N-acetylcysteine and reduced glutathione reverse flupirtine-induced liver injury and pro⁃duce other beneficial effects in combination with flupirtine.pdf

中国药理学与毒理学杂志2023年9月第37卷增刊1Chin J Pharmacol Toxicol，Vol 37，Suppl 1,Sep 2023孙 浩1，王 丹2（1.浙江大学医学院附属妇产科医院药剂科，浙江杭州 310006；2.浙江医院药剂科，浙江 杭州310030）摘要：目的 基于TMT蛋白质组学和网络药理学探讨常春藤皂苷元（Hed）抑制宫颈癌SiHa细胞线粒体自噬的作用机制。方法 首先，利用TMT蛋白质组学技术鉴定 Hed 干预的差异蛋白并进行KEGG富集分析；然后，通过自拟的网络关联算法确定与线粒体自噬关联度最高的信号转导通路并构建关联网络；随后，通过TOPSIS及k核分解法确定潜在关键靶点及靶网络；最后，通过JC-1荧光染色及 Western 印迹等方法验证 Hed抑制线粒体自噬的分子机制。结果 TMT蛋白质组学鉴定了1270个差异蛋白，包括 655 个上调和 615 个下调蛋白。关联分析结果显示 HIF-1 信号通路与线粒体自噬密切相关。TOPSIS 及 k 核分解显示 Hed 可能通过调控以 HIF-1、Src、Akt、Stat3 这 4 个潜在关键靶点为主的靶网络以抑制线粒体自噬。JC-1结果表明 Hed 能诱导线粒体膜电位下降。Western 印迹结果表明 Hed 能降低 HIF-1、Src、Akt的表达，增加 Stat3的表达，同时能增加 p62的水平及提高LC3-/LC3-的比例。结论 Hed 可能通过调控以 HIF-1、Src、Akt、Stat3 为主的靶网络阻滞自噬效应部分，从而抑制宫颈癌细胞的晚期线粒体自噬。关键词：线粒体自噬；常春藤皂苷元；宫颈癌；TMT蛋白质组学基 金 项 目：浙 江 省 自 然 科 学 基 金 青 年 项 目（LYQ20H280002）通讯作者：孙 浩，E-mail：W2-5-2葫芦素B通过靶向STAT3促进铁死亡抑制非小细胞肺癌的生长曾泽瑶，苏佳婷，罗连响（广 东 医 科 大 学 海 洋 医 药 研 究 院，广 东 湛 江524023）摘要：目的 葫芦素 B（CuB）是一种具有特殊苦味和细胞毒性的四环三萜分子，具有广泛的生物活性。本研究探索CuB在非小细胞肺癌（NSCLC）中诱导铁死亡的可能。方法 数据库综合分析结果揭示 CuB 介导的 NSCLC 铁死亡的潜在可能。通过蛋白-蛋白相互作用（PPI）网络预测CuB诱导NSCLC的枢纽靶点。利用分子对接、分子动力学检测 CuB 与枢纽靶点的结合效应。最后，通过体外实验包括脂质过氧化、活性氧、亚铁离子水平、线粒体膜电位测定和药物毒性分析、蛋白印迹、免疫荧光、热迁移等技术探究 CuB 诱导 NSCLC 铁死亡的潜在机制。结果 网络药理学分析显示，CuB 在 NSCLC 中介导 26 个铁死亡基因的改变，预测 STAT3 是其中最重要的靶点之一。使用KRAS-G12C 突变的 H358 细胞进行体外实验验证。结果表明，CuB 通过靶向 STAT3 诱导 H358细胞铁死亡。结论 本研究首次阐明了 CuB 在NSCLC 中诱导铁死亡的潜力。CuB 通过靶向STAT3 诱导 H358 细胞铁死亡，为从天然产物中提取有效成分开发新的靶向铁死亡的肺癌治疗药物提供新的线索。关 键 词：葫 芦 素 B；非 小 细 胞 肺 癌；铁 死 亡；STAT3；网络药理学通讯作者：罗连响，E-mail：W2-6 肝病W2-6-1N-acetylcysteineandreducedglutathionereverse flupirtine-induced liver injury and produce other beneficial effects in combinationwith flupirtineCHEN Yanming1，CHEN Jinsong2(1.Peking University Health Science Center,Beijing 100000,China;2.Xuzhou Food and DrugSupervisionandInspectionCenter,Xuzhou,221000,China)Abstract:OBJECTIVE To assess whetherN-acetylcysteine(NAC)and reduced glutathione(GSH)are effective in reversing flupirtine-inducedhepatotoxicity and whether they have other beneficialeffectswhencombinedwithflupirtine.METHODSThe analgesic effects of NAC andflupirtine were first evaluated in carrageenan-induced inflammatory pain and paclitaxel-inducedneuropathic pain.The combination subthresholding approach was then used to determine whetherthe combination of NAC and flupirtine producedsynergisticanalgesiceffects.Hepatotoxicity 28中国药理学与毒理学杂志2023年9月第37卷增刊1Chin J Pharmacol Toxicol，Vol 37，Suppl 1，Sep 2023markers and histopathological examination of theliver were used to assess the