SN∕T 4519-2016 出口动物源食品中利巴韦林残留量的测定 液相色谱-质谱∕质谱法(出入境检验检疫).pdf

书 书 书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖犜 出口动物源食品中利巴韦林残留量的测定液相色谱质谱质谱法犇犲 狋 犲 狉犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳狉 犻 犫 犪 狏 犻 狉 犻 狀狉 犲 狊 犻 犱 狌 犲犻 狀犳 狅 狅 犱 狊 狋 狌 犳 犳 狊狅 犳犪 狀 犻 犿犪 犾狅 狉 犻 犵 犻 狀犳 狅 狉犲 狓 狆 狅 狉 狋犔犆 犕犛犕犛犿犲 狋 犺 狅 犱 发布 实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发 布书 书 书前言本标准按照 给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国福建出入境检验检疫局、中华人民共和国东山出入境检验检疫局、中华人民共和国厦门出入境检验检疫局、中华人民共和国绍兴出入境检验检疫局、福建圣农发展股份有限公司。本标准主要起草人：刘正才、杨方、潘迎芬、林永辉、陈旭东、徐敦明、任明兴、吕小玲。犛犖犜 出口动物源食品中利巴韦林残留量的测定液相色谱质谱质谱法范围本标准规定了动物源食品中利巴韦林残留量的液相色谱质谱质谱的测定方法。本标准适用于鸡肉、肝脏、肾、蛋、猪肉、鳗鱼、虾等动物源食品中利巴韦林残留量的测定和确证。规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 分析实验室用水规格和试验方法方法提要试样中残留的利巴韦林代谢物经酸性磷酸酯酶水解成利巴韦林原药，与样品中残留的利巴韦林原药一起，经三氯乙酸乙晴混合溶液提取，经苯硼酸固相萃取小柱净化，液相色谱质谱质谱进行测定，同位素内标法定量。试剂和材料除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为 规定的一级水。 甲醇：色谱纯。 乙腈：色谱纯。 甲酸：色谱纯。 三氯乙酸。 氨水：含量为 。 乙酸铵：色谱级纯。 酸性磷酸酯酶（ ， ，活力： ，号： ） 。 酸性磷酸酯酶溶液（ ） ：准确称取酸性磷酸酯酶（ ），置 容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀，配制成 的酶解液，冰箱中保存。 三氯乙酸溶液（ ， ） ：称取 三氯乙酸，加水约 使其溶解，用氨水调至 （ ） ，再加水定容至 。 苯硼酸固相萃取小柱洗脱液，甲酸水甲醇溶液（体积比 ） ：准确量取甲酸和水加入 的甲醇中，混匀后备用。 乙酸铵缓冲溶液（ ， ） ：称取乙酸铵 ，加水约 使其溶解，用乙酸调至 （ ） ，再加水定溶至 。 乙酸铵缓冲溶液（ ， ） ：称取乙酸铵 ，加水约 使其溶解，用氨水调至 （ ） ，再加水定容至 。犛犖犜 标准物质：利巴韦林（ ；号： ） ，纯度大于 。 同位素内标标准物质：利巴韦林 纯度大于 。 标准储备液（ ） ：准确称取利巴韦林标准品（ ） （精确至 ） ，置 容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，配制成 的标准储备液， 冰箱中保存，有效期为年。 标准中间液（ ） ：用移液管吸取标准储备液（ ）置 容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀得到 标准中间液，置冰箱中保存，有效期为个月。 内标储备液：准确称取利巴韦林 标准品（ ） （精确至 ） ，置 容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，配制成 的内标标准储备液， 冰箱中保存，有效期为年。 内标中间溶液（ ） ：移取 的内标标准储备液（ ）至 容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，置冰箱中保存，有效期为个月。 标准工作液：临用时根据需要，移取适量的标准中间溶液（ ）和内标中间溶液（ ） ，用乙腈稀释至合适浓度，使用前配制。 苯硼酸固相萃取小柱： ，或相当者；使用前依次用乙腈，乙腈 甲酸（体积比，） ，乙酸铵缓冲溶液（ ）活化，并保持柱体湿润。注：可采用商品化的 固相萃取小柱 ， ： ， ，或等同性能的其他小柱。 滤膜： ，有机系。仪器和设备 液相色谱质谱质谱仪：配电喷雾电离（ ）源。 