SOCS6通过JAK2_STAT3信号通路对人牙周膜成纤维细胞炎症及凋亡的影响.pdf

基金项目 佛山市科技创新项目(编号:2 2 2 0 0 0 1 0 0 5 5 5 3)作者简介 邱枫(1 9 8 0),女,山东梁山人,副主任医师,学士,主要从事牙周病学研究。*通信作者 邱枫,E-m a i l:q f 8 0 1 1 2 31 6 3.c o mS O C S 6通过J A K 2/S T A T 3信号通路对人牙周膜成纤维细胞炎症及凋亡的影响邱枫1*杜宇1 罗惠冰1 刘星21.佛山市禅城区人民医院口腔综合科 广东 佛山 5 2 8 0 0 0;2.井冈山大学医学部 江西 吉安 3 4 3 0 0 9 摘要 目的:探究S O C S 6通过J AK 2/S TA T 3信号通路对人牙周膜成纤维细胞(h P D L F s)炎症及凋亡的影响。方法:取对数生长期的h P D L F s,分组如下:对照组、0.1 m g/L L P S组、1 m g/L L P S组、5 m g/L L P S组,q R T-P C R观察L P S对h P D L F s中S O C S 6 mR NA表达的影响,W e s t e r n b l o t观察L P S对h P D L F s中S O C S 6蛋白表达的影响,C C K-8法观察L P S对h P D L F s细胞活力的影响,E L I S A法观察L P S对h P D L F s细胞炎症因子T N F-、I L-1的含量的影响。慢病毒滴度检测、靶细胞感染预实验及细胞转染,并且q R T-P C R检测细胞S O C S 6 mR NA表达。取对数生长期的h P D L F s,过表达转染S O C S 6后,L P S诱导h P D L F s炎症细胞模型,用J AK 2信号激活剂香豆霉素A 1(C A 1)处理过夜,分组如下:L P S组(5 m g/L L P S)、L P S+o e-N C组、L P S+o e-S O C S 6组、L P S+o e-S O C S 6+C A 1组,C C K-8法检测各组细胞活力,流式细胞术检测各组细胞凋亡,E L I S A法检测细胞炎症因子TN F-、I L-1的含量,W e s t e r n b l o t检测细胞S O C S 6、p-J AK 2、p-S TA T 3蛋白表达。结果:S O C S 6在h P D L F s细胞表达,随着L P S刺激,S O C S 6基因表达下调,并且L P S浓度越高,细胞中S O C S 6基因表达下调越明显。而且,h P D L F s细胞过表达S O C S 6基因后,p-J AK 2、p-S T A T 3蛋白表达明显降低,细胞炎症因子T N F-、I L-1含量减少,凋亡率下降。结论:S O C S 6在L P S诱导的牙周炎细胞模型中表达下调,过表达S O C S 6后细胞活力显著升高,凋亡率降低,此作用可能与抑制 J AK 2/S TA T 3信号通路及炎症因子I L-1、T N F-的表达有关。关键词 细胞因子信号传导抑制因子6;J AK 2/S TA T 3信号通路;人牙周膜成纤维细胞;T N F-;I L-1 文献标识码 A 文章编号 1 6 7 17 6 5 1(2 0 2 3)0 90 8 1 50 6d o i 1 0.1 3 7 0 1/j.c n k i.k q y x y j.2 0 2 3.0 9.0 1 0E f f e c t s o f S O C S 6 o n I n f l a mm a t i o n a n d A p o p t o s i s o f H u m a n P e r i o d o n t a l L i g a m e n t F i b r o b l a s t s t h r o u g h J A K 2/S T A T 3 S i g n a l i n g P a t h w a y.Q I U F e n g1*,DU Y u1,L U O H u i b i n g1,L I U X i n g2.1.D e p a r t m e n t o f G e n e r a l D e n t i s t r y,F o s h a n C h a n c h e n g P e o p l es H o s p i t a l,F o s h a n 5 2 8 0 0 0,C h i n a;2.S c h o o l o f M e d i c i n e,J i n g g a n g s h a n U n i v e r s i t y,J i a n 3 4 3 0 0 9,C h i n a.A b s t r a c t O b j e c t i v e:T o e x p l o r e t h e e f f e c t s o f S O C S 6 o n i n f l a mm a t i o n a n d a p o p t o s i