图3Transwell检测各组MKN45细胞迁移Fig.3Transwell detects migration of MKN45 cells in each group图5各组 MKN45 细胞 TIPE2、E-cadherin 和 N-cadherin蛋白免疫荧光染色Fig.5Immunofluorescence staining of TIPE2，E-cadherin and N-cadherin proteins of MKN45 cells in each group表4各组 MKN45 细胞 TIPE2、E-cadherin 和 N-cadherin表达（x s）Tab.4TIPE2，E-cadherin and N-cadherin expressions of MKN45 cells in each group（x s）GroupsControlAD-EVAD-TIPE2LiClAD-TIPE2+LiClTIPE2 0.290.030.330.020.850.061）2）0.120.011）2）3）0.540.041）2）3）4）E-cadherin 0.340.030.380.040.980.071）2）0.190.021）2）3）0.660.051）2）3）4）N-cadherin 1.150.101.170.120.570.061）2）1.620.151）2）3）0.860.071）2）3）4）Note：Compared with control group，1）P0.05；compared with AD-EV group，2）P0.05；compared with AD-TIPE2 group，3）P0.05；compared with LiCl group，4）P0.05.1703中国免疫学杂志2023 年第 39 卷3 讨论 GC 是病死率仅次于肝癌和肺癌的恶性肿瘤，每年我国 GC 发病率约占全球发病率的 41%，且 每年我国因GC死亡的人数高达全球因GC死亡人数的 35%9。目前 GC 治疗主要以手术为主，放化疗、分子靶向及免疫治疗为辅，尚无明确靶向治疗方案10。因此有必要探讨 GC 发生发展的分子机制。TIPE2 是 TNFAIP8 家族成员，该家族还包括 TNFAIP8、TIPE1和 TIPE3，是免疫和肿瘤发生的调节因子11。研究表明，TNFAIP8家族成员与人类结直肠癌等多种癌症发生发展有关 12。此外，TNFAIP8家族成员已被证实与GC患者临床病理特征和预后密切相关13。TIPE2已被确定为多种恶性肿瘤的肿瘤抑制因子，如TIPE2过表达可显著抑制宫颈癌细胞增殖、迁移及侵袭14；TIPE2 过表达可通过调控survivin/caspase3/7信号通路抑制胰腺癌细胞活力、增殖并诱导细胞凋亡，可作为癌症患者预后的潜在生物标志物15；此外，TIPE2过表达减少了人直肠腺癌细胞增殖、迁移和侵袭，而TIPE2下调显示相反效果16。表明TIPE2在癌症发展中发挥关键作用。本研究阐明了TIPE2在GC中的作用和分子机制。首先，本研究发现，与正常胃黏膜上皮 GES-1细胞相比，TIPE2表达在GC细胞中显著下调，且在低分化GC细胞MKN45中表达最低，与在宫颈癌等中研究结论一致14。TIPE2异常表达与肿瘤增殖、迁移、侵袭和凋亡等病理过程密切相关，此外，有研究表明腺病毒介导的TIPE2过表达抑制了GC异种移植肿瘤生长17。本研究进一步显示，在MKN45细胞中上调TIPE2表达，细胞增殖活力和迁移能力均显著降低，表明TIPE2可能在GC发生发展过程中起抑癌作用。本研究进一步探讨了 TIPE2 与 EMT 的关系。EMT指上皮细胞通过特定程序转化为间充质表型的生物学过程，在胚胎形成、肿瘤转移及伤口愈合等生理病理过程中起重要作用9。EMT过程中，细胞失去细胞间连接，降解细胞外基质，最终转化为间充质细胞，从而促进细胞迁移和侵袭。此过程典型特征为上皮细胞标志物E-cadherin低表达，间充质细胞标志物N-cadherin高表达18。本研究发现，上调TIPE2表达后，E-cadherin表达增加，N-cadherin表达降低，表明上调TIPE2表达可通过抑制EMT抑制GC细胞迁移。研究发现，Wnt/-catenin信号通路参与EMT过程，Wnt2、-catenin是该通路的关键因子19。Wnt通路激活可增加-catenin表达，上调Twist等转录因子表达，抑制E-cadherin表达，促进N-cadherin表达，从而诱导 EMT，如 TIAN 等20研究发现，沉默 SERPINH1 可通过调控 Wnt/-catenin 信号通路调控Twist等下游靶基因表达进而抑制 GC 细胞 EMT 和迁移；ZHANG 等 21 研究发现，CyclinD1 和 c-Myc 是 -catenin的直接靶基因。CyclinD1 是增殖相关蛋白，其表达可反应细胞增殖能力22；c-Myc已在多个图6Western blot检测各组MKN45细胞Wnt2、-catenin、Twist、c-Myc和CyclinD1蛋白表达Fig.6Western blot detection of Wnt2，-catenin，Twist，c-Myc and CyclinD1 expressions of MKN45 cells in each group表5各组MKN45细胞Wnt2、-catenin、Twist、c-Myc和CyclinD1表达（x s）Tab.5Expressions of Wnt2，-catenin，Twist，c-Myc and CyclinD1 of MKN45 cells in each group（x s）GroupsControlAD-EVAD-TIPE2LiClAD-TIPE2+LiClWnt2 0.740.070.760.050.250.041）2）0.930.081）2）3）0.560.041）2）3）4）-catenin 0.890.070.920.060.310.051）2）1.230.101）2）3）0.670.051）2）3）4）Twist 1.210.111.240.130.480.051）2）1.630.141）2）3）0.870.091）2）3）4）c-Myc 0.850.070.890.090.220.041）2）1.160.101）2）3）0.510.061）2）3）4）CyclinD1 1.050.090.980.080.370.051）2）1.460.121）2）3）0.610.071）2）3）4）Note：Compared with control group，1）P0.05；compared with AD-EV group，2）P0.05；compared with AD-TIPE2 group，3）P0.05；compared with LiCl group，4）P0.05.1704王燕等 TIPE2过表达调控Wnt/-catenin抑制胃癌细胞增殖、迁移和EMT 第 8 期报道中证实与癌细胞迁移和EMT有关23。