天平：感量 和 。 组织捣碎机。 高速冷冻离心机：转速 。 离心机： 。 漩涡振荡器。 计。 氮吹仪。 固相萃取装置。试样制备与保存 试样制备肌肉、肝脏、肾放入组织捣碎机均质，充分混匀，均分成两份，分别装入清洁容器内，并标明标记；蛋类，虾去壳后取可食部分后放入组织捣碎机均质，充分混匀，均分成两份，分别装入清洁容器内，并标明标记。制样操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。 试样保存试样于 以下保存，新鲜或冷冻的组织样品可在贮存 。犛犖犜 测定步骤 提取称取约（精确至 ）试样，置于 具螺旋盖的聚丙烯离心管中，添加 内标标准工作溶液（ ） ，加入 三氯乙酸溶液（ ）和 乙腈，振荡混匀 后在超声波发生器中超声 ，于 离心 ，取出上清液，再加入 三氯乙酸溶液（ ）重复提取一次，离心后合并上清液定容至 的容量瓶中。 酶解准确移取以上提取液，加入 乙酸铵溶液（ ） ，混匀，再加入 酸性磷酸酯酶（ ） ，加盖后涡旋 ，于恒温烘箱中 培养。取出后冷却至室温，用氨水调至 （ ） ，混匀， 离心 ，取上清液备用。 净化取上清液（ ） ，上样到活化过的固相萃取小柱，控制上样流速小于 ；依次用含有 乙腈乙酸铵缓冲溶液（ ）和 氨水甲醇淋洗，然后真空抽干 ，以 洗脱溶液（ ）洗脱至 玻璃管中，在 用氮气浓缩仪吹干。准确加入 乙腈水（体积比 ）溶液溶解残渣，过 滤膜，供液相色谱质谱质谱仪测定。 测定 液相色谱条件 色谱柱：两性离子型亲水相互作用色谱柱， （内径） ，粒度 ，或相当者。 流动相：为 乙酸铵溶液（含 甲酸） ，为乙腈，梯度洗脱，洗脱程序见表。表液相色谱的梯度洗脱程序时间 流动相流动相 流速： 。 柱温： 。 进样量：。 质谱条件 离子化模式：电喷雾电离（ ）正离子模式； 质谱扫描方式：多反应监测（） ； 其他参考质谱条件参见附录。犛犖犜 定性测定被测组分选择个母离子，个以上子离子，在相同实验条件下，样品中待测物质的保留时间与标准校准溶液中对应浓度标准校准溶液的保留时间偏差在 之内；且样品谱图中各组分定性离子的相对丰度与浓度接近的标准校准溶液谱图中对应的定性离子的相对丰度进行比较，偏差不超过表规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物。表定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度 允许的最大偏差 定量测定内标法定量：用标准工作溶液分别进样，以分析化合物和内标化合物的峰面积比为纵坐标，以分析化合物和内标化合物的浓度比为横坐标作标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，标准工作液和待测液中利巴韦林的响应值均应在仪器线性响应范围内。利巴韦林的保留时间、母离子和子离子参见附录表 。利巴韦林的标准品选择离子流色谱图参见附录图 。 空白试验除不加试样外，均按 操作步骤进行。结果计算和表述试样中利巴韦林的残留总量利用数据处理系统计算或按式（）计算，计算结果需扣除空白值。犡犮犮犻犃犃狊犻犞犮狊犻犃犻犃犿 （）式中：犡 样品中利巴韦林残留量，单位为微克每千克（ ） ；犮 标准工作溶液中利巴韦林的浓度，单位为纳克每毫升（ ） ；犮犻 样液中内标物的浓度，单位为纳克每毫升（ ） ；犃 样液中利巴韦林的峰面积；犃狊犻 标准工作溶液中内标物的峰面积；犞 样品溶液最终定容体积，单位为毫升（） ；犮狊犻 标准工作溶液中内标物的浓度，单位为纳克每毫升（ ） ；犃犻 样液中内标物的峰面积；犃 标准工作溶液中利巴韦林的峰面积；犿 最终样液代表的试样质量，单位为克（） 。测定低限和回收率 测定低限本方法中利巴韦林的测定低限为 。 正确度（回收率）不同基质中利巴韦林残留量在不同添加水平下的回收率试验数据参见附录表 。犛犖犜 附录犃（资料性附录）质谱参考参数）非商业性声明：附录所列参考质谱条件是在 型液质联用仪上完成的，此处列出试验用仪器型号仅为提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试不同厂家或型号的仪器。质谱参考参数如下：） 正离子模式；）多反应监测（） ；）电喷雾电压（ ） ： ；）离子源温度（） ： ；）雾化气压力（ ） ： （ ） ；）辅助气压力（ ） ： （ ） ；）气帘气压力（） ： （ ） ；）监测离子对、去簇电压（） 、碰撞电压（）见表 。