s o f h u m a n p e r i o d o n t a l l i g a-m e n t f i b r o b l a s t s(h P D L F s)t h r o u g h J AK 2/S TA T 3 s i g n a l i n g p a t h w a y.M e t h o d s:h P D L F s i n t h e l o g a r i t h m i c g r o w t h p h a s e w e r e d i v i d e d i n t o t h e f o l l o w i n g g r o u p s:c o n t r o l g r o u p,0.1 m g/L L P S g r o u p,1 m g/L L P S g r o u p,a n d 5 m g/L L P S g r o u p.q R T-P C R w a s u s e d t o o b s e r v e t h e e f f e c t o f L P S o n t h e e x p r e s s i o n o f S O C S 6 mR NA i n h P D L F s,W e s t e r n b l o t w a s u s e d t o o b s e r v e t h e e f f e c t o f L P S o n t h e e x p r e s s i o n o f S O C S 6 p r o t e i n i n h P D L F s,C C K-8 w a s u s e d t o o b s e r v e t h e e f f e c t o f L P S o n t h e c e l l v i a b i l i t y o f h P D L F s,a n d E L I S A w a s u s e d t o o b s e r v e t h e e f f e c t s o f L P S o n t h e i n f l a mm a t o r y f a c t o r s T N F-a n d I L-1 o f h P D L F s.T h e l e n t i v i r u s t i t e r,p r e-e x p e r i m e n t o f t h e t a r g e t c e l l i n f e c t i o n,a n d c e l l t r a n s f e c t i o n w e r e d e t e c t e d,a n d S O C S 6 mR NA e x p r e s s i o n w a s d e t e c t e d b y q R T-P C R.h P D L F s i n t h e l o g a r i t h m i c g r o w t h p h a s e w e r e t r a n s f e c t e d w i t h o v e r e x p r e s s e d S O C S 6.A n i n f l a mm a t o r y c e l l m o d e l o f h P D L F s w a s t h e n i n d u c e d b y L P S a n d t r e a t e d o v e r n i g h t w i t h t h e J AK 2 s i g n a l a c t i v a t o r c o u m e r m y c i n A 1(C A 1).T h e g r o u p s w e r e a s f o l l o w s:L P S g r o u p(5 m g/L L P S),L P S+o e-N C g r o u p,L P S+o e-S O C S 6 g r o u p,a n d L P S+o e-S O C S 6+C A 1 g r o u p.C C K-8 w a s u s e d t o d e t e c t c e l l v i a b i l i t y i n e a c h g r o u p,f l o w c y t o m e t r y w a s u s e d t o d e t e c t c e l l a p o p t o s i s i n e a c h g r o u p,E L I S A w a s u s e d t o d e t e c t t h e c o n t e n t s o f i n f l a mm a t o r y f a c t o r s T N F-a n d I L-1,a n d W e s t e r n b l o t w a s u s e d t o d e t e c t t h e e x p r e s s i