LIU等6研究发现，TIPE2可通过靶向-catenin抑制EMT进而抑制子宫内膜癌细胞迁移和侵袭。本研究发现，上调TIPE2表达可显著降低Wnt2、-catenin、Twist、CyclinD1和c-Myc表达，结合以往研究表明TIPE2表达可能通过调控Wnt/-catenin信号通路参与GC增殖、迁移和 EMT。为进一步探究 TIPE2 调控 Wnt/-catenin信号通路的作用，本研究在上调TIPE2的MKN45细胞中添加Wnt/-catenin信号通路激活剂LiCl及单独添加LiCl处理MKN45细胞，结果显示，单独添加 LiCl 可激活 Wnt/-catenin 信号通路从而促进GC细胞增殖、迁移和EMT，而上调TIPE2表达与LiCl共处理可逆转TIPE2过表达对GC细胞增殖、迁移和 EMT的影响。提示上调 TIPE2表达可能通过抑制Wnt/-catenin信号通路激活从而抑制GC细胞增殖、迁移和EMT。综上，上调TIPE2表达可抑制GC细胞增殖、迁移和EMT，其作用机制可能与抑制Wnt/-catenin信号通路激活有关，TIPE2 可能成为 GC 治疗的新靶点，但其具体作用机制及在动物模型中的作用还需进一步探究。参考文献：1 XIE J，FU L，JIN L.Immunotherapy of gastric cancer：Past，future perspective and challenges J.Pathol Res Pract，2021，218（3）：153322-153328.DOI：10.1016/j.prp.2020.153322.2 BIAGIONI A，SKALAMERA I，PERI S，et al.Update on gastric cancer treatments and gene therapies J.Cancer Metastasis Rev，2019，38（3）：537-548.DOI：10.1007/s10555-019-09803-7.3 SAKAI S，OHHATA T，KITAGAWA K，et al.Long noncoding RNA ELIT-1 acts as a Smad3 cofactor to facilitate TGF/Smad signaling and promote epithelial-mesenchymal transition J.Cancer Res，2019，79（3）：2821-2838.DOI：10.1158/0008-5472.4 ZHU L，ZHANG X，FU X，et al.TIPE2 suppresses progression and tumorigenesis of esophageal carcinoma via inhibition of the Wnt/-catenin pathwayJ.J Transl Med，2018，16（1）：7-18.DOI：10.1186/s12967-018-1383-0.5 GU Z，CUI X，SUN P，et al.Regulatory roles of tumor necrosis factor-induced protein 8 like-protein 2 in inflammation，immunity and cancers：A review J.Cancer Manag Res，2020，12（4）：12735-12746.DOI：10.2147/CMAR.S283877.6 LIU Y，WANG X，WAN L，et al.TIPE2 inhibits the migration and invasion of endometrial cells by targeting-catenin to reverse epithelial-mesenchymal transition J.Hum Reprod，2020，35（6）：1377-1390.DOI：10.1093/humrep/deaa062.7 SHAO Z，GAO D，CHEN L，et al.Noncoding RNAs that regulate the Wnt/catenin signaling pathway in gastric cancer：Good cop，bad cop？（Review）J.Oncol Rep，2020，44（4）：1314-1321.DOI：10.3892/or.2020.7705.8 GUO X，CHEN Y，HONG T，et al.Induced pluripotent stem cell-derived conditional medium promotes Leydig cell anti-apoptosis and proliferation via autophagy and Wnt/-catenin pathwayJ.J Cell Mol Med，2018，22（7）：3614-3626.DOI：10.1111/jcmm.13641.9 符 亮，潘 锐，陈 钊.HMGA2在胃癌细胞上皮-间充质转化中的作用 J.中国病理生理杂志，2019，35（4）：606-613.DOI：10.39