表犃 利巴韦林保留时间、定性定量离子对及去簇电压、碰撞能量药物名称保留时间 定性离子对犿狕定量离子对犿狕去簇电压碰撞电压利巴韦林 利巴韦林 犛犖犜 附录犅（资料性附录）利巴韦林标准物质的多反应监测（犕犚犕）色谱图图犅 利巴韦林以及内标标准品（狀 犵犿犔）的反应监测（犕犚犕）色谱图犛犖犜 5X 103 2. 12 利巴韦林m/: 245.196.1 amu 4X 103 3 巳问 高川03国 2X103 1X 103 。2 4 6 时间/min8 10 1. 8X10 4 1. 6X10 4 g; 1. 4X10 4 与1.2X10 4 自1川4 8.0X103 6.0X103 4.0X103 2.0X103 0.0 2. 12 利巴韦林m/z: 245.1 113.1amu 。2 4 6 8 10 时间/min2.5X105 2. 12 2.0X105 利巴韦林13C5m/: 250.1 113.0 amu 3 巳问1. 5X10 堪f国 1. OX105 5.0X104 nu nu 。2 4 6 时间/min8 10 附录犆（资料性附录）回收率利巴韦林在鸡肉、鸡蛋、鸡肝、鸡肾、猪肉、鳗鱼、虾、蒸煮鸡尾串、皮蛋中回收率范围的试验数据，见表 。表犆 利巴韦林在不同基质中不同添加水平下的回收率范围样品名称添加水平（ ）回收率范围鸡肉 鸡蛋 鸡肝 鸡肾 猪肉 鳗鱼 虾 蒸煮鸡尾串 皮蛋 犛犖犜 犉狅 狉 犲狑狅 狉 犱犜犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱犻 狊狆 狉 犲 狆 犪 狉 犲 犱犪 犮 犮 狅 狉 犱 犻 狀 犵狋 狅犌犅犜 犘 犾 犲 犪 狊 犲狆 犪 狔犪 狋 狋 犲 狀 狋 犻 狅 狀狋 犺 犪 狋狊 狅犿犲犮 狅 狀 狋 犲 狀 狋 狊犻 狀狋 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱犿犪 狔狉 犲 犳 犲 狉狋 狅狆 犪 狋 犲 狀 狋 狊，犜犺 犲犻 狀 狊 狋 犻 狋 狌 狋 犻 狅 狀犱 狅 犲 狊 狀狋狋 犪 犽 犲狅 狀狋 犺 犲狉 犲 狊 狆 狅 狀 狊 犻 犫 犻 犾 犻 狋 狔狋 狅犻 狀 犱 犲 狀 狋 犻 犳 狔狋 犺 犲 狊 犲狆 犪 狋 犲 狀 狋 狊犜犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱犻 狊狆 狉 狅狆 狅 狊 犲 犱犫 狔犪 狀 犱犻 狊狌 狀 犱 犲 狉狋 犺 犲犮 犺 犪 狉 犵 犲狅 犳狋 犺 犲犆犲 狉 狋 犻 犳 犻 犮 犪 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱犃犮 犮 狉 犲 犱 犻 狋 犪 狋 犻 狅 狀犪 犱犿 犻 狀 犻 狊 狋 狉 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳狋 犺 犲犘 犲 狅狆 犾 犲狊犚 犲 狆 狌 犫 犾 犻 犮狅 犳犆犺 犻 狀 犪犜犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱犻 狊犱 狉 犪 犳 狋 犲 犱犫 狔犉 狌 犼 犻 犪 狀犈 狀 狋 狉 狔 犈狓 犻 狋犐 狀 狊 狆 犲 犮 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱犙狌 犪 狉 犪 狀 狋 犻 狀 犲犅狌 狉 犲 犪 狌狅 犳狋 犺 犲犘 犲 狅狆 犾 犲狊犚 犲 狆 狌 犫 犾 犻 犮狅 犳犆犺 犻 狀 犪，犇狅 狀 犵 狊 犺 犪 狀犈 狀 狋 狉 狔 犈狓 犻 狋犐 狀 狊 狆 犲 犮 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱犙狌 犪 狉 犪 狀 狋 犻 狀 犲犅狌 狉 犲 犪 狌狅 犳狋 犺 犲犘 犲 狅狆 犾 犲狊犚 犲 狆 狌 犫 犾 犻 犮狅 犳犆犺 犻 狀 犪，犡 犻 犪犿犲 狀犈 狀 狋 狉 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狀 犳 犻 狉犿犪 狋 犻 狅 狀狅 犳狉 犻 犫 犪 狏 犻 狉 犻 狀犻 狀狉 犲 狊 犻 犱 狌 犲 狊犻 狀犮 犺 犻 犮 犽 犲 狀，犾 犻 狏 犲 狉，犽 犻 犱 狀 犲 狔，犲 犵 犵 狊，狆 狅 狉 犽，犳 犻 狊 犺，犪 狀 犱狊 犺 狉 犻犿狆 狊犖狅 狉犿犪 狋 犻 狏 犲狉 犲 犳 犲 狉 犲 狀 犮 犲 狊犜犺 犲犳 狅 犾 犾 狅狑 犻 狀 犵犱 狅 犮 