o n o f S O C S 6,p-J AK 2,a n d p-S TA T 3 p r o t e i n s.R e s u l t s:518 口腔医学研究2 0 2 3年9月第3 9卷第9期S O C S 6 w a s e x p r e s s e d i n h P D L F s.W i t h L P S s t i m u l a t i o n,S O C S 6 g e n e e x p r e s s i o n w a s d o w n-r e g u l a t e d,a n d t h e h i g h e r t h e c o n c e n t r a t i o n o f L P S,t h e m o r e o b v i o u s t h e d o w n-r e g u l a t i o n o f S O C S 6 g e n e e x p r e s s i o n i n c e l l s.M o r e o-v e r,a f t e r o v e r e x p r e s s i o n o f S O C S 6 g e n e i n h P D L F s,t h e p r o t e i n e x p r e s s i o n o f p-J AK 2 a n d p-S TA T 3 d e c r e a s e d o b v i o u s l y,t h e c o n t e n t s o f i n f l a mm a t o r y f a c t o r s TN F-a n d I L-1 d e c r e a s e d,a n d t h e a p o p t o s i s r a t e d e c r e a s e d.C o n c l u s i o n:T h e e x p r e s s i o n o f S O C S 6 i s d o w n-r e g u l a t e d i n L P S-i n d u c e d p e r i o d o n t i t i s c e l l m o d e l,a n d t h e c e l l v i a b i l i-t y i s s i g n i f i c a n t l y i n c r e a s e d a n d t h e a p o p t o s i s r a t e i s d e c r e a s e d a f t e r o v e r e x p r e s s i o n o f S O C S 6,w h i c h m a y b e r e l a t e d t o t h e i n h i b i t i o n o f J AK 2/S TA T 3 s i g n a l i n g p a t h w a y a n d t h e e x p r e s s i o n o f i n f l a mm a t o r y f a c t o r s I L-1 a n d T N F-.K e y w o r d s S O C S 6;J AK 2/S TA T 3 s i g n a l i n g p a t h w a y;h u m a n p e r i o d o n t a l l i g a m e n t f i b r o b l a s t s;T N F-;I L-1 作为成年人牙齿松动和脱落的主要原因1,牙周炎被认为是世界上最常见和最严重的口腔疾病之一。文献表明,炎症是牙周炎发生和发展的关键因素之一,促炎细胞因子在细菌刺激和组织破坏中起着重要作用2。细胞因子信号传导抑制因子6(s u p p r e s s o r o f c y t o k i n e s i g n a l i n g 6,S O C S 6)属于S O C S家族,主要负责调节受体酪氨酸激酶信号3。已有研究表明,S O C S 6在牙周炎中表达下调,S O C S 6参与脂多糖(l i p o p o l y s a c c h a r i d e,L P S)刺激下的牙周韧带细胞损伤4。S O C S 6敲低可消除牙周炎细胞凋亡和炎症5。相关文献在心肌细胞中也证明了m i R-1 9 b对S O C S 6表达水平的调节作用6。但S O C S 6影响牙周炎的具体机制仍未明确。同时,X i a o等7在高糖条件下人视网膜微血管内皮细胞中证明了存在m i R-1 9 b/S O C S 6/J AK 2/S T AT 3的 信 号 轴 调 控 细胞凋亡和炎症。而且S T AT 3对炎症进展的调节在很多类型的疾病均有报道8。因此,对炎症的调控可能 是S T AT 3影 响 牙 周 炎 的 可 能 机 制。推 测S O C S 6通过J AK 2/S T AT 3信号通路调节牙周炎的发生发展。