efficacy of NACand GSH in reversing flupirtine-induced hepatotoxicity.Finally,the effect of GSH on the saferange of flupirtine was assessed in an acute toxicity assay.RESULTS Flupirtine and NAC produceddose-dependentantiallodyniceffectsevoked by carrageenan and paclitaxel in mice.Inthe above model,the combination of NAC andflupirtine produced an unexpected synergisticanalgesic effect.There were no significant differences observed in the hepatotoxicity markersand liver histopathology between the experimental group and the control group under NAC andGSH treatment.Finally,GSH(200 mg kg-1)expanded the therapeutic index of flupirtine by1.77 times.CONCLUSION NAC and GSH areeffective in preventing liver damage caused bylong-term flupirtine use,which provides a solution for the safe and effective treatment of chronicpain with flupirtine.In addition,the other beneficial effects of NAC and GSH when combinedwith flupirtine may provide the basis for the development of a new therapy with minimal side-effects and good efficacy.Key words:N-acetylcysteine;reduced glutathione;flupirtine;hepatotoxicityFoundation item:Priority Academic ProgramDevelopment of Jiangsu Higher Education Institutions(2022JSPAPD006)Corresponding author:CHEN Jinsong,E-mail:W2-6-2基于网络药理学和实验验证探讨苓荷颗粒对非酒精性脂肪肝的作用机制胡宇婷1，王 佳1，汪晨冉1，蔡 虹2，陆奕宇1（1.上 海 中 医 药 大 学 交 叉 科 学 研 究 院，上 海201203；2.厦 门 市 中 医 院 肝 病 科，福 建 厦 门361001）摘要：目的 基于网络药理学及动物实验验证探讨苓荷颗粒对非酒精性脂肪肝（NAFLD）的作用 机 制。方 法 网 络 药 理 学 预 测 苓 荷 颗 粒 对NAFLD 的 靶 点 和 信 号 通 路；高 脂 饮 食 诱 导 的NAFLD 大鼠模型，给予不同剂量的苓荷颗粒灌胃治疗，评估其药效。观察大鼠体重，状态及肝体比的变化；油红 O 和 HE 染色评估大鼠肝脏组织的病理学变化；生化分析检测大鼠血清 TC、TG、ALT 和 AST 的含量变化；Western 印迹法检测大鼠肝脏组织中 SREBP1，SCD1，EZH2，和 Nrf2 的蛋白表达情况。结果 网络药理学筛选出苓荷颗粒潜在活性成分134个，NAFLD的靶点基因1029个；构建成分-靶点网络，获得潜在作用靶点 258个。靶点基因的 GO 和 KEGG 富集分析显示苓荷颗粒的作用机制可能与氧化应激及多种代谢性疾病途径显著相关。动物实验验证显示，苓荷颗粒能 够 改 善 NAFLD；降 低 大 鼠 肝 组 织 SREBP1，SCD1，EZH2 蛋白表达水平，提高核内 Nrf2 蛋白表达水平。结论 苓荷颗粒的潜在活性成分可能降 低 脂 肪 代 谢 相 关 蛋 白 表 达，通 过 作 用 靶 点EZH2，Nrf2 调 控 氧 化 应 激 信 号 通 路，起 到 对NAFLD大鼠的治疗作用。关键词：苓荷颗粒；非酒精性脂肪肝；网络药理；氧化应激机制基 金 项 目：上 海 市 卫 健 委 临 床 研 究 专 项（202240243）；国 家 自 然 科 学 基 金 资 助 项 目（82274183）；上海中医药大学产业发展中心医养结合科创项目（YYKC-2021-01-117）；厦门市卫健委医学科研计划项目（2021D006）；厦门市中医院医疗卫生科技计划项目（3502Z0214ZD1150）通讯作者：陆奕宇，E-mail：W2-6-3基于网络药理学、分子对接与细胞实验研究山沉香对急性肝损伤的作用机制秦园媛1，任妍慧1，常福厚1，2，杨 艳1，2，范 蕾1，2（1.内蒙古医科大学药学院，内蒙古 呼和浩特010010；2.内蒙古自治区新药筛选工程研究中心，内蒙古 呼和浩特 010010）摘要：目的 探讨山沉香对急性肝损伤（ALI）的作用机制，并通过细胞实验进行验证。方法 通过PubChem 数据库并结合文献，根据 SwissTargetADEM、SwissTargetPrediction 平台预测山沉香化学成分及其作用靶点；通过 GeneCards、OMIM 数据库筛选ALI相关靶点，Venny2.l.0平台获取山沉香有效成分与ALI的共有靶点；STRING数据库构建 PPI 网 络，Cytohubba 筛 选 核 心 靶 点；Cytoscape3.9.0 软件构建成分-靶点-疾病网络图；29