狌犿犲 狀 狋 狊犪 狉 犲狀 犲 犮 犲 狊 狊 犪 狉 狔犳 狅 狉狋 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱 犉狅 狉犱 犪 狋 犲 犱狉 犲 犳 犲 狉 犲 狀 犮 犲 狊，狅 狀 犾 狔犱 犪 狋 犲 犱犲 犱 犻 狋 犻 狅 狀 狊狊 犺 犪 犾 犾犪 狆 狆 犾 狔狋 狅狋 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱 犉狅 狉狌 狀 犱 犪 狋 犲 犱狉 犲 犳 犲 狉 犲 狀 犮 犲 狊，狋 犺 犲犾 犪 狋 犲 狊 狋犲 犱 犻 狋 犻 狅 狀狅 犳狋 犺 犲狀 狅 狉犿犪 狋 犻 狏 犲犱 狅 犮 狌犿犲 狀 狋（犻 狀 犮 犾 狌 犱 犻 狀 犵狊 狌 犫 狊 犲 狇 狌 犲 狀 狋犪犿犲 狀 犱犿犲 狀 狋 狊）狉 犲 犳 犲 狉 狉 犲 犱狋 狅犪 狆 狆 犾 犻 犲 狊犌犅犜 犠犪 狋 犲 狉犳 狅 狉犪 狀 犪 犾 狔 狋 犻 犮 犪 犾犾 犪 犫 狅 狉 犪 狋 狅 狉 狔狌 狊 犲犛狆 犲 犮 犻 犳 犻 犮 犪 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱狋 犲 狊 狋犿犲 狋 犺 狅 犱 狊犘 狉 犻 狀 犮 犻 狆 犾 犲犜 狉 犻 犮 犺 犾 狅 狉 狅 犪 犮 犲 狋 犻 犮犪 犮 犻 犱 犪 犮 犲 狋 狅 狀 犻 狋 狉 犻 犾 犲狊 狅 犾 狌 狋 犻 狅 狀犻 狊狌 狊 犲 犱狋 狅犲 狓 狋 狉 犪 犮 狋狋 犺 犲狋 狅 狋 犪 犾狉 犲 狊 犻 犱 狌 犲 狊狅 犳狉 犻 犫 犪 狏 犻 狉 犻 狀犻 狀狋 犲 狊 狋 犲 犱 狊 犪犿狆 犾 犲 狊犪 狀 犱狋 犺 犲 狀狑犪 狊犱 犻 犵 犲 狊 狋 犲 犱犫 狔犪 犮 犻 犱狆 犺 狅 狊 狆 犺 犪 狋 犪 狊 犲 犜犺 犲犲 狓 狋 狉 犪 犮 狋狑犪 狊狆 狌 狉 犻 犳 犻 犲 犱狌 狊 犻 狀 犵狆 犺 犲 狀 狔 犾犫 狅 狉 狅 狀 犻 犮犪 犮 犻 犱（犘犅犃）犛犘犈犮 犪 狉 狋 狉 犻 犱 犵 犲 犜犺 犲狉 犻 犫 犪 狏 犻 狉 犻 狀犻 狊犱 犲 狋 犲 狉犿 犻 狀 犲 犱犫 狔犔犆 犕犛犕犛，狇 狌 犪 狀 狋 犻 犳 犻 犲 犱犫 狔犻 狀 狋 犲 狉 狀 犪 犾狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱犿犲 狋 犺 狅 犱犚犲 犪 犵犲 狀 狋 狊犪 狀 犱犿犪 狋 犲 狉 犻 犪 犾 狊犝狀 犾 犲 狊 狊狅 狋 犺 犲 狉狑 犻 狊 犲狊 狆 犲 犮 犻 犳 犻 犲 犱，犪 犾 犾狋 犺 犲狉 犲 犪 犵 犲 狀 狋狌 狊 犲 犱狊 犺 狅 狌 犾 犱犫 犲犪 狀 犪 犾 狔 狋 犻 犮 犪 犾犵 狉 犪 犱 犲，狑犪 狋 犲 狉犻 狊狋 犺 犲犳 犻 狉 狊 狉犵 狉 犪 犱 犲狑犪 狋 犲 狉狆 狉 犲 狊 犮 狉 犻 犫 犲 犱犫 狔犌犅犜 犕犲 狋 犺 犪 狀 狅 犾：犎犘 犔犆犵 狉 犪 犱 犲犛犖犜 犃犮 犲 狋 狅 狀 犻 狋 狉 犻 犾 犲：犎犘 犔犆犵 狉 犪 犱 犲 犉狅 狉犿 犻 犮犪 犮 犻 犱：犎犘 犔犆犵 狉 犪 犱 犲 犜 狉 犻 犮 犺 犾 狅 狉 狅 犪 犮 犲 狋 犻 犮犪 犮 犻 犱 犃犿犿狅 狀 犻 犪（ ） 犃犿犿狅 狀 犻 狌犿犪 犮 犲 狋 犪 狋 犲：犎犘 犔犆犵 狉 犪 犱 犲 犃犮 犻 犱狆 犺 狅 狊 狆 犺 犪 狋 犪 狊 犲（犘 犺 狅 狊 狆 犺 犪 狋 犪 狊 犲犃犮 犻 犱，犉 狉 狅犿犠犺 犲 犪 狋犌犲 狉犿，犞 犻 狋 犪 犾 犻 狋 狔： 狌 狀 犻 狋犿犵，犆犃犛犖狅： ） 犛 狋 狅 犮 犽狊 狅 犾 狌 狋 犻 狅 狀 狊狅 犳犪 犮 犻 犱狆 犺 狅 狊 狆 犺 犪 狋 犪 狊 犲（ 犵犿犔） ：犠犲 犻 犵 犺犪 犫 狅 狌 狋 犿犵犪 犮 犻 犱狆 犺 狅 狊 狆 犺 犪 狋 犪 狊 犲犿犪 狋 犲 狉 犻 犪 犾 狊（ ）犱 犻 狊 狊 狅 犾 狏 犲狑 犻 狋 犺狑犪 狋 犲 狉狋 狅犪狏狅 犾 狌犿犲狅 犳 犿犔犜犺 犲狊 狋 狅 犮 犽狊 狅 犾 狌 狋 犻 狅 狀 狊狊 狋 狅 狉 犲犪 狋犪 狆 狆 狉 狅狓 犻犿犪 狋 犲 犾 狔 犜 狉 犻 犮 犺 犾 狅 狉 狅 犪 犮 犲 狋 犻 犮犪 犮 犻 犱狊 狅 犾 狌 狋 犻 狅 狀（ 犵犔，狆犎 ） ：犠犲 犻 犵 犺 犵狋 狉 犻 犮 犺 犾 狅 狉 狅 犪 犮 