1 材料与方法1.1 材料 人牙周膜成纤维细胞(h u m a n p e r i o-d o n t a l l i g a m e n t f i b r o b l a s t s,h P D L F s)(货 号:C P-H 1 3 6)购自武汉普诺赛生命科技有限公司;L P S(货号:L 8 8 8 0)购 自 北 京 索 莱 宝 科 技 有 限 公 司;F a s t K i n g一步法除基因组c D NA第一链合成预混试剂(货号:K R 1 1 8-0 2)、无内毒素质粒小提中量试剂盒(货号:D P 1 1 8-0 2)、普通D NA产物纯化试剂盒(货号:D P 2 0 4-0 2)购自天根生化科技(北京)有限公司;R I P A裂 解 液(货 号:P 0 0 1 3 B)、PM S F(1 0 0 mm o l/L)(货号:S T 5 0 6)、B C A蛋白浓度测定试剂盒(货 号:P 0 0 1 0 S)、预 染 蛋 白 质 分 子 量 标 准(1 91 1 7 k D)(货号:P 0 0 6 6)、P B S(货号:C 0 2 2 1 A)、P V D F膜(货号:F F P 2 4)、S D S-P AG E蛋白上样缓冲液(货号:P 0 0 1 5 A)、A n n e x i n V-F I T C细胞凋亡检测试剂 盒(货 号:C 1 0 6 2 S)、C C K-8试 剂 盒(货 号:C 0 0 3 7)、人白细胞介素-1(I L-1)E L I S A试剂盒(货号:P I 3 0 5)购自上海碧云天生物技术有限公司;人肿瘤坏 死 因 子-(T N F-)E L I S A试 剂 盒(货 号:m l 0 6 4 3 0 3)购自上海酶联生物科技有限公司;A n t i-S O C S 6抗 体(兔 多 克 隆 抗 体)(货 号:a b 1 9 7 3 3 5)、A n t i-GA P DH抗 体(兔 单 克 隆 抗 体)(货 号:a b 1 8 1 6 0 2)、山 羊 抗 兔I g G H&L(HR P)(货 号:a b 6 7 2 1)购自A b c a m公司;p-J AK 2兔单克隆抗体(货号:#4 4 0 6)、p-S T AT 3兔单克隆抗体(货号:#4 9 0 8 1)购自C S T公司;香豆霉素A 1(c o u m e r m y c i n A 1,C A 1)(货号:HY-N 7 4 5 2)购自MC E公司。1.2 方法1.2.1 细胞培养 h P D L F s在含1 0%胎牛血清、1 0 0 g/m L链霉素和1 0 0 U/m L青霉素的DMEM培养基中,在3 7、5%C O2培养箱中培养。1.2.2 q R T-P C R 取对数生长期的h P D L F s,制成21 05个细胞/孔的细胞悬液于6孔板中,分组,然后分别收集各组细胞,提取总R NA,配制以下反应体系(反应条件:4 2,1 5 m i n;9 5,3 m i n),采用S Y B R G r e e n 两 步 法 进 行P C R扩 增,并 检 测S O C S 6 mR NA表达水平,以GA P DH为内参。引物序列见表1。采集、分析各组S O C S 6 mR NA的相对表达量,以 2-C t值表示。表1 引物序列T a b.1 P r i m e r s e q u e n c e s基因引物序列(53)产物长度/b pS O C S 6F:T C A GA G G C C GA T AA G G T C C A8 9 3R:AA C G G T C G T C A GAA C T G T C CGA P DHF:T G T G G G C A T C AA T G GAT T T G G1 1 6 R:A C A C C A T G T A T T C C G G G T C AA T1.2.3 W e s t e r n b l o t 将细胞接种于6孔板中(21 05个细胞/孔),分别按照各分组进行处理。将处理后的组织材料置于冰上裂解3 0 m i n,提取总蛋618J o u r n a l o f O r a l S c i e n c e R e s e a r c h,S e p.2 0 2 3,V o l.3 9,N o.9 白。取蛋白样品上样,经电泳、转膜、牛奶封闭,其中A n t i-S O C S 6抗体用封闭液按12 0 0的比例稀释,p-J AK 2、p-S T AT 3抗体用封闭液按11 0 0 0的比例稀释,内参一抗用封闭液按11 0 0 0 0的比例稀释;封闭后的膜分别加入对应的一抗工作液中,4 摇动过夜;将二抗用1T B S T按12 0 0 0稀释,将洗涤后的P V D F膜放入二抗工作液中,室温、避光缓慢摇动6 0 m i n,用1T B S T洗膜3次,洗去游离二抗。采用E C L化学发光显色液显色及成像,将胶片进行扫描存档,用蛋白条带的灰度值与内参蛋白条带的灰度值的比值表示蛋白的相对表达量。1.2.4 C C K-8 取对数生长期的h P D L F s,制成21 03个细胞/孔的细胞悬液于9 6孔板中,分组处理,严格按C C K-8试剂盒说明操作并观察各组细胞活力,用酶标仪测定在4 5 0 n m处的吸光度值。1.2.5 E L I S A 从冰箱取出试剂盒,分组处理,严格按照 E L I S A 试剂盒说明操作,以空白孔调零,在终止后1 5 m i n内,用4 5 0 n m波长检测各孔A值。以所测标准品A值为横坐标,标准品的浓度值为纵坐标,绘制标准曲线,并得到直线回归方程,将样品的A值代入方程,计算出样品的浓度,其中R 2大于0.9 9。重复实验3次。1.2.6 慢病毒转染 慢病毒转染过表达S O C S 6(在N C B I网站上设计的o e-S O C S 6序列并由云舟生物慢病毒载体构建)于h P D L F s细胞中2 4 h后,进行L P S诱导,通过前期实验选用5 m g/L L P S处理3 h,以模拟h P D L F s在体外牙周炎炎症条件下的生长环境。分组如下:L P S组、L P S+o e-N C组、L P S+o e-S O C S 6组。质粒的D NA转化后,按照无内毒素质粒小提中量试剂盒操作手册抽提质粒。然后,慢病毒的包装、浓缩,将冻存的2 9 3 T细胞从-8 0 中取出复苏及传代,当细胞生长至7 0%8 0%融合时可进行转染。取1 2 g空载质粒和过表达质 粒 及 慢 病 毒 包 装 质 粒,混 匀,加 入2 0 0 L DMEM培养基中,吹打均匀后加入8 L H i g h G e n e转染试剂。转染4 8 h和7 2 h分别收集上清,离心1 0 m i n后取上清用0.4 5 m o l/L过滤器过滤,过滤后上清与5P E G 8 0 0 0慢病毒浓缩液充分混合并4 过夜处理。浓缩液处理第2天后,4 条件下离心3 0 m i n,用1 m L无血清DMEM重悬离心后慢病毒颗粒,分装后冻存于-8 0。将生长良好的2 9 3 T细 胞 用 胰 酶 消 化 后 计 数,之 后 稀 释 至51 04个细胞/m L,加入9 6孔板,3 7、5%C O2培养箱中继续培养2 4 h。准备培养液并配制梯度浓度慢病毒培养基。第23天后,在观察结果前6 h弃去8 0 L旧培养液,加入等体积的新鲜完全培养基,之后继续在培养箱中培养6 h后观察结果。滴度计算(T U/m L):滴度依据计数最高稀释倍数下每个孔的荧光数目计算。测得病毒滴度为51 08 T U/m L,2 0 0 L分装后-8 0 冻存备用。然后,确认慢病毒对h P D L F s的 感 染MO I和 最 佳 的 感 染 条 件,MO I=(病毒滴度病毒体积)/细胞数目,并正式转染细胞,慢病毒感染1 8 h后,更换新鲜完全培养基;慢病毒感染7 2 h后,获得稳定表达细胞株。1.2.7 流式细胞术 取对数生长期的h P D L F s,制成2 1 04个细胞/孔的细胞悬液于2 4孔板中,分组如下:L P S组(5 m g/L L P S)、L P S+o e-N C组、L P S+o e-S O C S 6组、L P S+o e-S O C S 6+C A 1组。各组细胞培养4 8 h后,用不含E D T A的0.2 5%胰酶消化各组细胞,用预冷P B S重悬细胞,洗涤细胞;加入B i n d-i n g B u f f e r悬浮细胞;A n n e x i n V-F I T C标记及P I标记;用流式细胞仪检测,C E L L Q u e s t软件分析。1.2.8 统计学分析 所有数据均以xs表示。采用单因素方差分析比较组间差异。所有统计分析采用G r a g h P a d 7.0软件,以P0.0 5为组间比较差异具有统计学意义。2 结果2.1 q R T-P C R检 测L P S对h P D L F s中S O C S 6 mR NA表达的影响 与对照组相比,其余各组细胞中S O C S 6 mR NA表达均下调,与0.1 m g/L L P S组相比,1 m g/L L P S组和5 m g/L L P S组细胞中S O C S 6 mR NA表达均下调,与1 m g/L L P S组相比,5 m g/L L P S组细胞中S O C S 6 mR NA表达下调,呈剂量依赖性,L P S浓度越高,细胞中S O C S 6 mR NA表达下调越明显。见表2。2.2 W e s t e r n b l o t检测L P S对h P D L F s中S O C S 6蛋白表达的影响 与对照组相比,其余各组细胞中S O C S 6蛋白表达均下调,与0.1 m g/L L P S组相比,1 m g/L L P S组 和5 m g/L L P S组 细 胞 中S O C S 6蛋白表达均下调,与1 m g/L L P S组相比,5 m g/L L P S组细胞中S O C S 6蛋白表达下调,呈剂量依赖性,L P S浓度越高,细胞中S O C S 6蛋白表达下调越明显。见图1及表2。