犲 狋 犻 犮犪 犮 犻 犱，犱 犻 狊 狊 狅 犾 狏 犲狑 犻 狋 犺 犿犔狑犪 狋 犲 狉犪 狀 犱犪 犱 犼 狌 狊 狋 犲 犱狆犎 （ ）狑 犻 狋 犺犪犿犿狅 狀 犻 犪犪 狀 犱犱 犻 犾 狌 狋 犲狋 狅 犿犔，狋 犺 犲 狀犿 犻 狓狑犲 犾 犾 犜犺 犲犲 犾 狌 犲 狀 狋狅 犳犘犅犃犛犘犈（犳 狅 狉犿 犻 犮犪 犮 犻 犱狑犪 狋 犲 狉犿犲 狋 犺 犪 狀 狅 犾 ，犞犞犞） ：犘 犻 狆 犲 狋 犿犔犳 狅 狉犿 犻 犮犪 犮 犻 犱犪 狀 犱 犿犔狑犪 狋 犲 狉犻 狀 狋 狅 犿犔犿犲 狋 犺 犪 狀 狅 犾犪 狀 犱犿 犻 狓狑犲 犾 犾 犿狅 犾犔犪犿犿狅 狀 犻 狌犿犪 犮 犲 狋 犪 狋 犲犫 狌 犳 犳 犲 狉狊 狅 犾 狌 狋 犻 狅 狀：犠犲 犻 犵 犺犪犿犿狅 狀 犻 狌犿犪 犮 犲 狋 犪 狋 犲 犵，犱 犻 狊 狊 狅 犾 狏 犲狑 犻 狋 犺 犿犔狑犪 狋 犲 狉犪 狀 犱犪 犱 犼 狌 狊 狋 犲 犱狆犎 （ ）狑 犻 狋 犺犪犿犿狅 狀 犻 犪犪 狀 犱犱 犻 犾 狌 狋 犲狋 狅 犿犔 犿狅 犾犔犪犿犿狅 狀 犻 狌犿犪 犮 犲 狋 犪 狋 犲犫 狌 犳 犳 犲 狉狊 狅 犾 狌 狋 犻 狅 狀：犠犲 犻 犵 犺犪犿犿狅 狀 犻 狌犿犪 犮 犲 狋 犪 狋 犲 犵，犱 犻 狊 狊 狅 犾 狏 犲狑 犻 狋 犺 犿犔狑犪 狋 犲 狉犪 狀 犱犪 犱 犼 狌 狊 狋 犲 犱狆犎 （ ）狑 犻 狋 犺犪犿犿狅 狀 犻 犪犪 狀 犱犱 犻 犾 狌 狋 犲狋 狅 犿犔 犛 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱：狉 犻 犫 犪 狏 犻 狉 犻 狀，犆犃犛犖狅 ，狆 狌 狉 犻 狋 狔 犐 狊 狅 狋 狅狆 犲犻 狀 狋 犲 狉 狀 犪 犾狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱：狉 犻 犫 犪 狏 犻 狉 犻 狀 犆，狆 狌 狉 犻 狋 狔 犛 狋 狅 犮 犽狊 狅 犾 狌 狋 犻 狅 狀 狊狅 犳狉 犻 犫 犪 狏 犻 狉 犻 狀（ 犵犿犔） ：犠犲 犻 犵 犺犪 犫 狅 狌 狋 犿犵狉 犻 犫 犪 狏 犻 狉 犻 狀（ ） ，犱 犻 狊 狊 狅 犾 狏 犲狑 犻 狋 犺犿犲 狋 犺 犪 狀 狅 犾犪 狀 犱狋 犺 犲 狀犱 犻 犾 狌 狋 犲狑 犻 狋 犺犿犲 狋 犺 犪 狀 狅 犾狋 狅犪狏狅 犾 狌犿犲狅 犳 犿犔 犜犺 犲狊 狋 狅 犮 犽狊 狅 犾 狌 狋 犻 狅 狀 狊狊 狋 狅 狉 犲犪 狋犪 狆 狆 狉 狅狓 犻 犿犪 狋 犲 犾 狔 ，犮 犪 狀狌 狊 犲犳 狅 狉 犿狅 狀 狋 犺 狊 犕 犻 犱 犱 犾 犲狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狊 狅 犾 狌 狋 犻 狅 狀（犵犿犔） ：犇 犻 犾 狌 狋 犲 犿犔狋 犺 犲狊 狋 狅 犮 犽狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狊 狅 犾 狌 狋 犻 狅 狀（ ）狋 狅 犿犔狑 犻 狋 犺犿犲 狋 犺 犪 狀 狅 犾犜犺 犲狊 狋 狅 犮 犽狊 狅 犾 狌 狋 犻 狅 狀 狊狊 狋 狅 狉 犲犪 狋犪 狆 狆 狉 狅狓 犻犿犪 狋 犲 犾 狔，犮 犪 狀狌 狊 犲犳 狅 狉狋 犺 狉 犲 犲犿狅 狀 狋 犺 狊 犛 狋 狅 犮 犽狊 狅 犾 狌 狋 犻 狅 狀 狊狅 犳狉 犻 犫 犪 狏 犻 狉 犻 狀 犆（ 犵犿犔） ：犠犲 犻 犵 犺犪 犫 狅 狌 狋 犿犵狉 犻 犫 犪 狏 犻 狉 犻 狀 犆（ ） ，犱 犻 狊 狊 狅 犾 狏 犲狑 犻 狋 犺犿犲 狋 犺 犪 狀 狅 犾犪 狀 犱狋 犺 犲 狀犱 犻 犾 狌 狋 犲狑 犻 狋 犺犿犲 狋 犺 犪 狀 狅 犾狋 狅犪狏狅 犾 狌犿犲狅 犳 犿犔 犜犺 犲狊 狋 狅 犮 犽狊 狅 犾 狌 狋 犻 狅 狀 狊狊 狋 狅 狉 犲 犛犖犜 犪 狋犪 狆 狆 狉 狅狓 犻犿犪 狋 犲 犾 狔 ，犮 犪 狀狌 狊 犲犳 狅 狉 犿狅 狀 狋 犺 狊 犕 犻 犱 犱 犾 犲犐 狊 狅 狋 狅狆 犲犻 狀 狋 犲 狉 狀 犪 犾狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狊 狅 犾 狌 狋 犻 狅 狀（犵犿犔） ：犇 犻 犾 狌 狋 犲 犿犔狋 犺 犲狊 狋 狅 犮 