2.3 C C K-8法检测L P S对h P D L F s细胞活力的影响 与对照组相比,其余各组4 8 h细胞活力均下降,与0.1 m g/L L P S组相比,1 m g/L L P S组和5 m g/L L P S组4 8 h细胞活力均下降,与1 m g/L L P S组相比,5 m g/L L P S组4 8 h细胞活力下降,呈718 口腔医学研究2 0 2 3年9月第3 9卷第9期表2 L P S对h P D L F s中S O C S 6基因表达、细胞活力及炎症因子的影响T a b.2 E f f e c t s o f L P S o n S O C S 6 g e n e e x p r e s s i o n,c e l l v i a b i l i t y a n d i n f l a mm a t o r y f a c t o r s i n h P D L F sxs组别S O C S 6 mR NA S O C S 6蛋白 细胞活力/%T N F-/p gm L-1I L-1/p gm L-1对照组1.0 00.0 51.0 00.0 51 0 0.0 04.1 92 0 6.1 12 1.7 51 2 7.3 08.3 90.1 m g/L L P S组0.8 30.0 6a0.7 10.0 4b9 0.4 32.3 1a3 1 8.6 63 8.9 1a1 8 4.8 31 5.0 3a1 m g/L L P S组0.5 20.0 8b d0.3 80.0 7b d7 5.9 45.0 3b d4 6 1.3 15 8.1 6b c2 4 3.2 22 1.5 0b c5 m g/L L P S组0.2 50.0 4b d e0.1 90.0 3b d e4 9.5 15.8 6b d e7 2 9.0 54 3.9 2b d e3 8 6.3 32 9.6 8b d e 注:与对照组比较,a P0.0 5,b P0.0 1;与0.1 m g/L L P S组比较,c P0.0 5,d P0.0 1;与1 m g/L L P S组比较,e P0.0 11:对照组;2:0.1 m g/L L P S组;3:1 m g/L L P S组;4:5 m g/L L P S组图1 L P S对h P D L F s中S O C S 6蛋白表达的影响F i g.1 T h e e f f e c t o f L P S o n t h e e x p r e s s i o n o f S O C S 6 p r o t e i n i n h P D L F s.剂量依赖性,L P S浓度越高,4 8 h细胞活力下降越明显。见表2。2.4 E L I S A法检测L P S对h P D L F s细胞炎症因子T N F-、I L-1的含量的影响 与对照组相比,其余各组细胞炎 症 因 子T N F-、I L-1含 量 均 增 加,与0.1 m g/L L P S组相比,1 m g/L L P S组 和5 m g/L L P S组细胞炎症因子T N F-、I L-1含量均增加,与1 m g/L L P S组相比,5 m g/L L P S组细胞炎症因子T N F-、I L-1含量增加,呈剂量依赖性,L P S浓度越高,细胞炎症因子T N F-、I L-1含量增加的越多。见表2。2.5 q R T-P C R检测细胞S O C S 6 mR NA表达 S O C S 6 m R N A在L P S组、L P S+o e-N C组及L P S+o e-S O C S 6组细胞中的相对表达量分别为:1.0 00.1 1、1.1 00.1 4、3.4 70.2 3。与L P S组 相 比,L P S+o e-N C组细胞中S O C S 6 mR NA表达无显著差异,L P S+o e-S O C S 6组细胞中S O C S 6 mR NA表达上调。2.6 C C K-8法检测细胞活力 与L P S组相比,L P S+o e-N C组4 8 h细胞活力无显著差异,L P S+o e-S O C S 6+C A 1组和L P S+o e-S O C S 6组4 8 h细胞活力提高,与L P S+o e-S O C S 6组相比,L P S+o e-S O C S 6+C A 1组4 8 h细胞活力下降。见表3。2.7 流式细胞术检测细胞凋亡 与L P S组相比,L P S+o e-N C组4 8 h细 胞 凋 亡 率 无 显 著 差 异,L P S+o e-S O C S 6+C A 1组 和L P S+o e-S O C S 6组4 8 h细胞凋亡率下降,与L P S+o e-S O C S 6组相比,L P S+o e-S O C S 6+C A 1组4 8 h细胞凋亡率上升。见图2及表3。图2 过表达S O C S 6对L P S诱导的h P D L F s细胞凋亡的影响F i g.2 E f f e c t o f o v e r e x p r e s s i o n o f S O C S 6 o n c e l l a p o p t o s i s o f h P D L F s i n d u c e d b y L P S.表3 过表达S O C S 6对L P S诱导的h P D L F s细胞活力、细胞凋亡及炎症因子的影响T a b.3 E f f e c t s o f o v e r e x p r e s s i o n o f S O C S 6 o n c e l l v i a b i l i t y,c e l l a p o p t o s i s a n d i n f l a mm a t o r y f a c t o r s o f h P D L F s i n d u c e d b y L P Sxs组别细胞活力/%凋亡率/%T N F-/p gm L-1I L-1/p gm L-1L P S组1 0 0.0 04.5 51 8.6 11.6 97 2 1.5 42 5.0 03 9 3.2 82 0.6 6L P S+o e-N C组9 8.6 27.1 21 8.6 51.5 07 0 3.8 21 6.7 54 0 6.2 82 8.9 7L P S+o e-S O C S 6组1 7 7.6 98.9 3a b6.8 81.7 7a b3 7 0.4 92 2.4 6a b2 2 0.1 61 9.7 9a bL P S+o e-S O C S 6+C A 1组1 4 7.4 31 1.8 6a b c1 2.5 11.9 8d e f5 5 9.9 64 5.2 9a b c3 0 9.6 71 1.1 6a b c 注:与L P S组比较,d P0.0 5,a P0.0 1;与L P S+o e-N C组比较,e P0.0 5,b P0.0 1;与L P S+o e-S O C S 6组比较,f P0.0 5,c P0.0 1818J o u r n a l o f O r a l S c i e n c e R e s e a r c h,S e p.2 0 2 3,V o l.3 9,N o.9 表4 S O C S 6、p-J AK 2、p-S T A T 3蛋白在各组细胞中的表达T a b.4 T h e p r o t e i n e x p r e s s i o n o f S O C S 6,p-J AK 2 a n d p-S T AT 3 i n c e l l s o f e a c h g r o u pxs组别S O C S 6 p-J AK 2 p-S T A T 3 L P S组1.0 00.1 21.0 00.0 51.0 00.0 5L P S+o e-N C组1.1 00.0 71.0 30.0 60.9 60.0 9L P S+o e-S O C S 6组2.0 30.1 1a b0.2 80.0 5a b0.1 60.0 5a bL P S+o e-S O C S 6+C A 1组1.8 90.1 7a b0.5 60.0 7a b c0.4 60.0 4a b c 注:与L P S组比较,a P0.0 1;与L P S+o e-N C组比较,b P0.0 1;与L P S+o e-S O C S 6组比较,c P0.0 12.8 E L I S A法检测细胞炎症因子T N F-、I L-1的含量 与L P S组相比,L P S+o e-N C组细胞炎症因子T N F-、I L-1含 量 无 显 著 差 异,L P S+o e-S O C S 6+C A 1组和L P S+o e-S O C S 6组细胞炎症因子T N F-、I L-1含量减少,与L P S+o e-S O C S 6组相比,L P S+o e-S O C S 6+C A 1组 细 胞 炎 症 因 子T N F-、I L-1含量增加。见表3。2.9 W e s t e r n b l o t检 测 细 胞S O C S 6、p-J AK 2、p-S T AT 3蛋白表达 与L P S组相比,L P S+o e-N C组细胞中S O C S 6蛋白表达无显著差异,L P S+o e-S O C S 6+C A 1组 和L P S+o e-S O C S 6组 细 胞 中S O C S 6蛋白表达均上调,与L P S+o e-S O C S 6组相比,L P S+o e-S O C S 6+C A 1组细胞中蛋白表达无显著差异。见图3及表4。1:L P S组;2:L P S+o e-N C组;3:L P S+o e-S O C S 6组;4:L P S+o e-S O C S 6+C A 1组图3 各组细胞S O C S 6、p-J AK 2、p-S T A T 3蛋白表达F i g.3 T h e e x p r e s s i o n o f S O C S 6,p-J AK 2 a n d p-S T A T 3 p r o t e i n s i n c e l l s o f e a c h g r o u p.与L P S组 相 比,L P S+o e-N C组 细 胞 中p-J AK 2、p-S T AT 3蛋白表达无显著差异,L P S+o e-S O C S 6+C A 1