犽狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狊 狅 犾 狌 狋 犻 狅 狀（ ）狋 狅 犿犔狑 犻 狋 犺犿犲 狋 犺 犪 狀 狅 犾 犜犺 犲狊 狋 狅 犮 犽狊 狅 犾 狌 狋 犻 狅 狀 狊狊 狋 狅 狉 犲犪 狋犪 狆 狆 狉 狅狓 犻犿犪 狋 犲 犾 狔，犮 犪 狀狌 狊 犲犳 狅 狉狋 犺 狉 犲 犲犿狅 狀 狋 犺 狊 犠狅 狉 犽 犻 狀 犵狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狊 狅 犾 狌 狋 犻 狅 狀：犇 犻 犾 狌 狋 犲狋 犺 犲犿 犻 犱 犱 犾 犲狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狊 狅 犾 狌 狋 犻 狅 狀（ ）犪 狀 犱犻 狀 狋 犲 狉 狀 犪 犾狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狊 狅 犾 狌 狋 犻 狅 狀（ ）狋 狅犪 犮 狇 狌 犻 狉 犲 犱犮 狅 狀 犮 犲 狀 狋 狉 犪 狋 犻 狅 狀狑 犻 狋 犺犪 犮 犲 狋 狅 狀 犻 狋 狉 犻 犾 犲 犜犺 犲狊 狋 狅 犮 犽狊 狅 犾 狌 狋 犻 狅 狀 狊狊 犺 狅 狌 犾 犱犫 犲狆 狉 犲 狆 犪 狉 犲 犱犫 犲 犳 狅 狉 犲狌 狊 犻 狀 犵 犘 犺 犲 狀 狔 犾犫 狅 狉 狅 狀 犻 犮犪 犮 犻 犱（犘犅犃）犛犘犈犮 犪 狉 狋 狉 犻 犱 犵 犲： 犿犵犿犔狅 狉犲 狇 狌 犻 狏 犪 犾 犲 狀 狋，狋 犺 犲犲 狓 狋 狉 犪 犮 狋 犻 狅 狀犮 犪 狉 狋 狉 犻 犱 犵 犲犻 狊犮 狅 狀 犱 犻 狋 犻 狅 狀 犲 犱狌 狊 犻 狀 犵犿犔犪 犮 犲 狋 狅 狀 犻 狋 狉 犻 犾 犲，犿犔犪 犮 犲 狋 狅 狀 犻 狋 狉 犻 犾 犲 犳 狅 狉犿 犻 犮犪 犮 犻 犱（狏狏）犪 狀 犱犿犔犪犿犿狅 狀 犻 狌犿犪 犮 犲 狋 犪 狋 犲狊 狅 犾 狌 狋 犻 狅 狀（ ）犫 犲 犳 狅 狉 犲狌 狊 犲，狆 狉 犲 狏 犲 狀 狋狋 犺 犲犮 狅 犾 狌犿狀 狊犳 狉 狅犿狋 狌 狀 犻 狀 犵犱 狉 狔犖狅 狋 犲：犆 犪 狀狌 狊 犲犮 狅犿犿犲 狉 犮 犻 犪 犾犛犘 犈犮 犪 狉 狋 狉 犻 犱 犵 犲犅狅 狀 犱犈 犾 狌 狋犘犅犃，狆 犪 狉 狋犖狅： ，犝犛犃 ，狅 狉犲 狇 狌 犻 狏 犪 犾 犲 狀 狋 犕犲犿犫 狉 犪 狀 犲犳 犻 犾 狋 犲 狉：犗 狉 犵 犪 狀 犻 犮， 犿犃狆 狆 犪 狉 犪 狋 狌 狊 犎 犻 犵 犺犘 犲 狉 犳 狅 狉犿犪 狀 犮 犲犔 犻 狇 狌 犻 犱犆犺 狉 狅犿犪 狋 狅 犵 狉 犪 狆 犺 狔 犕犪 狊 狊犛狆 犲 犮 狋 狉 狅犿犲 狋 犲 狉犲 狇 狌 犻 狆犿犲 狀 狋：犲 狇 狌 犻 狆 狆 犲 犱狑 犻 狋 犺犲 犾 犲 犾 犲 犮 狋 狉 狅 狊 狆 狉 犪 狔（犈犛 犐）犔犆犻 狀 狋 犲 狉 犳 犪 犮 犲 犃狀 犪 犾 狔 狋 犻 犮 犪 犾犫 犪 犾 犪 狀 犮 犲：狊 犲 狀 狊 犻 犫 犻 犾 犻 狋 狔狉 犲 犮 犻 狆 狉 狅 犮 犪 犾犻 狊 犵犪 狀 犱 犿犵狉 犲 狊 狆 犲 犮 狋 犻 狏 犲 犾 狔 犜 犻 狊 狊 狌 犲犫 犾 犲 狀 犱 犲 狉 犚 犲 犳 狉 犻 犵 犲 狉 犪 狋 犲 犱犮 犲 狀 狋 狉 犻 犳 狌 犵 犲：犆狅狅 犾 犻 狀 犵狋 狅， 狉犿 犻 狀狅 狉犲 狇 狌 犻 狏 犪 犾 犲 狀 狋 犆犲 狀 狋 狉 犻 犳 狌 犵 犲： 狉犿 犻 狀 犞狅 狉 狋 犲 狓犿 犻 狓 犲 狉 狆犎犿犲 狋 犲 狉： 狆犎 犖 犻 狋 狉 狅 犵 犲 狀犲 狏 犪 狆 狅 狉 犪 狋 狅 狉 狊 犛狅 犾 犻 犱狆 犺 犪 狊 犲犲 狓 狋 狉 犪 犮 狋 犻 狅 狀犲 狇 狌 犻 狆犿犲 狀 狋 犛犖犜 犛 犪犿狆 犾 犲狆 狉 犲 狆 犪 狉 犪 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱狊 狋 狅 狉 犪 犵犲 犜犺犲狉 犲狇狌 犻 狉 犲犿犲狀 狋 狊狅 犳狊 犪犿狆 犾 犲狆 狉 犲狆 犪 狉 犪 狋 犻 狅狀犜 犪 犽 犲犪 狆 狆 狉 狅狓 犻犿犪 狋 犲 犾 狔狉 犲 狆 狉 犲 狊 犲 狀 狋 犪 狋 犻 狏 犲狊 犪犿狆 犾 犲狅 犳狋 犺 犲犮 犺 犻 犮 犽 犲 狀，犾 犻 狏 犲 狉，犳 犻 狊 犺犫 犾 犲 狀 犱 犲 犱犻 狀犪犺 犻 犵 犺狊 狆 犲 犲 犱犫 犾 犲 狀 犱 犲 狉，犿 犻 狓狋 犺 狅 狉 狅 狌 犵 犺 犾 狔，犱 犻 狏 犻 犱 犲犻 狀 狋 狅狋狑狅狆 狅 狉 狋 犻 狅 狀 狊犪 狀 犱狆 犾 犪 犮 犲 犱犻 狀 狋 狅犪犮 犾 犲 犪 狀犮 狅 狀 狋 犪 犻 狀 犲 狉，狊 犲 犪 犾 犲 犱犪 狀 犱犾 犪 犫 犲 犾 犲 犱 犜 犪 犽 犲狋 犺 犲犮 犺 犻 犮 犽 犲 狀犳 狅 狉狋 犺 犲犮 犺 犻 犮 犽 犲 狀狆 狉 狅 犱 狌 犮 狋犪 狀 犱狋 犺 犲犲 犱 犻 犫 犾 犲狆 犪 狉 狋犳 狅 狉狋 犺 犲犲 犵 犵犪 狀 犱狊 犺 狉 犻犿狆犫 犾 犲 狀 犱 犲 犱犻 狀犪犺 犻 犵 犺狊 狆 犲 犲 犱犫 犾 犲 狀 犱 犲 狉，犿 犻 狓狋 犺 狅 狉 狅 狌 犵 犺 犾 狔，犱 犻 狏 犻 犱 犲犻 狀 狋 狅狋狑狅狆 狅 狉 狋 犻 狅 狀 狊犪 狀 犱狆 犾 犪 犮 犲 犱犻 狀 狋 狅犪犮 犾 犲 犪 狀犮 狅 狀 狋 犪 犻 狀 犲 狉，狊 犲 犪 犾 犲 犱犪 狀 犱犾 犪 犫 犲 犾 犲 犱犘 狉 犲 犮 犪 狌 狋 犻 狅 狀犿犲 犪 狊 狌 狉 犲 狊狊 犺 狅 狌 犾 犱犫 犲狋 犪 犽 犲 狀狋 狅犪 狏狅 犻 犱犮 狅 狀 狋 犪犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 狉狅 狋 犺 犲 狉犳 犪 犮 狋 狅 狉 狊犿犪 狔犮 犪 狌 狊 犲狋 犺 犲犮 犺 犪 狀 犵 犲狅 犳狉 犲 狊 犻 犱 狌 犲 狊犮 狅 狀 犮 犲 狀 狋 狉 犪 狋 犻 狅 狀犻 狀狊 犪犿狆 犾 犲 狊 犛犪犿狆 犾 犲狆 狉 犲狆 犪 狉 犪 狋 犻 狅狀犜犺 犲狊 犪犿狆 犾 犲狊 犺 狅 狌 犾 犱犫 犲狊 狋 狅 狉 犲 犱犪 狋 ，狋 犺 犲犳 狉 犲 狊 犺犪 狀 犱犮 狉 狔 狅 犵 犲 狀 犻 犮犮 犪 狀犫 犲狊 狋 狅 狉 犲 犱犪 狋犻 狀 犺犕犲 狋 犺 狅 犱狅 犳犱 犲 狋 犲 狉犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀 犈 狓 狋 狉 犪 犮 狋 犻 狅狀犠犲 犻 犵 犺犵狋 犲 狊 狋 犲 犱狊 犪犿狆 犾 犲（犪 犮 犮 狌 狉 犪 狋 犲狋 狅 犵）犻 狀 狋 狅犪 犿犔犮 犲 狀 狋 狉 犻 犳 狌 犵 犲狋 狌 犫 犲，犪 犱 犱 犿犔犻 狀 狋 犲 狉 狀 犪 犾狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狑狅 狉 犽 犻 狀 犵狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狊 狅 犾 狌 狋 犻 狅 狀（ 犵犿犔） ， 犿犔狋 狉 犻 犮 犺 犾 狅 狉 狅 犪 犮 犲 狋 犻 犮犪 犮 犻 犱狊 狅 犾 狌 狋 犻 狅 狀（ ）犪 狀 犱 犿犔犪 犮 犲 狋 狅 狀 犻 狋 狉 犻 犾 犲 犃 犳 狋 犲 狉犿 犻 狓 狏狅 狉 狋 犲 狓 犻 狀 犵犳 狅 狉犿 犻 狀犪 狀 犱狌 犾 狋 狉 犪 狊 狅 狀 犻 犮 犿 犻 狀犻 狀狌 犾 狋 狉 犪 狊 狅 狀 犻 犮犵 犲 狀 犲 狉 犪 狋 狅 狉，狋 犺 犲 狀犮 犲 狀 狋 狉 犻 犳 狌 犵 犲犪 狋 狉犿 犻 狀犳 狅 狉犿 犻 狀狌 狀 犱 犲 狉狋 犺 犲犮 狅 狀 犱 犻 狋 犻 狅 狀狅 犳 犜 狉 犪 狀 狊 犳 犲 狉狋 犺 犲狊 狌 狆 犲 狉 狀 犪 狋 犪 狀 狋犻 狀 狋 狅 犿犔犳 犾 犪 狊 犽 犃犱 犱 犿犔犲 狓 狋 狉 犪 犮 狋 犻 狀 犵狊 狅 犾 狌 狋 犻 狅 狀（ ）犪 狀 犱犲 狓 狋 狉 犪 犮 狋犪 犵 犪 犻 狀 犆狅犿犫 犻 狀 犲狋 犺 犲狊 狌 狆 犲 狉 狀 犪 狋 犪 狀 狋犪 狀 犱犱 犻 犾 狌 狋 犲狋 狅狊 犮 犪 犾 犲狑 犻 狋 犺犪 犮 犲 狋 狅 狀 犻 狋 狉 犻 犾 犲 犈 狀 狕 狔犿犪 狋 犻 犮犃狆 狅 狉 狋 犻 狅 狀狅 犳狋 犺 犲犮 狅犿犫 犻 狀 犲 犱犲 狓 狋 狉 犪 犮 狋（犿犔）狑犪 狊狋 狉 犪 狀 狊 犳 犲 狉 狉 犲 犱狋 狅犪犮 犾 犲 犪 狀犵 犾 犪 狊 狊狋 狌 犫 犲；犪 犱 犱犿犔犪犿犿狅 狀 犻 狌犿犪 犮 犲 狋 犪 狋 犲狊 狅 犾 狌 狋 犻 狅 狀（ ）犪 狀 犱 犔犪 犮 犻 犱狆 犺 狅 狊 狆 犺 犪 狋 犪 狊 犲（ ） ，犿 犻 狓 狏狅 狉 狋 犲 狓 犻 狀 犵犳 狅 狉犿 犻 狀 犈 狀 狕 狔犿犲犱 犻 犵 犲 狊 狋 犻 狅 狀狋 狅犮 狅 狀 狏 犲 狉 狋犪 犾 犾狆 犺 狅 狊 狆 犺 狅 狉 狔 犾 犪 狋 犲 犱犿犲 狋 犪 犫 狅 犾 犻 狋 犲 狊狋 狅狉 犻 犫 犪 狏 犻 狉 犻 狀狑犪 狊犪 犮 犮 狅犿狆 犾 犻 狊 犺 犲 犱狋 狅狋 犺 犲狊 犪犿狆 犾 犲犪 狀 犱犻 狀 犮 狌 犫 犪 狋 犻 狀 犵犪 狋 犳 狅 狉犺犜犺 犲狆犎狅 犳狋 犺 犻 狊狊 狅 犾 狌 狋 犻 狅 狀狑犪 狊犪 犱 犼 狌 狊 狋 犲 犱狋 狅犪 狆 狆 狉 狅狓 犻犿犪 狋 犲 犾 狔 （ ）犫 狔犪 犱 犱 犻 狀 犵犪狊 狅 犾 狌 狋 犻 狅 狀狅 犳犪犿犿狅 狀 犻 犪犪 犳 狋 犲 狉犱 犻 犵 犲 狊 狋 犻 狅 狀，狋 犺 犲 狀犮 犲 狀 狋 狉 犻 犳 狌 犵 犲犪 狋 狉犿 犻 狀犳 狅 狉犿 犻 狀 犆 犾 犲 犪 狀 狌狆犃 犾 犾狅 犳狋 犺 犲狊 狌 狆 犲 狉 狀 犪 狋 犪 狀 狋（ ）犻 狊犾 狅 犪 犱 犲 犱狅 狀 狋 狅狆 犺 犲 狀 狔 犾犫 狅 狉 狅 狀 犻 犮犪 犮 犻 犱（犘犅犃）犛犘犈犮 犪 狉 狋 狉 犻 犱 犵 犲 犃 犳 狋 犲 狉狆 犲 狀 犲 狉 狋 狉 犪 狋 犻 狅 狀，狋 犺 犲犮 狅 犾 狌犿狀犻 狊狑犪 狊 犺 犲 犱狊 狌 犮 犮 犲 狊 狊 犻 狏 犲 犾 狔狑 犻 狋 犺犿犔犪 犮 犲 狋 狅 狀 犻 狋 狉 犻 犾 犲 犪犿犿狅 狀 犻 狌犿犪 犮 犲 狋 犪 狋 犲狊 狅 犾 狌 狋 犻 狅 狀（ ）（狏狏）犪 狀 犱 犿犔犿犲 狋 犺 犪 狀 狅 犾 犪犿犿狅 狀 犻 犪狊 狅 犾 狌 狋 犻 狅 狀（狏狏 ） ，犪 狀 犱狏 犪 犮 狌 狌犿犱 狉 犻 犲 犱犳 狅 狉犿 犻 狀犫 狔狊 狌 犮 犽 犛犖犜 犻 狀 犵犪 犻 狉 犜犺 犲犮 犪 狉 狋 狉 犻 犱 犵 犲犻 狊犲 犾 狌 狋 犲 犱狑 犻 狋 犺犿犔犿犲 狋 犺 犪 狀 狅 犾 狑犪 狋 犲 狉 犳 狅 狉犿 犻 犮犪 犮 犻 犱狊 狅 犾 狌 狋 犻 狅 狀（ ）犪 犳 狋 犲 狉犱 狉 犻 犲 犱狌 狀 犱 犲 狉狏 犪 犮 狌 狌犿犿 犻 狀 犜犺 犲犲 犾 狌 狋 犲犻 狊犲 狏 犪 狆 狅 狉 犪 狋 犲 犱狋 狅犱 狉 狔 狀 犲 狊 狊犪 狋 狌 狀 犱 犲 狉犪狊 狋 狉 犲 犪犿狅 犳狀 犻 狋 狉 狅 犵 犲 狀犪 狀 犱狉 犲 犱 犻 狊 狊 狅 犾 狏 犲 犱犻 狀犿犔狅 犳狋 犺 犲犱 犻 狊 狊 狅 犾 狏 犻 狀 犵狊 狅 犾 狏 犲 狀 狋（犪 犮 犲 狋 狅 狀 犻 狋 狉 犻 犾 犲狑犪 狋 犲 狉狏狏 ） 犜犺 犻 狊狊 狅 犾 狌 狋 犻 狅 狀犻 狊犳 犻 犾 狋 犲 狉 犲 犱狅 狀犪 犿犳 犻 犾 狋 犲 狉狆 狉 犻 狅 狉狋 狅犔犆 犕犛犕犛犪 狀 犪 犾 狔 狊 犻 狊 犇犲 狋 犲 狉犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅狀 犔犆狅狆犲 狉 犪 狋 犻 狅狀犮狅狀犱 犻 狋 犻 狅狀 狊 犆狅 犾 狌犿狀：犎狔 犱 狉 狅狆 犺 犻 犾 犻 犮犻 狀 狋 犲 狉 犪 犮 狋 犻 狅 狀犾 犻 狇 狌 犻 犱犮 犺 狉 狅犿犪 狋 狅 犵 狉 犪 狆 犺 狔（犎 犐 犔 犐 犆）犫 狅 狀 犱 犲 犱犪犿狆 犺 狅 狋 犲 狉 犻 犮犳 狌 狀 犮 狋 犻 狅 狀 犪 犾犵 狉 狅 狌 狆 狊（ 犿犿 犿犿， 犿） ，狅 狉犲 狇 狌 犻 狏 犪 犾 犲 狀 狋 犕狅 犫 犻 犾 犲狆 犺 犪 狊 犲：犃：犿犿狅 犾犔 犪犿犿狅 狀 犻 狌 狀犪 犮 犲 狋 犪 狋 犲犫 狌 犳 犳 犲 狉狊 狅 犾 狌 狋 犻 狅 狀（ 犳 狅 狉犿 犻 犮犪 犮 犻 犱） ，犅：犪 犮 犲 狋 狅 狀 犻 狋 狉 犻 犾 犲 犜犺 犲犵 狉 犪 犱 犻 犲 狀 狋犲 犾 狌 狋 犻 狅 狀狆 狉 狅 犵 狉 犪犿狊 犲 犲狋 犪 犫 犾 犲犜犪 犫 犾 犲 犜犺犲犵 狉 犪 犱 犻 犲狀 狋犲 犾 狌 狋 犻 狅狀狆 狉 狅犵 狉 犪犿犜 犻 犿犲犿 犻 狀犃犅 犉 犾 狅狑狉 犪 狋 犲： 犿犔犿 犻 狀 犆狅 犾 狌犿狀狋 犲犿狆 犲 狉 犪 狋 狌 狉 犲： 犐 狀 犼 犲 犮 狋 犻 狅 狀狏狅 犾 狌犿犲： 犔 犕犛狅狆犲 狉 犪 狋 犻 狅狀犮狅狀犱 犻 狋 犻 狅狀 狊 犐 狅 狀狊 狅 狌 狉 犮 犲：犈犛 犐，狆 狅 狊 犻 狋 犻 狏 犲犻 狅 狀 犻 狕 犪 狋 犻 狅 狀犿狅 犱 犲 犛 犮 犪 狀犿狅 犱